PREPARASI SAMPEL

Zedoary turmeric oil (ZTO) diperoleh dari ekstraksi Curcuma wenyujin

2.2 NALISIS HPLC

Sistem HPLC Agilent 1100 dengan kolom Agilent C18 dan Fase gerak yang terdiri dari air dan
asetonitril dipompa pada laju alir 1 ml / menit dengan Sampel (10 l) disuntikkan ke dalam kolom
untuk mendeteksi enam komponen secara bersamaan pada 214nm dengan detektor array dioda
(DAD). Berikut profil kromatogram HPLC:

2.3 PREPARASI SNEDDS UNTTUK SAMPEL ZTO

UJI KELAYAKAN

ZTO (1 ml) dicampur dengan masing-masing minyak, surfaktan atau kosurfaktan (1 ml) dengan
vortexing selama 10 menit, disetimbangkan pada suhu kamar (24 jam) dihasilkan campuran
disentrifuugasi (3500 rpm, 10 menit) diperiksa secara visual.
KONSTRUKSI DIAGRAM FASE PSEUDO-TERNER

Serangkaian sistem pengemulsi diri disiapkan untuk masing-masing

lima formula (Tabel 1)
persentase berat minyak dari 25 - 70%, surfaktan dari 30 - 75%, co-surfaktan (Co-S) dari 0 - 25%
dan obat (ZTO: minyak 3:10 , kecuali untuk formulasi ZTO saja sebagai fase lipid). Sebanyak
(0,1 ml) sampel + 100 ml air suling dalam gelas kimia pada suhu kamar. Akan terbentuk emulsi
secara spontan dan tetesan akan menyebar dapat dilihat secara visual dengan kriteria penilaian
Khoo dan Andrew (1998) dan Shafiq et Al. (2007).

A = self-emulsification (baik + efisien) terbentuk warna kebiruan atau sedikit mikroemulsi putih
kebiruan (transparan atau semi transparan sistem tersebar) terbentuk dalam 1 menit)

B = terbentuk dalam 2 menit, emulsi kasar, perlu pertimbangan untuk memenuhi kriteria
emulsifikasi, emulsi berwarna putih ke abu – abuan,

C = terbentuk dalam waktu > dari 2 menit, emulsifikasi rendah, terlihat tetesan minyak mengambang
dipermukaan,

2.3.3 Pengaruh perbedaan formula terhadap ukuran droplet dan zeta potensi

Konsentrasi surfaktan dinaikan 5%, konsentrasi fasa minyak diturunkan 5% , tanpa co-
surfaktan sehingga total komponen konsentrasi 100%. Konsentrasi co-surfaktan dinaikan 5% ,
surfaktan diturunkan 5 % . Kecuali formula dengan ZTO sendiri sebagai fase minyak. Konsentrasi
ZTO sebagai fase minyak sebesar 30%. Sebagai tambahan pengaruh konsentrasi ZTO divariasi
dari 0 hingga 100%.

2.4 Analisis ukuran droplet dan Zeta Potensial

 Ukuran rata – rata droplet dan PDI dari SNEEDS diukur dengan PCS. PDI menggambarkan
keseragaman diameter partikel dan distribusi ukuran dari populasi mikroemulsi. Zeta potensial diukur
dengan alat yang sama dan nilai zeta potensial dikalkulasi dengan Smoluchowski equation.
2.5 Transmisi mikroskopi elektron (TEM) dari SNEDDS
Mikroskop elektron transmisi (H-600, Hitachi, Jepang) digunakan untuk mempelajari morfologi
nanoemulsi yang dihasilkan. Sebelum analisis, sampel SNEDDS diencerkan 1000 kali dengan air untuk
membentuk emulsi, diwarnai dengan 2% (b / v) asam fosfat tungstat selama 30-an dan ditempatkan pada
grid tembaga 400-mesh dengan film untuk observasi.
2.6. Studi dispersi in vitro
Dispersibilitas komponen aktif ZTO dari SNEDDS ke media berair dinilai menggunakan alat uji pelarutan
standar dengan peralatan I (DT 7061000LH, Erweka, Jerman) seperti yang dijelaskan di US Pharmacopeia
(USP29 / NF24, 2006). Kapsul gelatin keras, yang baru-baru ini diisi dengan ZTO yang diformulasi
(rotari∼650 mg; setara dengan 200 mg minyak esensial) yang secara lembut gelisah di dalam
keranjangstainless steel standar pada 100 rpm dalam 900 ml air murni, gas-cair terstimulasi (0,1 M HCl,
pH 1,2, bebas enzim) atau cairan intestinal simulasi (buffer fosfat, pH 6,8, bebas enzim) pada 37 ◦C. Sampel
(3 ml) ditarik dengan interval 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90 dan 120 menit disaring menggunakan filter
Millipore 0,45 m dan dianalisis dengan HPLC. Semua percobaan disolusi dilakukan dalam rangkap tiga.
2.7. Studi Stabilitas
jangka pendek dari ZTO yang tidak diformulasikan dalam botol kaca amber dinilai pada 25 ◦C selama
periode 10 hari. Studi stabilitas jangka panjang dilakukan dengan menyimpan formula SNEDDS siap pakai
dalam botol kaca amber tertutup pada 25 ◦C. Stabilitas fisik ditentukan dengan memantau perubahan
tergantung waktu pada karakteristik fisik (misalnya, fase pemisahan minyak esensial) dari formulasi
SNEDDS. Stabilitas kimia dari komponen aktif dianalisis dengan HPLC.
2.8 Studi Bioavailabilitas penelitian
Semua hewan disetujui dan diawasi oleh Komite Perawatan dan Penggunaan Hewan Institusional
Universitas Sichuan (Sichuan, Cina). Tikus jantan Sprague-Dawley (250 ±20 g) diperoleh dari
Laboratorium Animal Centre of Sichuan University (Sichuan, China). Tikus-tikus itu ditempatkan di bawah
kondisi standar suhu, kelembaban dan cahaya relatif, dan memiliki akses bebas ke diet tikus standar dan air
sebelum percobaan. Tikus dipuasakan semalam sebelum pemberian obat. Bioavailabilitas
ZTO-SNEDDS dibandingkan dengan ZTO unfor- mulated. Tikus dibagi secara acak menjadi dua kelompok
perlakuan dengan masing-masing enam tikus. ZTO-SNEDDS yang tidak diformulasi diberikan secara intra-
gastrointestinally dengan dosis 500 mg / kg dan 1625mg / kg (setara dengan 500mg / kg ZTO) dalam larutan
berair, masing-masing. Darah ditarik dari vena ekor ke dalam tabung centrifuge heparin pada 1, 2, 3, 3,5,
4, 4,5, 5, 6, 8, 12, 18, 24 jam setelah pemberian dosis oral. Sampel darah disentrifugasi pada 3500 rpm
selama 10 menit untuk memisahkan plasma dan disimpan pada-20 ◦C. Konsentrasi plasma GM dan standar
internal ditentukan dengan menggunakan metode yang dijelaskan di atas. Parameter farmakokinetik
dihitung oleh perangkat lunak DAS 2.0 (Komite Farmasi Farmakologi Matematika Cina, Cina)
menggunakan aturan trapezoidal (untuk perhitungan AUC).
Bioavailabilitas relatif, F, dari ZTO-SNEDDS dihitung menurut Persamaan. (1).

di mana AUC adalah area di bawah kurva konsentrasi-waktu plasma.

2.9. Analisis statistik

Data farmakokinetik dari dua formulasi dibandingkan dengan t-test Student. Nilai p kurang dari 0,05
dianggap signifikan secara statistik.