Waktu Terapi Kortikosteroid Apakah Kritis untuk Mencegah Kehilangan Sel Ganglion

Retina Dengan Eksperimental Pada Optik Neuritis

Mahasweta Dutt, Philomela Tabuena, Elvira Ventura, Abdolmohamad Rostami, dan Kenneth S.
Shindler1.

TUJUAN: Kehilangan penglihatan akut dari optik neuritis biasanya dapat diatasi. Namun,
pemulihan sering tidak sempurna. Kehilangan penglihatan permanen dari sel ganglion
retina (RGC) akan menyebabkan kematian terjadi pada 40% − 60% pasien. Terapi
saat ini (kortikosteroid dosis tinggi) mempercepat pemulihan tetapi tidak mengubah
hasil akhir visual. Disini penulis meneliti apakah kortikosteroid yang diberikan pada
awal perjalanan penyakit dapat mencegah kehilangan sel ganglion retina (RGC) secara
eksperimental pada optik neuritis.

METODE: Sel ganglion retina (RGC) akan dilabel dengan fluorogold retrograde pada mencit.
Kemudian dilakukan eksperimental encephalomyelitis autoimun (EAE), dimana
mencit akan diinduksi dengan imunisasi menggunakan peptida protein proteolipid.
Optik neuritis akan mulai terjadi pada 9 hari setelah imunisasi. Kemudian mencit
setiap hari akan diberikan deksametason atau methylprednisolone,dari hari 0 sampai
hari ke 14 atau hari ke 10 sampai hari ke 14. Lalu mencit tersebut akan dimatikan pada
hari ke-14, 18, atau 22.

HASIL: Pengobatan kortikosteroid yang dimulai sebelum onset dari optik neuritis (hari 0
-14) akan mengurangi terjadinya optik neuritis hingga hari ke 14. Dalam beberapa mata,
neuritis optik yang terjadi memiliki peradangan ringan, dan akan mengurangi kehilangan
sel ganglion retina (RGC). Setelah pengobatan dihentikan pada hari ke-14, neuritis optik
pada mencit akan meningkat pada hari ke 18, tetapi kehilangan sel ganglion retina
(RGC) masih sedikit. Pada hari ke 22, kehilangan sel ganglion retina (RGC) akan
meningkat ke tingkat yang sama dengan kondisi dimana neuritis optic yang tidak
mendapatkan pengobatan. Pengobatan kortikosteroid setelah onset optik neuritis (hari 10
-14) menunjukkan respon yang lambat dalam kecenderungan penurunan terjadinya optik
neuritis dan penurunan kehilangan sel ganglion retina (RGC) pada hari 14 dan efeknya
akan menghilang pada hari ke 18.

KESIMPULAN: Kortikosteroid dapat menekan optik neuritis dan mencegah kehilangan sel
ganglion retina (RGC) jika pengobatan dimulai sebelum terjadi onset peradangan pada
saraf optic. Pengobatan kurang efektif setelah peradangan dimulai. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa immunomodulation kronis dapat mencegah terulangnya neuritis
optik dan kerusakan sel ganglion retina (RGC). (Investasi Ophthalmol Vis Sci 2010; 51:.
1439 -1445) DOI: 10,1167 / iovs.09-4009.
 Optik neuritis adalah penyakit demielinasi akibat inflamasi dari saraf optik yang sering
terjadi pada pasien dengan Multiple Sclerosis (MS). Penyakit ini ditandai dengan kehilangan
penglihatan secara akut dan sering meningkat selama beberapa minggu hingga peradangan yang
terjadi selesai. Namun, 40% sampai 60% dari pasien kehilangan penglihatan secara permanen.
Kehilangan penglihatan permanen berkorelasi dengan penipisan lapisan serat saraf retina. Hal ini
menunjukkan bahwa kerusakan akson sel ganglion retina (RGCs) bertanggung jawab atas
kehilangan penglihatan.

Kortikosteroid methylprednisolone diberikan secara intravena, diikuti oleh prednison

oral, untuk beberapa pasien dengan neuritis optik akut. Pengobatan ini memperpendek masa
pemulihan penglihatan, tetapi pengobatan steroid tidak meningkatkan ketajaman penglihatan.
Hasil ini menunjukkan bahwa steroid diberikan setelah neuritis onset optik dapat mempercepat
penyelesaian peradangan, tetapi kerusakan akson sel ganglion retina (RGC) mungkin telah
terjadi dan tidak terselesaikan dengan pengobatan steroid.

Eksperimental Autoimun Encephalomyelitis (EAE) adalah model eksperimen yang

paling banyak digunakan dari Multiple Sklerosis dan dalam peradangan pada sistem saraf
pusat, termasuk peradangan saraf optik mirip dengan optik neuritis. Mencit diimunisasi dengan
proteolipid protein (PLP) yang akan meningkatkan kekambuhan EAE,dan akan menyerupai
perjalanan penyakit yang paling umum di pasien MS. Optic neuritis berkembang di sekitar dua-
pertiga mata pada hari ke 11 setelah imunisasi dan menyebabkan cedera aksonal dan kematian
RGCs pada hari ke 14. Mengingat bahwa peradangan menyebabkan kehilangan RGC di
percobaan optik neuritis, kita dapat berhipotesis bahwa penekanan peradangan dengan
kortikosteroid harus mencegah kerusakan RGC. Namun, berdasarkan hasil visual dan perubahan
lapisan serat saraf yang terlihat pada pasien dengan neuritis optik, tidak jelas apakah ini benar
atau apakah ada waktu kritis yang diperlukan agar kortikosteroid memiliki efek ini. Dalam
penelitian ini, EAE tikus diperlakukan secara sistemik dengan dua kortikosteroid yang berbeda
(deksametason dan methylprednisolone) baik sebelum dan setelah peradangan saraf optik terjadi.
Kelangsungan hidup RGC, kejadian optik neuritis, dan tentu saja penyakit EAE dibandingkan
untuk menentukan apakah kortikosteroid memiliki potensi untuk mencegah kehilangan RGC.

METODE

Mencit

Mencit betina dengan umur 6 minggu dibeli dari Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME).
Perawatan hewan bertempat di fasilitas hewan di University of Pennsylvania dan Thomas
Jefferson University sesuai dengan pedoman Kelembagaan Perawatan Hewan dan Komite
Penggunaan dan berpegang pada Pernyataan Arvo untuk Penggunaan Hewan di Vision Research
Kedokteran.
GAMBAR 1.

Perawatan Dexamethasone dimulai pada hari imunisasi yang akan menekan EAE dan optik neuritis dan akan
mengurangi kehilangan RGC. RGCs yang retrogradely dilabel dengan injeksi fluorochrome ke superior colliculi
mencit betina yang berusia 7-minggu. Mencit diimunisasi 1 minggu kemudian (hari 0) dengan PLP untuk
menginduksi EAE, dan terdapat mencit sebagai kontrol yang tidak diinduksi dengan PLP.

Mencit diperlakukan setiap hari dari hari 0 sampai 14 dengan 200 mg /kg deksametason secara subkutan atau
volume yang sama dari PBS, kemudian mencit dimatikan pada hari ke-14.

(A) Mencit dengan EAE yang diobati dengan deksametason menunjukkan pengurangan tanda-tanda klinis
neurologis secara signifikan dari mencit dengan EAE dibandingkan yang diobati dengan PBS saja. (B)
Persentase perkembangan saraf optic yang mengalami peradangan lebih rendah jika diberikan deksametason
pada mencit EAE dari pada mencit EAE yang hanya diberikan PBS. (C) Potongan secara longitudinal
menunjukkan sebuah saraf optic dari mencit kontrol yang diwarnai dengan hematosilin dan eosin, menunjukkan
gambaran normal selular. (D) saraf optik 1 dari 3 mata mencit dengan EAE yang menunjukkan perkembangan
RGC Pelabelan
optik neuritis diberikan deksametason, menunjukkan tingkat peradangan yang relative ringan diamati, hanya
dengan kantong-kantong
Singkatnya, mencit kecil
dibiusbeberapa
dengandi 0,2sel peradangan.
mL larutan(E)yang
sedang sampai berat10
mengandung peradangan
mg / mLdengan banyak
ketamin
dalam sel infiltratif
(Sigma, St Louis, dalam
MO)saraf
danoptik
1 mgdari/ mLmencit yang (Sigma),
xylazine hanya diberikan PBS.kulit
dan irisan (F) RGCs difoto dan
mediosagittal dihitung
adalah
dalam 12 lapang
terbuat. pandangdibuat
Kemudian terstandarisasi
lubang dari sel retina.
secara dibor Mata dengan
melalui optik neuritis
tengkorak dari mencit
di atas setiap yang diberikan
colliculus
PBSsuperior.
memilikiKemudian 2,5RGCs
lebih sedikit L 1,25% hydroxystilbamidine.
dari mencit (Fluorogold;
kontrol, mata dari Molecular
mencit dengan EAE yang Probes,
tidak Eugene,
berkembang
OR) optik
dengan dalamneuritis,
air steril disuntikkan
atau stereotactically
tiga mata mencit dengan EAE ke setiap colliculus
yang diobati superior.
dengan perkembangan optik neuritis (*
P< 0.0001 ). mata dari mencit EAE dengan perkembangan optic neuritisyang diobati deksametason- memiliki
jumlah RGC setara dengan tikus kontrol. Skala bar 50 µm (C-E).

Pelabelan RGC

Pelabelan retrograde dari RGCs dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya. Secara singkat,
mencit dibius dengan 0,2 mL larutan yang mengandung 10 mg / mL ketamin (Sigma, St Louis,
MO) dan 1 mg / mL xylazine (Sigma), dan irisan kulit mediosagittal dibuat. Lubang dibor
melalui tengkorak di atas setiap colliculus superior. Kemudian 2.5µL dari 1,25%
hydroxystilbamidine (Fluorogold; Probe Molekuler, Eugene, OR) pada air steril disuntikkan
stereotactically ke setiap colliculus superior.

Induksi dan Evaluasi EAE

Mencit EAE diinduksi 1 minggu setelah RGC label, singkatnya mencit dibius dan di injeksikan
secara subkutan dengan 0,1 mL larutan yang mengandung 0,5 mg / mL proteolipid protein yang
mengandung 2,5 mg / mL Mycobacterium tuberculosis (Difco) di dua lokasi pada punggung.
Kelompok mencit kontrol disuntik dengan volume yang sama dari PBS. Semua tikus disuntik
dengan 200 ng pertusis toksin 0,2 mL PBS di intraperitoneal pada hari 0 (hari imunisasi) dan
lagi pada hari 2. Gejala EAE klinis dilihat pada skala 5-point seperti yang dijelaskan sebelumnya
yaitu: 0: tidak ada penyakit; 0,5: parsial kelumpuhan ekor; 1.0: kelumpuhan ekor atau berjalan
lambat; 1,5: parsial kelumpuhan ekor dan berjalan lambat; 2.0: kelumpuhan ekor dan berjalan
lambat; 2,5: parsial kelumpuhan anggota badan; 3.0: kelumpuhan satu tungkai; 3.5: kelumpuhan
satu tungkai dan kelumpuhan parsial lain; 4.0: kelumpuhan dua anggota badan; 4,5: hampir
mati; 5.0: kematian.

Pengobatan kortikosteroid

Deksametason (Sigma) pengobatan diberikan sekali sehari dengan injeksi subkutan pada
konsentrasi 200 mg / kg di PBS. Methylprednisolone (Sigma) secara intraperitoneal sekali sehari
pada konsentrasi 20, 40, atau 80 mg / kg di PBS. Pengobatan dengan setiap kortikosteroid
diulang setiap hari dari hari 0 sampai hari 14 atau dari hari 10 sampai hari ke-14 setelah
imunisasi. Tikus dimatikan pada hari ke-14, 18, atau 22.
GAMBAR 2.

Penarikan pengobatan dexamethasone menyebabkan perkembangan dari EAE dan neuritis optik. Mencit sebagai
kontrol dan mencit dengan EAE diperlakukan setiap hari dari hari 0 sampai 14 dengan 200 mg /kg deksametason
atau PBS, kemudian diamati setiap hari setelah pengobatan dihentikan sampai dimatikan pada hari 18 atau hari 22.
(A) Deksametason secara signifikan menekan EAE melalui hari 14 ketika mencit masih dirawat, tapi EAE klinis
berkembang pesat saat pengobatan dihentikan setelah hari ke-14, dengan tingkat keparahan penyakit yang sama
dengan yang ditemukan di mencit EAE yang di berikan PBS dengan hari 16 dan dipertahankan melalui hari 18.
(B) Persentase berbeda mata mencit dengan peradangan saraf optik yang terdeteksi pada 18 hari setelah imunisasi
antara tikus EAE diobati dengan deksametason dan mereka yang dirawat dengan PBS saja. (C) Pada hari 18,
jumlah RGCs di mata neuritis optik dari mencit EAE yang diberikan PBS secara signifikan lebih rendah daripada
di mata mencit kontrol atau optik neuritis dari mata mencit EAE yang diberikan dexamethason (* P= 0,0018). (D)
Pada hari 22, jumlah RGC secara signifikan lebih rendah pada neuritis optik dari kedua PBS- dan deksametason-
pada mencit EAE daripada mencit kontrol (* P= 0,0001), tapi tidak ada yang signifikan perbedaan antara
perlakuan PBS dan deksametason pada neuritis optic.

Perhitungan Jumlah RGC

RGCs yang dilihat oleh mikroskop fluoresensi dan dihitung. Singkatnya setelah mencit
dimatikan, setiap mata mencit diberikan 4% paraformaldehyde. Retina dari masing-masing mata
diambil, diletakkan pada kaca preparat , dan dilihat dengan mikroskop fluorescent (Eclipse
E600, Nikon, Tokyo, Jepang). Foto-foto RGCs berlabel diambil pada pembesaran 20 kali di 12
lapang pandang pada retina. RGCs dihitung dengan software pencitraan (Gambar-Pro Plus 5.0;
Media Cybernetics, Silver Spring, MD).

Evaluasi Histopatologi Dari Saraf Optic

Saraf optik diambil dan diberikan 4% paraformaldehyde. Saraf dipotong secara longitudinal
menjadi ukuran 5-µ m dan diwarnai dengan hematoxylin dan eosin, dan adanya infiltrasi sel
inflamasi dinilai menggunakan 4-point penilaian yaitu: 0, tidak ada infiltrasi; 1, infiltrasi seluler
ringan saraf optik atau selubung saraf optik; 2, infiltrasi moderat; 3, infiltrasi parah; 4, infiltrasi
besar. Kehadiran neuritis optik ditentukan oleh tingkat peradangan saraf optik (skor 1- 4),
sedangkan saraf tanpa peradangan yang dapat diidentifikasi (skor 0) tidak dianggap memiliki
optik neuritis. Setiap mata dianalisis secara individual karena neuritis optik terjadi sebagai suatu
peristiwa independen dalam model EAE ini, dengan 40% dari tikus berkembang bilateral optik
neuritis, 40% berkembang unilateral neuritis optik, dan 20% berkembang tidak terjadi
inflammation saraf optic.
Analisis Statistik

Jumlah RGC dibandingkan diantara masing-masing kelompok perlakuan dengan ANOVA satu
arah dilanjutkan dengan uji perbandingan Tukey’s Multiple menggunakan perangkat lunak
statistik (GraphPad Prism 5.0; GraphPad Software, San Diego, CA). Data yang ditampilkan
menunjukkan mean dan jumlah dari RGCs. Skor EAE klinis dari waktu ke waktu dibandingkan
diantara kelompok perlakuan dengan ANOVA menggunakan perangkat lunak statistik
(GraphPad Prism 5.0; GraphPad Software), dan uji t-tes digunakan untuk membandingkan skor
antara tikus yang diobati dan yang tidak diobati. Jumlah mata yang berkembangdengan neuritis
optik (tidak ada peradangan vs setiap tingkat peradangan yang terdeteksi) dan tingkat relatif
peradangan (ringan [skor 1] vs moderat dan berat [skor 2- 4] ) dibandingkan dengan two-tailed
Fisher exact tes yang tepat.

Hasil

EAE dan Suppression Neuritis Optik oleh Pengobatan Dexamethasone Dimulai pada Hari
Imunisasi.

Deksametason telah terbukti nyata menekan EAE di tikus. Oleh karena itu, kami menggunakan
dosis setara dengan dexamethasone untuk menekan EAE di mencit dan untuk mengevaluasi
apakah imunosupresi ini juga mengurangi peradangan saraf optik dan kehilangan RGC. Mencit
betina diimunisasi dengan PLP 1 minggu setelah RGC pelabelan untuk menginduksi penyakit.
Hari imunisasi dianggap hari 0. Mencit EAE sebagai kontrol diimunisasi dengan PBS. Mencit
diobati dengan 200 mg / kg dexamethasone dengan injeksi subkutan setiap hari dari hari 0
sampai 14 (saat puncak penyakit EAE dan timbulnya signifikan kehilangan RGC). pengobatan
deksametason hampir sepenuhnya menekan pengembangan EAE secara klinis hingga hari 14
(Gambar.1A). Demikian pula, deksametason secara signifikan mengurangi kejadian optik
neuritis yang terdeteksi pada bagian histologis optic saraf dari mencit yang dimatikan pada hari
14 (Gambar.1B), dengan hanya 3 dari 22 saraf dari mencit yang diberikan deksametason
mengandung sel inflamasi infiltrat dibandingkan dengan 12 dari 22 saraf dengan peradangan dari
mencit EAE yang diberikan PBS (P=0,0039). Tingkat peradangan juga berkurang (Gambar. 1C-
E), dengan ketiga saraf optik neuritis dari mencit yang diobati deksametason menunjukkan
peradangan hanya ringan (skor 1,0), sedangkan optik saraf neuritis dari mencit yang diberikan
PBS memiliki peradangan rata-rata dengan skor 1,50± 0,52 (mean ± SD). Dalam beberapa mata
dengan neuritis optik yang diberikan pengobatan deksametason, kelangsungan hidup RGC
meningkat secara signifikan dibandingkan dengan neuritis optik dari mencit yang diberikan PBS
(Gambar. 1F).
Pengembangan EAE dan Neuritis Optik setelah Penarikan Pengobatan Dexamethasone

Mencit EAE dan mencit kontrol diperlakukan setiap hari dengan diberikan 200 mg/kg
deksametason atau PBS saja dengan injeksi subkutan dari hari 0 sampai hari ke-14 setelah
imunisasi. Kemudian mencit dimatikan pada hari 18, dan saraf optik dan retina diambil. Setelah
pengobatan dihentikan pada hari ke 14, mencit berkembang pesat dengan gejala EAE, dengan
penyakit yang setara dengan yang di diberikan PBS pada mencit EAE pada hari 18 (Gbr. 2A).
Insiden optik neuritis juga meningkat setelah hari 18, hampir sama dengan di mata yang
diberikan PBS (Gambar 2B.), Dengan 50% dari saraf berkembang neuritis optik; di hari ke-14,
hanya 14% yang dikembangkan optik neuritis (Gambar. 1B). Rata-rata tingkat peradangan
adalah 1,25± 0.46 yang diobati dexamethasone pada mata neuritis optik dibandingkan dengan
1,30± 0.48 yang diberikan PBS pada mata neuritis optik. Meskipun kejadian neuritis optik
meningkat pada hari 18 pada mencit yang diobati deksametason, mata mencit tidak menunjukkan
kehilangan RGC yang signifikan sama seperti terlihat pada mencit yang diberikan PBS pada
neuritis optik (Gambar. 2C)

Untuk menentukan apakah peningkatan kelangsungan hidup RGC di hari 18 pada mencit
EAE yang diberikan deksametason dari hari 0 sampai 14 dengan merupakan efek neuroprotektif
atau lebih menunjukkan keterlambatan dalam hilangnya RGC karena onset tertunda neuritis
optik, kohort lain kontrol dan EAE tikus yang diobati setiap hari dengan 200 mg / kg
deksametason atau PBS dari hari 0 sampai hari ke-14 yang dimatikan pada hari 22. Optic neuritis
terjadi pada mata yang diberikan PBS (57%; 8 dari 14) dan yang diberikan deksametason (50% ;
6 dari 12). Tidak seperti hari 18, pada hari ke 22 kehilangan RGC signifikan terjadi pada mata
neuritis optik yang diberikan dexamethasone pada mencit EAE dibandingkan dengan mata
control, dengan jumlah kehilangan RGC seperti yang terlihat pada mata yang diberikan di PBS-
pada mata neuritis optik (Gambar. 2D).

EAE Suppression oleh MethylprednisoloneTreatment Dimulai pada Hari Imunisasi

Dosis tinggi pengobatan methylprednisolone intravena diberikan untuk beberapa pasien dengan
optik neuritis untuk mempercepat pemulihan visual, meskipun hasil visual akhir tidak membaik,
menunjukkan bahwa kelangsungan hidup RGC mungkin tidak diperbaiki oleh pengobatan
methylprednisolone dimulai setelah onset optik neuritis. Paradoksnya,pengobatan awal mencit
hasil model EAE meningkatkan jumlah RGC, tetapi efek dari methylprednisolone pada
kekambuhan EAE tidak diketahui. Oleh karena itu kami memperlakukan kekambuhan EAE
(pada mencit yang diimunisasi dengan PLP) setiap hari dari hari 0 sampai hari ke-14 dengan 20
mg / kg methylprednisolone dengan injeksi intraperitoneal, seperti yang digunakan dalam studies
sebelumnya. Seperti yang dilakukan deksametason, methylprednisolone secara signifikan
menekan perkembangan gejala EAE secara klinis (Gambar. 3A). Namun, meskipun
methylprednisolone memang menunjukkan kecenderungan penurunan insidensi neuritis optik
dibandingkan dengan saraf dari tikus yang diberikan PBS(Gambar. 3B), ini tidak signifikan (P=
0,3275). Tingkat relatif peradangan saraf optik adalah 1,39± 0.87 pada mencit yang diberikan
PBS dan 1.13± 0.35 pada mencit yang diobati methylprednisolone. Pada mata mencit dengan
neuritis optic yang diberikan methylprednisolone, ada juga kecenderungan peningkatan
kelangsungan hidup RGC yang tidak signifikan (P= 0,0818) dibandingkan dengan mencit EAE
dengan neuritis optik yang diberikan PBS (Gambar. 3C).

Meskipun methylprednisolone pengobatan pada 20 mg / kg menunjukkan kecenderungan efek

serupa dengan deksametason di percobaan optik neuritis, efek tidak signifikan, menimbulkan
pertanyaan apakah methylprednisolone secara inheren kurang efektif, atau apakah dosis yang
digunakan, dipilih berdasarkan efektivitas dalam mencit model EAE kronis, tidak maksimal
efektif. Untuk menguji ini, mencit EAE diperlakukan setiap hari dengan 40 atau 80 mg / kg
methylprednisolone dari hari 0 sampai hari ke-14 dengan injection. Dosis tinggi intraperitoneal
menekan EAE lebih efektif dari dosis 20 mg / kg methylprednisolone karena tidak adanya mencit
yang dtemukan dengan tanda-tanda klinis EAE (n=8/ group). Insiden neuritis optik menunjukkan
kecenderungan penurunan dibandingkan dengan hanya diberikan PBS pada mencit EAE, dengan
hanya 4 dari 14 mata (28,6%; P =0,0799) pada pemberian 40 mg / kg methylprednisolone pada
mencit EAE. Dalam 80 mg / kg methylprednisolon yang diberikan pada mencit EAE , kejadian
itu berkurang secara signifikan, dengan hanya 1 dari 12 mata (8,3%; P= 0,0028) yang
berkembang dengan neuritis optik. Jumlah kehilangan RGC, dengan pemberian 40 mg / kg
methylprednisolone pada optik neuritis setara dengan yang di mata mencit kontrol. Pemberian
80 mg / kg methylprednisolone pada neuritis optik memiliki jumlah RGC dalam kisaran terlihat
di mata mencit kontrol (Fig.3D). Meskipun metilprednisolon dosis tinggi tidak menunjukkan
efek toksik pada kelangsungan hidup RGC, efek samping kardiovaskular dapat ditemukan.
Mencit menjadi terutama takikardi segera setelah perawatan setiap hari dan diperlukan
pengamatan yang cermat dan sering resusitasi. Salah satu tikus di 40 mg /kg kelompok perlakuan
dan dua di 80 mg /kg pengobatan mati.
GAMBAR 3. Pengobatan Methylprednisolone dimulai pada hari imunisasi yang menekan EAE dan mengurangi optik neuritis
pada dosis yang lebih tinggi. Mencit kontrol dan EAE diperlakukan setiap hari dari hari 0 sampai 14 dengan 20 sampai 80 mg
/ kg intraperitoneal methylprednisolone atau volume yang sama dari PBS, kemudian dimatikan pada hari ke-14 (A) 20 mg / kg
pengobatan methylprednisolone secara signifikan mengurangi tanda-tanda EAE dibandingkan dengan mencit yang diobati
dengan PBS. (B) Tidak ada perbedaan persentase yang signifikan dalam mata dengan neuritis optik antara yang diberikan PBS
dan diberikan 20 mg / kg methylprednisolone pada EAE tikus. (C) Optic neuritis dari mata mencit EAE yang diberikan PBS
memiliki jumlah RGCs signifikan berkurang mata mencit sebagai kontrol (* P= 0,0175), juga kecenderungan memiliki jumlah
RGCs yang kurang dari mata neuritis optik yang diberikan 20 mg / kg methylprednisolone pada mencit EAE. (D) 40 mg / kg
pengobatan methylprednisolone mencegah kehilangan RGC dalam neuritis optik, dengan jumlah RGC setara dengan yang di
mata mencit kontrol. Pada 80 mg / kg, methylprednisolone hampir benar-benar memblokir peradangan saraf optik, dengan
hanya 1 dari 12 mata mengembangkan neuritis optik; dari mata yang memiliki nomor RGC normal.

Pengobatan Kortikosteroid Setelah Progresi, Onset Penyakit Melambat Tanpa Mencegah

Kehilangan RGC

Meskipun pengobatan dini dengan deksametason menunjukkan kemampuan yang signifikan

untuk menekan optik neuritis dan kehilangan RGC, pasien tidak mencari pengobatan untuk
episode awal optik neuritis sampai setelah peradangan dimulai. Potensi kortikosteroid untuk
mengurangi kehilangan RGC bila diberikan setelah onset dari optik neuritis perlu dievaluasi.
Dalam kambuhnya EAE, kami telah menunjukkan bahwa peradangan saraf optik dimulai hari 9
setelah immunisasi. Disini, RGCs diberi label, dan 1 minggu kemudian mencit diimunisasi
dengan PLP (hari 0). Mencit kontrol dan mencit EAE kemudian diberikan dengan 200 mg /kg
deksametason atau PBS saja dengan injeksi subkutan setiap hari dari hari 10 sampai hari 14.
Pada percobaan paralel mencit diobati dengan 20 mg /kg methylprednisolone atau PBS dengan
injeksi intraperitoneal setiap hari dari hari 10 sampai hari 14. Kedua tikus dimatikan hari 14 atau
18 hari, dan peradangan saraf optik dan jumlah RGC dibandingkan. pengobatan deksametason
menekan perkembangan EAE, dengan perkembangan sedikit penyakit setelah mulai pengobatan
dan tidak ada lonjakan gejala penyakit setelah penarikan pengobatan (Gambar. 4A). Penekanan
signifikan dari waktu ke waktu oleh ukuran berulang ANOVA (P= 0,0304), meskipun tidak ada
pengurangan EAE signifikan pada setiap hari. Methylprednisolone sama menghentikan
perkembangan EAE, dengan penekanan yang signifikan dari gejala selama puncak penyakit pada
hari 12 sampai 14 (Gambar. 4B). EAE tidak mengalami lonjakan setelah pengobatan dihentikan,
tetapi penekanan penyakit tidak lagi signifikan selama fase pemulihan awal khas melalui hari 18.
Tidak seperti pengobatan dini dimana deksametason secara signifikan mengurangi kejadian
peradangan saraf optik (Gambar.1B), pengobatan deksametason dari hari 10 sampai 14
menunjukkan kecenderungan insiden menurun optik neuritis pada hari 14 yang tidak tisignifikan
(P= 0,2377) (Gambar. 5A), peradangan diamati pada mata dengan optik neuritis antara yang
diobati dengan deksametason (1,25 ± 0,50) dan diobati dengan PBS (1,28 ±0,48) pada mencit
EAE ; tidak ada penurunan neuritis optik diamati pada hari 18 (P= 0,5108; Gambar 5B).
pengobatan methylprednisolone dari hari 10 sampai 14 juga gagal untuk mengurangi insiden dan
derajat neuritis optik pada hari ke 14 (P = 0,7638;. Gambar 5C) dan hari 18 (P= 1,000. Gambar
5D). Di antara mata dengan neuritis optik, baik diberikan pengobatan deksametason atau
pengobatan methylprednisolone (Gbr. 6) menghasilkan peningkatan signifikan dalam
kelangsungan hidup RGC dibandingkan dengan hanya dengan pengobatan PBS pada mencit
EAE.

GAMBAR 4. Pengobatan awal kortikosteroid setelah onset penyakit memperlambat perkembangan EAE. (A) Mencit
diimunisasi dengan PLP pada hari 0 diperlakukan setiap hari dengan 200 mg / kg deksametason atau volume yang sama
dari PBS dari hari 10 sampai 14 dan diamati setiap hari tanda-tanda EAE selama 18 hari. Tanda-tanda awal khas EAE
diamati oleh hari 9 sampai 10. Setelah pengobatan dimulai, keparahan EAE berkurang secara signifikan pada mencit yang
diberikan deksametason dibandingkan dengan mencit yang diberikan PBS-diperlakukan (P= 0,0304 untuk tindakan
berulang). (B) Mencit diimunisasi dengan PLP pada hari 0 diperlakukan setiap hari dengan 20 mg /kg methylprednisolone
atau volume yang sama dari PBS dari hari 10 sampai 14 dan setiap hari hingga hari 18 dinilai tanda-tanda EAE. tanda-
tanda awal khas EAE diamati oleh hari 9 untuk 10. Methylprednisolone secara signifikan menekan puncak penyakit EAE
pada hari 12 sampai 14.
GAMBAR 5. Pengobatan awal kortikosteroid setelah onset penyakit tidak menekan neuritis optik. (A) Pengobatan
Deksametason setiap hari dari hari 10 sampai 14 menyebabkan kecenderungan penurunan insidensi neuritis optik pada hari
ke 14 pada mencit EAE dibandingkan dengan pengobatan PBS. Efek ini tidak signifikan (P= 0,2377). (B) Tidak ada
perbedaan dalam insiden neuritis optik ditemukan di hari 18 antara mencit EAE setiap hari dari hari 10 sampai 14 yang
diberikan dengan deksametason dibandingkan dengan PBS. (C, D) Demikian pula, tidak ada perbedaan dalam insiden
neuritis optik ditemukan di hari ke-14 (C) atau hari 18 (D) antara mencit EAE tiap hari dari hari 10 sampai 14 yang
diberikan dengan methylprednisolone dibandingkan dengan PBS.

GAMBAR 6. Kehilangan RGC tidak dilemahkan oleh deksametason atau metilprednisolon ketika pengobatan dimulai
setelah onset penyakit. RGCs diberi label dengan fluorochrome, dan mencit diimunisasi 1 minggu kemudian (hari 0)
dengan PLP di CFA untuk menginduksi EAE, atau kontrol yang palsu diimunisasi dengan PBS di CFA. Mencit
diperlakukan setiap hari dari hari 10 sampai 14 dengan 200 mg / kg dexamethasone, 20 mg / kg methylprednisolone, atau
volume yang sama dari PBS. Tikus dimatikan pada hari ke-14 atau 18 hari, dan RGCs dihitung dengan mikroskop
fluoresensi. (A) 14 hari setelah imunisasi, kehilangan yang signifikan dari RGCs terdeteksi pada mata dengan optik
neuritis dibandingkan dengan mata mencit kontrol pada semua kelompok perlakuan (* P< 0,05). (B) 18 hari setelah
imunisasi, kehilangan yang signifikan dari RGCs terdeteksi pada mata dengan neuritis optik dibandingkan dengan mata
mencit kontrol di PBS dan kelompok perlakuan yang diberikan deksametason (* P< 0,05), dengan kecenderungan yang
sama terhadap penurunan angka RGC di mata neuritis optik dari methylprednisolone-dari manceit EAE .
Diskusi

Pengobatan dini dengan kortikosteroid, yang dimulai sebelum peradangan saraf optik terdeteksi,
secara signifikan menekan perkembangan eksperimental optik neuritis dan kehilangan RGCs dari
MS dalam studi ini. Hasil ini menunjukkan bahwa imunosupresi memang memiliki potensi untuk
mencegah cedera saraf dari penyakit demielinasi inflamasi sistem saraf pusat jika pengobatan
dapat dimulai awal cukup. Walaupun pengobatan jelas tidak dapat dimulai pada pasien sebelum
presentasi klinis mereka, hasil kami menunjukkan bahwa pasien yang beresiko untuk episode
berulang neuritis optik, seperti yang terjadi pada banyak pasien Multiple Sclesrosis, mungkin
memiliki manfaat terhadap saraf dari terapi imunosupresif kronis, meskipun saat ini digunakan
terapi imunomodulator untuk Multiple Sclerosis telah menunjukkan kemampuan terbatas untuk
mengurangi disability neurologis. Meskipun pengobatan kortikosteroid dini secara signifikan
mengurangi kehilangan RGC, penarikan pengobatan mengakibatkan pesatnya perkembangan
EAE dan neuritis optik, menunjukkan bahwa imunosupresi aktif mungkin adalah diperlukan
untuk mencegah penyakit.

Kedua dosis pengobatan yang digunakan dan spesifik yang mendasari proses penyakit mungkin
memainkan peran penting dalam respon terhadap pengobatan kortikosteroid untuk optik neuritis.
Meskipun methylprednisolone menunjukkan sedikit manfaat dalam kekambuhan model penyakit
saraf ini pada dosis 20 mg / kg, namun dosis yang lebih tinggi memang menunjukkan penekanan
optik neuritis dan kehilangan RGC dengan pengobatan dini, yang mirip dengan hasil dengan
deksametason. Tidak ada bukti dari memburuknya cedera neuronal ketika pengobatan diberikan
sebelum atau setelah onset penyakit. Dalam model EAE kronis, bagaimanapun, perawatan dini
dengan methylprednisolone sebelum peradangan saraf benar-benar menyebabkan peningkatan
jumlah RGCs dengan menekan sebuah pathway saraf endogen. Model EAE kronis, secara klinis
mirip dengan MS progresif primer, dimana menginduksi optik neuritis, dengan kehilangn RGC
signifikan terjadi sebelum terdeteksi inflammasi. Saraf optik dengan kerusakan akson dan
kehilangan RGC dalam model kekambuhan penyakit, terdeteksi hanya beberapa hari setelah
inflamasi saraf optik . Terdapat waktu yang berbeda dari kerusakan dan respon dari RGC dalam
terapi dalam beberapa temuan klinis di pusat sistem demielinasi saraf, di mana deficit kecil sisa
neurologis dari hilangnya neuron dapat menumpuk setelah episode akut pada relaps / remisi
penyakit. Progresif penyakit demielinasi, di sisi lain, mengalami penurunan neurologis lambat
tanpa remisi, lebih disebabkan oleh neurodegeneration dari peradangan, dan menunjukkan
kurang menanggapi therapies imunomodulator pada studi umumnya. Perbandingan dari
imunomodulator dan terapi saraf antara dua model ini akan berguna untuk mengidentifikasi
mekanisme umum dan penyakit-spesifik yang mendasari. Bersama-sama, studi saat ini
menunjukkan bahwa terapi imunosupresif memang memiliki potensi untuk mengurangi aspek
neurodegenerative penyakit sistem demielinasi saraf pusat, tetapi sifat spesifik dari proses
degeneratif dan waktu terapi akan sangat penting untuk suksesnya pengembangan terapi. Terapi
imunomodulator kronis memiliki potensi untuk mencegah kerugian kumulatif dari kehilangan
RGCs dan kehilangan berikutnya dari visi pada pasien MS atau orang lain pada risiko tinggi
untuk episode berulang neuritis optic.

References

1. Arnold AC. Evolving management of optic neuritis and multiple sclerosis. Am J Ophthalmol.
2005;139:1101–1108.
2. Noseworthy JH, Lucchinetti C, Rodriguez M, Weinshenker BG. Multiple sclerosis. N Engl J
Med. 2000;343:938 –952.
3. Optic Neuritis Study Group. Multiple sclerosis risk after optic neuritis: final optic neuritis
treatment trial follow-up. Arch Neurol. 2008;65:727–732.
4. Beck RW, Cleary PA, Anderson MM Jr, et al. A randomized, controlled trial of
corticosteroids in the treatment of acute optic neuritis. N Engl J Med. 1992;326:581–588.
5. Trip SA, Schlottmann PG, Jones SJ, et al. Retinal nerve fiber layer axonal loss and visual
dysfunction in optic neuritis. Ann Neurol. 2005;58:383–391.
6. Costello F, Coupland S, Hodge W, et al. Quantifying axonal loss after optic neuritis with
optical coherence tomography. Ann Neurol. 2006;59:963–969.
7. Fisher JB, Jacobs DA, Markowitz CE, et al. Relation of visual function to retinal nerve fiber
layer thickness in multiple sclerosis. Ophthalmology. 2006;113:324 –332.
8. Beck RW, Gal RL. Treatment of acute optic neuritis: a summary of findings from the optic
neuritis treatment trial. Arch Ophthalmol. 2008;126:994 –995.
9. Potter NT, Bigazzi PE. Acute optic neuritis associated with immunization with the CNS
myelin proteolipid protein. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1992;33:1717–1722.
10. Constantinescu CS, Hilliard B, Fujioka T, et al. Pathogenesis of neuroimmunologic diseases.
Immunol Res. 1998;17:217–227.
11. Shindler KS, Guan Y, Ventura E, Bennett J, Rostami A. Retinal ganglion cell loss induced by
acute optic neuritis in a relapsing model of multiple sclerosis. Multiple Sclerosis. 2006;12:526 –
532.
12. Shindler KS, Ventura E, Dutt M, Rostami AM. Inflammatory demyelination induces axonal
injury and retinal ganglion cell apoptosis in experimental optic neuritis. Exp Eye Res.
2008;87:208 –213.
13. Gran B, Zhang GX, Yu S, et al. IL-12p35-deficient mice are susceptible to experimental
autoimmune encephalomyelitis: evidence for redundancy in the IL-12 system in the induction of
central nervous system autoimmune demyelination. J Immunol. 2002;169:7104 – 7110.
14. Reder AT, Thapar M, Jensen MA. A reduction in serum glucocorticoids provokes
experimental allergic encephalomyelitis: implications for treatment of inflammatory brain
disease. Neurology. 1994;44:2289 –2294.
15. Diem R, Hobom M, Maier K, et al. Methylprednisolone increases neuronal apoptosis during
autoimmune CNS inflammation by inhibition of an endogenous neuroprotective pathway. J
Neurosci. 2003;23:6993–7000.
16. Hickman SJ, Kapoor R, Jones SJ, Altmann DR, Plant GT, Miller DH. Corticosteroids do not
prevent optic nerve atrophy following optic neuritis. J Neurol Neurosurg Psychiatry.
2003;74:1139 – 1141.
17. Parry A, Corkill R, Blamire AM, et al. beta-Interferon treatment does not always slow the
progression of axonal injury in multiple sclerosis. J Neurol. 2003;250:171–178.
18. Meyer R, Weissert R, Diem R, et al. Acute neuronal apoptosis in a rat model of multiple
sclerosis. J Neurosci. 2001;21:6214 – 6220.
19. Hobom M, Storch MK, Weissert R, et al. Mechanisms and time course of neuronal
degeneration in experimental autoimmune encephalomyelitis. Brain Pathol. 2004;14:148 –157.
20. Leary SM, Thompson AJ. Primary progressive multiple sclerosis: current and future
treatment options. CNS Drugs. 2005;19:369 – 376.
21. Rojas JI, Romano M, Ciapponi A, Patrucco L, Cristiano E. Interferon beta for primary
progressive multiple sclerosis. Cochrane Database Syst Rev. 2009;1:CD006643.
22. Wolinsky JS, Shochat T, Weiss S, et al. Glatiramer acetate treatment in PPMS: why males
appear to respond favorably. J Neurol. 2009; 286:92–98.
 TUGAS JURNAL READING
STASE MATA

Pembimbing :

dr. Eka Yeri Prasetia, Sp.M

Disusun Oleh :

Merina Selvira Yulianti, S.Ked

H1AP12017

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

UNIVERSITAS BENGKULU

BENGKULU

2016