Tugas Individu

INSTRUMEN SPEKTROSKOPI

“RINGKASAN MATERI INSTRUMEN SPEKTROSKOPI”

OLEH:

WAHYUNINGSIH

F1C1 16 084

JURUSAN KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS HALU OLEO

KENDARI

2018
 INSTRUMEN SPEKTROSKOPI

A. Pengantar Spektroskopi
Sebelum awal abad ke-20, sebagian besar analisis kimia kuantitatif
menggunakan gravimetri atau titrimetri sebagai metode analisis. Dengan metode
ini, analis dapat mencapai tingkat akurasi yang tinggi, tetapi biasanya terbatas
pada analisis analit mayor dan minor. Metode lain yang dikembangkan selama
periode ini memperluas analisis kuantitatif untuk memasukkan jejak analit. Salah
satu metode tersebut adalah kolorimetri. Salah satu contoh analisis kolorimetri
awal adalah metode Nessler untuk amonia, yang pertama kali diusulkan pada
1856. Nessler menemukan bahwa menambahkan larutan alkali HgI2 dan KI ke
larutan encer amonia menghasilkan koloid coklat kuning kemerahan dengan
warna yang ditentukan oleh konsentrasi amonia.
Kolorimetri, di mana sampel menyerap cahaya tampak, adalah salah satu
contoh metode analisis spektroskopi. Pada akhir abad kesembilan belas,
spektroskopi terbatas pada absorpsi, emisi, dan hamburan radiasi elektromagnetik
tampak, ultraviolet dan inframerah. Selama abad kedua puluh, spektroskopi telah
diperluas yang mencakup bentuk-bentuk radiasi elektromagnetik lainnya
(spektroskopi foton), seperti sinar-X, gelombang mikro dan gelombang radio,
serta partikel-partikel penghisap (spektroskopi partikel), seperti elektron dan ion.
Spektroskopi secara umum merupakan ilmu yang mempelajari interaksi antara
radiasi elektromagnetik dengan suatu materi.
B. Interaksi Radiasi dengan Materi
1. Radiasi Elektromagnetik
Radiasi elektromagnetik atau cahaya adalah bentuk energi yang
perilakunya digambarkan oleh sifat-sifat gelombang dan partikel. Sifat optik
radiasi elektromagnetik seperti difraksi, dijelaskan paling baik dengan
menggambarkan cahaya sebagai gelombang. Banyak interaksi antara radiasi
elektromagnetik dan materi, seperti penyerapan dan emisi, yang akan lebih baik
bila dijelaskan dengan menggambarkan cahaya sebagai partikel atau foton.
2. Sifat Radiasi Gelombang Elektromagnetik
Radiasi elektromagnetik terdiri dari osilasi medan magnet elektrik yang
merambat melalui ruang sepanjang jalur garis lurus dan dengan kecepatan
konstan. Dalam ruang hampa, radiasi elektromagnetik berjalan dengan kecepatan
cahaya, c yaitu 2.99792 x 108 m/s. Radiasi elektromagnetik bergerak melalui
medium selain dari ruang hampa dengan kecepatan, v, kurang dari kecepatan
cahaya dalam ruang hampa.
3. Partikel Properti Radiasi Elektromagnetik
Ketika sampel menyerap radiasi elektromagnetik akan mengalami
perubahan dalam bentuk energi. Interaksi antara sampel dan radiasi
elektromagnetik paling mudah untuk dipahami jika kita berasumsi bahwa radiasi
elektromagnetik terdiri dari seberkas partikel energi yang disebut foton. Ketika
foton diserap oleh sampel, maka akan hancur dan energinya diperoleh sampel.
Energi foton berkaitan dengan frekuensi atau bilangan gelombang dan panjang
gelombang.
4. Mengukur Foton sebagai Sinyal
Beberapa sifat karakteristik radiasi elektromagnetik adalah energi,
kecepatan, amplitudo, frekuensi, sudut fase, polarisasi dan arah propagasi.
Spektroskopi hanya mungkin jika interaksi foton dengan sampel mengarah ke
perubahan dalam satu atau lebih dari sifat-sifat karakteristik tersebut.
Spektroskopi dibagi menjadi dua kelas besar. Dalam satu kelas teknik, energi
ditransfer antara foton radiasi elektromagnetik dan analit. Dalam spektroskopi
absorpsi energi yang dibawa oleh foton diserap oleh analit, mempromosikan analit
dari keadaan energi rendah ke keadaan berenergi tinggi. Sumber dari keadaan
energi tergantung pada energi foton. Spektrum elektromagnetik menunjukkan
bahwa penyerapan foton cahaya tampak menyebabkan elektron valensi dalam
analit bergerak ke tingkat energi yang lebih tinggi. Ketika analit menyerap radiasi
infra merah, salah satu ikatan kimianya mengalami perubahan energi vibrasi.
C. Hukum Lambert-Beer

Gambaar 10.21
Ketika radiasi elektromagnetik monokromatik melewati lapisan yang
sangat tipis dari ketebalan dx, maka akan mengalami penurunan kekuatan dP
(Gambar 10.21). Penurunan fraksi daya sebanding dengan ketebalan sampel dan
konsentrasi analit, C; sehingga
-dP
= aCdx 10.3
P
di mana P adalah insiden daya pada lapisan tipis sampel, dan a adalah konstanta
proporsionalitas. Mengintegrasikan sisi kiri persamaan 10.3 dari P = P0 ke P =
PT, dan sisi kanan dari x = 0 ke x = b, di mana b adalah ketebalan keseluruhan
sampel memberikan

Konversi dari ln ke log, dan mengganti persamaan 10.2, berikan

A = abC 10.4
–1 –1
dimana a adalah absorptivitas analit dengan satuan cm conc . Ketika konsentrasi
dinyatakan menggunakan molaritas, absorptivitas digantikan oleh absorptivitas
molar, e (dengan satuan cm–1 M–1)
A = ɛbC 10.5
Absorptivitas dan absorptivitas molar memberikan probabilitas bahwa analit akan
menyerap energi foton yang diberikan. Akibatnya, nilai untuk a dan ɛ bergantung
pada panjang gelombang radiasi elektromagnetik.
Persamaan 10.4 dan 10.5, yang menetapkan hubungan linear antara absorbansi
dan konsentrasi yang dikenal sebagai hukum Lambert- Beer atau lebih umum
sebagai hukum Beer. Kurva kalibrasi berdasarkan hukum Beer digunakan secara
rutin dalam analisis kuantitatif.
1. Hukum Beer dan Sampel Multikomponen
Hukum Beer dapat digunakan untuk sampel yang berisi beberapa
komponen penyerap asalkan tidak ada interaksi antara komponen. Absorbansi
individu, Ai, bersifat tambahan. Untuk campuran dua komponen X dan Y, total
absorbansi, Atot, adalah
Atot =Ax + Ay =εx bCx +εy bCy

Generalisasi, absorbansi untuk campuran n komponen, Am, diberikan sebagai

= ∑ = ∑ εi bCi 10.6
2. Keterbatasan Hukum Beer

Konsentrasi

Gambar 22

Analit dalam serangkaian solusi standar harus berupa garis lurus dengan
intersep 0 dan kemiringan ab atau ɛb. Namun, dalam banyak kasus, kurva
kalibrasi ditemukan tidak linier (Gambar 10.22). Penyimpangan dari linearitas
dibagi menjadi tiga kategori: fundamental, kimia, dan instrumental.
3. Keterbatasan Mendasar Hukum Beer
Hukum Beer adalah hukum yang hanya berlaku untuk analit konsentrasi
rendah. Ada dua kontribusi batasan mendasar terhadap hukum Beer. Pada
konsentrasi yang lebih tinggi, partikel tunggal analit tidak lagi berperilaku
independen satu sama lain. Interaksi yang dihasilkan antara partikel analit dapat
mengubah nilai ɛ. Kontribusi kedua adalah absorptivitas, a, dan absorptivitas
molar, ɛ, bergantung pada indeks bias sampel. Karena indeks bias bervariasi
dengan konsentrasi analit, nilai a dan ɛ akan berubah. Untuk analit konsentrasi
yang cukup rendah, indeks bias pada dasarnya tetap konstan, dan kurva kalibrasi
linear.
4. Keterbatasan Kimia untuk Hukum Beer
Penyimpangan kimiawi dari hukum Beer dapat terjadi ketika spesies yang
menyerap terlibat dalam reaksi kesetimbangan. Pertimbangkan, sebagai contoh,
analisis untuk asam lemah, HA. Untuk membangun kurva kalibrasi hukum Beer,
beberapa standar yang mengandung konsentrasi HA yang diketahui, Ctot,
disiapkan dan absorbansi masing-masing diukur pada panjang gelombang yang
sama. Karena HA adalah asam lemah, ia berada dalam kesetimbangan dengan
basa lemah konjugasinya, A–
HA + H2O ↔ H3O+ + A-
Jika HA dan A- menyerap pada panjang gelombang yang dipilih, maka hukum
Beers ditulis sebagai

A = ɛHA b + εxA bCA 10.7

di mana CHA dan CA adalah konsentrasi kesetimbangan HA dan A–. Karena

konsentrasi total asam lemah, Ctot, adalah
Ctot = CHA + CA

konsentrasi HA dan A– dapat ditulis sebagai

CHA = αHA 10.8
dimana αHA adalah fraksi asam lemah yang hadir sebagai HA. Mensubstitusi
persamaan 10.8 dan 10.9 ke dalam persamaan 10.7, dan menata ulang,
memberikan
CA = (1 - αHA )Ctot 10.9
Jika nilai-nilai αHA dapat bergantung pada konsentrasi HA, persamaan
10.10 mungkin tidak linier, kurva kalibrasi hukum A dari A versus Ctot akan
menjadi linier jika salah satu dari dua kondisi terpenuhi, Jika panjang gelombang
dipilih sehingga ɛHA dan ɛA adalah sama, maka persamaan 10.10
menyederhanakannya
A = ɛHAbCtot
dan ekspresi linear dari αHA dipertahankan konstan untuk semua standar, maka
persamaan 10.10 akan menjadi garis lurus pada semua panjang gelombang.
Bergantung pada nilai relatif ɛHA dan ɛb , kurva kalibrasi akan menjadi
penyimpangan positif atau negatif dari hukum Beer jika standar tidak di-buffer ke
pH yang sama.
5. Batasan Instrumental pada Hukum Beer
Ada dua batasan instrumental utama terhadap hukum Beer. Keterbatasan
pertama adalah hukum Beer benar-benar valid untuk radiasi murni monokromatik,
yaitu untuk radiasi yang hanya terdiri dari satu panjang gelombang. Menggunakan
radiasi polikromatik selalu memberikan penyimpangan negatif dari hukum Beer,
tetapi diminimalkan jika nilai ɛ pada dasarnya konstan selama rentang panjang
gelombang yang dilewatkan oleh pemilih panjang gelombang. Selain itu, lebih
disukai untuk membuat pengukuran absorbansi pada puncak serapan yang luas.
Untuk alasan tersebut penyimpangan dari hukum Beer kurang serius jika lebar
pita efektif dari sumber kurang dari sepersepuluh dari lebar pita alami dari
species. Ketika pengukuran harus dilakukan pada kemiringan, linearitas
ditingkatkan dengan menggunakan lebar pita efektif yang lebih sempit.
Radiasi nyasar adalah kontribusi kedua untuk penyimpangan instrumental dari
hukum Beer. Radiasi nyasar muncul dari ketidaksempurnaan dalam pemilihan
panjang gelombang. Radiasi nyasar menambahkan kontribusi tambahan, Pstray,
pada kekuatan cahaya mencapai detektor;
Pada analit konsentrasi kecil, Pstray lebih dari P0 dan Pr, dan absorbansi tidak
terpengaruh oleh radiasi nyasar. Hasilnya adalah penyimpangan negatif dari
hukum Beer.
D. METODE VALIDASI
Agar suatu metode analisis dapat digunakan, maka metode tersebut harus
mampu menghasilkan hasil dengan akurasi dan presisi yang bagus. Persyaratan
lebih lanjut untuk metode standar adalah bahwa analisis tidak boleh dipengaruhi
oleh perubahan analis yang melakukan pekerjaan (human error), laboratorium
tempat pekerjaan dilakukan, atau waktu ketika analisis dilakukan. Proses dimana
suatu metode disetujui untuk penggunaan umum dikenal sebagai validasi dan
melibatkan tes kolaboratif metode oleh analis di beberapa laboratorium. Pengujian
kolaboratif digunakan secara rutin oleh badan pengatur dan organisasi profesional
dalam menetapkan metode analisis standar.
Ketika seorang analis melakukan analisis tunggal pada sampel, perbedaan
antara nilai yang ditentukan secara eksperimental dan nilai yang diharapkan
dipengaruhi oleh tiga sumber kesalahan: kesalahan acak, kesalahan sistematis
yang melekat pada metode, dan kesalahan sistematis yang unik bagi analis. Jika
analisis replikasi yang cukup dilakukan, distribusi hasil dapat diplot. Lebar
distribusi ini dijelaskan oleh standar deviasi dan dapat digunakan untuk
menentukan efek kesalahan acak pada analisis. Posisi distribusi relatif terhadap
nilai true sampel, m, ditentukan baik oleh kesalahan sistematik yang melekat pada
metode dan kesalahan sistematis yang unik bagi analis. Untuk seorang analis
tunggal tidak ada cara untuk memisahkan kesalahan sistematis total menjadi
bagian-bagian komponennya.
Tujuan dari tes kolaboratif adalah untuk menentukan besarnya yang
diharapkan dari ketiga sumber kesalahan ketika suatu metode ditempatkan ke
dalam praktik umum. Ketika beberapa analis masing-masing menganalisis sampel
yang sama satu kali, variasi dalam hasil kolektif mereka termasuk kontribusi dari
kesalahan acak dan kesalahan-kesalahan sistematis (bias) yang unik untuk para
analis. Tanpa informasi tambahan, deviasi standar untuk data yang dikumpulkan
tidak dapat digunakan untuk memisahkan ketepatan analisis dari kesalahan
sistematis para analis. Posisi distribusi, dapat digunakan untuk mendeteksi
keberadaan kesalahan sistematis dalam metode ini.
1. Pengujian Kolaboratif Dua Sampel
Desain tes kolaboratif harus memberikan informasi tambahan yang
diperlukan untuk memisahkan efek kesalahan acak karena kesalahan sistematis
oleh para analis. Satu pendekatan sederhana yang diterima oleh Asosiasi Analis
Analis Resmi, adalah meminta setiap analis menganalisis dua sampel, X dan Y,
yang serupa dalam matriks dan konsentrasi analit. Hasil yang diperoleh oleh
masing-masing analis diplot sebagai titik tunggal pada grafik dua sampel,
menggunakan hasil untuk satu sampel sebagai koordinat-x dan nilai untuk sampel
lain sebagai koordinat y.
Bagan dua sampel dibagi menjadi empat kuadran, diidentifikasi sebagai
(+, +), (-, +), (-, -), dan (+, -), tergantung pada apakah poin dalam kuadran
memiliki nilai untuk dua sampel yang lebih besar atau lebih kecil dari nilai rata-
rata untuk sampel X dan Y. Jadi, kuadran (+,-) berisi semua titik yang hasilnya
untuk sampel X lebih besar dari mean untuk sampel X, dan hasil untuk sampel Y
kurang dari mean untuk sampel Y. Jika variasi dalam hasil didominasi oleh
kesalahan acak, maka poin harus didistribusikan secara acak di keempat kuadran,
dengan jumlah poin yang sama di setiap kuadran. Selanjutnya, poin akan
dikelompokkan dalam pola melingkar yang pusatnya adalah nilai rata-rata untuk
dua sampel. Ketika kesalahan sistematis secara signifikan lebih besar dari
kesalahan acak, maka poin akan ditemukan terutama di kuadran (+, +) dan (-, -)
dan akan dikelompokkan dalam pola elips di sekitar garis yang membagi dua
kuadran ini pada sudut 45°.
Inspeksi visual dari bagan dua sampel memberikan cara yang efektif untuk
menilai secara kualitatif hasil yang diperoleh oleh setiap analis dan kemampuan
metode standar yang diusulkan. Jika tidak ada kesalahan acak, maka semua titik
akan ditemukan pada garis 45°. Panjang garis tegak lurus dari titik manapun ke
garis 45°, oleh karena itu, sebanding dengan efek kesalahan acak pada hasil analis
itu. Jarak dari perpotongan garis untuk nilai rata-rata sampel X dan Y, ke proyeksi
tegak lurus dari titik pada garis 45°, sebanding dengan kesalahan sistematis analis.
Metode standar yang ideal dicirikan oleh kesalahan acak kecil dan kesalahan
sistematis kecil.
2. Pengujian Kolaboratif dan Analisis Varians
Dalam uji kolaboratif dua sampel, setiap analis melakukan penentuan
tunggal pada dua sampel terpisah. Data yang dihasilkan dikurangi menjadi satu set
perbedaan, D, dan satu set total, T, masing-masing ditandai dengan nilai rata-rata
dan standar deviasi. Pendekatan alternatif untuk pengujian kolaboratif adalah
dengan meminta setiap analis melakukan beberapa penentuan replikasi pada satu
sampel umum. Pendekatan ini menghasilkan kumpulan data terpisah untuk setiap
analis, membutuhkan perlakuan statistik yang berbeda untuk sampai pada
perkiraan untuk σrand dan σsys.
Berbagai metode statistik dapat digunakan untuk membandingkan tiga
atau lebih set data. Metode yang paling umum digunakan adalah analisis varians.
Varians diperkenalkan sebagai salah satu ukuran kumpulan data yang tersebar di
sekitar tendensi sentralnya. Dalam konteks analisis varians, penting untuk melihat
bahwa varians hanyalah rasio jumlah kuadrat untuk perbedaan antara nilai
individu dan mean, dengan derajat kebebasan. Sebagai contoh, varians, s2, dari
satu set data yang terdiri dari n pengukuran diberikan sebagai

di mana Xi adalah nilai dari pengukuran tunggal, dan X adalah mean. Seperti
yang akan kita lihat, kemampuan untuk mempartisi varians menjadi istilah
terpisah untuk jumlah kuadrat dan derajat kebebasan sangat menyederhanakan
perhitungan dalam ANOVA satu arah.
E. Spektroskopi Infra Merah
Spektrum infra merah (IR) terletak pada daerah dengan bilangan
gelombang 12800 sampai 10 cm-1 atau panjang gelombang 0,78–1000 m.
Umumnya daerah infra merah terbagi dalam infra merah dekat, infra merah
tengah dan infra merah jauh. Daerah spektrum infra merah dapat dilihat pada
Tabel 3.1.
Tabel. 3.1. Daerah Spektrum Infra Merah
Panjang Bilangan
Frekuensi
Daerah Gelombang Gelombang
(Hz)
(m) (cm-1)
Dekat 0,78 – 2,5 12800 – 4000 3,8x1014 – 1,2x1014
Tengah 2,5 – 50 4000 – 200 1,2x1014 – 6,0x1014
Jauh 50 – 1000 200 – 10 6,0x1014 – 3,0x1014

Aplikasi spektroskopi infra merah sangat luas baik untuk analisis kualitatif
maupun kuantitatif. Penggunaan yang paling banyak adalah pada daerah
pertengahan dengan kisaran bilangan gelombang 4000 sampai 670 cm-1 atau
dengan panjang gelombang 2,5 sampai 15 m.

1. Teori Spektroskopi Infra Merah

Senyawa organik juga menyerap radiasi elektromagnetik pada daerah infra

merah. Radiasi infra merah tidak mempunyai energi yang cukup untuk
mengeksitasi elektron tetapi dapat menyebabkan senyawa organik mengalami
rotasi dan vibrasi. Bila molekul mengabsorpsi radiasi infra merah, energi yang
diserap menyebabkan kenaikan dalam amplitudo getaran atom-atom yang terikat
itu. Jadi molekul ini berada dalam keadaan vibrasi tereksitasi. Radiasi infra merah
dengan frekuensi kurang dari 100 cm-1 atau dengan panjang gelombang lebih dari
100 m diserap oleh molekul organik dan dikonversi ke dalam energi rotasi
molekul. Bila radiasi infra merah dengan frekuensi dalam kisaran 10000 sampai
100 cm-1 atau dengan panjang gelombang 1 sampai 100 m diserap oleh molekul
organik dan dikonversi ke dalam energi vibrasi molekul.
Keadaan vibrasi dari ikatan terjadi pada keadaan tetap, atau terkuantisasi,
tingkat-tingkat energi. Panjang gelombang eksak absorpsi oleh suatu tipe ikatan
tertentu, bergantung pada macam getaran dari ikatan tersebut. Oleh karena itu,
tipe ikatan yang berlainan (C-H, C-C, O-H, dan sebagainya) menyerap radiasi
infra merah pada panjang gelombang karakteristik yang berbeda. Namun hanya
vibrasi yang menghasilkan perubahan momen dwikutub saja yang teramati di
dalam infra merah.
2. Jenis Vibrasi

Terdapat dua jenis vibrasi molekul yaitu vibrasi ulur (stretching) dan tekuk
(bending). Vibrasi ulur adalah pergerakan atom yang teratur sepanjang sumbu
ikatan antara dua atom sehingga jarak antara atom dapat bertambah atau
berkurang. Contoh vibrasi ulur , yaitu uluran simetri dan asimetri.
Vibrasi tekuk adalah pergerakan atom yang menyebabkan perubahan sudut
ikatan antara dua ikatan atau pergerakan dari sekelompok atom terhadap atom
lainnya. Contoh dari vibrasi tekuk adalah scissoring, wagging, twisting, dan
rocking. Dari keempat vibrasi tekuk, vibrasi scissoring dan rocking terletak pada
satu bidang sedangkan vibrasi wagging dan twisting terletak di luar bidang.
Tanda + dan - pada vibrasi twisting menunjukkan arah tegak lurus dengan bidang,
+ arahnya ke muka, dan - arahnya ke belakang.

Faktor-faktor yang mempengaruhi energi getaran: kekuatan gaya ikatan (k) dan
massa atom-atom.

Terdapat dua macam spektrofotometer infra merah, yaitu dengan berkas

tunggal (single beam) dan berkas ganda (double beam).

3. Interpretasi Spektrum Infra Merah

Spektrum infra merah merupakan plot antara transmitans dengan frekuensi

atau bilangan gelombang. Spektrum ini juga menunjukkan banyaknya puncak
absorpsi (pita) pada frekuensi atau bilangan gelombang yang karakteristik. Daerah
bilangan gelombang yang sering digunakan pada spektrum infra merah berkisar
antara 4000-670 cm-1 (2,5-15 m). Di bawah ini spektrum infra merah 1-propanol
(Gambar 3.2).

Gambar 3.2. Spektrum IR 1-propanol

Daerah antara 4000-1400 cm-1 (2,5-7,1m), bagian kiri spektrum infra

merah, merupakan daerah yang khusus berguna untuk identifikasi gugus-gugus
fungsional. Daerah ini menunjukkan absorpsi yang disebabkan oleh vibrasi
(regangan) uluran. Vibrasi uluran (stretching) khas bagi gugus-gugus fungsi yang
penting seperti OH, NH dan C=O terletak pada daerah ini. Ketiadaan serapan pada
daerah gugus-gugus tertentu, dapat diartikan bahwa molekul atau senyawa itu
tidak mempunyai gugus tersebut. Tidak adanya serapan pada daerah 1850-1540
cm-1 menunjukkan tidak adanya struktur yang mengandung gugus karbonil.
Namun dalam menafsirkan seperti itu, haruslah dengan hati-hati, sebab suatu
struktur tertentu yang khas dapat menyebabkan sebuah pita menjadi terlalu lebar
sehingga tidak terartikan. Untuk menginterpretasikan sebuah spektrum infra
merah tidak terdapat aturan yang pasti.
F. Spektroskopi UV-Vis
Teknik spektroskopi pada daerah ultra violet dan sinar tampak disebut
spektroskopi UV-VIS. Spektrofotometri ini merupakan gabungan antara
spektrofotometri UV dan Visible. Spektrofotometer UV-VIS merupakan alat
dengan teknik spektrofotometer pada daerah ultra-violet dan sinar tampak. Alat
ini digunakan guna mengukur serapan sinar ultra violet atau sinar tampak oleh
suatu materi dalam bentuk larutan. Konsentrasi larutan yang dianalisis sebanding
dengan jumlah sinar yang diserap oleh zat yang terdapat dalam larutan tersebut.
Metoda penyelidikan dengan bantuan spektrometer disebut spektrometri.
Dalam spektrometer modern, sinar yang datang pada sampel diubah panjang
gelombangnya secara kontinyu. Hasil percobaan diungkapkan dalam spektrum
dengan absisnya menyatakan panjang gelombang (atau bilangan gelombang atau
frekuensi) sinar datang dan ordinatnya menyatakan energi yang diserap sampel.
Prinsip Kerja UV-Vis
Penyerapan sinar tampak atau ultraviolet oleh suatu molekul dapat
menyebabkan terjadinya eksitasi molekul tersebut dari tingkat energi dasar
(ground state) ke tingkat energi yang lebih tinggi (excited stated). Proses ini
melalui dua tahap :
tahap 1 : M + hv  M*
tahap 2 : M*  M + heat
Kromofor (chromophores)
Kromofor adalah gugus atom yang menyebabkan terjadinya absorpsi cahaya.
1)Transisi σ  σ*
Disini suatu elektron didalam orbital molekul bonding diaksitasi ke orbital
antibonding yang sesuai dengan pengabsobsian radiasi. Molekul berada dalam
bentuk exited state, σ*. Relatif terhhadap transisi lainnya, energi yang diperlukan
untuk menyebabkan transisi σ  σ* adalah besar (Gambar 1). Metana sebagai
contoh senyawa yang mengandung hanya sedikit ikatan tunggal C – H dan karena
itu hanya dapat mengalami transisi σ  σ* yang memperlihatkan absorbsi
maksimum pada 125 nm.
2) Transisi n  σ*
Senyawa-senyawa jenuh yang mengandung atom-atom dengan electron
elektron yang tidak berpasangan (elektron nonbonding) mempunyai kemampuan
untuk mengadakan transisi n  σ*. Umumnya transisi ini memerlukan energi
yang lebih kecil dari pada transisi σ  σ*, dan dapat disebabkan oleh radiasi
didaerah antara 150nm dan 250nm.
3) Transisi π → π* dan transisi n → π*
Umumnya penggunaan spektroskopi serapan pada senyawa-senyawa
organik didasarkan pada transisi elektron n dan π karena energi-energi yang
diperlukan untuk proses-proses ini cukup rendah, yaitu pada spektrum yang baik
sekali (200 – 700 nm). Kedua transisi memerlukan adanya suatu gugus funsional
tak jenuh untuk menydiakan orbital π. Absorptivitas molar (ε) sangat besar yaitu
-1 -1
antara 1000 – 10.000 L.cm .mol . Jenis pelarut yang dipakai mempengaruhi
panjang gelombang maksimum.
4) Transisi n → π*
Transisi ini terjadi pada senyawa organik tak jenuh yang mengandung satu
atau lebih atom dengan pasangan elektron bebas yang berasal dari atom N, O, F,
-
Cl, Br, I, S, P. Absorptivitas molar (ε) relatif kecil yaitu antara 10 – 100 L.cm
1 -1
.mol .
Ausokrom
Ausokrom adalah adalah suatu gugus jenuh dengan elektron tidak terikat dimana
bila menempel kepada suatu kromofor.
Contoh : ikatan n (non bonding) seperti gugus : -OH; -OCH3; -NH2
Pergeseran (Shif)
 Bathochromic Shif (Red Shif) adalah pergeseran serapan maksimum ke
panjang gelombang yang lebih besar. Hal ini disebabkan oleh adanya
perpanjangan konjugasi (delokalisasi e ) yang disebabkan oleh pelarut,
pereaksi penggeser, dan auksokrom sehingga energi transisi akan lebih kecil (
panjang gelombang lebih besar)
 Hypsochroomic Shif (Bule Shif) adalah pergeseran serapan maksimum ke
panjang gelombang yang lebih pendek. Hal ini disebabkan oleh konjugasi yang
dihilangkan akibat pelarut atau pereaksi penggeser.