Anda di halaman 1dari 17

FARMAKOGNOSI FITOKIMIA II

TUGAS PENENTUAN KANDUNGAN TOTAL FENOL, TANIN


TERKONDENSASI, GALOTANIN, ELAGITANIN, DAN LIGNIN

Dosen Pengampu :
Ismiarni Komala, M.Sc., PhD, Apt

Disusun :
Lulu Cahyani 11151020000001

PROGRAM STUDI FARMASI


FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
2017
1. PENENTUAN KANDUNGAN TOTAL FENOL : METODE FOLIN -
CIOCALTEU

Pada metode ini didasarkan pada reduksi asam fosfotungstat dalam larutan alkali
menjadi fosfotung stat biru. Absorbansi yang terbentuk akibat fosfotungstat biru sebanding
dengan jumlah senyawa fenolik yang terdapat dalam sampel, sehingga dapat diketahui
seberapa besar jumlah kandungan senyawa dengan gugus fenol dalam suatu sampel tanaman
yang dinyatakan dengan ekuivalen asam galat (Cindri et al., 2011).
Metode spektrofotometri UV/VIS banyak menggunakan reaksi kolorimetrik karena
mudah, cepat dan biayanya terjangkau. Metode ini mengukur konsentrasi total senyawa
fenolik dalam ekstrak tumbuhan. Polifenol dalam ekstrak tumbuhan akan bereaksi dengan
reagen Folin Ciocalteu sehingga membentuk kompleks berwarna biru yang dapat diukur
dengan cahaya tampak spektrofotometri. Reagen Folin Ciocalteu mempunyai kelemahan,
yaitu sangat cepat terurai dalam larutan alkali, sehingga perlu untuk menggunakan reagen
secara berlebih untuk mendapatkan reaksi yang lengkap. Tetapi penggunaan reagen berlebih
dapat menimbulkan endapan dan kekeruhan yang tinggi, sehingga membuat analisis
spektrofotometri tidak bisa dilakukan. Untuk mengatasi masalah ini, didalam reagen Folin
Ciocalteu terdapat garam lithium, yang dapat mencegah kekeruhan. Reaksi ini pada
umumnya memberikan data yang akurat dan spesifik pada beberapa kelompok senyawa
fenolik (Blainskiet al., 2013).
Pada saat direaksikan antara reagen Folin-Ciocalteu dengan senyawa fenolik akan
terjadi perubahan warna dari kuning menjadi biru. Intensitas warna biru ditentukan dengan
banyaknya kandungan fenol dalam larutan sampel. Semakin besar konsentrasi senyawa
fenolik dalam sampel semakin pekat warna biru yang terlihat. Menurut Singleton dan Rossi
(1965), Warna biru yang teramati berbanding lurus dengan konsentrasi ion fenolat yang
terbentuk, semakin besar konsentrasi senyawa fenolik maka semakin banyak ion fenolat yang
terbentuk sehingga warna biru yang dihasilkan semakin pekat. Fenolat hanya terdapat pada
larutan basa, tetapi pereaksi Folin-Ciocalteu dan produknya tidak stabil pada kondisi basa.
Nely (2007) mangatakan, penambahan Na2CO3 pada uji fenolik bertujuan untuk membentuk
suasana basa agar terjadi reaksi reduksi Folin-Ciocalteu oleh gugus hidroksil dari fenolik di
dalam sampel.
Prinsip reaksi ini adalah berdasarkan reduksi reagen campuran fosfotungstic (WO42-)
-fosfomolibdat (MoO42) dengan gugus hidroksil fenolikyangmenghasilkan produk berwarna
biru. Intensitas warnakemudian dikuantifikasi berdasarkan absorbansi dengan
spektrofotometer.

2. PENENTUAN KANDUNGAN TANIN TERKONDENSASI

Pada Kandungan tanin terkondensasi berpengaruh terhadap aktivitas antioksidan


karena tanin merupakan salah satu antioksidan alami dalam tumbuhan. Prinsip uji vanilin-
HCl dalam penentuan kandungan tanin terkondensasi yaitu vanilin terprotonasi dalam asam,
membentuk karbokation dan bereaksi dengan flavonoid. Senyawa antara yang dihasilkan
mengalami reaksi dehidrasi dan menghasilkan senyawa berwarna ungu atau merah (Salunkhe
et al.,1990).
Khusus untuk kandungan tanin terkondensasi, Makkar (2003) menyatakan bahwa
kandungan tanin terkondensasi yang dianalisis berdasarkan metode butanol-HCl tidak
merefleksikan aktivitas biologis tanin. Hal tersebut didasarkan pada beberapa eksperimen
yang menunjukkan rendahnya korelasi antara keduanya. Aktivitas biologis tanin tersebut
dianalisa menggunakan metode kapasitas presipitasi protein. Jayanegara et al.(2008)
melaporkan bahwa terdapat korelasi yang sangat kuat dan signifikan (r=0,99; p<0,001) antara
aktivitas biologis tanin dengan konsentrasi gas metan dalam total produksi gas, sedangkan
kandungan total fenol, total tanin dan tanin terkondensasi memperlihatkan korelasi yang
lemah dan tidak signifikan. Ini menunjukkan bahwa aktivitas biologis tanin hijauan dalam
rumen lebih memiliki arti secara fisiologis pada ternak ruminansia dibandingkan dengan
hanya kandungan taninnya dalam hijauan.

3. PENENTUAN KADAR GALOTANIN

Pada Gallotanin terbentuk dari asam gallat dan gula, biasanya glukosa. Beberapa asam
gallat terikat pada satu molekul gula. Asam gallat mungkin terikat bersama pada gugus ester
yang terbentuk antara gugus karboksil molekul satu dan gugus hidroksi pada molekul lain
(Luchner, 1984 dalam skripsi Nuraini, 2002). Sifat fisik dari gallotanin berupa polimer amorf,
berwarna putih kekuningan, mempunyai bau spesifik, dapat larut dalam air, gliserol, dan
sangat larut dalam alkohol, aseton. Gallotanin tidak larut dalam benzen, kloroform, eter dan
petroleum eter, karbon disulfida, karbon tetraklorida (Gohen, 1976).
Sifat kimia dari gallotanin adalah berwarna coklat jika terkena cahaya, dengan
albumin, tepung, gelatin, alkaloid dan garam metalik memberikan endapan yang tidak larut,
sedangkan dengan FeCl3 memberikan warna biru kehitaman, pada suhu 215 C akan
terdekomposisi menjadi pirogalol dan CO2 (Tyler, 1947). Gallotanin merupakan suatu ester
dimana dalam larutan gugus karbonil dari gugus esternya dapat diprotonkan, kemudian
karbon yang bermuatan positif parsial dapat diserang oleh nukleofil lemah seperti air. Untuk
reaksi hidrolisis dengan katalisis asam dalam air berlebih dan panas maka suatu ester menjadi
asam karboksilat. Kelebihan air akan menggeser kesetimbangan ke arah sisi asam karboksilat
(Solomons, 1976). Mekanisme reaksi hidrolisis ester berkatalis asam mempunyai tahap-tahap
yaitu tahap protonasi, adisi H2O, kemudian eliminasi ROH yang disusul dengan deprotonasi.
Mekanisme reaksinya adalah sebagai berikut:
Gambar 2.5 Reaksi hidrolisis gallotanin (Solomons, 1976)
Asam gallat (3,4,5 trihidroksibenzoat) merupakan senyawa turunan dari aromatik karboksilat,
dengan berat molekul 170,12, mempunyai titik didih 200C, titik leleh 110 C, sedikit larut
dalam air panas, alkohol, etil asetat, gliserol. Asam gallat tidak larut dalam benzena,
kloroform, petroleum eter, dengan FeCl3 memberikan warna biru kehitaman (Tyler, 1947).
Adapun identifikasi senyawa gallotanin yaitu sebagai berikut:

Identifikasi Senyawa Tanin dengan Spektrofotometer UV-vis dan FTIR


Isolat yang menunjukkan positif mengandung tanin yang diperoleh dari hasil KLT
preparatif dilarutkan dengan aseton dan disentrifugasi, selanjutnya dianalisis dengan
spektrofotometer UV-Vis dan FTiR. Masing-masing isolat dimasukkan dalam kuvet dan
diamati spektrum yang dihasilkan pada panjang gelombang 200-800 nm. KBr ditambahkan
dengan isolat yang diduga senyawa tannin diidentifikasi dengan spektrofotometer FTIR
dengan panjang gelombang 4000-400 cm-1, spektrum yang terbentuk diamati. Spektrum UV-
Vis dari isolat 2 dan isolat 3 menunjukkan panjang gelombang maksimum masing-masing
346,50 nm dan 347,00 nm. Panjang gelombang maksimum yang ditunjukkan kedua isolat
tidak berbeda jauh dan berada antara 300-550 nm yang diperkirakan adanya transisi *
yang mengindikasikan adanya ikatan C=C terkonjugasi dan transisi n * berupa
kromofor C=O (Sastrohamidjojo, 2001). Identifikasi senyawa tanin menggunakan
spektrofotometer FTIR dilakukan analisis pada bilangan gelombang di daerah IR 4000-400
cm-1. Spektrum serapan inframerah dari isolat 2 dan 3 hasil KLTP dipaparkan pada Gambar
2. Spektrum inframerah dari isolat 2 hasil pemisahan KLTP tampak adanya serapan pada
daerah 3556,74 cm-1 dan 3251,98 cm-1 dengan intensitas kuat dan bentuk pita lebar
menunjukkan adanya gugus fungsi seperti rentangan O-H.
(A)

(B)

Gambar 2. Spektrum inframerah hasil identifikasi (A) isolat 2 dan (B) isolat 3

Pada bilangan gelombang 3620,39 cm-1 dan 3234,62 cm-1 untuk isolat 3 terjadi
serapan yang lebar dengan intensitas kuat menunjukkan bahwa pada isolat 3 juga terdapat
gugus O-H. Serapan tersebut menunjukkan bahwa pada isolat 2 dan 3 terdapat gugus O-H
yang terikat pada gugus alifatik dan aromatik akibat dari vibrasi ikatan hidrogen intramolekul
(Sastrohamidjojo, 2001). Hal ini diperkuat dengan adanya serapan yang lemah dan lebar pada
daerah bilangan gelombang 1363,67 cm-1 pada isolat 2 dan 1340,53 cm-1 pada isolat 3 yang
menunjukkan adanya gugus C-O-H. Gugus O-H juga diperkuat dengan adanya O-H bending
dengan serapan lemah dan lebar pada bilangan gelombang 966,34 cm-1 (isolat 2) dan 967,20
cm-1 (isolat 3). Bilangan gelombang pada isolat 2 dan 3 yaitu 2889,37 cm-1 dan 2895,15 cm-
1 dengan serapan yang tajam dan intensitas lemah menunjukkan adanya gugus C-H alifatik.
C-H alifatik diperkuat dengan adanya C-H bending dengan intensitas lemah dan bentuk pita
tajam pada bilangan gelombang 574,79 cm-1 dan 507,28 cm-1 (isolat 2), serta bilangan
gelombang 671,23 cm-1 ;576,72 cm-1 dan 509,21 cm-1 (isolat 3). Pita serapan yang tajam
dan intensitas sedang pada bilangan gelombang 1743,65 cm-1 dan 1635,64 cm-1 untuk isolat
2 dan 3 menunjukkan adanya gugus C=O ester. Hal ini diperkuat dengan terjadinya serapan
yang lebar dan intensitas lemah pada bilangan gelombang 1215,15 cm-1 pada isolate 2 dan
1186,22 cm-1 pada isolat 3 yang menunjukkan adanya gugus C-O-C eter. Terdapatnya gugus
ester memperkuat dugaan adanya senyawa tanin terhidrolisis, karena tannin terhidrolisis
terbentuk akibat ikatan ester antara gugus hidroksi pada glukosa dengan gugus karboksil dari
asam fenolat (Manitto, 1981). Dugaan senyawa tanin diperkuat dengan adanya serapan pada
bilangan gelombang 1516,05 cm-1 dengan intensitas lemah dan bentuk pita tajam pada kedua
isolat tersebut yang menunjukkan adanya C=C aromatik. Spektrum inframerah di atas
menunjukkan bahwa isolat 2 dan isolat 3 mempunyai gugus fungsi karakteristik yang sama
yaitu gugus -O-H, C-H alifatik, C=O ester, C=C aromatik, C-O-H, dan C-O-C eter. Puncak-
puncak tersebut merupakan puncak spesifik dari senyawa tanin khususnya tanin terhidrolisis,
sehingga memperkuat dugaan bahwa isolat 2 dan 3 hasil KLTP dari ekstrak aseton daun
trembesi mengandung senyawa tanin terhidrolisis.

4. PENENTUAN KADAR ELAGITANIN

Senyawa aktif tumbuhan dapat dikelompokkan dalam empat golongan, yaitu: fenol, alkaloid,
terpenoid, dan asam amino non protein. Penggolongan tersebut didasarkan atas prekursor,
struktur dasar dan jalur biosintesisnya (Edwards dan Gatehouse, 1999; Smith, 1976). Golongan
fenol dicirikan oleh adanya cincin aromatik dengan satu atau dua gugus hidroksil. Kelompok fenol
terdiri dari ribuan senyawa, meliputi flavonoid, fenilpropanoid, asam fenolat, antosianin, pigmen
kuinon, melanin, lignin, dan tanin, yang tersebar luas di berbagai jenis tumbuhan (Harbone,
1996). Tanin secara umum didefinisikan sebagai senyawa polifenol yang memiliki berat molekul
cukup tinggi (lebih dari 1000) dan dapat membentuk kompleks dengan protein. Berdasarkan
strukturnya, tanin dibedakan menjadi dua kelas yaitu taninterkondensasi (condensed tannins) dan
tanin-terhidrolisiskan (hydrolysable tannins) (Hagerman et al., 1992; Harbone, 1996).

Tanin-terhidrolisiskan merupakan derivat dari asam galat yang teresterkan (Xu, 1991).
Berdasarkan strukturnya, tanin ini dibedakan menjadi dua kelas yaitu, gallotanin dan
ellagitanin. Perbedaan struktur keduanya adalah adanya ester asam galat pada gallotanin dan
ester asam heksahidroksidifenat (HHDP) pada ellagitanin. Kedua ester asam tersebut berikatan
dengan glukosa. Ellagitanin yang dihidrolisis akan menghasilkan asam elagat (Harbone, 1996).
Oksidasi perangkaian (oxidative coupling) pada gugus galoil dari gallotanin akan menghasilkan
ellagitanin (Gross, 1992).
Ellagitanin hanya terdapat pada angiospermae, khususnya pada tumbuhan dikotil, terutama
Hammamelidae, Dilleniidae, Rosidae, serta beberapa lainnya (Harbone, 1996, Bruyne et al.,
1999). Aktivitas biologis dan farmakologi yang telah diketahui antara lain, penghambatan
karsinogenensis, anti-tumor, antivirus, anti-oksidasi (peroksidasi lipida, lipoksigenase, oksidasi
xanthin, dan oksidasi monoamin), anti hipertensi (Okuda et al., 1992; Taylor, 2003), antibakteri
dan jamur, anti-diabetes, dan antinematoda (Cowan, 1999; Hayashi et al., 2002; Mori et al., 2000).

Biosintesis Ellagitannin

Biosintesis ellagitanin secara mendetail ke setiap senyawa-senyawanya masih belum jelas.


Reaksi spesifik yang menuju ke senyawa ellagitanin tertentu berbeda-beda tergantung jenis
senyawa dan tumbuhannya. Jalur biosintesis ellagitanin, terdiri atas tiga tahapan reaksi. Tahap
pertama adalah pembentukan asam galat, sebagai penyusun struktur primer ellagitanin. Tahap ini
diawali dari jalur shikimat yang membentuk dua arah reaksi sintesis asam galat. Arah pertama
melalui pembentukan L-fenilalanin dengan perantara arogenate. Pembentukan asam sinamat dari
Lfenilalanin dihalangi oleh enzim L-AOPP (L-2-aminooxy-3-phenylpropionic acid), dan reaksi
diarahkan pada senyawa kafeat. Arah reaksi kedua melalui pembentukan 3-dehidroshikimat yang
mengalami hidrogenasi pada atom C ke-3 sehingga terbentuk asam galat (Gross, 1992).
Tahap kedua adalah pembentukan pentagalloilglukosa yang diawali oleh reaksi asam galat
dengan uridin 5-difosfat glukosa untuk membentuk -glukogallin. Dengan penambahan 4 molekul
galloil, -glukogallin diubah menjadi 1,2,3,4,6-pentagalloilglukosa. Empat molekul galloil
menggantikan atom H pada empat gugus hidroksil. Proses penggantian atom H tersebut
dinamakan reaksi galloilasi. Reaksi ini berurutan mulai dari gugus hidroksil ke-1, lalu ke-6, ke-2,
ke-3, dan yang terakhir ke-4. Reaksi ini membutuhkan enzim galloiltransferase (Gross, 1992).

Tahap terakhir merupakan tahap yang secara langsung menuju ke pembentukan


senyawasenyawa golongan ellagitanin. Seperti telah disebutkan sebelumnya, biosintesis senyawa
ellagitanin berbeda-beda tergantung jenis senyawa dan jenis tumbuhan penghasilnya. Senyawa
ellagitanin dihasilkan dari oksidasi (atau lebih tepatnya dehidrogenasi/pelepasan atom H dari
gugus OH) pentagalloilglukosa. Gallotanin yang mengalami oksidasi perangkaian C-C dan C-O
pada gugus galloil yang berdekatan menghasilkan ellagitanin (Gross, 1992).
Ekstraksi dan Isolasi Ellagitannin

Tanin dapat diekstraksi dari seluruh bagian tumbuhan, meliputi daun, cabang, batang,
akar, dan buah (Scalbert, 1991). Umumnya ekstraksi tanin dilakukan dari daun dan batang
tumbuhan. Jaringan yang diekstrak dapat berupa jaringan segar maupun yang sudah kering. Teknik
ekstraksi ellagitannin dapat dilakukan dengan cara pengeringan. Titik uap senyawa ellagitanin
sangat tinggi, misalnya pada lagerstroemin (5) di atas 2500C, namun proses pengeringan
sebaiknya dilakukan pada suhu kamar atau kurang dari 400C. Pada suhu lebih dari 400C dapat
terjadi penurunan kadar dan ekstrakbilitas tanin secara drastis. Jika pengeringan dilakukan
dalam ruang yang kelembabannya tinggi, maka penggunaan kipas angin sangat disarankan. Hal
ini akan mempercepat proses pengeringan dan mencegah molekul air bereaksi dengan molekul
tanin melalui luka luka pada jaringan.

Ekstraksi dan Isolasi

Senyawa tanin umumnya dapat larut dengan pelarut dari polar sampai semipolar.
Ekstraksi tanin dari jaringan tumbuhan dilakukan dengan menggunakan pelarut aseton 70% atau
metanol 50% dalam air (FAO/IAEA, 2000). Jika menggunakan air sebagai pelarut, proses
ekstraksi harus berlangsung pada kondisi air mendidih. Suhu panas dapat membantu ekstrabilitas
tanin terhadap pelarut air. Prosedur ekstraksi biasa tidak cukup untuk mengisolasi ellagitanin.
Proses ekstraksi umumnya dilakukan secara berulang dan bertahap. Sering kali, ekstraksi
dengan aseton 70% dilakukan berulang sampai tiga kali dan dilanjutkan ke tahapan isolasi.
Banyak pekerjaan isolasi ellagitanin mengharuskan penggunaan kromatografi kolom sebagai salah
satu tahapan isolasi. Ellagitanin dapat terpisah dengan baik menggunakan kolom pemisah
Sephadex LH-20, MCI-gel CHP 20P, atau ODS-AQ. Metanol dengan konsentrasi bertingkat
merupakan eluen yang baik untuk memperoleh ellagitanin. Proses isolasi berakhir dengan
penggunaan instrumen HPLC-preparatif (high performance liquid chromatography).

Teknik kromatografi lapis tipis (KLT) dua arah biasa digunakan untuk deteksi
pendahuluan ellagitanin, jika hanya menggunakan KLT satu arah, hasil pemisahan kurang maksimal
akibat adanya bercak-bercak yang masih menyatu. Lempeng yang digunakan dalam KLT adalah
selulosa, misalnya MN300, dengan pengembang I dari asam asetat 2% v/v dan pengembang II dari
campuran butanol: asam asetat: air (12:3:5). Penyemprot yang digunakan untuk ellagitanin
adalah reagen vanillin/HCL dan reagen NaNO2 (Harbone, 1996; FAO/IAEA, 2000).
Aktivitas Biologi

Aktivitas biologi ellagitanin merupakan implikasi dari ikatan antara ellagitanin dengan
protein, senyawa dengan berat molekul tinggi, senyawa sederhana, dan ion logam berat (Okuda
et al., 1992). Aktivitas biologi ellagitanin yang telah diketahui antara lain sebagai antidiabetes,
anti-mikrobia, anti-virus, anti-hipertensi, anti-oksidan, dan anti-kanker/tumor. Dari sekian banyak
penelitian yang telah dilakukan, belum ada yang menunjukkan efek toksik ellagitanin.

1. Antidiabetes
Senyawa ellagitannin yang digunakan sebagai obat antidiabetes yaitu lagerstroemin, flosin
B, dan reginin A.

2. Antimikroba
Senyawa ellagitannin yang berperan sebagai antimikroba yaitu corilagin dan punicalagin.

3. Antivirus
Senyawa ellagitannin yang berperan sebagai antivirus yaitu arjunin, asam elagat
pentagalloilglukosa, asam galat, dan HHDP. Selain itu nobotanin B dan C, oenothein B,
agrimoniin, coriariin A, trapanin B dan putranjivain A juga dikenal sebagai senyawa
ellagitannin yang memiliki aktivitas sebagai antivirus.

4. Antihipertensi
Senyawa ellagitanni yang berperan sebagai antihipertensi yaitu geraniin, lambertianin C dan
sanguiin H-6.

5. Antioksidan
Senyawa yang berperan sebagai antioksidan yaitu Emblicanin A dan B, punigluconin,
pedunculagin, lambertianin C, sanguiin H-6.

6. Antikanker/antitumor
Senyawa ellagitannin yang berperan sebagai antikanker/antitumor yaitu Agrimoniin,
oenothein A dan B, woofoordin C, D, dan F, coriariin, cornusin, Alienanin B dan
stenophyllanin A
5. PENENTUAN KADAR LIGNIN

Lignin bukan termasuk dalam golongan karbohidrat, bersama selulose lignin


membentuk komponen yang disebut ligno-selulose, dengan koefisien cerna sangat kecil
karena tahan terhadap setiap degradasi kimia, termasuk degradasi enzimatik (Tillman dkk,
1983). Lignin mengandung unsur C, H dan 0, tetapi kandungan C (karbon) Iebih tinggi
dibandingkan dengan karbohidrat (Anggorodi, 1979). Kadar lignin meningkat dengan
bertambahnya umur tanaman, sehingga daya cernanya makin rendah dengan bertambahnya
lignifikasi (Tilman dkk, 1983). Dikatakan pula bahwa lignin mengandung nitrogen antara 1 -
5 %.

Untuk menentukan kandungan lignin yang ada di dalam suatu bahan menurut Goering
dan Van Soest (1970), diawali dengan penetapan ADF dengan menggunakan dua metode
yaitu

1 . Ekstraksi dengan asam H2SO4 72%

2. Oksidasi lignin dengan buffer asam asetat dan larutan KMnO4 jenuh.

Penetapan ADF (Acid Detergent Fiber)

Tahapan pengerjaan

1 . Kurang lebih 0,5 g (a gram) contoh ditimbang kedalam gelas piala, kemudian
ditambah 100 ml larutan detergen asam (ADS), lalu dipanaskan dan diekstraksi
selama 60 menit.

2. Selesai ekstraksi lalu disaring dengan cawan penyaring yang beratnya sudah
deketahui (bgram)dengan menggunakan pompa vakum. Residu dibilas dengan air
panas beberapa kali, dan terakhir dicuci dengan aseton.

3. Dikeringkan pada suhu 105 C, didinginkan dalam eksikator, kemudian ditimbang


(c gram).

Perhitunggan Kadar ADF = c - b x 100%

a
Penetapan lignin dengan metode H2SO4

Tahapan pengerjaan

Residu ADF dalam cawan (a gram) diletakkan dalam nampan yang berisi air setinggi
1 cm. Sebelumnya cawan ditutup dengan penutup karet.

Ditambahkan 25 ml larutan H2SO4 72 % (15 C). Diekstrak dingin selama 3 jam dan
diaduk setiap 1 jam.

Disaring dan dicuci dengan air panas (90 - 100 C) 3 kali.

Dikeringkan dalam oven (105 C) selama 8 jam, dan setelah dingin ditimbang
(gram).

Residue yang ada di dalam cawan diabukan selama 3 jam (15000 C), setetelah
dingin ditimbang kembali (h gram).

Perhitungan lignin =g -h x 100%

Penetapan lignin dengan metode KMnO4

Tahapan pengerjaan

Residu ADF dalam cawan (c gram) diletakkan dalam nampan yang berisi air
setinggi 1 cm, sebelumnya cawan ditutup bagian bawahnya dengan penutup karet.

Tambahkan 25 ml larutan lignin ke dalam cawan, larutan diaduk dengan batang


pengaduk.

Larutan dibiarkan selama 9 - 10 menit pada suhu 20- 25.

Selanjutnya cawan dipindahkan ke penyaringan yang dihubungkan dengan pompa


vakum, kemudian cawan + residue ditambahkan 25ml larutan demineral
(DS),biarkan selama 20 - 30 menit sampai serat menjadi putih .

Dicuci berturut-turut dengan etanol 80 % dan aseton.

Cawan dikeringkan di dalam oven 105C selama 8 jam, kemudian ditimbang (e


gram). Perhitungan % lignin = c - e x 100%
DAFTAR PUSTAKA

Sari, Putu Puspita., Wiwik Susanah Rita, dan Ni Made Puspawati. Identifikasi Dan Uji
Aktivitas Senyawa Tanin Dari Ekstrak Daun Trembesi (Samanea Saman (Jacq.)
Merr) Sebagai Antibakteri Escherichia Coli (E. Coli). Bali : FMIPA Universitas
Udayana.

Gohen. 1976. Encyclopedia of Chemical Technology, 3nd. New York. hal 294

Nuraini, F, 2002, Isolasi Dan Identifikasi Tannin Dari Daun Gamal (Gliricidia sepium
(Jackquin) kunth ex walp.), skripsi Jurusan Kimia Universitas Brawijaya Malang

Tyler, C.B. 1947. Organic Chemistry For Students Of Agriculture. London 2nd Allan

Solomons, G.T. 1976. Organic Chemistry, 4 th ed, john wiley and sons. New York. hal 838-
839

Sastrohamidjojo, H., 2001, Spektroskopi, Liberty, Yogyakarta

Manitto, P., 1981, Biosinthesis of Natural Products, The 1st edition, Ellis Horwood Limited
Publiser, England

Salunkhe, D. K.; Chavan J.K.;Kadam S.S. Dietary Tannins Consequences and Remedies.
CRC Press,Boca Raton.1990.

Makkar, H.P.S. 2003. Quantification of Tannin in Tree and Shrub Legumes; A Laboratory
Manual. Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, The Netherlands.

Jayanegara, A., H.P.S. Makkar & K. Becker. 2008. Methane reduction potential of
tannins-containing plants using an in vitrorumen fermentation system. Proc. Soc.
Nutr. Physiol, Goettingen, Germany, 17: 159.

Cowan, MM. 1999. Plant products as anti-microbial agents. Clinical Microbiology Review12 (4):
564-582
Edwards, R and J.A. Gatehouse. 1999. Secondary metabolism. In Lea, P.J. and R.C. Leegood
(ed.). Plant Biochemistry and Molecular Biology.). 2nd edition. New York: John Wiley
and Sons Ltd.

FAO/IAEA. 2000. Quantification of Tannin in Tree Foliage : A Laboratory Manual for the
FAO/IAEA Coordinated Research Project Use of Nuclear and Related Techniques to
Develop simple Tannin Assays for Predicting and Improving the Safety and Efficiency
of Feeding Ruminants on Tanninferous Tree Foliage. USA : Joint FAO/IAEA Division of
Nuclear Techniques in Food and Agriculture

Gross, G.G. 1992. Enzimes in the biosynthesis of hydrolyzable tannins. In Hemingway, R.W.
and P.E. Laks (ed.). Plant Polyphenols: Synthesis, Properties, and Significance. New
York: Plenum Press.

Hagerman, A.E., C.T. Robbins, Y. Weerasuriya, T.C. Wilson, and C. McArthur. 1992. Tannin
chemistry in relation to digestion. Journal of Range Management 45 (1): 5762.

Harbone, J.B. 1996. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan
(Phytochemical Methods). Penerjemah:. Padmawinata, K. dan I. Soedino. Edisi ke-2.
Bandung: Penerbit ITB.

Hayashi, T., H. Maruyama, R. Kasai. K. Hattori, S. Takasuga, O. Hazeki, K. Yamasaki, and


T. Tanaka. 2002. Ellagitannins from Lagerstroemia speciosa as activators of glucose
transport in fat cells. Planta Medica 68: 173175.

Hernawan, Udhi Eko dan Ahmad Dwi Setyawan. 2003. Review : Ellagitannin ; Biosintesis, Isolasi
dan Aktivitas Biologi. Jurnal. Surakarta : Universitas Sebelas Maret.

Mori, T., A.S.A. Mohamed, M. Sato, and T. Yamasaki. 2000. Ellagitannin toxicity in the free-
living soilinhabiting nematode, Caenorhabditis elegans. Journal of Pesticide Science 25:
405-409.

Okuda, T., T. Yoshida, and T. Hatano. 1992. Pharmacologically Active Tannins Isolated from
Medicinal Plants. In Hemingway, R.W. and P.E. Laks (ed.). Plant Polyphenols:
Synthesis, Properties, and Significance. New York: Plenum Press.

Taylor, L. 2003. Herbal Secrets of The Rainforest. 2nd edition. Austin : Sage Press, Inc.

Anggorodi, R. 1979. Ilmu makanan ternak. Gramedia, Jakarta.

Goering, H. K and P. J. Van Soest. 1970. Forege fiber analisys . Agricultural Hand Book379.
Agricultural Research Sevice, USA.
Tillman, A.D., H. Hartadi., S. Reksohadiprodjo., S. Prawirokusumo dan S. Lebdosoekojo.
1983. Ilmu makanan ternak dasar. Gadjah Mada University Press. Fapet UGM,
Yogyakarta
Blainski, A., Lopes, G.C.,de Mello, J.C.P., 2013, Application and Analysis of the Folin
Ciocalteu Method for the Determination of the Total Phenolic Content from Limonium
brasilienseL, Molecules, 18 : 68- 6865.

Cindri I.J., Kuntic M., Zeiner M., Stingeder G.,Rusak G., 2011, Sample Preparation
Methods forthe Determination of the Antioxidative Capacity of Apple Juices, Croat. Chem.
Acta, 84 (3), 435-438.

Nely,F. 2007. Aktivitas Antioksidan Rempah Pasar dan Bubuk Rempah Pabrik dengan
Metode Polifenol dan Uji AOM (Active Oxygen Method) [skripsi].Institud Pertanian Bogor,
Bogor.

Anda mungkin juga menyukai