Sel Tanaman, S401 – S417, Suplemen 2002, Nurnberger dan Scheel, 2001; Munne-Bosch dan

www.plantcell.org © 2002 American Society of Plant Alegre,

Biologists 2002), dan yang paling penting, kalsium.
Kalsium di Persimpangan Persinyalan
Dale Sanders,
a, 1 Perubahan kalsium bebas sitosolik ([Ca
Jérôme Pelloux,
Sebuah
Colin Brownlee,
2
b
dan Jeffrey F. Harper
c
Sebuah ]
Jurusan Biologi, Universitas York, York YO10 5YW,
Inggris c
b
Asosiasi Biologi Laut, Laboratorium, Citadel Hill, ) terlihat jelas
Plymouth PL1 2PB, Inggris
c
Scripps Research Institute, 10550 Torrey Pines Road selama transduksi dari berbagai macam abiotik
Utara, La Jolla, California 92037 dan

sinyal biotik. Spektrum rangsangan yang

PENGANTAR membangkitkan cepat
Sinyal Kalsium: Paradigma Sentral di Indonesia
Stimulus – Respon Kopling
perubahan [Ca
Sel harus menanggapi berbagai lingkungan dan
perkembangan
isyarat. Jaringan signaling yang telah berevolusi 2
menjadi
menghasilkan tanggapan seluler yang sesuai dan
bervariasi
biasanya terdiri dari unsur-unsur yang mencakup ]
urutan
reseptor, pembawa pesan nonprotein, enzim dan c
transkripsi
faktor-faktor. Reseptor biasanya sangat spesifik
untuk telah di katalog dalam sejumlah baru-baru ini
stimulus fisiologis, dan karenanya berbeda dalam hal
ini ulasan (Sanders et al., 1999; Knight, 2000; Anil
identitas. Demikian juga enzim dan faktor transkripsi dan
cenderung
menuju kekhususan, dan fakta ini tercermin dalam Rao, 2001; Knight and Knight, 2001; Rudd dan
kelimpahan di
tingkat genom. Genom Arabidopsis, misalnya, Franklin-
berpotensi mengkodekan di wilayah 1000 protein
kinase, Tong, 2001). Rangsangan abiotik termasuk
300 protein fosfatase, dan 1.500 faktor transkripsi. cahaya — dengan warna merah, biru,
Sebaliknya, pembawa pesan nonprotein relatif
sedikit. Mereka
dan radiasi UV / B masing-masing bertindak
termasuk nukleotida siklik (Newton et al., 1999),
hidrogen melalui berbagai reseptor dan
ion (Guern et al., 1991), spesies oksigen aktif (Van
Breusegem et al., 2001), lipid (Ng dan Hetherington, mengarah ke respon perkembangan yang
2001; berbeda (Shacklock et
al., 1992; Baum et al., 1999; Frohnmeyer et al., hanya harus ada perubahan sinyal lain secara
1999), rendah paralel. Kedua, spesifisitas

dan suhu tinggi, sentuhan, tekanan hiposmotik, mungkin dikodekan oleh sifat spasial dari Ca
dan oksidatif
2
menekankan. Rangsangan biotik termasuk
hormon abscissic

asam (ABA) dan giberelin, elisitor jamur, dan sinyal, baik karena sinyal dilokalisasi secara
nodulasi kompartemen

(misalnya, ke nukleus, bukan sitosol) atau

(Tidak ada) faktor.
karena

sumber dari Ca
Pertanyaan Spesifitas
2
Sebuah pertanyaan yang banyak merebak
selama dekade terakhir kalsium

penelitian pensinyalan telah berkisar pada
masalah kekhususan
(McAinsh dan Hetherington, 1998). Bagaimana
bisa seorang nonprotein sederhana
utusan terlibat dalam banyak transduksi sinyal
jalur dan namun masih menyampaikan
spesifisitas stimulus dalam
berbagai jalur? Tampaknya ada sejumlah yang
masuk akal
jawaban nonexclusive untuk pertanyaan ini.
Pertama, Ca
2
sinyal (dari luar sel atau
dari toko intraseluler) dapat secara selektif
memicu elemen respons.
Ketiga, sifat dinamis dari Ca
2
kekuatan sinyal
menentukan kemanjuran dengan mana respon
tersebut diperoleh.
Keempat, tentu saja, elemen respons yang
tepat harus
hadir dalam jenis sel tertentu di mana Ca

2
sinyal itu sendiri mungkin menjadi pemicu yang
diperlukan tetapi tidak cukup untuk

respon, dengan transduksi sinyal yang efektif sinyal

terjadi
muncul. Sejak Ca
2 berada pada potensi yang lebih rendah.

Ada, di masa lalu, kecenderungan untuk

merujuk seperti itu
signaling terakhir ditinjau dalam jurnal ini
saluran sebagai "Ca
(Sanders et al., 1999), kemajuan luar biasa telah
dibuat 2

dalam mengatasi masalah kekhususan ini,

dalam banyak hal
saluran, "meskipun kami lebih memilih istilah
kasus berkat wawasan yang diberikan oleh
pendekatan genetik. “Ca

Dengan demikian, sementara merujuk secara 2

singkat pada literatur sebelumnya, saat ini

review akan fokus pada perkembangan saluran -termuni "karena ini mencerminkan
pemahaman kita itu kemungkinan
telah terjadi selama empat tahun terakhir. pentingnya saluran kation selektif dalam
menghasilkan

menanam Ca
UNSUR-UNSUR ENSODA SINYAL KALSIUM

Sinyal kalsium dihasilkan melalui pembukaan 2

ion

saluran yang memungkinkan aliran menurun Ca sinyal. Pemeliharaan Ca rendah

2 2

dari sebuah kompartemen elektrokimia

di mana ion hadir pada elektrokimia yang relatif aktivitas di Ca
tinggi
2
potensial (baik di luar sel, atau dari suatu

toko intraseluler) ke salah satu di mana Ca

Kompasemen-responsif dicapai oleh ATP- atau
2 proton motive force-driven removal of Ca

2
di penutupan stomata instan dalam tembakau
(Wood et al.,
pompa atau pengangkut (transporter), masing-
masing. Seperti yang ditunjukkan di 2000). Penghapusan Ca ekstraseluler

Gambar 1, interaksi antara masuknya melalui 2

saluran dan

penghabisan dari pompa dan pengangkut akan

menentukan bentuk a dengan chelator EGTA

Ca atau penyumbatan entri dengan sejumlah

blocker saluran ion
2
menyarankan agar melibatkan penutupan suhu
rendah

spike yang berpotensi spesifik untuk decoder terutama masuknya Ca

yang relevan.
2
Gambar 2 menunjukkan lokasi saluran, pompa,
dan operator
melintasi membran plasma, sementara
terlibat dalam Ca
mobilisasi intraseluler tampaknya mendominasi
2
jika stomata

penutupan dimulai dengan ABA atau

transportasi untuk Arabidopsis umum rangsangan mekanik.

sel, sebagai dasar untuk diskusi di bawah ini. Saluran kalsium-permeabel telah diselidiki

dengan pendekatan elektrofisiologi, biokimia,

dan molekuler,
Kanal Ion Kalsium-Permeabel
dan ini sekarang mulai menghasilkan
Pentingnya lokasi seluler saluran ion dalam
komplementer
menentukan
wawasan tentang sifat dan kontrol saluran itu
Spesifisitas stimulus ditekankan oleh studi
tentang mendasari generasi Ca

Ca 2

2
Sinyal dapat menyebabkan peningkatan [Ca

Membran plasma
Studi elektrofisiologi selama dekade terakhir
mengungkapkan kehadiran dalam membran plasma ]
tanaman kalsium
Berbagai mekanisme umpan balik dari sensor c
kalsium (atau "decoder")
. Sedangkan aktivasi depolarisasi Ca
itu mungkin. Ini bisa termasuk pengaturan
kalsium 2

paku melalui kontrol saluran kalsium gating

kalsium (misalnya,
saluran -permaable
melalui EF mengikat tangan, atau melalui ikatan
adalah tema yang berulang di sejumlah sistem
Ca2 / CaM) atau melalui kontrol
biologis,
aktivitas pompa. kalsium-
studi simultan dan independen baru-baru ini
saluran permeabel yang diaktifkan oleh telah diikuti
membran
pekerjaan perintis oleh Gelli dkk. (1997) dan
depolarisasi (ditinjau oleh White, 2000). Telah Gelli dan Blumwald
dispekulasikan
(1997) tentang suspensi sel tomat, melaporkan
bahwa bentuk gating tegangan ini mungkin kehadirannya
memberkati semacam itu
dalam membran plasma tanaman Ca
saluran dengan peran penting pada tahap awal
2
dalam transduksi sinyal

(Ward et al., 1995). Dengan demikian, persepsi

rentang saluran -permaable
rangsangan menghasilkan depolarisasi yang diaktifkan oleh hyperpolarization
membran, mungkin sebagai hasilnya membran. Seperti itu
aktivasi saluran anion, dan yang dihasilkan saluran memiliki selektivitas tinggi untuk Ca
pembukaan Ca depolarisasi-diaktifkan 2
2

lebih dari K
saluran -permaable
 tunduk pada kontrol umpan balik negatif untuk
mencegah berlebihan
dan Cl
Ca

2
(Gelli dan Blumwald, 1997; Hamilton et al.,
2000; Véry dan

Davies, 2000). Telah diketahui untuk beberapa entri, karena aktivitas berkurang sekitar sepuluh
waktu bahwa dalam kali lipat

sel penjaga, membran hyperpolarization terkait di atas kisaran [Ca

secara langsung
2
dengan ketinggian [Ca

2
]

c
]
dari 0,2 hingga 2
c

yang mengikuti aplikasi ABA

M. Pada rambut akar,
(Grabov dan Blatt, 1998). Observasi itu
aktivitas saluran hadir di ujung sel yang tumbuh,
hiperpolarisasi-diaktifkan Ca tetapi

2 tidak terdeteksi di wilayah subapikal atau di

ujung matang

sel (Véry dan Davies, 2000), sebuah

saluran -permaable dalam
membran plasma sel penjaga dibuka oleh ABA
di dalam bercak-bercak membran yang
dipotong berarti fisik yang sangat dekat
penggabungan antara saluran dan situs persepsi
ABA
pengamatan yang konsisten
dengan anggapan bahwa saluran ini memainkan
peran penting dalam
generasi Ca ujung-ke-dasar
2

(Hamilton et al., 2000). Pembukaan saluran juga

bisa gradien yang sangat penting
untuk mempertahankan polarisasi dalam sistem
penumbuhan ujung (termasuk
tabung serbuk sari dan sel rhizoid). Menariknya,
akar rambut
saluran, berbeda dengan rekan-rekan mereka di
sel penjaga,
diaktifkan oleh elevasi [Ca
2
saluran dalam pembelahan dan pemanjangan
sel. ABA-induced stomata penutupan
melibatkan produksi
spesies oksigen reaktif, terutama hidrogen
peroksida (Pei et
al., 2000; Zhang et al., 2001), dan
hyperpolarization-diaktifkan
Ca
2

]
Saluran yang bisa dipakai memainkan peran
c
penting dalam hal ini
, menunjukkan bahwa mereka mungkin bantah Dalam sel penjaga Arabidopsis, hidrogen
memainkan peran mandiri dalam peroksida
mempertahankan tip-ke-basis merangsang Ca hiperpolarisasi-diaktifkan
Ca 2
2

saluran -termuni,
gradien. Hyperpolarization-diaktifkan Ca dan dengan demikian peningkatan [Ca
2 2

-berpori ]
saluran juga telah dilaporkan di puncak akar
c
yang tumbuh
(Pei et al., 2000).
akar Arabidopsis, tetapi tidak di sel yang lebih
dewasa lainnya Proses ini membutuhkan cytosolic NAD (P) H,
yang menunjukkan itu
(Kiegle dkk., 2000a), mungkin menyarankan
peran untuk ini NAD (P) H oksidase dapat menjadi bagian dari
kaskade sinyal ABA
(Murata et al., 2001). Tidak mungkin jalur
tegangan-gated terdiri dari
Lingkaran biru mewakili sistem transportasi
berenergi. ACA1, ACA4, ACA8 adalah ATPase
kalsium autoinhibited yang diidentifikasi pada
tingkat molekuler. Itu
arah pemompaan Ca2 untuk ACA1 adalah
hipotetis. ECA adalah ATPase kalsium tipe ER.
ACAx di vakuola pusat dan di Golgi belum
diidentifikasi pada tingkat molekuler. CAX1
adalah antiporter Ca2 / H yang diharapkan
terlokalisasi pada membran vacuolar. Kotak
merah mewakili
Saluran Ca2-layak. Pada membran plasma,
saluran kation selektif (NSC), saluran yang
diaktifkan depolarisasi (DAC) dan hiperpolarisasi
saluran yang diaktifkan (HACs) telah dicirikan
pada elektrofisiologi tetapi tidak pada tingkat
molekuler. Saluran dua-pori
(TPC1) telah ditunjukkan untuk melengkapi
kekurangan mutan ragi dalam penyerapan Ca2,
tetapi lokasi saluran adalah hipotetis.
Menggunakan electrophysiolocal
teknik, saluran nukleotida siklik nukleotida
(CNGC1 dan CNGC2) ditunjukkan dapat
permeabel terhadap kalsium. Lokasi membran
plasma adalah
lagi hipotetis. Reseptor glutamat (GLRs)
mungkin terlibat dalam peningkatan
konsentrasi kalsium sitosol dan telah
diidentifikasi.
pada tingkat molekuler. Saluran-saluran yang
diidentifikasi pada endomembran telah
dicirikan pada elektrofisiologi dan biokimia
tetapi tidak molekuler
tingkat. InsP3R, reseptor Putatif Ins3P; RyR,
reseptor ryanodine putatif yang diaktifkan oleh
cADPR; Saluran yang aktif NAADP juga berada di
ER seperti yang ditunjukkan. Saluran SV,
perlahan-lahan mengaktifkan saluran vacuolar;
Saluran VVCa, saluran Ca2 tegangan-gratololar.
satu-satunya rute untuk Ca
2
masuk melintasi membran plasma.
Saluran yang membedakan dengan buruk
antara mono dan divalen
kation dan pameran itu paling baik hanya
memiliki voltagedependensi yang sangat lemah
di mana-mana di sel tumbuhan (Demidchik et
al.,
2002). Saluran kation non selektif ini mungkin
memenuhi a
berbagai fungsi selain itu dari Ca
2
serapan, termasuk
serapan kation untuk tujuan gizi umum,
dan kehadiran berbagai kelas saluran mencakup, masing-masing berisi "pori" yang
disarankan diduga

oleh laporan berbagai mode regulasi, termasuk wilayah) dihubungkan oleh domain hidrofilik
siklik yang mencakup

nukleotida (Maathuis dan Sanders, 2001) dan dua tangan EF (Gambar 3A). Struktur umum
ekstraselulerpH (Demidchik and Tester, 2002). menyerupai
Karena itu akan menjadi penting
bahwa dari subunit pembentuk pori mamalia
untuk mengidentifikasi saluran ini pada tingkat dan
molekuler sebelumnya
ragi Ca
menarik kesimpulan tentang peran khusus
mereka dalam Ca 2

2
saluran yang berisi empat domain yang
menyerupai Shaker,
-
dan ada beberapa kesamaan urutan. Ekspresi
berdasarkan transduksi sinyal. TPC1

Dasar molekuler membran plasma Ca meningkatkan Ca

2 2

-berpori serapan dalam ragi Ca

aktivitas saluran hanya menjadi jelas, dan 2

ada sejumlah gen kandidat yang menarik. Unik

gen di Arabidopsis, -saluran

TPC1 mutan (Furuichi et al., 2001). Ada indikasi itu

(At4 g03560), menyandikan saluran TPC1, yang diekspresikan di mana-mana,

membentuk depolarisasi-
dengan dua domain Shaker-like (yaitu, 2
saluran diaktifkan karena overekspresi dan
antisense
6 transmembran ekspresi muncul, masing-masing, untuk
meningkatkan dan
menekan peningkatan [Ca AtCNGC2 telah dianalisis secara elektrofisiologi
dan
2
ditunjukkan untuk melakukan sejumlah kation,
termasuk Ca
] 2
c

yang terjadi sebagai akibat dari , di

depolarisasi membran yang diinduksi gula. respon terhadap cAMP (Leng et al., 1999, 2002).
Namun, tegas Tembakau
kesimpulan tentang tegangan gating menunggu CNGC (NtCBP4) dilokalisasi pada membran
elektrofisiologi plasma dan
karakterisasi, dan belum ada indikasi
ketika diekspresikan secara berlebihan Pb
untuk peran fisiologis (s) dari TPC1. Genom 2
Arabidopsis juga muncul untuk mengkodekan
no

kurang dari 20 anggota saluran nukleotida-siklik hipersensitivitas (Arazi et

siklik
al., 1999). Sebaliknya, ekspresi C-terminal
(CNGC) keluarga (Maser et al., 2001; http: terpotong
//plantst.sdsc.
NtCBP4 menganugerahkan Pb
edu / plantst / html / 1.A.1.shtml). Struktur
umum ditampilkan 2

pada Gambar 3B. Sebuah domain yang

menyerupai Shaker dilengkapi di C toleransi, seperti halnya gangguan pada
terminus dengan tumpang tindih calmodulin AtCNGC1
dan nukleotida siklik
gen (Sunkar et al., 2000). Sejak Pb
mengikat domain (Arazi et al., 2000; Kohler dan
Neuhaus, 2

2000). Ortolog mamalia membentuk saluran

tetrameric itu
tidak punya
selektif lemah di antara kation Grup I dan
dikenal peran fisiologis dalam tumbuhan tetapi
Kelompok II.
dikenal untuk menyerap
beberapa Ca
2 ,
saluran -termuni, pengamatan ini
konsisten dengan NtCBP4 dan AtCNGC1
menyediakan rute untuk
Ca
2 berkaitan dengan isoform CNGC selain yang
masuk melintasi membran plasma di planta
.
Menariknya,
cngc2
mutan dari Arabidopsis rusak di
respons hipersensitif yang mengikuti infeksi
patogen, meskipun
tanaman ini menunjukkan gen-untuk-gen
resistensi (Clough et al., 2000), menyiratkan
bahwa AtCNGC2 adalah
bukan komponen penting dalam respon
pertahanan. Agak,
analisis ekspresi AtCNGC2 mendukung gagasan
itu
saluran ini mungkin memainkan peran dalam
penuaan atau perkembangan
kematian sel yang diatur (Kohler et al., 2001).
Saat ini,
tidak ada laporan dari saluran yang diaktifkan
nukleotida siklik
aktivitas di planta
meskipun kehadiran kation tidak selektifsaluran
yang dihambat oleh nukleotida siklik (cAMP
dan cGMP) telah dicatat dalam sel-sel akar
Arabidopsis
(Maathuis dan Sanders, 2001). Ada
kemungkinan bahwa kegiatan ini
sudah ada
dianalisis dalam sistem heterolog. Sejumlah
laporan
Gambar 3. Model Topologi Protein
Membran Plasma Putatif Terlibat dalam
Masuknya Kalsium dalam Cytosol di
Arabidopsis’
(A) Saluran dua-pori (TPC1) terdiri dari dua
kalsium EF
mengikat tangan, yang bisa terlibat dalam
kontrol umpan balik
aktivitas saluran melalui konsentrasi
kalsium sitosol. Pori-pori
loop (P) dilokalisasi antara domain
transmembran ke-5 dan ke-6
setiap ulangan. Domain transmembran
keempat dalam setiap pengulangan
diperkaya dengan residu dasar, yang
mungkin menunjukkan bahwa
saluran adalah tegangan terjaga
keamanannya.
(B) Struktur CNGC juga mengandung loop
P dan, tidak seperti rekan-rekan
pada hewan, tumpang tindih dari terdiri dari 30 gen (Lacombe et al., 2001;
pengikatan calmodulin dan nukleotida siklik http: // plantst.

domain di ujung C dari protein. sdsc.edu/plantst/html/1.A.10.shtml).

Glutamat memicu
(C) struktur GLR mirip dengan reseptor
glutamat ionotropic hewan Akar Arabidopsis merupakan elevasi
transien yang besar di [Ca
dan terdiri dari empat domain yang
terlokalisir di antara 2

dimana M2 diprediksi tidak membentang

membran. Dua glutamat
]
domain yang mengikat (GlnH) dilokalisasi di
luar membran. telah menghubungkan c
nukleotida siklik dengan Ca
dan a
2 depolarisasi membran, keduanya sensitif
terhadap

signaling (Bowler Ca

et al., 1994; Volotovski et al., 1998; Jin dan 2

Wu, 1999;

Moutinho dkk., 2001), dan mungkin CNGC

antagonis La
menyediakan
3
hubungan penting antara dua utusan.

Reseptor glutamat (GLRs) terdiri dari kelas

lebih lanjut (Dennison dan Spalding, 2000). Responnya

saluran ion yang mungkin menyediakan relatif spesifik untuk glutamat.

jalur kalsium-permeabel Overexpression of

melintasi membran plasma. Struktur umum gen AtGLR2 mengarah ke Ca

ditunjukkan pada Gambar 3C. Pada hewan, 2

GLRs adalah neurotransmitter

kated dan membentuk saluran kasi yang

tidak selektif dalam gejala defisiensi dan

membran postsynaptic. Di Arabidopsis, cacat ionik lain yang dapat dikurangi

keluarga GLR dengan meningkatkan eksternal

Ca
2 trisphosphate dan oleh ADP-ribose
siklik. Dua saluran lebih lanjut

jenis dikunci oleh tegangan, satu oleh

konsentrasi (Kim et al., 2001). Ekspresi membran hyperpolarization
analisis menunjukkan bahwa AtGLR2 dan yang kedua dengan depolarisasi
mungkin terlibat dalam pembongkaran membran. Ini
kalsium dari pembuluh xilem (Kim et al., kelas kedua saluran dikenal sebagai
2001). ini pengaktifan lambat
mungkin bahwa aktivasi fisiologis GLR saluran vacuolar (SV) mengacu pada
melibatkan aktivasi tegangannya
pembukaan saluran anion non-selektif pada kinetika (Hedrich dan Neher, 1987), dan
membran plasma, diaktifkan oleh
meskipun lokasi membran plasma untuk naik di [Ca
GLRs tanaman
2
belum dibuktikan.

Endomembranes
]
Vakuola besar litik sel tanaman dewasa
tidak diragukan lagi c

Ca intraseluler utama selama rentang fisiologis. Tanggapan ini

2 berpotensi memberi saluran dengan

kapasitas untuk mengkatalisasi

Ca
simpan, dan dengan demikian, a
2
jumlah Ca

2
-induced Ca

2
saluran rilis telah dilaporkan berada

dalam membran vacuolar (Sanders et al.,

1999). Dua rilis (CICR) (Ward dan Schroeder,

dari saluran ini adalah ligan gated 1994; Bewell et al., 1999). Meskipun
masing-masing oleh inositol respon terhadap Ca

2
sendiri tidak akan mengizinkan CICR in
vivo (Pottosin et al., 1997),
kehadiran ion Mg2 pada konsentrasi
fisiologis
mempotensiasi respon Ca2, dengan
demikian menyarankan bona
peran fide di CICR (Pei et al., 1999;
Carpaneto et al., 2001). Di
penambahan regulasi oleh [Ca2] c dan
oleh fosforilasi
negara (Allen dan Sanders, 1995),
saluran SV juga sangat kuat
direndahkan oleh 14-3-3 protein (van den
Wijngaard
et al., 2001), menyiratkan peran sentral
untuk saluran SV dalam koordinasi
peristiwa pensinyalan.
Kehadiran hanya dari sebuah toko Ca2
intraseluler besar
tidak, tentu saja, menjamin bahwa itu
dimobilisasi dalam pensinyalan
Peristiwa, dan perhatian baru-baru ini
telah menyoroti pentingnya dari toko
Ca2 intraseluler lainnya, terutama
endoplasmik
reticulum (ER). Saluran Ca2 yang
bergantung voltase
telah diidentifikasi di ER (Klusener et al.,
1995;
Klusener dan Weiler, 1999), dan
demonstrasi highaffinity
Situs pengikatan InsP3 pada ER juga
sugestif dari
Kehadiran saluran rilis Ca2 InsP3-gated
(Martinec et
al., 2000). Tes pelepasan kalsium juga
telah mengungkapkan
kehadiran cADPR-mobilitas Ca2 di ER
vesikel (Navazio
et al., 2001), dan telah mengidentifikasi
serta novel dan diskrit
Jalur pelepasan Ca2 diaktifkan oleh
NADP metabolit nikotinik
asam adenin dinukleotida fosfat
(NAADP; Navazio
et al., 2000). Menariknya, NAADP tidak
mempengaruhi mobilisasi Ca2
dari vesikula membran vakuolar.
Peran yang berbeda untuk beberapa
ligan ini muncul. Untuk
InsP3, peran ini termasuk transduksi
garam dan hiperosmotik
sinyal tegangan (Drobaktransduksi
garam dan hiperosmotik
sinyal tegangan (Drobak dan Watkins,
2000; DeWald et
al., 2001) serta keterlibatan dalam
gravitropism (Perera et
al., 1999), sedangkan untuk cADPR,
mediasi dalam aktivasi pabrik
Gen pertahanan tampaknya mungkin
(Durner et al., 1998), serta
dalam transduksi sinyal ABA (Wu et al.,
1997; McAinsh dan
Hetherington, 1998).
Arti penuh dari kebanyakan
endomembran ini
Jalur pelepasan Ca2 belum dinilai secara
ketat.
Namun, hingga saat ini, tidak ada gen
yang menyandikan endomembrane Ca2
saluran rilis telah diidentifikasi, dan
sampai dikodekan
saluran dicirikan dan dilokalisasi, sulit
untuk
berspekulasi tentang pentingnya
distribusi intraseluler.
Efflux kalsium melalui Antiporter H / Ca2
dan
ATPase kalsium
Sistem transportasi yang memberi
energi penghabisan dari sitosol
menyediakan tiga fungsi rumah tangga
yang penting. Pertama, mengikuti
pelepasan kalsium, sistem penghabisan
mengembalikan [Ca2] c untuk
beristirahat
level, dengan demikian mengakhiri
sinyal Ca2. Kedua, mereka
muat Ca2 ke dalam kompartemen seperti
ER dan vakuola ke
digunakan sebagai sumber untuk rilis
Ca2 yang diatur. Ketiga, mereka
memasok Ca2 ke berbagai organel untuk
mendukung biokimia spesifik
fungsi. Misalnya, tingkat Ca2 yang tinggi
dalam
ER diperlukan untuk memproses protein
yang tepat melalui
jalur sekresi (misalnya, Durr et al., 1998).
Pertanyaan mendasar adalah apakah, di
samping mereka
fungsi rumah tangga, salah satu jalur
penghabisan ini membantu
bentuk dinamis dari lonjakan kalsium
dan dengan demikian membantu
menentukan informasi yang dikodekan
dalam sinyal. Jika penghabisan
dikenakan
untuk regulasi, kemudian menjelaskan
sinyal yang mengontrol
sistem penghabisan ini akan sama
pentingnya dalam mengidentifikasi
sinyal yang membuka berbagai saluran
kalsium. Kepeloporan
bekerja dalam dua sistem nonplant
(Xenopus oocytes dan Dictyostelium)
telah menunjukkan bahwa meningkatkan
kelimpahan
atau aktivitas pompa Ca2 memang bisa
mengubah transduksi sinyal
(Camacho dan Lechleiter, 1993;
Lechleiter et al., 1998;
Roderick et al., 2000). Dengan demikian,
potensi pentingnya signalling
sistem penghabisan pada tumbuhan
harus dipertimbangkan secara serius.
Exchanger Kalsium
Antiporter H / Ca2 dapat pada prinsipnya
mendorong transportasi “menanjak”
Ca2, di mana kekuatan motif proton
dipertahankan, meskipun
pada tumbuhan ini biasanya
membutuhkan stoikiometri H / Ca2
setidaknya tiga (Blackford et al., 1990).
Pabrik pertama
Antiporter H / Ca2 akan dikloning dan
diekspresikan secara fungsional
adalah CAX1 (penukar kalsium 1; Hirschi
et al., 1996; Hirschi,
2001) dan topologi membran yang
diproyeksikan ditunjukkan pada Gambar
4A. Gen diidentifikasi oleh
kemampuannya untuk mengembalikan
pertumbuhan pada media Ca2 tinggi ke
mutan ragi yang rusak di
transportasi Ca2 vacuolar. CAX1
tampaknya mengangkut Ca2 dengan
afinitas rendah (Km adalah 13 M),
konsisten dengan studi kinetik pada
Aktivitas aktivat H / Ca2 dilakukan
dengan vakuola oat root
(Schumaker dan Sze, 1986). Spesifisitas
ion CAX1 adalah
sebagian ditentukan oleh urutan asam 9-
amino berikut
domain transmembran diprediksi
pertama (Shigaki et al., 2001).
Di Arabidopsis, ada 12 gen yang
diprediksi untuk dikodekan
antiporters terkait erat dengan CAX1
(Maser et al., 2001; http: //
plantst.sdsc.edu/plantst/html/2.A.19.sht
ml). Apakah semua
antiporter terkait ini dapat mengangkut
kalsium belum
bertekad. CAX2 tampaknya mengangkut
Mn selain Ca
(Hirschi, et al., 2000). Meskipun CAX1
diharapkan dilokalisasi
ke vakuola tanaman, ada bukti untuk H /
Ca2
antiporter di lokasi lain, seperti membran
plasma
(Kasai dan Muto, 1990). Lokasi
subseluler dari
Gambar 4. Model Topologi Sistem
Catalyzing Ca2 Efflux dari Cytosol
(A) Antiporter Ca2 / H. Topologi CAX1
didasarkan pada spekulasi dari analisis
hidropati. Jumlah domain transmembran
diprediksi
bervariasi dari delapan hingga sebelas.
CAX1 baru-baru ini terbukti memiliki
autoinhibitor N-terminal. Sorotan biru
menunjukkan posisi
Urutan asam 9-amino yang terlibat dalam
pemberian spesifisitas transportasi
untuk kation.
(B) Ca2 -ATPase (tipe ACA). Topologi
pompa kalsium didukung dengan baik
oleh pemodelan homologi berdasarkan
struktur kristal mamalia
sacro (endo) plasmic reticulum-type Ca2
ATPase pump. Pompa kalsium tipe ECA
diprediksi memiliki topologi yang sama,
tetapi kekurangan
fitur yang membedakan dari
auotoinhibitor N-terminal dan situs
pengikatan tungrolulin. semua isotop
dua belas Arabidopsis CAX1-terkait
masih perlu
ditentukan.
Baru-baru ini, aktivitas CAX1 terbukti
diatur oleh
autoinhibitor N-terminal (Pittman dan
Hirschi, 2001). Ekspresi
dari CAX1 yang “diregulasi” dalam
tembakau menghasilkan tanaman
dengan peningkatan akumulasi Ca
(Hirschi, 1999), konsisten
dengan meningkatnya aktivitas
antiporter yang berfungsi untuk
menyuntikkan kalsium ke dalam
kompartemen endomembran.
Menariknya,
tanaman ditampilkan fenotipe
pertumbuhan yang menirukan
gejala kekurangan kalsium. Selain itu,
tanaman
ditampilkan hipersensitivitas terhadap K
dan Mg dan peningkatan sensitivitas
berbagai tekanan, termasuk dingin. Jadi,
aspek tanaman
pengembangan dan toleransi stres
tergantung pada peraturan
aktivitas CAX1. Tantangan penting
adalah memahami caranya
aktivitas CAX1 dan antiporter terkait
dikontrol.
Pompa
Pompa kalsium milik superfamili P-type
ATPase
yang secara langsung menggunakan
ATP untuk mendorong translokasi ion.
Dua berbeda
Keluarga pompa Ca2 telah diusulkan
atas dasar protein
identitas urutan (Geisler et al., 2000a;
Axelsen dan
Palmgren, 2001;
http://biobase.dk/~axe/Patbase.html).
Anggota
dari keluarga tipe IIA dan IIB, masing-
masing, termasuk
ER-type calcium ATPase (ECAs) dan
kalsium autoinhibited
ATPASAS (ACAs). ACA dibedakan dari
ECA oleh tiga fitur biokimia: 1)
Kehadiran sebuah
Autoinhibitor N-terminal, 2) aktivasi
langsung melalui pengikatan
Ca / calmodulin, dan 3) ketidakpekaan
terhadap penghambatan oleh
cyclopiazonic
asam dan thapsigargin (Gambar 4B; Sze
et al., 2000). Menariknya,
sebuah pompa yang menunjukkan
karakteristik campuran dari kedua ECA
dan pompa ACA diidentifikasi dalam
jagung (Subbaiah dan Sachs,
2000). Namun, "gen chimeric" yang
sesuai belum
telah ditemukan dalam genom
Arabidopsis, menunjukkan bahwa ini
pompa yang tidak biasa tidak umum
untuk semua tanaman darat.
Di Arabidopsis, ada empat ECA dan
sepuluh kalsium tipe ACA
pompa (Axelsen dan Palmgren, 2001).
Isoform ECA1
tampaknya terletak di UGD, sebagaimana
ditentukan oleh membran
fraksinasi dan imunodeteksi (Liang et al.,
1997;
Hong et al., 1999). Namun, potensi
isoform lainnya
penargetan ke lokasi non-ER harus
dipertimbangkan. Di dalam tomat,
ada bukti dari fraksinasi membran dan
imunodeteksi yang menunjukkan bahwa
kalsium tipe ER terkait
pompa (terkait LCA1) ada dalam
vakuolar dan
membran plasma (Ferrol dan Bennett,
1996).
Subkelompok ACA tanaman Ca2 ATPase
paling dekat
terkait dengan pompa tipe membran
plasma yang ditemukan pada hewan.
Namun, mereka membentuk
subkelompok yang berbeda dibedakan
oleh dua fitur: 1) pengaturan struktural
yang unik dengan
domain autoinhibitory pada ujung N
bukan ujung C,
dan 2) perwakilan yang menargetkan ke
membran
selain membran plasma (yaitu
endomembran).
Sementara ACA8 telah ditemukan pada
membran plasma
(Bonza et al., 2000), seperti yang
diharapkan atas dasar hewan
paradigma, lokasi endomembrane telah
diidentifikasi untukACA2 (ER; Liang et
al., 1997; Hong, et al., 1999) dan ACA4
(vakuola kecil; Geisler et al., 2000b).
Selain itu, bukti
menunjukkan bahwa ACA1 terletak di
dalam amplop dalam plastid
membran (Huang et al., 1993). Lokasi
subselular
belum ditentukan untuk ACA7, 9, 10, 11,
12, dan 13.
Overlap Fungsional?
Mengingat kemungkinan setidaknya 26
pompa kalsium dan antiporter
di Arabidopsis, ada kemungkinan bahwa
banyak sistem penghabisan
terletak di sistem membran yang sama
akan ditemukan. Sebagai contoh,
di vakuola, ada bukti untuk antiporter H /
Ca2
(seperti CAX1p) dan pompa kalsium
autoinhibited,
seperti ACA4. Di UGD, ada bukti untuk
dua yang berbeda
jenis pompa kalsium, ECA1 dan ACA2.
Sebuah tantangan penting
adalah untuk menggambarkan fungsi
spesifik dan redundan untuk
masing-masing jalur penghabisan yang
berbeda (Harper, 2001).
Regulation
Sekarang jelas bahwa kegiatan
transportasi diatur untuk
CAX1 dan sebagian besar anggota
pompa kalsium tipe ACA,
sebagaimana ditunjukkan oleh bukti
eksperimental dan analogi struktural.
Namun, pada tumbuhan, tidak ada
bukti eksperimental
untuk pengaturan aktivitas ECA.
Secara teori, ECA tanaman
jalur dapat menyediakan kegiatan
"menjaga rumah" konstitutif
yang hanya "membersihkan" pada
tingkat yang konstan setelah kalsium
melepaskan. Namun demikian, ada
dua alasan untuk
mengharapkan semacam kontrol
pengaturan. Pertama, paling banyak
Pompa kalsium tipe ER yang terkait
erat dalam sistem hewan
sangat diatur. Pada hewan, aktivitas
sakro-
(endo) plasmic reticulum-type Ca2
ATPase pump secara ketat
diatur oleh status fosforilasi dari
subunit penghambatan,
phospholamban (East, 2000). Selain
itu, ada bukti
bahwa pompa jenis ER-hewan dapat
diatur oleh a
sistem umpan balik yang
mempertahankan beban Ca2 yang
sesuai
dalam lumen ER (Bhogal dan Colyer,
1998; Mogami et al.,
1998). Kedua, pengamatan pada
tumbuhan regulasi
jalur CAX1 dan ACA mendukung
spekulasi itu
semua jalur penghabisan utama
dalam sel tumbuhan diatur secara
hati-hati.
Dengan asumsi bahwa ECA diatur,
tantangan penting
adalah menentukan untuk setiap jalur
eflux spesifik apakah
peraturan transporter adalah sebagai
mekanisme penyetelan
mengontrol besarnya atau durasi dari
lonjakan kalsium (yaitu, a
signaling function), atau sebagai
kontrol umpan balik untuk mengatur
distribusi
dan kadar kalsium pada permukaan
sel atau berbeda
kompartemen endomembrane (yaitu,
fungsi nutrisi).
MEMUTUSKAN SINYAL KALSIUM
Persepsi awal sinyal kalsium terjadi
melalui
pengikatan kalsium ke banyak sensor
kalsium yang berbeda. Sensordapat
dibagi menjadi dua jenis, relay
sensor dan responder sensor.
Relay sensor, seperti calmodulin,
menjalani
perubahan konformasi yang
diinduksi kalsium (penginderaan)
yang disampaikan
kepada mitra yang berinteraksi. Mitra
yang berinteraksi kemudian
merespon dengan beberapa
perubahan dalam aktivitas enzim
atau strukturnya
(misalnya, stimulasi calmodulin
kalsium ACA
aktivitas pompa). Jenis sensor ini
termasuk calmodulin dan
protein seperti kalsineurin B yang
ditinjau secara terpisah di
masalah ini oleh Luan et al. (2002).
Sebaliknya, penanggap sensor
menjalani kalsium yang diinduksi
perubahan konformasi
(penginderaan) yang mengubah
protein
memiliki aktivitas atau struktur
sendiri (mis., aktivasi intramolekul a
Ca2-kinase protein independen
[CDPK]). Menurut definisi,
fungsi sensor relay melalui interaksi
bimolecular,
sedangkan fungsi sensor responders
melalui intramolecular
interaksi. Ini dua mode berbeda dari
decoding kalsium
sinyal digunakan secara luas pada
tanaman untuk menyediakan banyak
jalur di mana kalsium dapat memicu
jumlah yang beragam
tanggapan.
Kinase yang Diatur Kalsium
Kinase merupakan jalur penting di
mana kalsium
sinyal didekodekan dan disebarkan
ke hilir
perubahan struktur dan aktivitas
enzim (Harmon et al.,
2000). Di Arabidopsis, kinase terbukti
terlibat
dalam mendekode sinyal kalsium
semua milik CDPK / SNF1-
keluarga kinase terkait
(http://plantsP.sdsc.edu). Dari 84
anggota
dari keluarga ini, 59 diprediksi akan
diatur oleh kalsium,
berdasarkan kesamaan struktural
untuk karakteristik biokimia
anggota, dan dari 34 ini adalah CDPK
yang mengikat kalsium
langsung melalui domain peraturan
mereka yang seperti kalimodulin
(sensor-responders). Sisa 25 terdiri
dari SNF1-
terkait kinase 3 subkelompok,
anggota yang tampak berinteraksi
dengan beragam koleksi sensor
seperti B calcineurin
relay dan memainkan peran dalam
sejumlah proses pensinyalan,
termasuk yang terkait dengan
toleransi garam (Halfter et al., 2000;
Luan et al., 2002).
CDPK unik karena kehadiran C-
terminal
domain peraturan yang mirip dengan
calmodulin yang berfungsi untuk
pasangan
sensor kalsium (yaitu, domain yang
mirip dengan keadaan tenang)
langsung ke
"responden" nya (yaitu, kinase).
Kelompok kinase ini adalah yang
pertama
ditemukan pada tumbuhan (Harper et
al., 1991; Suen dan Choi,
1991). Sementara kinase struktural
analog telah
ditemukan di protista alveolate
(misalnya, Plasmodium; Zhao et al.,
1993; Zhang dan Choi, 2001), CDPK
belum ditemukan
di anggota cabang filogenetik
lainnya, termasuk jamur,
serangga, dan manusia.
Di Arabidopsis, sebagian besar
CDPK memiliki empat kalsium yang
mengikat EF
tangan, tetapi ada beberapa contoh
degenerasi atau
Tangan EF terpotong
(http://plantsP.sdsc.edu). Secara
ekstrim
akhir spektrum divergensi, ada
delapan
Kinase yang berhubungan dengan
CDPK (CRK) yang tidak lagi tampak
diatur oleh kalsium (Furumoto et al.,
1996) karena tingginya
tingkat divergensi dalam domain
mereka yang seperti kaldodulin.
DiSelain itu, ada dua PPCKs terkait
erat (fosfoenolpiruvat
caboxylase kinase) dan PPRKs
(PPCK-terkait
kinase) yang tidak memiliki domain
C-terminal atau satu dengan
tidak ada kesamaan yang signifikan
dengan protein yang mengandung
tangan EF.
Apa yang tampaknya hilang dari
Arabidopsis adalah potensi
homolog dari CaMK (kinase protein
dependen-calmodulin)
dan protein kinase C, yang mewakili
dua mayor
jenis kinase yang diatur oleh kalsium
yang berfungsi pada hewan
sistem (Satterlee dan Sussman,
1998). Selain itu, seorang
Arabidopsis
homolog belum ditemukan untuk
kalsium / calmodulin-
tergantung protein kinase, kinase
yang diidentifikasi dalam lilly
(Patil et al., 1995) dan tembakau (Liu
et al., 1998) yang bisa
diatur oleh calmodulin (analog
dengan CaMK) dan a
visinin-like regulatory domain
(analog dengan CDPK).
Ada bukti untuk cytosolic-, nuclear-,
cytoskeletal-,
dan CDPK yang berhubungan
dengan membran (misalnya, Schaller
et al.,
1992; Satterlee dan Sussman, 1998;
Martin dan Busconi,
2000; Patharkar dan Cushman, 2000;
Romeis et al., 2000;
Lu dan Hrabak, 2002), meningkatkan
harapan bahwa CDPK
dapat berpartisipasi dalam mengatur
semua aspek fisiologi sel.
Sementara tidak ada CDPK yang
tampak seperti membran integral
protein, 24 dari 34 CDPK Arabidopsis
memiliki potensi
Situs-situs myristoylation pada
permulaan dari variabel mereka yang
sangat tinggi
Domain N-terminal. Myristoylation
dan palmitoylation pada
N terminus telah terlibat dalam
asosiasi membran CDPK
(Ellard-Ivey et al., 1999; Martin dan
Busconi, 2000;
Lu dan Hrabak, 2002). Potensi CDPK
yang berbeda untuk merasakan dan
menanggapi
paku kalsium yang berbeda
disediakan oleh perbedaan
fungsional
diamati pada EF tangan yang
berbeda seperti kaldodulin
domain peraturan. Bukti bahwa
perbedaan semacam itu bisa terjadi
pengaruh ambang aktivasi kalsium
disediakan oleh
karakterisasi biokimia dari tiga
isoform kedelai yang berbeda
(Lee et al., 1998). Masing-masing dari
tiga isoform ditampilkan
ambang kalsium yang berbeda untuk
aktivasi setengah maksimal, dengan
perbedaan terbesar antara dua
isoform menjadi lebih banyak
dari sepuluh kali lipat (menggunakan
syntide-2 yang sama dengan substrat
protein).
Menariknya, substrat protein itu
sendiri (misalnya, histone
versus syntide-2) juga diamati untuk
mengubah kalsium
ambang batas dengan lebih dari
sepuluh kali lipat. Selanjutnya, ada
bukti
bahwa stimulasi kalsium dari
beberapa CDPK memiliki potensiasi
oleh utusan lipid putatif (Harper et al.,
1993; Binder
et al., 1994; Farmer and Choi, 1999),
interaksi dengan 14-3-3
(Camoni et al., 1998), dan fosforilasi
oleh kinase lainnya
(Romeis et al., 2000, 2001). Tema
yang muncul berbeda
CDPK dapat digunakan untuk
merasakan sinyal kalsium yang
berbeda,
dan aktivitas spesifik dari CDPK yang
diberikan akan bergantung
pada beberapa faktor, termasuk
modifikasinya dengan pensinyalan
lainnya
jalur dan interaksinya dengan hilir
yang berbeda
target.
Wawasan tentang peran fisiologis
CDPK telah datang
dari tiga strategi: 1) identifikasi
substrat potensial, 2)
dalam ekspresi planta dari CDPK
rekombinan, dan 3) di planta
penindasan aktivitas CDPK.
Ada daftar potensial substrat CDPK
yang berkembang yang diidentifikasi
melalui pendekatan yang melibatkan
in vitro fosforilasi ulangtindakan
(misalnya, Weaver and Roberts,
1992), protein-protein
interaksi (Patharkar dan Cushman,
2000), dan konsensus
prediksi situs (mis., Huang et al.,
2001). Target potensial termasuk
enzim / protein penting yang terlibat
dalam karbon dan nitrogen
metabolisme, seperti reduktase nitrat
dan sukrosa
sintase (Huber et al., 1996; Douglas
et al., 1998); respon stress
jalur, termasuk fenilalanin amonia
liase
(Cheng et al., 2001) dan amino-1-
cyclopropane carboxylate
sintase (Huang et al., 2001);
transportasi ion dan air, seperti
aquaporins (Weaver and Roberts,
1992; Johansson et al.,
1996; Huang et al., 2001), pompa
kalsium ACA2 (Hwang et al.,
2000), pompa proton membran
plasma (Lino et al., 1998), klorida
saluran (Pei et al., 1996), dan saluran
kalium KAT1
(Li et al., 1998; Berkowitz et al., 2000);
sitoskeleton, seperti
actin depolymerizing factor (Allwood
et al., 2001) dan myosin
rantai ringan (McCurdy and Harmon,
1992); dan transkripsi,
seperti regulator pseudoresponse
(Patharkar dan Cushman,
2000).
Bukti untuk fungsi potensial dari
CDPK berasal
ekspresi CDPK yang aktif secara
konstitutif dalam protoplas jagung
(Sheen, 1996). Dalam hal ini, yang
konstitutif aktif
versi isoform AtCPK10, tetapi tidak
isoform CPK1 atau 11,
memicu jalur signaling,
menghasilkan ekspresi wartawan
untuk kekeringan dan tekanan dingin
di bawah kendali
ABA / stress diatur promotor HVA-1.
Sampai saat ini, sudah ada
tidak ada laporan yang
dipublikasikan tentang ekspresi
stabil dari a
CDPK aktif secara konstitutif dalam
tanaman transgenik.
Namun, fenotipe tanaman yang
dihasilkan dari overekspresi
dari CDPK tipe liar telah dilaporkan.
Di dalam
Kasus, tanaman padi menunjukkan
peningkatan kekeringan, garam, dan
dingin
toleransi stres melalui overekspresi
OsCDPK7
(Saijo et al., 2000). Ada juga bukti
kuat in vivo untuk
peran potensial dari CDPK dalam
mengendalikan respon patogen
dalam tembakau (Romeis et al.,
2001). Dalam hal ini, penekanan
NtCDPK2 dan NtCDPK3 oleh gen
yang diinduksi virus
pembungkaman mengurangi dan
menunda hipersensitif Cf-9 / Avr9-
induced
Menanggapi dan memblokir fenotipe
layu yang diharapkan.
Bersama-sama, ini dalam studi planta
menyoroti
potensi untuk merekayasa tanaman
dengan CDPK yang berubah untuk
diperbaiki
respons tanaman terhadap stres
biotik dan abiotik.
MENENTUKAN SPESIFIKASI KE
SIGNAL CA2
Konvergensi dan Spesifisitas dalam
Signalling Ca2 Tanaman
Tanggapan spesifik untuk secara
kualitatif atau kuantitatif berbeda
rangsangan dapat disebabkan oleh
berbagai mekanisme.
Paling jelas, diferensiasi
menimbulkan jenis sel itu
siap untuk merespon secara berbeda
dengan mengekspresikan yang
berbeda
elemen penginderaan atau respons.
Memang, tanggapan jenis-sel khusus
kekeringan, garam, dan dingin telah
ditunjukkan di Arabidopsis
akar dengan penggunaan perangkap
penambah tipe sel khusus
penargetan aequorin (Kiegle et al.,
2000b). Di sel tunggal
tingkat, keterlibatan Ca2 dalam
kopling stimulus-responkopel
memunculkan masalah bagaimana
seorang kurir tunggal bisa
menyampaikan informasi untuk
tanggapan spesifik ke berbagai
macam
rangsangan yang berbeda (McAinsh
dan Hetherington, 1998). Sebagai
contoh,
baik auksin dan ABA dapat
menyebabkan peningkatan Ca2 di
sel penjaga stomata (Schroeder et al.,
2001). Namun,
auksin mengarah ke pembukaan
stomata dan ABA mengarah ke
penutupan.
Pertanyaan tentang kekhususan
menjadi lebih kompleks ketika
faktor-faktor seperti aklimatisasi
terhadap rangsangan sebelumnya
dipertimbangkan.
Misalnya, riwayat kekeringan atau
stres dingin sebelumnya
secara signifikan mempengaruhi
respon Ca2 berikutnya dari
Arabidopsis
bibit, yang mungkin melibatkan
perubahan pada kerabat
kontribusi dari berbagai sumber Ca2
seluler ke keseluruhan
Sinyal Ca2 (Knight et al., 1998).
Sel tumbuhan juga menampilkan
konvergensi sinyal, dimana a
berbagai macam input dapat
diintegrasikan ke dalam jumlah yang
lebih kecil
dari output. Berbeda dengan
kekhususan, melibatkan konvergensi
aktivasi unsur-unsur hilir yang
serupa dalam menanggapi yang
berbeda
rangsangan. Contoh yang baik
adalah penutupan stomata sebagai
jawaban
untuk menyalakan, CO2, dan
kekeringan, di mana sinyal Ca2
tampaknya memainkan peran kunci
(Schroeder et al., 2001).
Tanda Tangan Kalsium
Meskipun jumlah perubahan spesifik
yang dilaporkan stimulus
di seluler Ca2 ("tanda tangan" Ca2)
pada tanaman terus meningkat
(lihat Evans et al., 2001; Rudd dan
Franklin Tong,
2001 untuk ulasan terbaru), relatif
sedikit dari ini
dikategorikan dengan spesifik
dengan respon hilir.
Memang, perubahan tertentu dalam
Ca2 seluler dapat mencerminkan
gangguan
dari homeostasis Ca2 yang tidak
memiliki spesifik
function (Plieth, 2001). Bahkan di
mana telah ditunjukkan itu
Peningkatan Ca2 sangat penting
untuk proses tertentu, sebuah sinyal
Peran mungkin tidak jelas. Dalam
tabung serbuk sari, misalnya, BAPTA
buffer suntikan yang menghapuskan
gradien Ca2 apikal juga
menyebabkan penghambatan
pertumbuhan (Miller et al., 1992).
Apalagi buatan
elevasi Ca2 di satu sisi puncak
tabung polen
mengarah ke reorientasi
pertumbuhan (Malho et al., 1996).
Namun,
peran langsung Ca2 sebagai sinyal
khusus dalam mengarahkan
pertumbuhan telah dipertanyakan
oleh pengamatan bahwa osilasi
di Ca2 lag apikal belakang osilasi
pertumbuhan yang sesuai
(Messerli et al., 2000). Meski ada yang
menarik
bukti untuk interaksi yang luas antara
Ca2 -
tergantung dan jalur Ca2-independen
dalam sinyal tanaman
(mis., Jacob et al., 1999; Knight dan
Knight, 2001), ya
juga menjadi jelas bahwa pola
spesifik elevasi Ca2
sendiri dapat menimbulkan respons
spesifik.
Namun, menetapkan fungsi ke sinyal
Ca2 tertentu membutuhkan
memonitor respon terhadap stimulus
selama penghambatan
dari sinyal Ca2 dan memaksakan
sinyal Ca2 di
tidak adanya stimulus. Pada sel
tumbuhan yang lebih tinggi, ini
seringkali sulit,
dan manipulasi khusus dari sinyal
Ca2 untuk mempengaruhi secara
langsung
tanggapan hilir telah berhasil hanya
dalam a
jumlah tipe sel terbatas. Di seluruh
bibit Arabidopsis
menanggapi perawatan ozon, tanda
Ca2 biphasic
ditunjukkan berkorelasi dengan
peningkatan ekspresienzim
antioksidan glutathione S-transferase
(GST; Clayton
et al., 1999). La3 pretreatment
mengakibatkan penghapusan
kedua, tetapi bukan yang pertama,
komponen elevasi Ca2
dan juga menghambat ekspresi gen
GST. Meskipun keterlibatan
jenis sel yang berbeda dengan
respons yang berbeda
kinetika ke ozon tidak dapat
dikesampingkan dalam respons ini,
hasil menunjukkan fungsi yang
berbeda dari setiap fase dari
Ca2 “tanda tangan.”
Karena demonstrasi bahwa sel
penjaga stomata bisa
menunjukkan osilasi atau
peningkatan berulang dalam Ca2
sitosol
(McAinsh et al., 1995), kemajuan
signifikan telah dibuat
dalam membedah makna fungsional
mereka. Kunci untuk generasi
sinyal Ca2 cytosolic spesifik
mungkin terletak pada
keberadaannya
dari beberapa jalur masuk dan
penghabisan Ca2, yang
diri mereka sendiri mungkin diatur
oleh cytosolic Ca2 (Harper,
2001). Dalam sel penjaga stomata,
beberapa komponen ini
telah dimanipulasi dengan efek
konsekuen pada formulir
perubahan yang diinduksi oleh
stimulus dalam [Ca2] c. Di
Commelina communis
sel penjaga stomata, penghambatan
peningkatan Ca2 oleh
BAPTA buffer microinjection
menghasilkan penghambatan yang
hampir lengkap
dari penutupan stomata ABA (Webb
et al.,
2001). Peningkatan Ca2 sementara
dapat terjadi
sel penjaga berikut aktivasi membran
plasma Ca2
saluran dengan hyperpolarization
(Grabov dan Blatt, 1998) atau
Pengobatan H2O2 (Pei et al., 2000).
Efeknya pada stomata
aperture memanipulasi osilasi Ca2
dengan stimulasi atau
penghambatan pelepasan Ca2 oleh
cADPR atau InsP3 (Leckie et al.,
1998; Staxen et al., 1999)
menunjukkan keterlibatan yang jelas
utusan-utusan ini tetapi juga
menunjukkan tingkat redundansi
di jalur sinyal. Redundansi dalam sel
penjaga Ca2
signaling juga terbukti dari bekerja
dengan mutan yang rusak di
gen FIERY yang mengkodekan
inositol fosfatase. Berapi
mutan telah meningkatkan level
InsP3 namun menunjukkan rupanya
regulasi stomata normal,
berdasarkan pengukuran
kehilangan air transpirational (Xiong
et al., 2001). Peran dalam
regulasi lobang stomata molekul lain,
seperti
NAADP (Navazio et al., 2000) dan
inositol hexakisphosphate
(InsP6) (Lemitri-Chlieh et al., 2000),
mungkin terlibat dalam
memunculkan elevasi cyt [Ca2]
masih harus ditentukan.
Bukti lebih lanjut untuk respon-
ketergantungan spesifik
pola elevasi Ca2 datang dari
penemuan baru-baru ini
bahwa sphingosine-1-fosfat (S-1-P)
menginduksi osilasi Ca2
dalam sel penjaga (Ng et al., 2001).
Frekuensi dan
amplitudo ini tergantung pada
konsentrasi
diterapkan S-1-P, dengan efek yang
sesuai pada kinetika
penutupan stomata. Selama tiga
tahun terakhir, kemajuan signifikan
lebih lanjut
telah dibuat dalam menetapkan
kekhususan untuk "tanda tangan"
Ca2
dalam sel penjaga dengan
menggunakan neon ratiometic
indikator Ca2 protein (cameleon)
berubah menjadi Arabidopsis
sel penjaga (Allen et al., 1999).
Pekerjaan ini
gabungan teknologi kamuflase
dengan penggunaan homeostasis
Ca2
atau memberi isyarat mutan untuk
memberikan beberapa yang menarik
wawasan baru. Jadi, seperti yang
ditunjukkan pada Gambar 5, det3
mutan itu
rusak pada respons V-type H -
ATPase yang meningkat
Ca2 eksternal atau stres oksidatif
dengan peningkatan Ca2 yang
berkepanjangan
Gambar 5. Penggunaan Mutan
Arabidopsis dan Teknik Imaging Baru
Menghasilkan Pemahaman yang
Lebih Baik tentang Pemberian
Kalsium.
(A) Indikator Cameleon dinyatakan
dalam sel penjaga memungkinkan
ratiometric
pengukuran perubahan Ca2 sitosol
(rendah di kiri dan tinggi pada
kanan).
(B) Mutan menampilkan sinyal Ca2
abnormal yang gagal memicu
stomata
penutupan (Allen et al., 2000, 2001).
Dalam tipe liar (atas), berbagai
hormon atau perawatan stres
memicu serangkaian osilasi Ca2
yang diikuti dengan penutupan
stomata yang berkepanjangan.
Sebaliknya,
kenaikan mantap dalam kalsium
diamati pada det3 mutan (tengah)
dalam menanggapi perawatan seperti
Ca2 atau oksidatif eksternal yang
tinggi
stres (tetapi tidak ABA dan dingin).
Perawatan yang gagal menghasilkan
normal
osilasi juga gagal memicu penutupan
stomata berkepanjangan.
Respon penutupan stomata juga
terganggu pada mutan
gca2 (bawah). Dalam hal ini, sinyal
kalsium terjadi sebagai abnormal
"Frekuensi tinggi" pola osilasi
kalsium. Hasil ini
memberikan bukti genetik untuk
mendukung hipotesis yang spesifik
frekuensi osilasi Ca2 diperlukan
untuk penutupan stomata normal
tanggapan. tions, tidak seperti
tanaman wild type yang
menunjukkan transien yang berulang
peningkatan Ca2 (Allen et al., 2000).
Apalagi, tidak seperti wildtype
tanaman, stomata mutan det3 gagal
mendekat
Menanggapi perawatan ini.
Sebaliknya, dingin atau ABA
perawatan menghasilkan
peningkatan Ca2 serupa osilasi dan
respon penutupan stomata di det3
dan tanaman wild type.
Secara signifikan, memaksakan pola
khusus osilasi Ca2
oleh membran hiperpolarisasi
berulang dan depolarisasi
dapat menginduksi penutupan
stomata baik pada tipe liar maupun
det3 mutan.
Baru-baru ini, Allen dkk. (2001)
menunjukkan pola tertentu
elevasi Ca2 mungkin terlibat dalam
mengontrol keduanya
respon penutupan stomata dan
kondisi stabil akhir
bukaan stomata. Dengan demikian,
pada tanaman tipe liar, peningkatan
Ca2 sitosol memunculkan "kalsium-
reaktif" penutupan, tapi
osilasi dalam rentang frekuensi
tertentu diperlukan
untuk memprogram durasi
penutupan jangka panjang. Pekerjaan
ini juga
memanfaatkan gca2 (pertumbuhan
dikendalikan oleh asam absisat)
mutan
yang menunjukkan peningkatan
frekuensi osilasi Ca2
dalam menanggapi peningkatan Ca2
atau ABA ekstraseluler
dibandingkan dengan tanaman liar.
Stomata mutan ini
tidak dapat ditutup sebagai respons
terhadap Ca2 eksternal atau
ABA (Gambar 5). Memaksimalkan
osilasi Ca2 frekuensi lebih tinggi
pada stomata tipe liar, mirip dengan
yang terjadi di gca2 mutan,
hanya menghasilkan penutupan
stomata sementara. Pembedahan
dari elemen hilir yang diatur Ca2
yang terlibat dalam
Penutupan awal dan mantap sangat
ditunggu-tunggu.
Heterogenitas Spasial dan Lokalisasi
Sinyal Ca2:
Pesan Kecil dengan Makna Besar
Meskipun ada bukti bahwa elevasi sel
Ca2 penjaga stomata
dapat menyebar melintasi sel sebagai
bergerak lambat
gelombang Ca2 yang ditinggikan
(Grabov dan Blatt, 1998; Webb et
al., 2001), sejauh ini ada sedikit bukti
yang menunjukkan bahwa spasial
lokalisasi di daerah spesifik sitosol
memainkan peran
dalam fungsi mereka. Namun, dalam
tipe sel lainnya, peningkatan Ca2
terbatas pada organel tertentu atau
sitosol lokal
wilayah mungkin memiliki peran
pemberian sinyal khusus. Dengan
menggunakan nucleoplasmin-
Aequorin terkonjugasi, van der Luit
et al. (1999) adalah
mampu menunjukkan elevasi Ca2
nuklir dan sitosol yang terpisah
dalam bibit tembakau sebagai
respons terhadap mekanik
(angin) dan shock dingin, masing-
masing. Yang menarik, kedua tipe
sinyal Ca2 menghasilkan
peningkatan ekspresi NpCAM1,
menunjukkan konvergensi dari
pensinyalan Ca2 yang berbeda ini
jalur. Dalam studi paralel dengan
budaya suspensi tembakau
sel, Pauly et al. (2001) menunjukkan
bahwa cytosolic berbeda
dan sinyal nuklir mungkin terlibat
dalam diskriminasi antara
perawatan hiper dan hipo -otik.
Dalam embrio multicellular alga
Fucus, derajat berbeda
syok hipo-osmotik yang dihasilkan
sangat berbeda
pola spasial elevasi Ca2 dalam sel
rhizoid (Goddard et
al., 2000). Perawatan hipo-osmotik
ringan menghasilkan yang
berkelanjutan
amplifikasi gradien Ca2 di puncak
rhizoid.
Namun, guncangan hipo-osmotik
yang lebih berat menghasilkan
peningkatan sementara Ca2 cytosolic
apikal, hanya berlangsung selama a
beberapa detik, diikuti oleh elevasi
Ca2 yang jauh lebih besar
yang disebarkan sebagai gelombang
Ca2 bi-directional dari nuklir
wilayah. Dengan menggunakan
photorelease lokal dari kandang
InsP3
di daerah apikal atau nuklir,
peningkatan Ca2 di puncak sel
ditunjukkan untuk terlibat dalam
osmoregulasi, sedangkan nuklir
Peningkatan Ca2 bertindak untuk
memperlambat perkembangan siklus
sel.
Karya ini juga memberikan petunjuk
tentang mekanisme
perbanyakan gelombang Ca2. Baik
apikal dan perinuklear
Gelombang Ca2 diperbanyak sebagai
elemen peningkatan karakteristik Ca2
dari yang dijelaskan dalam berbagai
sel hewan (misalnya,
Haak et al., 2001; Wang et al., 2001).
Sejauh ini, tidak ada unsur seperti itu
komponen sinyal Ca2 telah
dijelaskan
untuk sel tumbuhan lain. Ini mungkin
mencerminkan, sebagian, kurangnya
studi pencitraan propagasi sinyal
Ca2 lebih tinggi
tanaman. Peningkatan cepat Ca2
dalam menanggapi dingin dan
Syok osmotik pada sel tumbuhan
yang lebih tinggi dapat memberikan
eksperimen yang berguna
sistem untuk pencitraan elemen
beresolusi tinggi
Peningkatan Ca2 yang mungkin
mendasari propagasi tanaman
Sinyal Ca2.
Sinyal Ca2 yang dibatasi secara
spasial juga tampak mendasari
respon dari akar rambut legum ke
Nod factor. Baru
bekerja dengan mutan Medicago
(Wais et al., 2000) dan
kacang (Walker et al., 2000) mulai
menunjukkan pola itu
dari Ca2 spiking menyampaikan
informasi yang sangat penting bagi
inisiasi peristiwa nodulasi dini. Di
kedua sistem, mutan
yang rusak dalam spiking Ca2 tidak
mampu
memperoleh tanggapan seperti
deformasi rambut akar atau ekspresi
gen-gen nodulasi awal (ENOD).
Mutan-mutan ini termasuk
sym8, sym10, dan sym19 mutan
kacang dan dmi1 dan
mutan dmi2 Medicago. Namun,
mutan lainnya
(sym2A, sym7, sym9, dan sym30 dari
kacang dan dmi3 dari Medicago)
yang juga rusak pada respon
nodulasi dini
memang menunjukkan spiking Ca2
normal. Jadi, dua kelas gen
(yaitu, mereka yang bertindak untuk
menghasilkan spiking Ca2 dan yang
itu
bertindak hilir dari spiking Ca2)
tampaknya diperlukan untuk
respon nodulasi. Meskipun masih
belum bisa dibedakan
antara peran langsung Ca2 dalam
respons ini atau
efek sekunder dari proses nodulasi
pada homeostasis Ca2,
mutan-mutan ini menyediakan alat-
alat penting untuk detail
diseksi yang pada akhirnya akan
memungkinkan perbedaan ini terjadi
terbuat. Menariknya, mutan nodular
kacang tertentu (sym8,
sym19, dan sym30) juga tidak dapat
membentuk mikoriza
sementara yang lain (sym10)
membentuk mikoriza normal. Karena
mutan sym10, sym8, dan sym 19
rusak pada
Ca2 spiking, ini bisa menunjukkan
bahwa sinyal Ca2 spesifik
eksklusif untuk nodulasi atau
pembentukan mikoriza, dengan
sym10 secara khusus terlibat dalam
sinyal faktor NOD.
Akhirnya, muncul bukti dari
penelitian hewan itu
sinyal Ca2 stimulus-spesifik dapat
terjadi tanpa terdeteksi
perubahan tingkat Ca2 seluler. Sudah
diketahui itu
Masuknya Ca2 terkait dengan
pengisian penyimpanan intraseluler
bisa
terjadi tanpa perubahan terukur Ca2
sitosol (Putney,
1999). Masukan Ca2 kapasitif seperti
itu kemungkinan penting
proses dalam generasi peningkatan
Ca2 berulang
(Berridge, 1995). Ini juga telah
ditunjukkan baru-baru ini (Dolmetsch
etal., 2001) bahwa fluks Ca2 melalui
tikus tipe L neuron kortikal
kanal Ca2 tegangan-gated yang
memiliki binding calmodulin
domain dapat menyebabkan elemen
respon cAMP nuklir
mengikat fosforilasi protein melalui
mitogen yang diaktifkan
jalur protein kinase. Domain pengikat
calmodulin
terbukti penting untuk
menyampaikan sinyal Ca2 ke
inti. Wahyu menarik ini menunjukkan
bahwa sebuah calmodulin
mengikat daerah dekat pori saluran
dapat berfungsi tidak hanya untuk
pengaturan efek aktivitas saluran
tetapi juga untuk menyampaikan
informasi
dibawa oleh masuknya Ca2 khusus
dari saluran itu ke
elemen hilir. Oleh karena itu tergoda
untuk berspekulasi
peran pensinyalan hilir untuk domain
pengikat calmodulin
CNGC (Arazi et al., 2000). Mengingat
ragam tumbuhan kalimodulin
isoform (Snedden dan Fromm, 2001),
potensi
untuk jalur pemberian sinyal khusus
saluran menjadi sangat signifikan.
Karena masuk melalui membran
plasma Ca2 -mampu
saluran cenderung mengarah ke Ca2
yang sangat terlokalisasi
ketinggian (Marsault et al., 1997; Zou
et al., 1999), lebar
kisaran proses pensinyalan Ca2-
spesifik bisa tidak terdeteksi
dengan metode saat ini untuk
memantau Ca2 seluler. PROSPEK
MASA DEPAN
Pada sebagian besar sel tumbuhan,
kontribusi relatif berbeda
sumber (eksternal, ER, atau vakuola)
dari Ca2 dalam generasi
sinyal Ca2 tertentu masih belum
jelas. Perbaikan dalam
penggunaan aequorin dan cameleons
yang ditargetkan, dikombinasikan
dengan
perbaikan dalam pencitraan spatio-
temporal sinyal Ca2,
akan diperlukan, bersama dengan
identifikasi pada molekul
tingkat, di tanaman, dari berbagai
saluran Ca2-enak dan
efek gangguan mereka. Rentang
berbasis protein
indikator neon untuk digunakan di
pabrik yang lebih tinggi cenderung
meningkat,
menyediakan berbagai sifat spektral,
dinamis
rentang, dan kinetika untuk
pencitraan Ca2 di lingkungan yang
berbeda.
Sebagai contoh, sisipan dari
calmodulin ke neon hijau
turunan protein, seperti "perikam"
yang baru dikembangkan
protein, dapat memungkinkan
pencitraan scan garis cepat cepat,
sangat loclalised
Peningkatan Ca2 (Nagai et al., 2001).
Temuan yang sangat signifikan
tentang peran mitokondria di
mengatur pola spatio-temporal dari
sinyal Ca2
muncul dari penggunaan indikator
yang ditargetkan dalam berbagai
sel-sel hewan (misalnya, Montero et
al., 2000). Mitokondria punya
juga telah terbukti memainkan peran
kunci dalam pola dan
perbanyakan gelombang Ca2 (mis.,
Haak et al., 2002). Bahkan
lebih mengejutkan, dengan
menggunakan indikator cameleon
yang ditargetkan

sitosol, ER lumen, dan matriks

mitokondria di HeLa

sel, Arnaudeau et al. (2001)

menunjukkan bahwa mitokondria

memainkan peran penting dalam

mendaur ulang Ca2 ke ER selama
histamin-

diinduksi Ca2 signaling. Pendekatan

semacam itu, bersama

dengan aplikasi yang lebih luas dari

resolusi spasial dan temporal yang
tinggi

confocal dan multiphoton pencitraan

indikator neon,

harus pergi jauh menuju menjelaskan

mekanisme subselular yang

mendasari pembentukan spesifik

Sinyal Ca2. Pendekatan ini,

dilengkapi dengankekayaan mutan
sekarang tersedia, akan
memungkinkan pengujian yang ketat

hipotesis tentang cara-cara di mana

sinyal Ca2

dikodekan dan diterjemahkan.