Ryun-Kyung Lee 1,2, Hwa-Won Ryu 3, Hurok Oh 4, Mina Kim 1, dan Young-Jung Wee 1 *
1 Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Yeungnam University, Gyeongsan 712-749, Republik Korea
2 Zat Analisis Divisi, Daegu Regional Food and Drug Administration, Daegu 704-940, Republik Korea
3 Departemen Bioteknologi dan Bioengineering, Chonnam National University, Gwangju 500-757, Republik Korea
4 Korea Petroleum Kualitas Lembaga Inspeksi, Seongnam 462-420, Republik Korea
25 Februari 2014 mempertahankan pertumbuhan mikroorganisme. Namun, ketika umpan segar terkandung 100 g / l glukosa dan ekstrak
ragi 2 g / l selama cellrecycle terus beroperasi pada tingkat pengenceran 0,04 h- 1, lebih dari 90 g / l asam laktat terus
* Penulis yang sesuai
Telepon: + 82-53-810-2951; Fax: + menerus diproduksi, dengan produktivitas rata-rata 3,72 g / l · h. Dalam percobaan ini, 82 g ekstrak ragi (77% dari hasil
82-53-810-4662; E-mail:
pengurangan) dapat dikurangi untuk produksi 1 kg asam laktat dibandingkan dengan fermentasi batch produktivitas
yjwee@ynu.ac.kr
volumetrik yang sama.
pISSN 1017-7825, eISSN 1738-8872
pengantar digunakan untuk menghasilkan polimer murni dari poli ( L- asam laktat) dan
poli ( D- asam laktat) [3, 9]. Kemurnian optik dari asam laktat mempengaruhi
Asam laktat merupakan salah satu asam penting bangunan-blok organik sifat fisik dan biodegradabilitas dari PLA yang dihasilkan, dan D- asam laktat
yang diperoleh dari sumber daya terbarukan. Karena kehadiran dua kelompok biasanya berbahaya bagi metabolisme manusia [4, 22]. Oleh karena itu,
fungsional reaktif seperti -OH dan produksi fermentasi L- asam laktat telah menerima banyak minat dari para
- COOH, asam laktat dapat dikonversi menjadi berbagai macam senyawa peneliti dalam beberapa tahun terakhir [8, 11, 16, 20, 22, 24]. Pada skala
industri melalui reaksi kimia sederhana [19]. sifat kimia ini memungkinkan industri, biaya pembuatan asam laktat fermentasi ditargetkan kurang dari
asam laktat untuk berpartisipasi dalam aplikasi dalam berbagai industri, 0,8 US $ / kg, karena harga jual PLA harus menurun secara signifikan untuk
seperti makanan, farmasi, kosmetik, tekstil, dan sektor kimia lainnya [21]. Di bersaing dengan polimer sintetis [21]. Biaya tertinggi dalam produksi asam
antara berbagai aplikasi asam laktat, asam polylactic (PLA) telah laktat dengan fermentasi sesuai dengan bahan baku serta proses
memperoleh bunga di seluruh dunia karena karakteristik biodegradable dan pemulihan. González dan rekan kerja [6] mengusulkan evaluasi ekonomis
biokompatibel nya [14, 17]. Meskipun ada dua rute untuk produksi asam untuk produksi 50% food grade asam laktat dari whey ultrafiltered dan
laktat, seperti sintesis kimia dan fermentasi mikroba, produksi fermentasi ekstrak ragi sebagai bahan baku utama. Mereka melaporkan bahwa biaya
asam laktat telah mendapatkan banyak perhatian karena sumber daya ekstrak ragi adalah penyumbang utama terhadap biaya operasi, sesuai
petrokimia terbatas dan pencemaran lingkungan [21]. dengan 25% dari total biaya tahunan. Åkerberg dan Zacchi [1] juga
melaporkan bahwa biaya bahan baku untuk produksi asam laktat
oleh fermentasi dievaluasi menjadi 34% dari total biaya produksi. Oleh 38 ° C selama 12 jam pada rotary shaker (KMC-8480SF; Visi Scientific Co, Korea).
karena itu, ada kebutuhan untuk mengembangkan proses industri yang Setelah tiga transfer berturut-turut dari budaya ke 20 ml botol, 2 ml budaya akhir
menarik yang menganggap biaya bahan baku dan produktivitas. Operasi dipindahkan ke 50 ml botol berisi 40 ml media pertumbuhan, yang dibudidayakan
pada 38 ° C selama 6 jam pada rotary shaker. Kemudian, budaya dihasilkan
terus menerus dalam bioreaktor membran digabungkan ke proses
diinokulasikan ke dalam bioreaktor 2,5 L yang berisi 1 L medium produksi. Jumlah
fermentasi dan ultrafiltrasi akan menyebabkan biaya bahan baku berkurang
inokulasi akhir adalah 4% (v / v) berdasarkan volume kerja bioreaktor.
tanpa penurunan produktivitas [6].
proses yang berkesinambungan kopling ke bioreaktor membran dengan modul membran ultrafiltrasi aliran silang (SKUF-103-0830, 300 × 25 mm; SK
dibandingkan dengan proses yang berkesinambungan tradisional. Kimia, Suwon, Korea) memiliki 0,06 m 2 luas permukaan. ultrafiltrasi crossflow
dilakukan dengan membran polisulfon, dan molekul massa cut-off dari membran
adalah 30 kDa. Dua alat pengukur tekanan yang melekat pada inlet dan outlet dari
modul untuk tekanan pemantauan transmembran. Fermentasi kaldu beredar melalui
modul membran UF oleh pompa diafragma (Cole-Parmer Instrument, Vernon Hills,
Material dan metode
IL, USA). Sebuah kapal produk 2 L berkumpul dengan sistem untuk mengumpulkan
permeat. Sebuah pompa peristaltik 3-channel (Teledyne ISCO, Lincoln, NE, USA)
Saring bakteri dan Menengah
digunakan untuk menyediakan media segar dan untuk menghapus kaldu fermentasi.
Enterococcus faecalis RKY1 KCTC 8890P [10, 23, 24] sebagai bersifat
Setelah masing-masing berjalan, pembersihan dan sterilisasi membran ultrafiltrasi
homofermentatif sebuah L (+) - produser asam laktat yang digunakan selama penelitian
dilakukan dengan
ini. Budaya saham dipertahankan dalam 5 ml botol berisi kaldu dan 50% (v / v)
gliserol pada -20 ° C sampai digunakan. Media pertumbuhan terdiri dari 30 g / l
glukosa, 10 g / l ekstrak ragi, dan 6 g / l K 2 HPO 4. Medium produksi untuk batch dan
fermentasi kontinyu telah dilengkapi dengan 100 g / l glukosa, 0-40 g / l ekstrak ragi,
NaOH 0,1 M dan 200 ppm NaOCl. Disterilkan air deionisasi digunakan untuk
dan 6 g / l K 2 HPO 4. Solusi dengan semua kandungan kimia disterilisasi pada 121 ° C
pembilasan modul untuk menghilangkan sisa NaOH dan NaOCl solusi. Sebelum
selama 15 menit sebelum digunakan dalam fermentasi. Glukosa dan K 2 HPO 4 yang
setiap percobaan, bioreaktor, kapal pakan, dan pembuluh produk autoclave pada
dibeli dari Yakuri Pure Chemicals Co (Kyoto, Jepang), dan ekstrak ragi diperoleh dari
suhu 121 ° C selama 15 menit.
Difco Laboratories (Detroit, USA).
fermentasi
Fermentasi dilakukan dengan 1 L medium dengan 4% (v / v) inokulum dalam
inokulum Persiapan sistem bioreaktor 2,5 L. Fermentasi dimulai pada proses batch pada 38 ° C dan 200
Sel dari kultur stok dipindahkan ke botol 20 ml mengandung 15 ml medium rpm, dan pH budaya secara otomatis dikendalikan pada 7,0 dengan penambahan 10
Gambar. 1. Skema ilustrasi dari sistem bioreaktor membran-terintegrasi untuk sel-recycle produksi berkelanjutan asam laktat.
J. Microbiol. Biotechnol.
Produksi terus menerus Asam Laktat oleh Enterococcus faecalis RKY1 663
Untuk fermentasi terus menerus, proses batch terus hingga 6 jam, dan kemudian laju alir umpan lh (/ )
tingkat pengenceran (h- 1) = ------------------------------------------------------------------------------------------------------
ultrafiltrasi dengan sel-recycle dimulai. Budaya Periode waktu ini tumbuh dalam Volume kerja bioreaktor L ()
bioreaktor itu dalam fase eksponensial. Volume kerja bioreaktor dipertahankan pada
1 L dengan menyediakan medium fermentasi yang seimbang dengan permeat dari Hasil dan Diskusi
modul ultrafiltrasi dan dengan memompa keluar kelebihan volume bioreaktor. Laju
aliran permeat dari unit ultrafiltrasi dipertahankan sedemikian rupa bahwa itu adalah Pengaruh Konsentrasi Ragi Ekstrak Produksi Batch Asam Laktat
sama dengan laju alir umpan segar untuk bioreaktor. Kaldu diuji secara berkala untuk
memprediksi waktu ketika solusi dalam bioreaktor mencapai kondisi mapan.
Pengaruh konsentrasi ekstrak ragi pada fermentasi batch yang asam
laktat diselidiki dengan menggunakan medium kultur yang mengandung 100
g / l glukosa dan 0-40 g ekstrak / l ragi, dan hasilnya ditunjukkan pada Tabel
1. Kedua pertumbuhan sel dan produktivitas asam laktat yang linear
Metode analitis
meningkat hingga / l ekstrak ragi suplementasi 25 g, tetapi ini jarang
Sampel diambil pada interval waktu yang telah ditentukan, dan kepadatan optik dipengaruhi oleh ekstrak suplementasi ragi melampaui 25 g / l. Peningkatan
sampel tersebut diukur dengan spektrofotometer UV (UV-1700, Shimadzu, Jepang) serupa fermentasi asam laktat oleh suplementasi ekstrak ragi digambarkan
di 660 nm untuk mengukur pertumbuhan sel. Sampel kemudian disentrifugasi pada oleh Kulozik dan Wilde [12], yang melaporkan bahwa pertumbuhan sel dan
13.000 × g produktivitas asam laktat yang linear meningkat suplementasi ekstrak ragi
selama 20 menit dengan menggunakan bangku-top centrifuge (Visi Scientific Co) dan hingga 10 atau 15 g / l ketika 60 g / l laktosa digunakan sebagai sumber
supernatannya diambil untuk analisis asam laktat dan glukosa. konsentrasi asam karbon untuk produksi asam laktat oleh
laktat diukur menggunakan HPLC (Young Lin Instrumen, Korea) dilengkapi dengan
Aminex HPX87H ion-pengecualian kolom (300 × 7,8 mm; Bio-Rad, Hercules, CA,
USA) dan detektor UV ditetapkan pada 210 nm. Fase gerak adalah 5 mM H 2 BEGITU 4
Lactobacillus helveticus. Namun, biaya bahan baku untuk produksi asam
larutan pada laju aliran 0,6 ml / menit. Volume sampel disuntikkan adalah 20 μ l
laktat harus meningkat secara signifikan ketika fermentasi membutuhkan
setelah penyaringan dengan 0,2 μ m jarum suntik kertas filter. Temperatur kolom
tingkat tinggi suplementasi ekstrak ragi. Oleh karena itu, perlu untuk
tetap pada 35 ° C. Konsentrasi glukosa secara enzimatis dianalisis dengan
menggunakan kit tes (Asan Pharmaceutical, Korea). Pewarna merah dikembangkan
mengembangkan bahan baku alternatif dan / atau proses untuk produksi
dari dua reaksi berantai yang dipicu oleh oksidase glukosa dan peroksidase ekonomis asam laktat. Sistem sel-recycle dengan menggunakan membran
ditentukan oleh pengukuran absorbansi pada 505 nm. Setiap assay dilakukan dalam yang efisien untuk fermentasi asam laktat, karena produksi asam laktat
rangkap tiga dan nilai rata-rata disajikan. tingkat pengenceran didefinisikan sebagai biasanya terkait dengan pertumbuhan sel [5, 13, 22].
rasio laju alir umpan dengan volume kerja bioreaktor. produktivitas asam laktat
dihitung dengan menggunakan persamaan berikut.
Produktivitas (g / l · h- 1) = konsentrasi asam laktat (g / l) Sebelum operasi terus-menerus, fermentasi dimulai dengan batch mode
Tingkat Pengenceran × (h- 1) dan dioperasikan pada 38 ° C dan
Tabel 1. Pengaruh konsentrasi ekstrak ragi pada fermentasi batch yang asam laktat oleh E. faecalis RKY1.
ekstrak ragi (g / l) waktu fermentasi (h) asam laktat (g / l) Max. berat sel kering (g / l) Produktivitas (g / l · h- 1)
Sebuah fermentasi itu tidak selesai karena kurangnya suplementasi ekstrak ragi.
200 rpm dalam bioreaktor 2.5 L menggunakan 1 L volume kerjanya hingga 6 suplemen untuk pakan segar dapat mengakibatkan merangsang pertumbuhan
jam. Batch mode fermentasi dilakukan dengan menggunakan 100 g / l sel dan produksi asam laktat, tapi ini secara ekonomi tidak menguntungkan
glukosa, 15 g / l ekstrak ragi, dan 6 g / l K 2 HPO 4. Untuk terus beroperasi, pakan karena biaya sumber nitrogen adalah salah satu hambatan utama untuk
segar mengandung 100 g / l glukosa dan 0-4 g ekstrak / l ragi diperkenalkan produksi biologis kompetitif asam laktat [15].
ke dalam bioreaktor dengan tingkat pengenceran 0,04 h- 1. konsentrasi asam
laktat dan pertumbuhan sel selama percobaan ditunjukkan pada Gambar. 2.
Selama tahap budidaya terus menerus awal, konsentrasi asam laktat dan Pengaruh Konsentrasi Ragi Ekstrak Sel Recycle Produksi berkelanjutan
berat sel kering mencapai lebih tinggi dari 95 dan 13 g / l, masing-masing, Asam Laktat
ketika pakan segar mengandung 4 g / ekstrak l ragi diperkenalkan ke Sel-recycle fermentasi terus menerus E. facalis RKY1 dilakukan dengan
bioreaktor. Secara keseluruhan, konsentrasi asam laktat dan konsentrasi perangkat filtrasi membran untuk mencegah penurunan konsentrasi massa
massa sel mulai menurun dalam beberapa jam fermentasi terus menerus sel dalam bioreaktor dan untuk meningkatkan konversi substrat menjadi
dengan pengenalan media segar yang mengandung kurang dari 5 g / l ekstrak asam laktat. Untuk tujuan ini, fermentasi awalnya dimulai dengan modus
ragi. Meskipun pakan segar diperkenalkan ke dalam bioreaktor dengan tingkat batch, yang dioperasikan pada 38 ° C dan 200 rpm dalam bioreaktor 2.5 L
pengenceran signifikan rendah, jumlah ekstrak ragi yang digunakan dalam menggunakan 1 L volume kerjanya. Batch mode fermentasi dilakukan
percobaan ini tidak cukup untuk mempertahankan atau untuk merangsang dengan menggunakan 100 g / l glukosa, 15 g / l ekstrak ragi, dan 6 g / l K 2 HPO
pertumbuhan mikroorganisme. Peningkatan ekstrak ragi 4. Untuk terus beroperasi sel-recycle, pakan segar mengandung 100 g / l
glukosa dan 0-4 g ekstrak / l ragi diperkenalkan
Gambar. 2. Pengaruh konsentrasi ekstrak ragi pada ( SEBUAH) produksi asam laktat dan ( B) Gambar. 3. Pengaruh konsentrasi ekstrak ragi pada ( SEBUAH) produksi asam laktat
pertumbuhan sel selama fermentasi terus menerus oleh E. faecalis RKY1. dan ( B) pertumbuhan sel selama sel-recycle fermentasi kontinyu oleh E. faecalis RKY1.
Tingkat pengenceran untuk terus beroperasi ditetapkan pada 0,04 h- 1. Tingkat pengenceran untuk terus beroperasi ditetapkan pada 0,04 h- 1.
J. Microbiol. Biotechnol.
Produksi terus menerus Asam Laktat oleh Enterococcus faecalis RKY1 665
200 rpm dalam bioreaktor 2.5 L menggunakan 1 L volume kerjanya. sel selama sel-recycle fermentasi kontinyu oleh
Fermentasi batch yang awal dilakukan dengan menggunakan 100 g / l E. faecalis RKY1.
glukosa, 15 g / l ekstrak ragi, dan 6 g / l K 2 HPO 4, dan pakan segar Konsentrasi ekstrak ragi dari larutan umpan segar untuk terus beroperasi dipertahankan pada 2 g
Oleh karena itu, dapat disimpulkan bahwa biaya langkah fermentasi dapat vinasse kedelai di laboratorium dan skala pilot. Bioresour. Technol. 102: 1765-1772.
dikurangi dengan beroperasi dalam mode terus menerus, dan mendaur ulang
konsentrat ultrafiltrasi mengandung protein yang tidak terpakai dan sel untuk 12. Kulozik U, Wilde J. 1999. produksi asam laktat cepat pada konsentrasi sel yang
tinggi di whey ultrafiltrate oleh Lactobacillus helveticus. Enzim MicroB. Technol. 24:
bioreaktor. operasi semacam ini akan mengurangi mikroorganisme dan
297-302.
konsumsi ekstrak ragi dan akan meningkatkan produktivitas volumetrik dari
13. Kwon S, Yoo IK, Lee WG, Chang HN, Chang YK. 2001. Tingkat Tinggi produksi
bioreaktor. Dengan demikian, produksi terus menerus dari asam laktat melalui
berkelanjutan asam laktat oleh Lactobacillus rhamnosus dalam dua tahap
sistem bioreaktor membran-terintegrasi adalah pilihan ekonomis yang cukup
membran sel-recycle bioreaktor.
layak dan menarik.
Biotechnol. Bioeng. 73: 225-234.
6. González MI, Álvarez S, Riera F, Álvarez R. 2007. Evaluasi ekonomi dari suatu 20. Watanabe M, Makino M, Kaku N, Koyama M, Nakamura K, Sasano K. 2013.
proses yang terintegrasi untuk produksi asam laktat dari whey ultrafiltered. J. fermentatif L (+) - produksi asam laktat dari beras non-steril cuci drainase yang
Food Eng. 80: 553-561. mengandung dedak padi oleh bakteri asam laktat yang baru diisolasi tanpa
7. González-Pajuelo M, Adrade JC, Vasconcelos I. 2005. Produksi 1,3-propanadiol penambahan nutrisi. J. Biosci. Bioeng. 115: 449-452.
oleh Clostridium butyricum VPI 3266 dalam budaya terus menerus dengan hasil
yang tinggi dan produktivitas. 21. Wee YJ, Kim JN, Ryu HW. 2006. produksi bioteknologi asam laktat dan aplikasi
J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 32: 391-396. baru-baru ini. Makanan Technol. Biotechnol. 44: 163-172.
8. John RP, Nampoothiri KM, Pandey A. 2006. simultan sakarifikasi dan L (+) - fermentasi
asam laktat dari proteasetreated dedak gandum menggunakan kultur campuran 22. Wee YJ, Ryu HW. 2009. laktat produksi asam oleh Lactobacillus
Lactobacillus. sp. RKY2 dalam fermentasi kontinyu sel-recycle menggunakan hydrolyzates
Biotechnol. Lett. 28: 1823-1826. lignoselulosa sebagai bahan baku murah.
9. John RP, Nampoothiri KM, Pandey A. 2007. Produksi fermentatif asam laktat dari Bioresour. Technol. 100: 4262-4270.
biomassa: gambaran tentang perkembangan proses dan perspektif masa 23. Wee YJ, Yun JS, Kim D, Ryu HW. 2006. Batch dan batch produksi berulang L (+) - asam
depan. Appl. Microbiol. Biotechnol. 74: 524-534. laktat oleh Enterococcus faecalis
RKY1 menggunakan hidrolisat kayu dan jagung minuman keras curam. J. Ind. Microbiol.
10. Kang KH, Yun JS, Ryu HW. 2000. Pengaruh kondisi budaya pada produksi Biotechnol. 33: 431-435.
suksinat oleh Enterococcus faecalis RKY1. J. Microbiol. Biotechnol. 10: 1-7. 24. Wee YJ, Yun JS, Taman DH, Ryu HW. 2004. Bioteknologi produksi L (+) - asam
laktat dari hidrolisat kayu dengan fermentasi batch Enterococcus faecalis.
11. Karp SG, Igashiyama AH, Siqueira PF, Carvalho JC, Biotechnol. Lett.
Vandenberghe LPS, Thomaz-Soccol V, et al. 2011. Penerapan konsep 26: 71-74.
J. Microbiol. Biotechnol.