Aktivitas Fraksi Sitotoksik dan Dua Senyawa Terisolasi dari Sirih Merah (sirih

merah di Indonesia), Piper crocatum Ruiz & Pav.

Abstrak
Investigasi aktivitas sitotoksik menggunakan uji lethality udang air asin pada fraksi berdasarkan
polaritas pelarut telah dilakukan. Nilai konsentrasi penghambatan dari tiga fraksi ekstrak metanol
sirih merah (sirih merah Indonesia), Piper crocatum Ruiz dan Pav., Menunjukkan nilai IC50 2,04; 1,34
dan 2,08 μg / mL masing-masing dalam n-heksana, etil asetat dan butanol. Hasil ini menunjukkan
bahwa tanaman ini berpotensi sebagai agen antitumoral dan juga berpotensi menjadi kandidat
untuk penyelidikan lanjutan senyawa sitotoksik. Dua senyawa terisolasi, yang diidentifikasi sebagai
β-sitosterol dan 2- (5 ', 6'-dimetoksi-3', 4'-methylenedioxyphenyl) -6- (3 ", 4", 5 "-trimethoxyphenyl) -
3,7 dioxabicyclo [ 3,3,0] oktan telah diisolasi dari tanaman ini. Karakterisasi senyawa ini dilakukan
berdasarkan data NMR dan perbandingan dengan data dari literatur.

1. Perkenalan

Pemanfaatan tanaman sebagai bahan obat telah menjadi warisan. Di Indonesia, bahan baku
obat-obatan banyak ditemukan namun sayangnya, hanya sejumlah kecil tanaman ini yang secara
ilmiah telah dipelajari secara ilmiah. Diperkirakan hanya 5-15% dari perkiraan setengah juta spesies
tumbuhan di dunia telah diselidiki dan diputar untuk kegiatan kimia dan biologi. Jelas ditunjukkan
bahwa obat tradisional menawarkan sumber lead terapeutik yang kaya dan sebagian besar belum
diselidiki untuk sediaan farmasi.
Sekitar 80% populasi di dunia masih bergantung pada obat herbal dan obat alami lainnya
sebagai sumber pengobatan berbagai penyakit dan penyakit. Namun, sedikit usaha telah dilakukan
untuk menetapkan dasar ilmiah pengobatan tradisional dan untuk mengembangkan ketersediaan
tanaman menjadi produk farmasi yang berguna dan berharga.
Pemanfaatan tanaman ini awalnya berbentuk obat kasar, seperti tincture, teh, tapal obat,
serbuk, dan formulasi herbal lainnya. Tanaman spesifik yang akan digunakan dan metode aplikasi
untuk penyakit tertentu diturunkan melalui sejarah lisan. Dalam sejarah yang lebih baru penggunaan
tanaman sebagai obat-obatan telah melibatkan isolasi senyawa aktif, dimulai dengan isolasi morfin
dari opium pada awal abad ke-19. Isolasi dan karakterisasi senyawa aktif farmakologis dari tanaman
obat terus berlanjut hingga saat ini.
Tujuan yang terkenal untuk mempelajari tanaman obat adalah penemuan komponen bioaktif
baru, untuk mencari obat yang menjanjikan. Genus Piper memiliki keragaman terbesar dalam
distribusi geografis dengan sekitar 700 spesies di tropika Amerika dan hampir 340 spesies di tropika
Asia termasuk hutan hujan tropis Indonesia. Kimia anggota genus ini sangat diminati karena
beragam sifat biologisnya. Sebuah survei keragaman dan bioaktivitas menunjukkan bahwa genus ini
mengkhususkan pada produksi amida, fenilpropanoid, lignans dan neolignans, asam benzoat dan
chromen, alkaloid, polipidin, dan sejumlah besar senyawa asal biosintesis campuran.
Di keluarga Piperaceae, sekitar 677 senyawa yang berbeda telah diisolasi dari 112 spesies
keluarga ini. Mereka ditemukan 190 alkaloid / amida, 49 lignan, 70 neolignans, 97 terpena, 39
fenilpropanoid, 15 steroid, 18 kavapiron, 17 chalcones / dihydrochalcones, 16 flavon, 6 flavanon, 4
piperolida (cinnamylidone butenolides) dan 146 senyawa lain-lain Tidak sesuai dengan kelompok
metabolit sekunder yang umum. Dalam tulisan ini, kami melaporkan ekstraksi dan fraksinasi sirih
merah (sirih merah Indonesia), Piper crocatum Ruiz & Pav., Dari Sumatera Barat, Indonesia,
berdasarkan polaritas pelarut dan juga aktivitas sitotoksik dari pecahan menggunakan uji lethality
udang air asin (BSLT).
Di Indonesia tanaman ini secara tradisional digunakan sebagai obat herbal untuk pengobatan
penderita diabetes dan untuk pencegahan penyakit jantung koroner, terutama di Batusangkar,
Sumatera Barat, tempat tanaman ini dikumpulkan. Orang-orang mengkonsumsi tanaman ini dengan
memberi sedikit cuti di segelas air panas dan mengonsumsinya dua kali sehari. Berdasarkan
pengetahuan kami, belum ada laporan tentang isolasi senyawa murni dari tanaman ini sejauh ini.

Percobaan
2.1. Bahan

2.2.1. Metode ekstraksi dan fraksinasi berdasarkan polaritas

Seluruh tanaman kering dan bubuk dari Piper crocatum Ruiz dan Pav., (0.841 kg) diekstraksi pada
suhu kamar dengan MeOH untuk mendapatkan ekstrak metanol kasar 253,27 g (30.1153%) setelah
pengeringan. Fraksionasi dari ekstrak kasar ini didasarkan pada polaritas pelarut dengan
menggunakan pelarut non polar (n-heksana), semi polar (etil asetat) dan polar (butanol). Masing-
masing fraksi ini terkonsentrasi di bawah tekanan tereduksi dengan menggunakan evaporator putar
untuk menghasilkan permen karet hijau n-heksana 24,22 g (9,56%), permen karet hijau etil asetat
53,17 g (20,99%) dan permen karet butanol berwarna putih 61,23 g ( 24,18%) pecahan.

2.2.2. Investigasi fitokimia

Semua fraksi diajukan ke analisis metabolit sekunder8, 9. Fraksi heksana dan etil asetat
menunjukkan tes positif untuk terpenoid dan steroid, masing-masing, sedangkan fraksi metanol dan
butanol menghasilkan uji positif untuk senyawa fenolik, flavonoid, terpenoid dan steroid.

2.2.3. Pemurnian menggunakan beberapa metode kromatografi kolom

Fraksi yang memberikan pemisahan yang baik dengan kromatografi lapis tipis (KLT) dimurnikan
dengan menggunakan metode kromatografi kolom ganda dengan silika gel 60 sebagai fasa diam dan
n-heksana; Kombinasi n-heksana: etil asetat; Etil asetat: pelarut metanol sebagai fase gerak,
berdasarkan polaritas gradien langkah. Kromatografi ini menghasilkan fraksi yang dipantau oleh TLC
untuk mengevaluasi profil pemisahan.

2.2.4. Pemurnian fraksi n-heksan

Pemurnian fraksi n-heksan dengan kromatografi kolom SiO2 menggunakan gradien langkah polaritas
menghasilkan 650 fraksi yang dipantau pada pelat KLT untuk mengevaluasi profil pemisahan
senyawa. Profil TLC ini menghasilkan 14 gabungan fraksi yang diberi label PC1 ke PC14. Dari fraksi ini,
ada dua fraksi yang menunjukkan pemisahan senyawa yang baik. Kedua fraksi ini selanjutnya
dimurnikan dengan rekristalisasi untuk menghasilkan dua senyawa murni. Senyawa pertama adalah
steroid dan senyawa kedua adalah lignan. Senyawa ini dicirikan dan diidentifikasi berdasarkan sifat
fisik dan analisis spektroskopi.

2.2.5. Evaluasi aktivitas sitotoksisitas

Bioassay umum yang tampaknya mampu mendeteksi spektrum bioaktivitas yang luas yang ada
dalam ekstrak kasar adalah bioetanda udang air asin (BSLT). Teknik ini mudah dikuasai, sedikit biaya,
dan menggunakan sejumlah kecil bahan uji10. Sampel (rangkap tiga) yang akan diuji dilarutkan
dalam DMSO (dimethylsulfoxide) (2 mg / 400 μl atau 2 mg / 1000 μl) dan diencerkan secara serial
(10, 20, 30 dan 50 μl / 5 ml) dalam air laut. Sekitar 10-20 nauplii ditambahkan ke setiap set tabung
berisi sampel. Kontrol yang mengandung 50 μl DMSO di air laut dimasukkan ke dalam masing-
masing percobaan. Dua puluh empat jam kemudian, jumlah korban selamat dihitung, dicatat dan
konsentrasi mematikan 50% (nilai LC50) dihitung dengan analisis Probit11, 12.

2.2.6. Analisis statistik

Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan Sigma Plot 8.0. Data disajikan sebagai alat standar
kesalahan sampel rangkap tiga.

Hasil dan Diskusi

Investigasi aktivitas sitotoksik dengan menggunakan uji lethality udang air asin untuk mendeteksi
fraksi sitotoksik dari tanaman Piperaceae, Piper crocatum Ruiz dan Pav menunjukkan variasi aktivitas
sitotoksiknya. Nilai konsentrasi penghambatan tiga fraksi ekstrak metanol kasar sirih merah (sirih
merah di Indonesia), menunjukkan nilai IC50 2,04; 1,34, 2,08 dan 27,40 μg / mL dalam n-heksana,
etil asetat, fraksi butanol, dan ekstrak metanol. Hasil ini menunjukkan aktivitas larvisitas udang air
asin yang baik menurut literatur10, yang mengklasifikasikan ekstrak kasar dan zat murni menjadi
toksik (nilai LC50 <1000 μg / ml) dan tidak beracun (nilai LC50> 1000 μg / ml).
Penelitian fitokimia terhadap fraksi n-heksana dan EtOAc menunjukkan hasil tes positif untuk
terpenoid dan steroid, sedangkan fraksi butanol menunjukkan hasil uji positif untuk senyawa fenolik,
flavonoid, terpenoid dan steroid. Nilai LC50 untuk ekstrak dan semua fraksi terbukti merupakan
tanaman larvisida yang paling aktif. Hasil ini menunjukkan bahwa tanaman ini berpotensi sebagai
agen antitumoral dan juga berpotensi menjadi kandidat untuk penyelidikan lanjutan senyawa
sitotoksik.