METODOLOGI

ISOLASI ENZIM PEPAYANASE

Kelompok 1 Enzimologi.
1. Denika Dellanerra (3425150760)
2. Enik Mushonifah (3425151255)
3. Saskia Ratry Arsiewi (3425151091)
4. Dinda Eka Putri (3425150757)
5. Adina Novia Permata P (3425152352)
6. Diah Dwi Lestari (3425154429)
7. Susi Rahmiyati (3425152569)
8. Assofa Maria (3425151009)
9. Annisa Zahra (3425152547)
10. Septiana Tri Nugraheni (3425143721)

11. Pengambilan Sampel

Dipilih Pepaya Muda masih pada Pohon

Dibuat Torehan pada lima titik pada buah

dengan jarak 1-2cm dan kedalaman 1-2mm

Waktu Pengambilan
pada pagi hari sebelum matahari terbit (05.30 - 08.00)
atau sore hari sebelum matahari terbit (17.30-18.00)

Diambil sebanyak 50gr

 12. Pengendapan Protein Getah Pepaya

Getah pepaya
Sentrifuge dengan
dilarutkan dalam
Diamkan selama 2 kecepatan 4000rpm
0,1M Larutan buffer
jam pada suhu 4C pada suhu 4C selama
fosfat pH 7 dengan
15 menit
perbandingan 1:4

Ditambahkan
Campuran disimpan
Filtrat yang dengan alkohol 92%
didalam lemari
terbentuk berwarna sebanyak 5 kali
pendingin pada suhu
putih volume getah
4-8C selama 12 jam
pepaya

Cairan dipisahkan
dan endapan
digunakan untuk
proses selanjutnya
13. Pengukuran Aktivitas Enzim

Dimasukkan 0,1ml Ditambahkan 0,5 ml

larutan enzim kasein konsentrasi 0,02 Kocok hingga
konsentrasi g/ml dan 0,5 ml buffer homogen
0,1g/ml 0,05M pH 6

Inkubasi dalam
penangas air suhu Tambahkan TCA 0,1M Vortex hingga
55˚C selama 10 sebanyak 1ml homogen
menit

Diambil 0,75ml filtrat hasil

Sentrifugasi
Inkubasi pada sentrifugasi dimasukkan
dengan kecepatan
suhu 37˚C kedalam tabung reaksi yang
3500rpm selama
selama 10 menit berisi 2,5ml Na2CO3 0,4M &
10 menit
0,5ml pereaksi Follin ciocalteu

Diukur absorbansinya
Diinkubasi pada
suhu 37˚C selama
pada λ 578nm
20 menit. menggunakan
spektofotometer

14. Pengeringan Enzim Pepaya Kasar

Dengan Pengeringan Kabinet (Cabinet Drying)

Petridisk dimasukkan ke dalam

Endapan enzim
lemari pengering (cabinet
disebar merata
drying) dengan suhu 55˚C
kedalam petridisk
selama 6 jam

Getah dikeringkan hingga

terbentuk serpihan - serpihan
berwarna putih kecoklatan