PELATIHAN TEKNIK IMUNOLOGI DASAR

SURAKARTA, 3 DESEMBER 2012

Pewarnaan Immunohistokimia Dengan Cara Manual

Tahap-tahap Cek
I Deparafinisasi
1. Masukkan ke xylol 4 kali masing-masing selama 5 menit
2. Masukkan ke alkohol absolut 2 kali masing-masing 5 menit
3. Masukkan ke alkohol 96% selama 5 menit
4. Masukkan ke alkohol 80% selama 5 menit
5. Cuci dengan air mengalir selama 5 menit
II Pewarnaan immunohistokimia
1. Tetesi dengan H2O2 dalam methanol 3% selama 20 menit
2. Cuci dengan air mengalir selama 5 menit dilanjutkan cuci dengan aquades
selama 5 menit kemudian cuci dengan PBS 2 kali masing-masing selama 5
menit
3. Panaskan dengan buffer sitrat pH 6 atauTris EDTA pH 9,5 (sesuai data sheet)
pada decloaking chamber/microwave dengan suhu tinggi hingga mendidih
kemudian turun ke suhu rendah selama 10 menit.
4. Tunggu hingga suhu ruang
5. Cuci 2 kali dengan PBS masing-masing selama 5 menit
6. Tetesi dengan bloking serum selama 10 menit (sesuai data sheet)
7. Tetesi dengan antibody primer, inkubasi over night pada suhu 4o
8. Cuci 2 kali dengan PBS masing-masing selama 5 menit
9. Tetesi dengan universal link/antibody sekunder selama 15 menit (data sheet)
10. Cuci 2 kali dengan PBS masing-masing selama 5 menit
11. Tetesi dengan HRP label/streptavidin selama 10 menit (data sheet)
12. Cuci 2 kali dengan PBS masing-masing selama 5 menit
13. Tetesi dengan DAB selama 3-5 menit
14. Cuci dengan air mengalir selama 5 menit
15. Diwarnai dengan counterstaining memakai hematoxylin selama 2-4 menit
16. Cuci dengan air mengalir
17. Cuci dengan alkohol 96% selama 1 menit
18. Cuci dengan alkohol absolute selama 1 menit
19. Rendam dalam xylol selama 1 menit
20. Tutup dengan coverglass dan diberi label
II. Alat dan Bahan
A. Bahan
- Formalin buffer
- Alkohol absolut, 95%, 80%, 70%, 50%.
- Xylol
- Parafin
- Aquadest
- Buffer sitrat pH 6
- PBS pH 7,2 - 7,4
- Metanol H2O2 0,3%
- Universal Link
- Hematoxylin
- Canada balsam
- Kapas/tissue
B. Alat
- Tissue cassette
- Beaker glass
- Mikrotom
- Poly-L-Lysine slides
- Deckglass
- Humidity chamber vertikal
- Humidity chamber horisontal
- Mikro pipet 10 µl
- Mikro pipet 100 µl
- Mikro pipet 1000 µl
- Mikro tube
- Shaker

Kapala Lab. Patologi Anatomi

Prof.Dr.dr.Ambar Mudigdo,SpPA(K)
NIP. 19490317 197609 1 001