MODEL STRUKTURAL DAN FUNGSIONAL FLAVONOL 2,4-DIOXYGENASE DARI

TEMBAGA(II)-FLAVONOLATE ES COMPLEX

ABSTRAK
Sebuah novel monocular tembaga(II)-flavonolate complex [CuIIL(fla)] (LH: 2-{[bis(pyridine-2-
ylmethyl)-amino]methyl}-4-methoxy benzoic acid, flaH: flavonol) telah dipersiapkan sebagai
model struktur dan fungsi ES ( Enzyme-substrat ) komplek dari CUII yang berisi flavonol 2,4-
dioksigenasi.Struktur, sifat dan reaktivitas terhadap molekul dioksigen yang telah diteliti
detailnya. Komplek tersebut memperlihatkan reaktivitas yang terbaik dari system model
tembaga(II ) – Flavonolate ES, bisa jadi ini berkontribusi terhadap koordinasi monodentat dari
substrat falvolate .

1. Pendahuluan

Sebagai dari kelompok cupin superfamily, flavonol 2,4-dioxygenase (FDO, quercetin 2,3-
dioxygenase) bertanggung jawab terhadap degradasi dari flavonol [ 1, 2] yang bisa
mengkatalis pembelahan oksigenatif 2 ikatan CAC dari O-heterocycle dari Flavonol yang
hasilnya berkorespondesi dengan depsides (phenolic carboxylic acid esters) serta
berevolusi bersama dengan karbon monoxide.

Jamur CUII yang berisi flavonol 2,4 dioksigenasi terlah terisolasi dari aspergillus
javanicus, aspergilus flavus dan aspergilus niger DSM 821. Struktur kristal CUII berisi
FDO dari aspergilus javanicus memperlihatkan bahwa ini homodimer yang berisi satu type
ion II tembaga (II) per unit monomer, dan sisi aktif memliki 2 struktur yang jelas berbeda.
Satu berkoordinasi dengan 3 histidine imidazole(His66, His68, and His112) dan molekul
air yang terdistorsi di dalam geometri tetrahedral, serta yang lain koordinasi tambahan oleh
anggota carboxylate dari Glu73 yang terdistorsi di dalam geometri trigonal bypyramidal.

Di bawah kondisi anaerobic, kelompok deprotonated 3 hydroxy dari flavonol terkoordinasi

ke cooper(II) dengan perpindahan molekul air dari adisi ES ( Enzyme-substrate ) dengan
pendistorsian geometri piramida persegi. Kelompok Karboxylate dari Glu73 tidak hanya
beraksi sebagai sisi aktiv basa untuk substrate deprotonation tetapi juga menstabilkan
ikatan substrat melalui interaksi ikatan hydrogen

sejauh ini, variasi Cu(II)/Cu(I) komplek telah dilaporkan sebagai studi biometric dari CUII
yang berisi FDO, dan hampir semua model ligand yang menggunakan laporan model
komplek adalah N- chelating polyamine ligands. Hanya 2 laporan memperhatikan Efek
carboxylate dan menunjukkan bahwa menambahkan kelebihan gratis carboxylate bisa
mempercepat dioxygenation substrat terikat flavonolate dengan mengubah modus
koordinasi flavonolate dari bidentate menjadi monodentate seperti yang ditemukan di
enzim asli. Hanya satu bantalan ligan dari grup carboxylate yang digunakan dalam ES
(enzim-substrat) model kompleks [CuIIL(fla)] _3CH3OH (LH: 2-{[bis(pyridin-2-
ylmethyl) amino] asam benzoat metil}, fla:flavonolate) telah dilaporkan, namun, kompleks
ini tidak ditandai secara structural.
Dalam komunikasi ini, untuk memiliki pengetahuan dari efek kelompok carboxylate
Dari Glu pada struktur, sifat dan reaktivitas menjadi molekuler O2, kami telah siap dan
ditandai oleh sebuah novel tembaga (II)-flavonolate kompleks [CuIIL(fla)] [22] memiliki
kelompok carboxylate dalam molekul ligan (LH: 2-{[bis (piridina - 2 - ylmethyl) amino]
metil}-4-methoxy asam benzoat, flah: flavonol) sebagai struktural dan fungsional ES
model FDO. Struktur, fitur spektroskopi, serta reaktivitas menjadi molekuler dioxygen
telah diselidiki rincianya untuk mendapatkan pengetahuan terhadap efek dari kelompok
carboxylate di model ligan pada struktur, properti redoks dan reaktivitas oksigenasi
kompleks.

Model ligan LH (Fig. 1) disiapkan sesuai laporan prosedur [23]. ES model kompleks
[CuIIL(fla)] Disintesis Menurut prosedur berikut. Solusi kimia CH3OH kering (3 mL) 0.1
mmol 2_H2O CuII (OAc) ditambahkan beberapa tetes ke CH2Cl2 (5 mililiter) larutan yang
mengandung flah- (23.8 mg, 0.10 mmol) dan LH (36.3 mg,0.1 mmol) pada suhu kamar di
bawah N2. Dalam kasus ini, kedua LH dan flah terdeprotonated oleh asetat (OAc_) dari
CuII (OAc) 2. Setelah pengadukan selama 30 menit, [CuIIL(fla)] disolasi sebagai serbuk
hijau gelap dengan memperlakukan dengan eter. Zaitun hijau mikro kristal diperoleh
dengan difusi eter ke dalam larutan CH2Cl2 kompleks pada suhu kamar.

Struktur [CuIIL(fla)] terdiri dari dua molekul crystallographically inequivalent, yang

berbeda dari satu sama lain sebagian di Panjang ikatan dan sudut. Setiap Cu(II)Di Pusat
geometri oktahedral terdistorsi dengan N3O3,set donor terdiri dari dua atom oksigen dari
flavonolate (O(3) /O(7), 3-hydroxylate; O(4)/O(8), 4-karbonil), satu carboxylate oksigen
O(1) (primer struktural dari karboksil dari Glu73), dan tiga atom-atom nitrogen dari LH,
dimana tiga nitrogen Atom dan atom oksigen hydroxylate O(3)/O(7) dari flavonolate
menduduki posisi ekuatorial, dan oksigen karbonil Atom O(4)/O(8) dan atom oksigen
carboxylate O(1)/O(5) dari ligan L_ menempati posisi aksial. Panjang obligasi Cu(1)-O(1)
dan Cu(2)-O(5) yang 2.226(3) Å dan 2.202(4) Å, masing-masing, mirip dengan Cu-
OGlu73 jarak (2.28 Å) ES adisi alami dari FDO [8]. Jarak Cu-O3-hydroxylate Cu (1)-O(3)
dan Cu(2)-O(7) yang 1.920(2) Å dan 1.956(3) Å, berturut - turut, Tapi jarak Cu-O4-
karbonil Cu(1)... O(4) dan Cu(2)-O(8) yang 2.479(35) Å 2.371(3) Å, berturut – turut dan
yang mana lebih panjang dari Semua yang mengandung CuII ES yang dilaporkan dalam
model kompleks untuk FDO (Tabel 1), jelas, kelompok terkoordinasi carboxylate
melihatkan interaksi lemah antara karbonil atom oksigen O(4)/O(8) dan Pusat CuII. Hal
ini luar biasa bahwa perbedaan Cu-O3 -hydroxylate dan Cu-O4-karbonil jarak Dd(Cu–O)
adalah 0.559 Å dan 0.415 Å, masing-masing juga lebih semua dari semua laporan CuII-
yang berisi ES model kompleks (Tabel 1). Semua hasil menunjukkan bahwa flavonolate
substrat agak cenderung monodentate, yang mungkin dimasukkan ke untuk
memperkenalkan kelompok carboxylate. Sudut torsi C(21)_C(22)_C(30)_C(31) dan
C(57)_C(58)_C(66)_C(67) adalah 10.223 _ (732) dan 16.625 (44) _, Rata – rata
menunjukkan bahwa atom C(22)/C(58) (sesuai untuk C(2) dari substrat flavonol, skema 1)
di kompleks memiliki beberapa karakter SP3 oleh pyramidalization, yang juga diamati
pada Adisi ES dari FDO yang mengandung CuII dari Aspergillus japonicus. Sebuah fitur
struktural harus menstabilkan substrat radikal fla_ yang dihasilkan dari transfer elektron
tunggal antara CuII dan terkoordinasi fla_ . [CuIIL(fla)] adalah yang struktural pertama
yang ditandai CuII-berisi FDO ES model kompleks yang memperkenalkan kelompok
carboxylate di model ligan L_, dan koordinasi geometri lebih dekat dengan ES adisi alami
dengan dibandingkan dengan ES lain.model [24 – 30] dengan ligan N chelating. Mungkin
estimasi mode koordinasi monodentate flavonolate yang harus dikaitkan dengan kelompok
carboxylate ligan L_ dan mungkin alasan utama reaktivitasnya lebih tinggi, didiskusikan
di bawah ini.

sampel padat dari Spektrum IR menunjukkan getaran C = O dari peregangan m (CO) atau
yang terkoordinasi kelompok karbonil dari flavonolate 1543 cm , yang mana perpindahan
merah dibandingkan dengan flavonol yang bebas.(1649 cm _ 1) [31] asimetris m (CO2)
dan simetris ms (CO2) frekuensi pereganganya dari kelompok carboxylate L _ muncul di
1611 dan 1420 cm. Perbedaan antara (Dm = tiang (CO2) /ms (CO2)) adalah sekitar 191
cm _ metode 1, ikatan monodentate carboxylate mode [32], sesuai dengan struktur X-ray
yang ditampilkan dalam Fig. 2.

properti Redoks [CuIIL (fla)] telah dilakukan pada siklik voltammetry di bawah N2 di
DMF dengan konsentrasi kompleks atau 2 mM dan KClO4 (0,5 M) jika elektrolit
mendukung. Rata-rata pemindaianya adalah 50 mV s. Setup eksperimental terdiri dari kaca
karbon bekerja elektroda, SCE referensi elektroda, dan kawat platinum pembantu
elektroda. . Semua potensi telah dirangkum versus SCE. Ada beberapa redoks quasi
reversibel muncul diE1/2 = _ 0.459 V (Dab = 142 mV, ipc ipa = 1,06), yang merupakan
sebanding untuk analog [CuIILH (fla)] dan dapat ditetapkan ke satu transfer elektron antara
CuI dan CuII (Fig. 3). Menariknya, beberapa quasi reversibel redoks lain muncul di E1/2
= + 0.399 V (Dab = 156 mV, ipc ipa = 0,84), yang dapat diberikan untuk transfer elektron
tunggal antara fla dan fla , fenomena ini tidak diamati dalam model yang mengandung CuII
ES kompleks lain untuk FDO. dua pasangan Redoks CuII /CuI dan fla/ fla muncul secara
bersamaan menunjukkan bahwa ada transfer elektron tunggal cepat antara substrat fla yang
terkoordinasi denga pusat CuII telah dilakukan pada model ES kompleks lain untuk CuII-
FDO [10,11,21], dan fla lebih stabil di kompleksnya, mungkin muatan negatif atau
kelompok carboxylate harus menstabilak stabil fla radikal melalui pusat CuII.

Dioxygenation dari [CuIIL (fla)] di DMF di 70 C memberikan 25,4% asam

benzoylsalicylic (HObs) sebagai produk utama dan kemudian terhidrolisis dengan jumlah
kecil air dalam pelarut dan amidated di pelarut DMF untuk memberikan 60.2% asam
benzoate,73,4%, asam salisilat dan 12.4% N, N-dimethylbenzamide (ditandai di LC-MS).
reaksi Dioxygenation produk mirip dengan adisi bakteri alami ES dari FDO, menunjukkan
bahwa kompleks model kami [CuIIL (fla)] memiliki reaktivitas enzimatik.
sejak [CuIIL (fla)] menunjukan penyerapan intens pita di 416 nm (e = 1,08 104 _ M _ 1 _
_ 1 cm), yang dapat diberikan ke p? p / transisi flavonolate terkoordinasi [33],
deoxygenation atau kompleks yang bisa diikuti dengan pemantauan menghilangnya
atau band di 416 nm (Gambar 4a). plot rata-rata tingkat reaksi awal versus konsentrasi awal
atau [CuIIL (fla)] (gambar 4b) dan O2 (Gambar 4 c) keduanya linear, sehingga tingkat
hukum dapat digambarkan Jika _ d [CuIIL (fla)] /dt = k [CuIIL (fla)] [O2]. Jadi, laju reaksi
tetap konstan k yang ditentukan sebagai (1.46 ± 0,05) M _ 1 _ S _ 1 jam 70 _ C(DH # = 62
± 2 kJ/mol _ 1, DS # = _ 63 ± 3 mol J _ _ 1 _ _ K 1) (Tabel S1,gambar. S1). Reaktivitas
sebelum dikumpulkan yang mengandung model kompleks CuII FDO yang jauh lebih
rendah dan diperlukan suhu tinggi (Tabel 1), tetapi kompleks kita dapat bereaksi pada
suhu yang rendah(50 _ 70 _ C, table S1). Dengan demikian, [CuIIL (fla)] menunjukkan
reaktivitas tinggi (Tabel 1) antara model yang sejauh dilaporkan. Reaktivitas tinggi bisa
dihubungkan ke kelompok carboxylate dari ligand, yang mungkin membuat flavonolate
CuII koordinat ke pusat dengan perkiraan monodentate mode koordinasi dan
meningkatkan reaktivitas dari [CuIIL (fla)] menuju O2 dengan menyumbangkan elektron.

Berdasarkan hasil, kami sarankan mengambil deoxygenation mekanisme dari [CuIIL (fla)]
seperti yang ditunjukkan dalam skema 2: pertama, ada keseimbangan yang cepat antara
[CuIIL (fla)] / [CuIL (fla _)] (A), yang mana lebih menguntungkan daripada aktivasi
dioxygen. Kemudian [CuIL (fla _)] bereaksi dengan satu O2 molekuler untuk membentuk
[CuIIL (fla _)] (B) dan radikal super oksida O2 _ _ perlahan-lahan dengan transfer
langsung satu elektron dari CuI ke O2. Maka B bereaksi dengan O2 _ _ cepat dan
melepaskan CO.
Kesimpulannya, kita telah berhasil mengembangkan struktur yang baik dan fungsional
model ES atau flavonol 2.4-dioxygenase. Struktur, Properti serta reaktivitas menuju O2
telah terselidiki secara rinci . Kompleks [CuIIL (fla)] menunjukkan reaktivitas enzimatik
yang lebih tinggi , yang mana itu tingkat terbaik dari kelompok carboxylate yang di
perlihatkan di model ligand [CuIIL (fla)] yang struktural pertama ditandai dengan
tembaga (II)- model kompleks flavonolate ES yang berhubungan dengan kelompok
carboxylate di dalam ligand untuk dioxygenase flavonol 2.4-. Jika diharapkan, kelompok
carboxylate koordinat menuju ion logam CuII, sehingga estimasi mode koordinasi
monodentate atau_ fla substrat. Kompleks model ES ini memiliki struktural yang terbaik
atau kompleks yang mengandung CuII flavonol 2.4- dioxygenase, dan struktur yang baik
membuat reaktivitas yang lebih baik.