TUGAS IMUNOLOGI

ELISA READER

Disusun oleh:

Stella Refromanda Br Sembiring

F1D016043

Dosen Pengampu :
Drs. Chirul Muslim, Ph.D

JURUSAN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS BENGKULU
BENGKULU
2018
PENGERTIAN ELISA
Enzyme immunoassay (EIA) dan enzyme-linked immunosor-bent assay (ELISA) keduanya
digunakan secara luas sebagai alat diagnostik dalam dunia kedokteran dan sebagai tindakan
pengendalian kualitas di berbagai industri; mereka juga digunakan sebagai alat analisis dalam
penelitian biomedis untuk deteksi dan kuantifikasi antigen spesifik atau anti-tubuh dalam
sampel yang diberikan. Kedua prosedur ini memiliki prinsip dasar yang sama dan berasal dari
radioimmunoassay (RIA). RIA pertama kali dijelaskan oleh Berson dan Yalow (Yalow dan
Berson, 1960), di mana Yalow dianugerahi Hadiah Nobel pada tahun 1977, untuk mengukur
insulin plasma endogen. RIA kemudian dikembangkan menjadi teknik baru untuk mendeteksi
dan mengukur molekul bio-logis yang ada dalam jumlah yang sangat kecil, membuka jalan
untuk analisis dan deteksi molekul biologis yang tak terhitung jumlahnya lainnya, termasuk
hormon, peptida, dan protein. Karena kekhawatiran keamanan mengenai penggunaan
radioaktivitas, tes RIA dimodifikasi dengan mengganti radioisotop dengan enzim, sehingga
menciptakan EIA dan ELISA modern.

PRINSIP-PRINSIP UMUM
EIA / ELISA menggunakan konsep imunologi dasar dari antigen yang mengikat pada
antibodi spesifiknya, yang memungkinkan deteksi sejumlah kecil antigen seperti protein,
peptida, hor-mones, atau antibodi dalam sampel cairan. EIA dan ELISA menggunakan
antigen yang berlabel enzim dan antibodi untuk mendeteksi molekul bio-logis, enzim yang
paling sering digunakan adalah alkalin fosfatase (EC 3.1.3.1) dan glukosa oksidase (EC
1.1.3.4). Antigen dalam fasa cairan diimobilisasikan, biasanya dalam piring mikrotiter 96-
baik. Antigen dibiarkan mengikat ke antibodi spesifik, yang dengan sendirinya kemudian
terdeteksi oleh antibodi sekunder yang digabungkan dengan enzim. Substrat kromogenik
untuk enzim menghasilkan perubahan warna yang terlihat atau fluoresens, menunjukkan
adanya antigen. Pengukuran kuantitatif atau kualitatif dapat dinilai berdasarkan pembacaan
kolorimetri. Substrat fluorogenik memiliki sensitivitas yang lebih tinggi dan dapat secara
akurat mengukur tingkat konsentrasi antigen dalam sampel. Prosedur umum untuk ELISA
diuraikan pada Gambar 1.
Gambar 1. Teknik Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) yang digunakan untuk
mendeteksi antigen dalam sampel yang diberikan. Antigen (dalam fase cair)
adalah ditambahkan ke sumur, di mana ia menempel ke dinding. Antibodi primer berikatan
secara khusus dengan antigen. Antibodi sekunder terkait-enzim ditambahkan yang bereaksi
dengan chromogen, menghasilkan perubahan warna secara kuantitatif atau kualitatif
mendeteksi antigen.

Berbagai jenis ELISA telah dipekerjakan dengan modifikasi terhadap langkah-langkah dasar
yang dijelaskan pada Gambar 1. Langkah kunci dalam Tes ELISA adalah deteksi antigen
langsung atau tidak langsung dengan mengikuti atau mengimobilisasi antigen atau antibodi
cap-ture antigen, masing-masing, langsung ke permukaan sumur. Untuk pengukuran yang
sensitif dan kuat, antigen dapat secara khusus dipilih dari sampel antigen campuran melalui

JENIS ELISA
1. Indirect ELISA (ELISA tidak langsung)
Sampel yang harus dianalisis untuk antigen spesifik dipatuhi dengan sumur piring mikrotiter,
diikuti oleh larutan protein non-akting seperti albumin serum bovin untuk memblokir setiap
area dari sumur yang tidak dilapisi dengan antigen. Antibodi primer, yang berikatan khusus
dengan antigen, kemudian ditambahkan, diikuti oleh antibodi sekunder enzim yang
terkonjugasi. Substrat untuk enzim dikenalkan untuk mengukur antibodi primer melalui
perubahan warna. Konsentrasi antibodi primer yang ada di dalam serum secara langsung
berkorelasi dengan intensitas warna. Salah satu penerapan metode ELISA tidak langsung
adalah setan-strated oleh Haapakoski et al. (2013), yang menyelidiki peran aktivasi reseptor
Toll-seperti selama alergen senen sitologi kulit menggunakan ovalbumin (OVA) dalam
modulasi asma alergi. Dalam satu percobaan, paparan dermal terhadap ligan reseptor mirip-
Toll (lipopolisakarida, Pam 3 Cys, P (I: C)) ditunjukkan untuk menurunkan regulasi antibodi
IgE spesifik-OA dalam serum, sebagaimana diukur dengan teknik ELISA tidak langsung
(Gambar 2). ).
Kerugian utama dari ELISA tidak langsung adalah bahwa metanol imobilisasi antigen tidak
spesifik. Ketika serum digunakan sebagai antigen tes, semua protein dalam sampel dapat
melekat pada sumur piring mikrotiter. Keterbatasan ini, bagaimanapun, dapat diatasi dengan
menggunakan antibodi tangkap yang unik ke antigen tes khusus untuk memilihnya keluar
dari serum, seperti yang diilustrasikan dalam teknik sandwich di bawah ini.

2. Sandwich ELISA
Teknik sandwich digunakan untuk mengidentifikasi sampel anti-gen tertentu. Permukaan
sumur disiapkan dengan kuantitas antibodi yang terikat untuk menangkap antigen yang
diinginkan. Setelah situs pengikatan nonspesifik diblokir menggunakan albumin serum bovin,
sampel antigen-con-taining diterapkan ke piring. Antibodi primer tertentu kemudian
ditambahkan bahwa "sandwich" antigen. Antibodi sekreter terkait-enzyme diterapkan yang
mengikat ke antibodi primer. Konjugat antibodi-enzim yang tidak terikat dibersihkan.Substrat
ditambahkan dan secara enzim diubah menjadi warna yang dapat dikuantifikasi
kemudian. Canady dkk. (2013) menganalisis serum pasien menggunakan metode sandwich
untuk mendeteksi peningkatan tingkat pertumbuhan keratinosit (KGF) pada serum pasien
keloid dan skleroderma dibandingkan dengan kontrol yang sehat untuk mengukur KGF
manusia (Gambar 3).
Salah satu keuntungan menggunakan antibodi spesifik yang dimurnikan untuk menangkap
antigen adalah menghilangkan kebutuhan untuk memurnikan antigen dari campuran antigen
lain, sehingga menyederhanakan pengujian dan meningkatkan spesifisitas dan sensitivitasnya.

3. ELISA Kompetitif
Peristiwa kunci dari ELISA kompetitif adalah proses reaksi kompetitif antara antigen sampel
dan antigen terikat ke sumur dari piring mikrotiter dengan antibodi primer. Pertama, antibodi
primer diinkubasi dengan sampel anti-gen dan kompleks antibodi-antigen yang dihasilkan
ditambahkan ke sumur yang telah dilapisi dengan antigen yang sama. Setelah periode
inkubasi, antibodi yang tidak terikat dicuci bersih. Semakin banyak antigen dalam sampel,
semakin banyak antibodi primer akan terikat pada antigen sampel. Oleh karena itu, akan ada
sejumlah kecil antibodi primer yang tersedia untuk mengikat antigen yang dilapisi pada
sumur. Antibodi sekunder terkonjugasi ke enzim ditambahkan, diikuti oleh substrat untuk
memperoleh sinyal chro-mogenik atau fluoresensi. Ketiadaan warna menunjukkan adanya
antigen dalam sampel.

Keuntungan utama dari kompetisi ELISA adalah sensitivitasnya yang tinggi terhadap
perbedaan komposisi campuran antigen kompleks, bahkan ketika antibodi pendeteksi spesifik
hadir dalam jumlah yang relatif kecil (Dobrovolskaia et al ., 2006). Metode ini dapat
digunakan untuk menentukan potensi ekstrak alergen standar AS (Dobrovolskaia et al .,
2006) dan untuk mengukur total antibodi terhadap polisakarida kapsuler tipe Haemophilus
influenzae.

Gambar 2. Uji immunosorbent enzyme-linked tidak langsung (ELISA). Yg berhubung dgn

kulit paparan ligan reseptor mirip-Toll (lipopolisakarida, Pam 3 Cys, P (I: C))
didemonstrasikan menurunkan regulasi antibodi IgE spesifik ovalbumin dalam serum, yang
diukur dengan teknik ELI SA tidak langsung .

Gambar 3. Alat tes imunosorbent terkait-enzim Sandwich (ELISA). Itu Metode “sandwich”
digunakan untuk mendeteksi tingkat faktor pertumbuhan keratinosit (KGF) yang ditingkatkan
dalam serum pasien keloid dan skleroderma dibandingkan dengan kontrol yang sehat untuk
mengukur KGF manusia. Dicetak ulang dari Canady et al. (2013).
b pada sera manusia dari subjek yang divaksinasi (Mariani et al ., 1998). ELISA kompetitif
sering digunakan untuk mendeteksi antibodi HIV pada serum pasien. Antigen HIV dilapisi
pada permukaan sumur plat mikrotiter, dan dua antibodi spesifik diterapkan: satu
terkonjugasi dengan enzim dan yang lainnya dari serum pasien. Persaingan kumulatif terjadi
antara dua anti-tubuh untuk antigen yang sama. Jika antibodi hadir dalam serum, maka reaksi
antigen-antibodi terjadi, meninggalkan jumlah antigen yang sangat rendah yang tersedia
untuk mengikat dengan antibodi berlabel enzim. Sebagian besar anti-bodi berlabel enzim
yang tak berbekas dibersihkan, menghasilkan sedikit perubahan warna. Tidak adanya warna
merupakan indikasi sampel HIV-positif.

4. ELISA ganda dan portabel

ELISA ganda dan portabel adalah teknik baru yang menggunakan perangkat mul-ticatcher
dengan 8 atau 12 pin menonjol imunosorben pada tongkat pusat yang dapat direndam dalam
sampel yang terkumpul. Pencucian dan inkubasi dengan antigen enzim-konjugasi dan
kromogen dilakukan dengan mencelupkan pin di microwells prefilled dengan
reagen. Keuntungan utama dari peralatan laboratorium yang siap pakai ini adalah relatif
murah, dapat digunakan untuk skrining populasi yang besar, dan tidak memerlukan peralatan
ahli atau peralatan laboratorium, menjadikannya alat yang ideal untuk pengaturan sumber
daya rendah ( Balsam et al ., 2013). Aplikasi klinis termasuk deteksi titik perawatan penyakit
infeksi, racun bakteri, penanda onkologi, dan skrining obat.

KESIMPULAN
EIA / ELISA adalah metode yang kuat tidak hanya untuk penelitian biomedi-kal umum tetapi
juga sebagai alat diagnostik. Ini memungkinkan deteksi semua jenis molekul biologis pada
konsentrasi dan jumlah yang sangat rendah. Meskipun memiliki keterbatasan, EIA / ELISA
tetap merupakan alat penting baik dalam penelitian klinis dan dasar, serta dalam diagnostik
klinis.