EFEK KOMPARATIF DARI ZINC OXIDE, NANOPARTIKEL ZINC OXIDE DAN

ZINC METHIONINE PADA DAYA TETAS DAN VARIABEL REPRODUKSI PADA

PUYUH JEPANG JANTAN
Abstrak
Tujuannya adalah untuk menguji pengaruh sumber seng makanan yang berbeda pada
reproduksi Puyuh Jepang jantan. Sebanyak 512 anak ayam puyuh (hari-tua) dibagi menjadi
empat kelompok dengan empat replikasi selama 42 hari. Setelah periode ini, anak ayam yang
kelebihan dikeluarkan untuk mencapai rasio satu laki-laki hingga tiga perempuan dan 16 puyuh
di setiap subkelompok. Pada usia 52 sampai 60, telur dikumpulkan dan diinkubasi. Diet basal
(kontrol) tidak mengandung zinc dan tiga lainnya diet eksperimental dilengkapi dengan seng
25 dan 50 mg / kg dari seng oksida (ZnO), seng nanopartikel oksida (ZnONP) dan seng-
metionin (Zn-Met) selama 1 hingga 35 dan 36 hingga 60 hari, masing-masing. Pada hari ke 42,
dua laki-laki dari setiap ulangan telah di-eutanasia. Pria dari ZnO dan Perawatan Zn-Met
mengalami peningkatan (P <0,05) dalam diameter tubulus seminiferus (STD) dan ketebalan
germinal epithelium (GET) dibandingkan dengan kontrol dan perawatan ZnONP. Cloacal
Indeks kelenjar (CGI) adalah yang terbesar (P <0,05) untuk Zn-Met dibandingkan dengan
kelompok lain. Konsentrasi testosteron lebih besar (P <0,05) di ZnO dan Zn-Met dibandingkan
dengan kelompok lain. Penambahan Zn-Met ke diet ditingkatkan (P <0,05) kesuburan, daya
tetas dan berat ayam menetas dibandingkan dengan kelompok lain. Kematian embrio awal dan
akhir adalah lebih besar (P <0,05) dalam kelompok kontrol dan ZnONP, masing-masing,
dibandingkan dengan yang lain kelompok. Studi ini menunjukkan bahwa suplementasi diet
dengan sumber Zn-Met meningkatkan pria Performa reproduksi burung puyuh Jepang dan sifat
daya tetas sementara nanopartikel seng oksida
memiliki efek merugikan pada reproduksi puyuh jantan Jepang dan mengurangi daya tetas.

A. pendahuluan
Memasok anak ayam umur sehari oleh perusahaan pembibitan merupakan aspek
penting dari keberhasilan dalam rantai produksi unggas (Kingori, 2011). Kesuburan dan
daya tetas telur adalah dua faktor ekonomi paling penting dari reproduksi yang
mempengaruhi jumlah anak ayam yang dapat dipasarkan dari kawanan pemuliaan
(Narinc et al., 2013). Kinerja reproduksi peternak unggas dipengaruhi oleh faktor
genetik dan lingkungan, seperti status gizi (Brillard, 2003). Dilaporkan bahwa
heritabilitas kesuburan dan Daya tetas telur pada unggas kurang optimal dan
memerlukan program perbaikan genetik yang rumit (Wolc et al., 2009). Saya t, oleh
karena itu, adalah kepentingan utama untuk memasukkan prosedur dalam breeding
flocks yang dapat memodifikasi efek dan pengaruh lingkungan
sifat-sifat ini. Nutrisi memiliki peran penting dalam modulasi respons reproduksi. Seng
merupakan faktor penting dalam mempertahankan yang diinginkan fungsi reproduksi
unggas (Gallo et al., 2003, 2005). Efek dari defisiensi Zn pada perkembangan embrio
dan peternak kinerja telah didokumentasikan dengan baik dan termasuk disfungsi
seksual laki-laki, penurunan bobot testis, diameter lebih kecil dari tubulus seminiferus
(Egwurugwu et al., 2013), produksi telur yang buruk, kekuatan cangkang telur
berkurang, kesuburan menurun, daya tetas buruk telur, malformasi embrio, anak ayam
yang lemah dengan bulu yang buruk dan mortalitas tinggi (Kidd, 2003; Oliveira et al.,
2015). Ahli nutrisi menyadari bahwa baik jumlah maupun sumber unsur-unsur mikro
memiliki peran penting dalam formulasi diet dan optimalisasi produksi, kualitas
produk, status kesehatan burung dan hasil ekonomi (Attia et al., 2010). Secara umum,
jumlah makanan lebih banyak seng ditambahkan untuk mengurangi insidensi defisiensi
zinc dan memungkinkan burung untuk mencapai potensi pertumbuhan genetik mereka
di bawah komersil kondisi (Zhao et al., 2010). Penyebabnya adalah ketersediaan seng
yang buruk dalam bahan pakan tanaman dan seng anorganik konvensional sumber
(Lukić et al., 2009). Diet yang mengandung seng dalam jumlah besar berkontribusi
terhadap kepedulian lingkungan karena ekskresi kelebihan seng dalam tinja (Bao et al.,
2007; Aksu et al., 2011). Selain itu, jumlah Zn diet yang lebih besar dari optimal dapat
mengganggu dengan bioavailabilitas mineral lainnya, seperti besi, tembaga dan
cadmium, dan meningkatkan biaya pakan (Suttle, 2010). Salah satu cara untuk
mengatasi masalah yang terkait dengan bioavailabilitas seng yang buruk dapat berupa
perubahan dari sumber anorganik ke organik suplementasi seng (Jahanian et al., 2008).
Pencantuman jumlah yang lebih rendah dari Zn terikat organik dalam diet dengan bio-
efficacy yang lebih besar (mis., seng-metionin) mungkin memaksimalkan
bioavailabilitas Zn (Jahanian et al., 2008). Selain itu, ada minat yang cukup besar dalam
menggantikan mineral jejak anorganik dengan nanopartikel yang dapat memenuhi
kebutuhan hewan dan sekaligus meningkatkan bioavailabilitas logam untuk hewan
(Sekhon, 2014). Nanopartikel, yang melibatkan setidaknya satu dimensi yang direduksi
menjadi Skala nanometer, telah mengubah fitur listrik, mekanik dan biologis (Sekhon,
2014) dan telah diidentifikasi sebagai penting faktor yang mempengaruhi serapan
partikel di situs di mana agen aktif secara biologis (Delie, 1998). Laporan yang
berkaitan dengan suplementasi seng dan efek pada kesuburan puyuh laki-laki dan daya
 tetas telur di puyuh Jepang peternak terbatas. Akibatnya, penelitian ini meneliti efek
dari berbagai sumber seng (nano, organik dan anorganik) suplementasi pada beberapa
sifat reproduksi penting dan daya tetas telur dari peternak puyuh Jepang.
B. Alatdanmetode
Percobaan ini dilakukan dengan 512 anak burung puyuh Jepang berusia satu hari.
Burung puyuh ditempatkan di Universitas Guilan, Fakultas Ilmu Pertanian, Penelitian
Pendidikan dan Pertanian Praktik, South Rasht, Iran. Perawatan hewan dan prosedur
eksperimental dan protokol disetujui oleh organisasi kedokteran hewan Iran. Burung-
burung dibagi menjadi empat kelompok dan empat subkelompok. Itu puyuh diberi
makan diet basal berdasarkan jagung dan bungkil kedelai, diformulasikan untuk dua
fase produksi termasuk yang pertama (1-35 hari) dan fase kedua (36 hingga 60 hari)
menurut National Research Council (NRC, 1994), kecuali untuk Zn (Tabel 1). Kontrol
diet kelompok tidak dilengkapi dengan seng. Makanan dari kelompok lain dilengkapi
dengan zinc oxide (ZnO), zinc oxide nanopartikel (ZnONP, Nanosany Co., kemurnian:
99,9%; dan ukuran partikel rata-rata: 10–30 nm) dan metionin seng (Zn-Met, Sanadam-
epars dan Yasna mehr Co., Iran). Jumlah diet zinc adalah 25 dan 50 mg / kg diet untuk
periode pertama dan kedua percobaan, masing-masing. Burung puyuh memiliki akses
gratis ke air dan makanan. Fotoperiode harian adalah 16 jam selama periode peletakan.
 Penilaian variabel reproduksi laki-laki
Pada hari ke 42 percobaan, dua ekor burung puyuh dari masing-masing
subkelompok dipilih secara acak dan daerah kelenjar kloaka adalah diukur
menggunakan callipers. Lebar (lateral) dan tinggi (dorsoventral) dari kelenjar
kloaka setiap burung diukur ke yang terdekat 0.01mm menggunakan callipers. Hasil
pengukuran tinggi dan lebar (mm2) digunakan sebagai indeks untuk ukuran
kelenjar. Sampel darah kemudian dikumpulkan melalui vena sayap. Laki-laki ini
di-eutanasia untuk penentuan bobot testis dan histologis parameter. Rongga perut
dibuka dan testis dibedah. Berat masing-masing testis ditentukan menggunakan
elektronik keseimbangan analitik. Indeks gonadosomatic (GSI) kemudian dihitung:
GSI = [testis berat / berat badan] × 100 (Bello et al., 2014). Untuk menilai
perubahan morfometri gonad, testis kiri diproses untuk analisis histologis.
Jaringannya diperbaiki di Bouin larutan. Jaringan testis tetap kemudian didehidrasi,
parafin-tertanam menggunakan prosesor jaringan otomatis (ASP300, Leica,
Wetzlar, Jerman), dipotong dengan irisan tebal 5 μm, dan bagian-bagian diwarnai
dengan hematoxylin dan eosin (H & E) dan digunakan untuk studi histologis dan
 analisis morfometrik. Bagian-bagian (lima bagian histologis dari masing-masing
testis) dilihat dan difoto (20 bidang dengan perbesaran 4x400) menggunakan
mikroskop (Magnum-3, Ceti, Inggris) dengan kamera terpasang (Sony-DSCH50).
Selanjutnya, evaluasi diameter tubulus seminiferus (STD) dan ketebalan germinal
epitel (GET) dilakukan. Pengukuran ini ditentukan dengan menggunakan perangkat
lunak pengukuran gambar Digimizer Versi 4.1.1.0 (Med Calc Software, www.
digimizer.com). Sampel darah disentrifugasi pada 3000 rpm selama 15 menit dan
sampel serum disimpan pada -20 ° C sampai waktu tes testosteron dilakukan.
Konsentrasi testosteron serum diuji dalam rangkap dua, menggunakan enzimatik
komersial kit immunoassay (ELISA) (DiaPlus Inc., USA). Sensitivitas assay adalah
0,038 pg / mL.
 Percobaan penetasan telur
Pada hari ke 42, anak ayam ekstra secara acak dikeluarkan untuk membuat
rasio antara satu laki-laki dan tiga perempuan dengan 16 burung puyuh dimasukkan
setiap subkelompok. Telur dikumpulkan setiap hari dari 52 hingga 60 hari percobaan
dan disimpan pada 15 hingga 18 ° C dengan kelembaban relatif 75% hingga 80%.
Telur, 70 per subkelompok diatur secara acak dalam inkubator (Belderchin-e
Damavand Co., DQ170SH) dan diinkubasi pada 37,8 ℃ dengan kelembaban relatif
55% selama 14 hari. Telur kemudian dipindahkan ke nampan Hatcher, secara acak,
di mana telur berada dipertahankan pada 37,2 ℃ dan 75% kelembaban relatif sampai
menetas. Jumlah anak ayam dari penetasan dihitung pada hari ke 18 dari inkubasi.
Anak-anak ayam itu kemudian ditimbang menggunakan keseimbangan listrik
digital.
Telur yang tidak menetas dibuka dan digolongkan sebagai tidak subur atau
mati selama perkembangan embrio. Kematian embrio diklasifikasikan menjadi tiga
kelompok, kelompok pertama adalah kematian selama tahap awal perkembangan
embrio dari 0 hingga 6 hari inkubasi, kelompok kedua adalah tahap tengah
perkembangan embrio (7 hingga 14 hari inkubasi) dan ke 3 kelompok
diklasifikasikan sebagai memiliki kematian embrio akhir (15 sampai 17 hari
inkubasi; Seker et al., 2004). Kesuburan dihitung sebagai persentase telur yang subur
relatif terhadap jumlah total telur yang ditetapkan. Daya tetas telur yang subur
diekspresikan sebagai jumlah anak ayam yang dihasilkan dari penetasan per jumlah
set telur yang subur dan persentase daya tetas kumulatif dihitung sebagai
 persentase anak ayam dari penetasan relatif terhadap jumlah total telur yang
ditetapkan.

C. Analisa statistik
Semua data menjadi sasaran analisis varians menggunakan model linear umum SAS
(Versi 9.2., SAS institute Inc.). Nilai rata-rata untuk kelompok dibandingkan
menggunakan tes Tukey. Perbedaan dianggap signifikan pada P <0,05.

D. Hasil
Ada perubahan histologis pada testis puyuh pria 42 hari (Gambar 1). Tidak ada
perbedaan yang diamati dalam nilai GSI kelompok perlakuan (Tabel 2; P> 0,05). STD
dan GET lebih besar untuk ZnO dan Zn-Met dibandingkan dengan ZnONP dan kontrol
(P <0,05) kelompok. Konsentrasi testosteron untuk kelompok ZnO dan Zn-Met lebih
besar dari pada kelompok kontrol (P <0,05). Indeks ukuran kelenjar kloaka kelompok
Zn-Met lebih besar dari kelompok kontrol (P <0,05). Kesuburan dalam kelompok Zn-
Met lebih besar daripada kelompok kontrol (Tabel 3; P <0,05) dan tidak ada perbedaan
antara perawatan lainnya (P> 0,05). Ada tingkat daya tetas telur yang lebih rendah di
kelompok ZnONP dibandingkan dengan kelompok lain (P <0,05). Tingkat daya tetas
telur untuk kelompok Zn-Met lebih besar daripada kelompok kontrol (P <0,05).
Kematian dini embrio paling besar pada kelompok kontrol relatif terhadap kelompok
lain (P <0,05). Kematian embrio yang terlambat adalah yang terbesar di ZnONP grup
(P <0,05). Kematian embrio total adalah yang paling sedikit untuk kelompok perlakuan
Zn-Met dibandingkan dengan kelompok lain (P <0,05). Anak ayam yang tidak menetas
abnormal hanya diamati pada kelompok ZnONP. Bobot ayam terbesar dan paling tidak
adalah diamati dalam Zn-Met dan kelompok kontrol relatif terhadap kelompok lain
pada saat telur menetas, masing-masing (P <0,05).
E. Pembahasan
Seng memiliki peran penting dalam banyak fungsi fisiologis, seperti reproduksi dan
pertumbuhan hewan (Atakisi et al., 2009). Itu Zn molekul terakumulasi dalam testis
dalam jumlah yang sama seperti yang ada di ginjal dan hati (Bedwal dan Bahuguna,
1994). Utama Konsekuensi klinis defisiensi Zn tertunda kematangan seksual dan
infertilitas (Croxford et al., 2011). Menurun seminiferus diameter tubulus, kurang
fungsi sel Leydig dan konsentrasi testosteron yang lebih rendah adalah gejala lain dari
defisiensi Zn (Croxford et al.,2011). Pengambilan Zn yang memadai diperlukan untuk
mempertahankan fungsi testis yang optimal (Croxford et al., 2011). Kekurangan Zn
sering terjadi dari asupan yang relatif lebih rendah dari bioavailable Zn (Huang et al.,
2009). Dalam penelitian ini, GSI tidak terpengaruh oleh pengobatan tiga sumber Zn
yang berbeda dalam puyuh Jepang dewasa. Makanan makan puyuh yang ditambah
dengan 50 mg / kg Zn-Met memiliki persentase testis yang lebih besar berat bila
dibandingkan dengan mereka yang makan seng anorganik (ZnSO4; Namra et al., 2008).
Kekurangan seng menyebabkan kurangnya perkembangan testis (Martin et al., 1994).
Ada korelasi positif antara berat testis dan jumlah sel germinal di testis dan a hubungan
positif antara diameter tubulus seminiferus dan spermatogenisis (Cheah dan Yang,
2011). Peningkatan yang signifikan di STD dan GET terjadi dalam penelitian ini, dan
temuan ini konsisten dengan hasil dari penelitian sebelumnya di mana volume tubulus
seminiferus secara signifikan lebih besar mengikuti suplementasi diet dengan seng
organik (Goodarzi et al., 2017). Juga, ada perubahan histologis yang signifikan pada
kelompok ZnONP, karena STD dan GET sangat kurang dibandingkan dengan
perawatan lain, kecuali untuk kelompok kontrol. Temuan terbaru menunjukkan bahwa
pengobatan dengan nanopartikel mungkin memiliki efek buruk atau beracun pada pria
reproduksi (Braydich-Stolle et al., 2010). Beberapa penelitian, bagaimanapun, telah
menunjukkan bahwa nanoform ZnO meningkatkan efisiensi Zn pemanfaatan dengan
meningkatkan penyerapan dan bioavailabilitasnya di saluran pencernaan (Faiz et al.,
2015). Penyerapan dan bioavailabilitas lebih besar memiliki efek menguntungkan pada
kinerja hewan (Park et al., 2015). Kerusakan testis pada tikus telah dilaporkan dengan
ZnONP pengobatan (Talebi et al., 2013). Selanjutnya, nanopartikel dengan mudah
melewati darah-otak, dan hambatan darah-testis (Borm dan Kreyling, 2004) .Ada
beberapa bukti di mana pengobatan dengan jumlah kecil nanopartikel, dapat
menyebabkan penurunan kualitas sperma dan menginduksi efek toksik pada sel
germinal (Gromadzka-Ostrowska et al., 2012). Selanjutnya, perawatan dengan
nanopartikel telah dilakukan dilaporkan menyebabkan penurunan jumlah sel Sertoli,
STD yang lebih rendah dan perubahan spermatogenesis (Mozaffari et al., 2015). Di
Selain itu, ada temuan sebelumnya (Talebi et al., 2013) di mana jumlah sel Leydig
menurun tajam dengan ZnONP pengobatan.
Peningkatan konsentrasi testosteron diamati pada burung yang diberi makan dengan
diet yang mengandung Zn organik dan anorganik. Selanjutnya, suplementasi Zn dari
diet dapat mempengaruhi jumlah sel Leydig dan memberi makan suplemen organik
memiliki manfaat berkaitan dengan kinerja reproduksi dibandingkan dengan pemberian
bentuk anorganik Zn (Goodarzi et al., 2017). Juga, Zn itu penting komponen protein
yang terlibat dalam sintesis dan sekresi testosteron (Chu et al., 2016). Kekurangan zinc
menyebabkan penurunan sintesis testosteron dan sekresi dari sel Leydig. Dalam
kelompok ZnONP dari penelitian ini, ada perbedaan yang tidak signifikan dalam
konsentrasi testosteron dibandingkan dengan kelompok kontrol yang tidak menerima
seng dalam diet.
Indeks kelenjar kloaka terbesar diamati pada kelompok Zn-Met dalam penelitian ini.
Ada laporan yang positif dan korelasi yang signifikan antara nilai-nilai untuk indeks
kelenjar kloaka, berat testis, konsentrasi testosteron plasma, status kesuburan dan
aktivitas seksual di puyuh Jepang. Pengamatan visual dari ukuran kelenjar kloaka dapat
memberikan non-invasif yang berharga dan dapat diandalkan teknik untuk
memprediksi pemupukan kapasitas puyuh laki-laki (Biswas et al., 2007; Shit et al.,
2010). Makan seng organik untuk tumbuh kambing jantan lanjutan dari pematangan
seksual dan peningkatan karakteristik semen kuantitatif dan kualitatif (Arangasamy et
al., 2018). Secara keseluruhan, dari penelitian ini dan sebelumnya tampak seolah-olah
penambahan seng organik untuk diet dengan menyediakan Zn di bentuk-bentuk yang
lebih tersedia secara biologis dapat menstimulasi pematangan seksual awal pada burung
puyuh Jepang.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa menambahkan zinc organik pada diet
peternak puyuh Jepang dapat meningkatkan persentase kesuburan dan daya tetas telur,
serta berat badan anak ayam yang baru menetas. Selain itu, ada penurunan mortalitas
embrio saat peternak puyuh diberi makan Zn-Met dalam diet. Seng memiliki peran
penting dalam perkembangan embrio, serta daya tetas telur (Kidd, 2003). Karakteristik
klasik embrio atau anak ayam dari ayam yang diberi diet defisien Zn adalah daya tetas
telur yang menetas, Abnormalitas embrio, anak ayam yang lemah dengan insidensi
mortalitas dan mortalitas yang buruk (Oliveira et al., 2015). Mirip dengan hasil
penelitian ini, telah dilaporkan di mana suplementasi diet peternak dengan seng organik
meningkatkan kesuburan dan telur tingkat daya tetas dibandingkan dengan ketika diet
peternak mengandung inorganik atau tidak ada Zn (Kidd, 2003; Namra et al., 2009).
The Zn kompleks atau chelates dengan ligan organik, seperti asam amino, dapat
memberikan stabilitas mineral di bagian atas gastrointestinal sistem. Sebagai hasilnya,
pendekatan ini memungkinkan kompleks utuh untuk diangkut ke epitel serapan lumen
usus (Leeson dan Summers, 2001). Hal ini dapat menyebabkan berkurangnya interaksi
antagonis antara Zn dan ikatannya ligan dengan nutrisi dan komponen non-nutrisi dari
 sistem pencernaan, yang meningkatkan bioavailabilitas Zn (Dibner et al., 2007). Oleh
karena itu, ada kemungkinan bahwa Zn terikat pada ligan stabil tertentu berfungsi untuk
meningkatkan kinerja reproduksi peternak Burung puyuh.
Telur dari mana penetasan terjadi dan mortalitas embrio total lebih kecil, masing-
masing, untuk kelompok ZnONP dari penelitian ini dibandingkan dengan nilai-nilai
untuk variabel-variabel ini dalam kelompok Zn-Met. Mortalitas embrio yang meningkat
dapat dipengaruhi oleh efek merugikan dari pelepasan logam Zn2 + kation yang
merupakan kontributor utama toksisitas (Pujalté et al., 2011). Juga, ada melaporkan
bahwa perawatan dengan ZnONPs dapat menyebabkan kerusakan DNA sperma (Taylor
et al., 2012). Dalam penelitian ini, kelainan cewek hanya diamati dalam kelompok
ZnONPs. Ada perbedaan yang tidak signifikan antara kelompok perlakuan, kontrol dan
anorganik untuk berat cewek. Perawatan dengan partikel nano-seng oksida selama
periode pra-kehamilan, kehamilan dan laktasi dapat menyebabkan perkembangan
toksisitas pada keturunan (Jo et al., 2013). Demikian pula, perawatan pranatal tikus
dengan nanopartikel titanium dioksida hasil dalam pergantian dalam korteks serebral
dan penciuman keturunan (Umezawa et al., 2012). Embrio tikus diobati dengan
nanopartikel seng oksida selama organogenesis embrional memiliki pertumbuhan yang
parah dan retardasi perkembangan (Jo et al., 2013). Memiliki telah dilaporkan bahwa
pengobatan dengan nanomaterial berkontribusi pada pertumbuhan janin yang buruk dan
bobot lahir yang lebih rendah pada bayi yang belum lahir dan baru lahir bayi
(Yamashita et al., 2011). Temuan ini, oleh karena itu, menunjukkan bahwa tingkat daya
tetas telur yang lebih rendah dalam kelompok ZnONP saat ini studi terjadi karena
infertilitas dan insiden kematian embrio yang lebih besar.
F. Kesimpulan
Melengkapi diet dengan Zn-Met meningkatkan kinerja reproduksi puyuh jantan Jepang
dan tingkat penetasan telur. Pemberian nanopartikel seng oksida memiliki efek
merugikan pada reproduksi burung puyuh Jepang, dengan mengurangi daya tetas dan,
juga, menginduksi efek teratogenik pada embrio burung puyuh Jepang.