Perbedaan Fluorosensi dan Fosforesensi
Posisi Detektor
Fluorosensi
- Emisi oleh molekul yang telah menyerap energy sinar
terjadi dalam waktu yang sangat singkat setlah
penyerapan (10-8s)
- Jika peyinaran dihentikan, pemancaran kembali oleh
molekul (emisi) tersebut juga berhenti
- Berasal dari transisi antara tingkat – tingkat energy
singlet
Fosforesensi
- Emisi oleh molekul yang telah menyerap energy sinar
terjadi dalam waktu relative lebih lama setelah
penyerapan (10-8s)
- Jika penyinaran dihetikan, pemancaran kembali oleh
molekul (emisi) masih dapat berlangsung
- Berasal dari transisi anatara tingkat – tingkat energy
triplet ke singlet menjadi molekul
Struktur senyawa yang bisa berflurosein : struktur
yang lebih kaku dan tidak mengalami fibrasi shhg
langsung memancarkan cahaya
Semakin kaku strukturnya suatu senyawa maka smakin
besar/ mudah kemungkinan u/ mengalami
fluororesensi&fosoresesnsi
Faktor yang mempengaruhi Fluorosensi dan
Fosforesensi
1. Temperature (suhu)
a. EF berkurang pada suhu yang dinaikkan
b. Kenaikan suhu menyebabkan tabrakan antar mol
atau dengam mol pelatrut
c. Energy akan di pancarkan sebagai sinar
fluoresensi diubah menjadi bentuk lain
2. Pelarut
a. Dalam pelarut polar intensitas fluoresensi
bertambah karena dalam pelarut polar.
b. Jika pelarut yang digunakan mengandung atom –
atom yang berat (CBr4, C2H5I) maka intensitas
flouresensi berkurang, sebab ada interaksi
gerakan spin dengan gerakan orbital electron
ikatan mempercepat LAS maka inesitas
menjadu berkurang
3. PH mempengaruh keseimbangan dengan bentuk
molekul dan ionic
4. Oksigen  adanya oksigen terlarut dalam larutan
cuplikan menyebabkan intesitas fluoresensi
berkurang sebab:
a. Oksigen terlarut oleh pengaruh cahaya dapat
mengkoodinasikan senyawa yang dperiksa
b. Oksigen mempermudah LAS
5. Kekakuan struktur ( structural rigidity) struktur yang
rigid (kaku) mempunyai intesitas yang tinggi.
Adanyya –CH2- pada fluoren menyebabkan
struktrurnya lebih kaku
Perbedaan dengan Spektrofotometri UV – VIS
1. Kurvet
UV – Vis  2 sisi transparan
Fluorosensi /Fosforesensi  4 sisi transparan
2.
UV-Vis lurus (dari sinar datang, monokromator,
sampel dan detector) membentuk garis urus
Fluorosensi /Fosforesensi tegak lurus dengan
posisi sampel
3. Jumlah monokromator
UV-Vis 1 monokromator
Fluorosensi /Fosforesensi 2 monokromator
Komponen Fluorometer  cahaya masuk  kemudian
di eksitasi (filter primer)  kemudian di eksitasi
kembali kemudian cahaya ditransmisikan (transmitted
light) dan dapat mengalami fluoresensi dengan
memancarkan cahaya (Fluoresensi emitted light)
kemudian dilakukan filter kedua (Fluoresensi secondary
filter) Phototube, Photomultiplier tube
Hokum HOOKS
 Masa atom berbanding terbalik dengan energi
 Semakin besar massa atom maka semakin kecil
binlangan gelombang
 Konstanta berbanding lurus dengan energi
 Energi berbanding lurus dengan bilangan gelombang
Proses Infarmerah  sumber sinar mengenai suatu
senyawa didalam kurvet maka akan muncul fibrasi
apabila sinar yang dberikan sama dengan yang
dibutuhkan suatu senyawa akan menyebabkan absorbsi
dan menimburlan sinar infra merah
Jenis vibrasi
1. Vibrasi ulur ( Stretching Vibration) vibrasi yang
mengakibatkan perubahan panjang ikatan suatu
ikatan Dibagi menjadi:
a. Smetris : ikatan antar atom bergerak bersamaan
dlm satu bidang datar
b. Asimetris: tdk bersamaan dlm satu bidang datar
2.Vibrasi tekuk (Bending Vibration) vibrasi yang
mengakibatkan perubahan sudut ikatan antara dua ikatan
a.Scissoring pada bidang kanan kiri bersaman
(berlawan arah)
b. Rocking  pada bidang datar tdk berlawan arah
c. Wagging  searah depan belakang tp dtk satu bidang
d.Twisting  berlawan arah depan plakng depan
belakang tdk dlm 1 bidang
Kenapa karbonil dg resonansi dan tdk resonansi
mudah bergeser?
SPEKTROFOTOMETRI UV VIS
(senyawa yang memiliki ikatan rangkap terkonjugasi
(rangkap tidak rangkap)
Instrumen UV Vis

1. Lamp: memancarkan semua warna cahaya (cahaya
putih) lampu yang biasanya digunakan Wolfram
dan Lampu Deuterium. lampu deuterium untuk UV
(190 -350 nm),lampu tungsten untuk Visibel (350 –
900nm), Argon 100 – 160 nm, Xenon 200 – 900 nm.
2. Lens: meneruskan cahaya dari sumber cahaya
menuju monokromator
3. Monochromator: Untuk mendispersikan sinar
kekomponen panjang gelombang yang selanjutnya
dipilih oleh celah (slit). Berupa Prisma atau Kuarsa
4. Kuvet: Kuvet terbuat dari silica atau kuarsa
berbentuk persegi panjang dengan lebar 1 cm. Cuvet
ditempatkan setelah monokromator supaya
kemungkinan terjadinya dekomposisi/ fluorescence
oleh panjang gelombang berenergi tinggi yang masih
ada didalam radiasi polikromatis dapat diminimalkan.
5. Detector: penangkapan sinar yg ditransmisikan untk
slnjutnya diolah oleh amplifier adanya fotolistrik
6. Amplifier : meningkatkan sinyal sehingga lebih
mudah untuk baca terhadap kebisingan latar
belakang.
7. Read out: pencatatan hasil
Single vs Double Beam
1. Single Beam: melakukan pengukuran sampel dan
larutan blanko secara bergantian pada sel yang satu
berkas sumber cahay.
Single-beam UV-Vis Spectrometer, dapat
digunakan untuk kuantitatif dengan mengukur
absorbansi pada panjang gelombang tunggal. Prinsip
kerja dari single-beam spektrofotometer UV-Vis
sumber sinar masuk pemisahan berkas cahaya sumber
oleh diffraction grating, lalu berkas cahaya diseleksi
oleh kisi agar didapatkan intensitas tertentu kemudian
diserap oleh sample cuvette lalu dideteksi oleh
detektor. Sebelum dilakukan pengukuran terhadap
larutan uji, terlebih dahulu diujikan sample cuvette
yang berisi pelarut dari larutan uji. Pada pengujian ini
didapatkan I0 yang merupakan intensitas cahaya yang
melewati cuvette pelarut. Kemudian dengan proses
yang sama dilakukan pengujian terhadap larutan uji
dan akan didapatkan I yang merupakan intensitas
cahaya yang melewati larutan uji. Kedua proses ini
kemudian dibandingkan.
Single-beam instrument mempunyai beberapa
keuntungan yaitu sederhana, harganya murah, dan
mengurangi biaya Beberapa instrumen menghasilkan
single-beam instrument untuk pengukuran sinar ultra
violet dan sinar tampak. Panjang gelombang paling
rendah adalah 190 sampai 210 nm dan paling tinggi
adalah 800 sampai 1000
2. Double beam digunakan pada panjang gelombang
190 sampai 750 nm. Double-beam instrument
mempunyai dua sinar yang dibentuk oleh pemecah
sinar. Sinar pertama melewati larutan blanko dan
sinar kedua secara serentak melewati sampel. Prinsip
kerja adanya pemisahan komponen panjang
gelombang cahaya yang berasal dari sumber radiasi
UV-Visible oleh prisma ataupun diffraction grating.
Kemudian berkas sinar monokromatis akan terbagi
menjadi dua bagian dengan intensitas yang sebanding
dengan mirror dan dipantulkan. Berkas cahaya yang
dipantulkan masing-masing melewati cuvette berisi
larutan referensi (berisi pelarut dari larutan uji) dan
cuvette berisi larutan uji,kemudian berkas cahaya
yang melewati kedua cuvette ini dideteksi oleh
detektor.
3. Milti Channel: Tanpa monokromator,
Mendispersikan cahaya dengan panjang gelombang
yang sama, Mahal, Resolusi terbatas
1. TEOFILIN TABLET
Sebelum SPE
1. Pra-perlakuan terhadap sampel  Ambil 10 tablet
dari masing-masing sampel ditimbang dan digerus
hingga halus. Berat akurat dari teofilin (setara dengan
0,01 g) bubuk dipindahkan ke 250 mL labu ukur. Lalu
ditambahkan 0,1 N HCl ke serbuk dan mengguncang
selama 10 menit dan disaring. Larutan stok kemudian
dilakukan pengenceran dengan menggunakan air
suling/aquadest. Larutan yang digunakan dalam SPE
sebanyak 20 ml.
2. Ekstraksi Fase Terbalik/ Reversed Phase  karena
analit yang digunakan adalah analit yang bersifat non
polar atau tidak bermuatan, dimana ekstraksi fase
terbalik baik digunakan untuk menarik analit non
polar.
3. Pemilihan tabung  Tabung LC-18 oktadesil terikat
silika endcaped, untuk ekstraksi fase terbalik dari
analit nonpolar dan dengan moderat pengotor
senyawa polar maka silika ini sesuai untuk pemisahan
teofilin dalam tablet
4. Pemilihan ukuran tabung  tabung 60 ml,
dikarenakan sampel yang akan digunakan 20 ml.
Tahapan SPE
1. Pengkondisian  Sebelum pengisian sampel, tabung
SPE harus dibilas dengan pelarut. Pada tahapan SPE
sampel teofilin dalam tablet digunakan fase terbalik
dengan jenis silika dan media nonpolar biasanya
tabung dikondisikan dengan pelarut organik dapat
tercampur air seperti metanol, diikuti oleh air atau
buffer berair dalam sampel ini digunakan larutan
buffer asam format 0,5-1,5 mol/L 0,4 ml pH 4,0.
Tujuan dari ditambahkannya larutan buffer adalah
untuk mempertahankan pH sampel dimana pH dari
teofilin yakni antara 4,2-4,7. Methanol membasahi
 permukaan sorben dan menembus terikat fase alkil,
efisien dalam membasahi permukaan silika.
2. Retensi sample  Larutan sampel sebanyak 20 ml
dilewatkan ke dalam cartridge menggunakan pipet
volumetrik untuk menahan analit yang diharapkan,
sementara komponen lain seperti pengotor akan
terelusi. Sampel larutan teofilin dimasukan ke dalam
tabung LC-18.
3. Pembilasan  pembilasan digunakan air yang
bersifat polar. Penggunaan air sebagai pembilas
dikarenakan pengotor sampel bersifat polar dan
sediaan teofilin bersifat non polar, sehingga dengan
dibilas menggunakan pelarut polar, maka pengotor
yang tidak diharapkan dapat terelusi dan kandungan
analit yang bersifat non polar tidak ikut terelusi
bersama air tetapi analit akan tertinggal pada silika.
4. Elusi Pada ekstraksi terbalik sampel teofilin dalam
tablet teofilin, (teophyline) bersifat non polar dan
pengotornya bersifat polar, sehingga tahap elusi harus
diberikan pelarut non polar yaitu Kloroform 10 ml
sebagai fase gerak dengan laju aliran 0,5-1,0
ml/menit. Sehingga dengan penambahan kloroform
diharapkan analit yang tertinggal di silica dapat
terelusi dan dianalisis.
2. TEOFILIN DALAM URINE
Sebelum SPE
1. Preparasi sample Disentrifugasi dengan
menggunakan kecepatan 5000 rpm selama 15 menit.
Sampel urine yang disentrifugasi kemudian disaring
sebanyak 2ml
2. Menggunakan Ekstraksi Fase Terbalik  Pada sampe
urine ini metode solid phase extraction ini termasuk
kedalam tipe reversed phase. Reversed phase/fase
terbalik bertujuan untuk menghilangkan analit
nonpolar dari matriks yang polar.
3. Menggunakan Tabung LC18  Pada metode SPE
sample teofilin menggunakan C18 atau Oktadesil
Silika (ODS) karena untuk ekstraksi fase terbalik
nonpolar dengan pengotor yang bersifat polar dan
silika ini digunakan sesuai untuk pemisahan teofilin
dalam urine.
4. Pemilihan Ukuran Tabung  Menggunkan ukuran
tabung 6 mL, dikarenakan sampel yang akan
dianalisis lebih dari > 1 mL
Tahapan SPE
1. Pengkondisian  Menggunakan catridge C18 untuk
senyawa non polar. Dilakukan pengkondisian
catridge dengan cara menambahkan larutan buffer
sebanyak 0,5ml doigunakan larutan buffer karena
untuk mempertahankan pH sampel karena jika pH
nya basa maka akan terbentuk ikatan kimia yang tidak
diinginkan.
2. Retensi (Matrik Sampel) Sampel urine sebanyak 2
ml dimasukkan kedalam catridge C18 yang kemudian
diekstraksi dengan menggunakan methanol dan air.
Waktu retensi teofilin pada kolom C18 sangat
dipengaruhi oleh kandungan metanol dari fase gerak
karena sampel yang digunakan bersifat non polar.
3. Pembilasan  Menggunakan air diamana bertujuan
untuk menghindari terbilasnya analit bersama
pengotor. Air digunakan karena pengotor (urea)
bersifar polar sedangkan analit (teofilin) bersifat non
polar, sehingga saat pembilasan dengan
menggunakan pelarut polar analit tidak ikut terbilas
melainkan tertinggal di silica.
4. Elusi  Berdasarkan teori pada sampel teofiin dalam
urine, larutan yang digunakan adalah kloroform
degan volume 0,5 ml sebanyak 5 kali dalam 7 menit.
Penggunaan klorofom bertujuan untuk mengluarkan
analit yang bersifat non polar dan kemudian
ditampung dalam tabung koleksi.
3. TEOFILIN DALAM DARAH
Sebelum SPE
1. Preparasi Sample Darah Sejumlah darah
disentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm/lebih
selama 15 menit atau lebih hingga didapatkan lapisan
jernih berwarna bening dibagian atas (serum). Serum
dan plasma sample pada umumnya tidak memerlukan
perlakuan khusus sebelum SPE tetapi banyak kasus
analit (seperti obat) mungkin terikat pada protein
(proitein bround, sehingga perlu dilakukan perlakuan
tambahan. Diambil 500 mcL serum yang telah
disentrifugasi untuk pemisahan ikatan protein pada
cairan biologis, dilakukan menambahkan serum
dengan 1mL metanol lalu divortek selama 10 detik
dan disentrifugasi dengan kecepatan 4000 rpm
selama 5 menit dan diencerkan dengan 2 bagian air (1
mL)
2. Menggunana Ekstrasi Fase Terbalik Menggunakan
fase terbalik karena pada proses ekstrasi keadaan
sample larut dalam larutan organik dan tidak
bermuatan (netral)
3. Menggunakan tabung LC-8 Pada SPE sample
teofilin menggunakan LC-8 okktil terikat silika
endcaped. Silika ini digunakan untuk ekstrakti fase
terbalik nonpolar dan moderat (pengotor) yang
bersifat polar. Silika ini sesuai digunakan untuk
pemisahan teofilin dalam darah, dimana pemisahan
antara analit (teofilin) yang bersifat nonpolar dari
moderat (pengotor) yang tersusun dari air dan serum
yang bersifat polar.
4. Pemilihan Ukuran Tabung Menggunkan ukuran
tabung 6 mL, hal ini dikarenakan sampel yang akan
dianalisis lebih dari > 1 m
Tahapan SPE
1. Pengkondisian  Pada SPE sample teofilin dalam
serum dengan fase terbalik menggunkaan jenis silika
dan media nonpolar absorpsi sehingga
pengkondisiannya dengan pelarut organik, yang
dapat bercampur dengan air seperti metanol.
2. Matriks sample Sampel sejumlah 2.5 mL
dimasukkan kedalam tabung yang silikanya telah
 ditambahkan pelarut pra-kondisi. sampel dimasukkan
dengan menggunakan pipet volumetrik atau
mikropipet. Sample harus dalam bentuk yang
kompatibel dengan tabung SPE. Untuk menghindari
penyumbatan frit pada tabung SPE, yang dikarnakan
larutan yang terlalu pelan melewati tabung SPE dapat
digunakan vakum.
3. Pembilasan Pembilasan dilakukan menggunakan
air yang bertujuan untuk menghindari ikut terbilasnya
analit bersama pengotor. Air bersifar polar sedangkan
analit (teofilin) bersifat non polar, sehingga saat
pembilasan dengan menggunakan pelarut non-polar
kandungan analit yang bersifat polar tidak ikut
larut/keluar bersama air melainkan tertinggal pada
silika.
4. Dilusi  Dilusi dengan menggunakan dua pelarut
kecil, umumnya mengelusi senyawa analit lebih
efisien daripada satu pelarut besar. Bersasarkan teori
diatas maka pada Sampel teofilin serum pada tahap
delusi menggunakan dua pelarut. Pelarut pertama
digunakan kloroform sebanyak 500mcL dan pelarut
kedua menggunakan Heksana sebanyam 500 mcL.
Hasil yang keluar dapat ditampung langsung ke
dalam tabung koleksi yang untuk selanjutnya akan di
analisi pembilasan tube SPE biasanya menggunakan
pelarut sebanyak 200 mcL sampai 2 mL tergantung
pada ukuran tabung SPE dan pengambilan Analit
yang terbaik adalah ketika masing masing pelarut
tetap kontak dengan tube/silika untuk 20 sampai 1
menit.
3. Instrumental Deviation
a. Efek Radiasi Polikromatik: Idealnya, monokromator akan
melewatkan radiasi monokromatis, tetapi kenyataannya
monokromator akan melewatkan radiasi berupa pita.
Bandwidth spectrometer akan mempengaruhi linieritas
Hk. Lambert-Beer. Pengukuran dilakukan pada ƛmax
untuk memperkecil error.
PH
Asam basa kuat
pH = -log H+ (asam)
pOH = - log OH- (basa) lalu Ph=14-POH
contoh soal: pH HCL 0,05M?
jawab: ph=-log H = -log (5x10-2) = 2-log 5 = 1.3
Asam basa lemah
Asam : pKa=-log Ka= log (1/Ka)
Reaksi: HA ka H+ + A- maka ka = (H+) (A-) / HA
Contoh soal:
Asam Asetat 0,1 M (Ka = 1,75x10-5)(ans 2,4)
Jawab: CH3COOH = CH3COO- + H+
Ka= (CH3COO- )( H+ ) / CH3COOH
1,75x10-5 = x.x/0,1
X2 = 1,75x10-6 = √1.75 𝑥10-6 = 0,00132

Limitasi HK Lamber Beer

A=abc Menurut Hk. Lambert-Beer, A berbanding lurus
dengan panjang lintasan (b) dan konsentrasi (c), sehingga:
1. A tidak mempunyai limitasi terkait dengan b.
- Gunakan sel yang tipis untuk sampel dengan
konsentrasi tinggi.
- Gunakan sel yang tebal untuk sampel dengan
konsentrasi rendah.
- Contoh: Jika A = 0.410 dalam kuvet (b = 1.0 cm)
- Sehingga jika: b = 2.0 cm, A = 0.820, b = 0.1 cm,
A = 0.041
2. Chemical Deviation: A berbanding lurus dengan
konsentrasi (c), kecuali: untuk konsentrasi yang
terlalu tinggi atau jika terjadi reaksi kimia
- Biasanya, A menjadi nonlinier jika c > 0.10 M :
Pada konsentrasi diatas 0.10 M, jarak antar
molekul analit menjadi cukup dekat, yang
mempengaruhi distribusi muatan, sehingga
mengubah cara molekul melakukan serapan
(mengubah ε).
- A menjadi nonlinier jika terjadi reaksi kimia: Jika
analit mengalami assosiasi, dissosiasi atau
bereaksi dengan pelarut atau komponen lain
dalam larutan, penyimpangan Hk.Lambert-Beer
akan terjadi.
 Contoh Soal: 100 mg sampel yang mengandung
Parasetamol dilarutkan dengan etanol hingga 100 ml.
diambil 10 ml diencerkan hingga 100 ml. dari larutan
yang sudah dilarutkan diukur Absorbansinya
ternyata A = 0,465. hitunglah kadar paresetamol dalam
sampel tersebut ?
Jawab: Dari data di atas diperoleh
a = 0,096, b = 0,013, r = 0,9852
sehingga diperoleh persamaan y = 0,096 + 0,013 x
jika y = 0,465 maka x = 28,38
Kadar = C.reg. x P x V/ berat sampel
= 28,38 mg/L x 10 x 0,1 L x 100 % / 100 mg
Perhitungan: Sebanyak 20 tablet furosemid ditimbang = 28,38 %
beratnya 1,656 g. Diambil sampel 519,5 mg digojog Prosedur umum pengukuran: hidupkan alat ( 10~15
dengan 300 mL NaOH 0,1 N , lalu diencerkan sampai menit), kaliberasi alat dengan larutan blangko, ukur
500,0 mL dengan NaOH 0,1 N. Sejumlah ekstrak disaring larutan standar , ukur larutan sampel, analisis data
dan diambil 5,0 mL lalu diencerkan dengan NaOH 0,1 N Analisis KOmponen tunggal :
sampai 250,0 mL. Absorbansi dibaca pada λ 271 nm Kurva baku: absorbansi suatu seri, larutan diukur pada λ,
dengan blanko NaOH 0,1 N ternyata absorbansinya suhu,kondisi pelarut sama, dan A larutan diplotkan
0,596. Jika E 1%1cm furosemid λ271 nm = 580, Hitung kadar terhadap konsentrasinya. Penentuan konsentrasi
Furosemid tiap tabletnya ? komponen tunggal: Menggunakan
Jawab: Sebanyak 519,5 mg serbuk yang mengandung informasi absorbtivitas molar, Menggunakan
furosemide dilarutkan sampai 500 ml, berarti : persamaan regresi linier kurva baku
519,5 𝑚𝑔 103,9 𝑚𝑔 Analisis 2 camp: Dua buah kromofor yang berbeda akan
500 𝑚𝑙
= 100 𝑚𝑙
memiliki kekuatan absorbsi cahaya yang berbeda pada
Berat rata-rata tablet
1,656 𝑔 suatu λ tertentu, sehingga dengan mengukur kedua λ akan
= 0,0828 g = 82,8 mg diperoleh konsentrasi masing-masing komponen
20 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡
Faktor pengenceran campuran.
250 Hal Penting Dalam Pengukuran:
= 50 kali
5
-Senyawa yang semula tidak berwarna dan diukur dengan
Konsentrasi furosemide dalam ekstrak yang
spektrofotometer Visibel:dilakukan derivatisasi.
diencerkan
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 -Waktu operasional (operating time) untuk mengetahui
1% x 1 % x Faktor penggenceran waktu pengukuran yang stabil.
𝐸
1 𝑐𝑚
0,596 -Pemilihan panjang gelombang maksimum (λ max)
= 580
x
1 % x 50 -Pembuatan kurva baku sebaiknya diperiksa ulang.
= 0,0514 % -Pembacaan absorbansi sampel/cuplikan sebaiknya dalam
= 51,4 mg / 100 ml rentang 0,2 – 0,8.
Kadar furosemide tiap
tablel
𝑚𝑔 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑝𝑒𝑛𝑔𝑒𝑛𝑐𝑒𝑟𝑎𝑛
𝑘𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑓𝑢𝑟𝑜𝑠𝑒𝑚𝑖𝑑𝑒 (𝑝𝑒𝑛𝑔𝑒𝑛𝑐𝑒𝑟𝑎𝑛) 𝑚𝑙 𝑥 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
)𝑥𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑟𝑎𝑡𝑎 −
51,4 𝑚𝑔 500 𝑚𝑙 𝑚𝑔
𝑟𝑎𝑡𝑎 𝑡𝑎𝑏=( 100 𝑚𝑙 𝑥 519,5 𝑚𝑔) 𝑥 82,8 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡
= 40,96 mg/tablet

Transisi Elektronik: Transisi sigma – sigma star (σ – σ*),

Transisi n – sigma star (n - σ*) , Transisi n phi star (n –
π*), Transisi phi – phi star (π - π*)
Tahapan melakukan analisis:
1.Apakah senyawa tersebut dapat dianalisis dengan
spektrofotometri
2. Membuat larutan standar
3. Menentukan larutan panjang gelombang maks
4. Membuat kurva baku antara Absorbansi versus
konsentrasi sehingga diperoleh persamaan regresi linier.
5. Menentukan kadar sampel.
Penetapan Kadar: