ASPEK BIOMOLEKULER DALAM LIMBAH TULANG IKAN,

CANGKANG TELUR AYAM, DAN CANGKANG KEPITING YANG

BERMANFAAT SEBAGAI SUPLEMEN UNTUK MENINGKATKAN
KEPADATAN TULANG: SEBUAH KAJIAN PUSTAKA

Agus Suarjaya Putra

1971111002

PPDS I ORTHOPAEDI DAN TRAUMATOLOGI

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS UDAYANA
2019
 ASPEK BIOMOLEKULER DALAM LIMBAH TULANG IKAN, CANGKANG
TELUR AYAM, DAN CANGKANG KEPITING YANG BERMANFAAT SEBAGAI
SUPLEMEN UNTUK MENINGKATKANKEPADATAN TULANG: SEBUAH
KAJIAN PUSTAKA
Agus Suarjaya Putra1
1
PPDS-1 Program Studi Orthopaedi dan Traumatologi, Fakultas Kedokteran Universitas
Udayana, Denpasar, Bali, Indonesia
Emal: agussuarjayaputra@yahoo.com

ABASTRAK
Proses penuaan secara tidak langsung akan berdampak pada tingkat kepadatan tulang.
Penggunaan suplemen penambah masa tulang menjadi salah satu alternatif guna
mempertahankan kepadatan tulang di usia lanjut. Peredaran suplemen penambah massa tulang
sudah sangat marak, namun mayoritas masih menggunakan bahan-bahan sintetik yang bila
dikonsumsi pada waktu yang lama akan berpotensi menimbukan masalah lain di kemudian
hari. Salah satu yang menjadi jalan keluar adalah pemanfaatan limbah makanan untuk dapat
digunakan sebagai suplemen berbahan dasar alami. Tulang ikan memiliki kandungan kalsium,
kolagen dan BMP-2 yang lebih tinggi jika dibandingkan dengan Cangkang telur dan cangkang
kepiting. Mikronutrien yang terkandung di dalam tulang ikan ini merupakan bahan-bahan
penting dalam peningkatan massa tulang. Pemanfaatan bahan dasar alami pada pembuatan
suplemen penambah massa tulang diharapkan mampu mengurangi efek samping yang tidak
diinginkan dari penggunaan suplemen penambah massa tulang berbahan dasar sintetis. Artikel
ini menjelaskan tentang aspek biomolekuler kandungan bahan limbah dan efektivitasnya untuk
mempertahankan kepadatan tulang.

BIOMOLECULAR ASPECTS IN FISH BONE WASTE, CHICKEN EGG’S SHELL,

AND CRAB SHELLS WHICH ARE BENEFIT AS SUPPLEMENTS TO INCREASE
BONE DENSITY: A STUDY OF LITERATURE

ABSTRACT
The aging process will indirectly have an impact on bone density. The use of bone mass
enhancing supplements is one alternative to maintain bone density in old age. Circulation of
bone mass enhancing supplements is very widespread, but the majority still use synthetic
ingredients which if consumed for a long time will potentially cause other problems later on.
One of the solutions is the utilization of food waste to be used as a natural-based supplement.
Fish bones contain higher calcium, collagen and BMP-2 when compared to eggshell and crab
shell. Micronutrients contained in fish bones are important ingredients in increasing bone mass.
Utilization of natural ingredients in the manufacture of bone mass enhancing supplements is
expected to reduce unwanted side effects from the use of synthetic bone based supplements.
This article describes the biomolecular aspects of waste material content and its effectiveness
for maintaining bone density.
PENDAHULUAN

Kalsium merupakan mineral yang krusial dalam mempertahankan kepadatan tulang dan

berperan dalam pencegahan penyakit-penyakit pada sistem muskuloskeletal. Kurangnya

asupan kalsium hingga saat ini masih merupakan faktor risiko utama yang dapat dicegah dalam

berkembangnya berbagai macam penyakit. Rendahnya pemahanan mengenai menu makanan

dan gaya hidup tinggi kalsium, menjadikan suplementasi vitamin D sebagai alternatif dalam

memenuhi kebutuhan asupan kalsium.

Berbagai jenis suplemen kalsium yang sudah beredar menawarkan kandungan kalsium

dengan dosis yang bervariasi, yang juga disertai dengan kandungan aditif yang bermacam-

macam. Asupan yang adekuat dari kalsium mempengaruhi massa puncak tulang yang didapat

pada usia dewasa muda. Konsumsim makanan kaya kalsium selama hidup efektif untuk

mencegah atau menunda osteoporosis pada wanita pra dan pasca menopause dan lelaki tua

(Chaimongkol, 2012).

Melihat tingginya kebutuhan suplementasi vitamin D, beberapa upaya guna mencari

bahan baku yang lebih ekonomis dengan kandungan yang setara mulai menjadi kajian yang

diteliti secara luas. Tulang ikan merupakan sumber yang berharga dan komponen elemen

esensial untuk meningkatkan kesehatan. Diperkirakan 100 juta metrik ton ikan dipanen dari

laut tiap tahunnya. Sekitar 30% dari seluruh hasil tangkapan merupakan hasil sampingan yang

tidak dapat diolah seperti kulit, organ internal, kepala, dan sirip. Lebih lanjut, pengelolaan hasil

sampingan yang tidak adekuat dapat menimbulkan permasalahan lingkungan. Di sisi lain,

produk ikan mengandung banyak kandungan yang bermanfaat seperti peptide, kolagen, gelatin,

minyak ikan, dan hidroksiapatit. Kandungan tersebut diketahui berperan sebagai antihipertensi,

antioksidan, dan anti mikrobial selain kandungan-kandungan lain yang aktif secara biologis 1.

Tulang ikan mengandung kandungan kalsium (Ca) dan fosfor (P) yang menyusun

sekitar 2% (20 g/kg berat kering) dari ikan. Selain itu, pada tulang ikan diperkirakan terdapat
senyawa yang identik dengan growth factor untuk tulang yang salah satunya yaitu BMP.

Pepida yang telah dimurnikan secara signifikan meingkatkan ekspresi marker fenotip pada fase

awal dan akhir, meliputi ALP, OCN, dan OPN serta deposisi mineral. Lebih lanjut, interaksi

yang mungkin dari peptide bioaktif FBP-KSA dengan reseptor BMP mengaktivasi MAPK,

meliputi p38, JNK, dan ERK, serta pathway dar Smad1/5/8 yang berkontribusi pada

diferensiasi osteoblas 1.

Cangkang telur ayam merupakan produk sisa (limbah) dari kompleks peternakan ayam

petelur, perumahan, dan industri makanan cepat saji yang berkontribusi terhadap polusi

lingkungan. Banyak upaya telah dilakukan untuk memanfaatkan cangkang telur ayam menjadi

produk yang lebih bermanfaat. Sekitar 10,2% dari volume telur yang tersusun dari cangkang

yang terkalsifikasi dan membran cangkang dalam dan luar. Cangkang telur ayam dapat

digunakan sebagai alternatif sebagai sumber alami dari kalsium dengan karakteristik kelarutan

yang tinggi bila dibandingkan dengan cangkang lain seperti cangkang kerang laut. Selain itu,

bahan sediaan kalsium mengandung karbonat, sitrat, atau garam glukonat yang mana tidak

selalu efektif. Sehingga, sumber mineral dan vitamin alami menjadi lebih popular dan

digemari2.

Melihat potensi yang masih belum dimanfaatkan secara sepenuhnya serta melihat dari

kelimpahannya, maka penelitian lebih lanjut mengenai manfaat dari inovasi tersebut

diharapkan dapat memberikan manfaat lintas sektorial dalam pemanfaaatan tulang ikan

salmon, cangkang telur ayam, dan cangkang kepiting dengan kandungan kalsium karbonat,

BMP-2 dan serta kolagen.

Kandungan kalsium tulang ikan

Jaringan tulang terutama dibangun dari matriks ekstra seluler organik yang ditutupi

dengan hidroksiapatit (Ca5 (PO4) 3OH2). Jaringan tulang adalah tempat penting untuk

penyimpanan kalsium dan karbonat dan sangat penting dalam pengaturan konsentrasi plasma

mineral ini. Karena kepentingan fisiologis kalsium karbonat dalam jaringan lunak, kalsium

karbonat yang ada dalam tulang dapat dipindahkan ke jaringan lain ketika pasokan makanan

tidak memenuhi kebutuhan. Tulang merupakan bagian penting dari ikan; sekitar 10–15% dari

total biomassa ikan adalah tulang dari kepala dan vertebra. Pengetahuan tentang komposisi

kimia tulang ikan terbatas, tetapi mungkin menarik karena beberapa alasan. Dalam penelitian

baru-baru ini, tulang ikan kering digunakan sebagai bahan pakan dalam makanan ikan cod,

menunjukkan efek positif pada pertumbuhan dan efisiensi pakan dibandingkan dengan diet

tradisional 3.

Tingkat makro mineral kalsium (Ca), fosfor (P) paling rendah dalam tulang dari spesies

salmonid (salmon dan trout), menunjukkan kisaran 135-147 g / kg untuk Ca, 81-87 g / kg untuk

P dan 2,2-2,4 g / kg untuk Mg dalam bahan kering bebas lemak. Tingkat yang sesuai dalam

spesies ikan tanpa lemak adalah; Ca: 186 ± 15 g / kg, P: 102 ± 14 g / kg, Mg: 3,1 ± 0,1 g / kg

(n = 3) Namun, kadar kalium (K) tertinggi pada salmon dan trout dengan kisaran 7,7– 8,2 g /

kg. Makarel kuda menunjukkan kadar Ca (233 g / kg) dan Mg (3,6 g / kg) tertinggi. Ikan blue

whiting memiliki tingkat K terendah (2,6 g / kg). Cod dan saithe spesies gadoid menunjukkan

kisaran Ca, P, Mg, dan K 190-199, 108–113, 3.0 dan 4.9–5.2 g / kg, masing-masing. Tingkat

Ca dalam abu tulang ikan adalah hampir sama untuk semua spesies mulai dari 304 g / kg abu

tulang ikan dalam salmon, hingga 325 g / kg abu tulang ikan dalam saithe, kecuali untuk ikan

haring besar dan ikan kuda tenggiri yang menunjukkan nilai Ca 367 g / kg abu tulang ikan 4.
 Gambar 2.1 Data kandungan nutrisi tulang ikan (g/kg)

Nilai yang ditemukan pada salmon dalam korespondensi yang baik dengan nilai yang

dilaporkan oleh Liaset et al. (2003) 325 g / kg abu dan Helland et al. (2005) 272 g / kg abu.

Tingkat Ca dalam ikan blue whiting dari 316 g / kg abu juga dalam korespondensi yang baik

dengan nilai yang dilaporkan oleh Shearer et al. (1992) (294 g / kg abu) dan oleh Toppe et al.

(2006) (297 g / kg abu) 3–6.

Kalsium karbonat adalah yang paling umum dan bentuk kalsium yang paling cost

effective. Biaya adalah pertimbangan untuk banyak pasien. Sebuah studi menilai biaya

suplemen kalsium dari makanan dan suplemen menemukan bahwa kalsium karbonat adalah

bentuk paling murah dari suplemen kalsium, sekitar sepertiga biaya sumber makanan paling

murah, termasuk skim terbuat dari susu dan jus jeruk yang diperkaya kalsium konsentrat beku.

Konsentrasi kalsium bervariasi dalam suplemen. 14 Suplemen kalsium karbonat mengandung

40% kalsium, sedangkan suplemen kalsium sitrat hanya mengandung 21% kalsium. Satu-

satunya kelemahan terkait dengan penggunaan suplemen kalsium sitrat adalah kebutuhan

untuk meminum lebih banyak tablet atau kapsul buat dosis yang setara dengan kalsium
karbonat. Persyaratan untuk meminum lebih banyak tablet dapat memengaruhi kepatuhan

minum obat pasien 7.

Usia (tahun) Kebutuhan Kalsium Harian (mg)

1–8 2.500

9 – 18 3.000

19 – 50 2.500

> 51 2.000

Bagan 2.1 Kebutuhan kalsium harian

Menurut studi oleh Hanzlik dkk, hasil penyerapan suplemen kalsium karbonat sebesar

600 mg 2 kali sehari selama 7 hari yaitu meningkatkan kadar kalsium serum sebesar kurang

lebih 5% di atas nilai ambang. Pada penelitian tersebut peningkatan kadar kalsium serum pada

suplemen kalsium karbonat hamper sama dengan peningkatan kadar kalsium plasma pada

pasien yang diberikan placebo. Kurangnya perbedaan antara plasebo dan kelompok kalsium

karbonat tidak berarti bahwa tidak ada kalsium yang diserap pada akhirnya; lebih mungkin itu

berarti mekanisme yang sekresi kalsium dari aliran darah mampu mengimbangi tingkat

penyerapan kalsium yang rendah dan dengan demikian mencegah serum kalsium meningkat

secara signifikan selama penyerapan berlangsung. Pada peneltian tersebut juga dinilai

penurunan kadar PTH serum setelah pemberian kalsium karbonat. Penurunan kadar PTH

sebesar 1-84 iPTH (intact parathyroid hormone) atau sebesar 20-40 persen. Namun penurunan

ini tidak signifikan secara statistik jika dibandingkan dengan placebo 8.

Kandungan Kolagen pada Tulang Ikan

Kolagen adalah komponen struktural utama dari protein jaringan ikat yang membuat

hingga 30% dari total protein dalam jaringan tubuh vertebrata dan invertebrata yang

mengandung asam amino seperti glutamin dan aspargine, alanine, arginine, lisin, glisin, dan
prolin. Molekul kolagen terdiri dari tiga α-rantai yang saling terkait dalam apa yang disebut

kolagen triple-helix. Triple-helix memiliki panjang sekitar 300 nm, dan rantai memiliki berat

molekul sekitar 105 kDa. Denaturasi kolagen menyebabkan pemisahan batang dan pemisahan

total atau bahkan sebagian dari rantai karena penghancuran ikatan hidrogen, menyebabkan

hilangnya konformasi triple-helix, dan setelah denaturasi, polimer akan ada dalam bentuk

melingkar 9.

Kolagen dapat ditambahkan ke produk makanan untuk meningkatkan kualitas gizi dan

fungsionalnya. Pada mamalia, kolagen ditemukan di kulit, tulang rawan, dan jaringan ikat.

Kolagen dapat diklasifikasikan menjadi 4 jenis, di mana salah satu dari mereka terutama

ditemukan dalam jaringan ikat seperti kulit, tulang dan tendon. Kolagen dapat ditemukan di

kulit dan tulang hewan dan ikan, menghasilkan gelatin berkualitas tinggi ketika mengalami

denaturasi termal. Karena komposisi kolagen unik, dan kolagen dapat dianggap bermanfaat

secara nutrisi sebagai bantuan untuk membangun jaringan dalam tubuh manusia. Dalam dekade

terakhir, telah terjadi peningkatan produk ikan berbasis protein seperti: sosis ikan, nugget ikan,

kue ikan, kamaboko, chikuwa, bakso ikan, dll. Kualitas produk ini tergantung pada bahan baku

yang digunakan dalam pembuatannya. Dengan demikian, berbagai produk ikan berbasis

protein akan tergantung pada jumlah protein myofibril yang ada pada spesies ikan 9.

Bone Morphogenetik -2 (BMP-2)

Bone Morphogenetic Protein (BMP) adalah hasil sekresi pensinyalan protein yang

mempunyai kelompok protein lebih dari 40 anggota dalam kelompok besar protein

transforming growth factor beta (TGF-β). BMP memainkan peran penting dalam biologi

vertebrata, peran penting sebagai morfogen selama perkembangan embrio dan sebagai

penginduksi tulang, yang pertama kali dikenali karena properti osteogeniknya. BMP-2 telah
dipelajari secara ekstensif sejak 1988 karena sifatnya sebagai posisi dominan dalam keluarga

BMP dan peran penting sebagai penginduksi tulang, dengan demikian menjadi agen terapeutik

untuk memperbaiki cacat tulang dan gigi, serta fusi tulang belakang. Menurut studi Rafael dan

Cancela tahun 2006 terdapat beberapa sumber dari BMP-2 di beberapa spesies dengan spesies

Salmo salar dan D. rerio yang memiliki ekspresi BMP-2 paling banyak.

Rafael dkk. telah mengkloning cDNA BMP-2 dari Salmo salar dan menganalisis

ekspresi gennya sepanjang pengembangan dalam jaringan ikan dewasa dan dalam garis sel

homolog di embrio. Pada studi mereka ditemukan lebih dari satu gen BMP-2 di Salmo salar,

diuji menggunakan hibridisasi genomic southern. DNA genomik dari Salmo salar yang telah

dicerna dan diimobilisasi kemudian dihibridisasi dengan sebuah probe radiolabel sesuai

dengan ekson 3 BMP-2 Salmo salar (SaBMP-2). Hasil menunjukkan pola satu pita untuk setiap

enzim yang diuji menggambarkan keberadaan gen tunggal BMP-2 dalam Salmo salar. Pst-I

adalah satu-satunya endonuklease yang menghadirkan situs pembelahan dalam urutan yang

digunakan sebagai probe. Namun, hanya itu saja satu fragmen terkait PstI diamati, yang kedua

adalah terlalu kecil untuk dideteksi dalam kondisi eksperimental yang digunakan 10.

Cangkang Telur Ayam

Cangkang telur merupakan lapisan luar dari telur yang berfungsi melindungi semua

bagian telur dari luka atau kerusakan. Cangkang telur ayam yang membungkus telur umumnya

beratnya 9-12% dari berat telur total. Warna kulit telur ayam bervariasi, mulai dari putih

kekuningan sampai cokelat. Warna cangkang luar telur ayam ras (ayam boiler) ada yang putih,

ada yang cokelat. Bedanya pada ketebalan cangkang, yang berwarna cokelat lebih tebal

daripada yang berwarna putih.

Kandungan Kalsium Karbonat pada Cangkang Telur Ayam

Kalsium ditemukan di alam tidak dalam bentuk murni. Kalsium selalu berikatan dengan

mineral atau unsur alam lainnya. Dalam cangkang telur, kalsium membentuk senyawa kalsium

karbonat. Kalsium karbonat adalah garam kalsium yang terdapat pada kapur, batu kapur,

pualam dan merupakan komponen utama yang terdapat pada cangkang telur. Kalsium karbonat

berupa serbuk, putih, tidak berbau, tidak berasa, stabil di udara. Kalsium karbonat tidak mudah

larut dalam air, tetapi kelarutan dalam air bisa meningkat dengan adanya sedikit garam

amonium atau karbon dioksida. Kalsium karbonat dapat larut dalam asam nitrat dengan

membentuk gelembung gas. Kalsium karbonat juga larut dalam asam asetat, asam hidroklorik,

asam lainnya, dan larutan ammonium klorida (BPOM, 2010).

Salah satu sifat kimia dari kalsium karbonat yaitu dapat menetralisasi asam.

Penggunaan kalsium karbonat dalam bidang farmasi adalah sebagai antasida karena

kemampuannya dalam menetralisir asam, namun kalsium karbonat dapat menyebabkan

konstipasi. Selain sebagai antasida, dalam bidang farmasi, kalsium karbonat digunakan sebagai

suplemen kalsium dan osteoporosis.

Kandungan Kolagen Pada Cangkang Telur Ayam

Cangkang telur dibentuk dari serat membran yang tersusun dari kira-kira 10%

kolagen (tipe I, V dan X) dan 70-75% dari protein lain dan glikoprotein yang mengandung lisin

tautan silang. Persentase terbesar dari total yang diekstraksi konten kolagen adalah sekitar 507

dan 495 mg 100 g-1 sampel kering dengan ekstraksi asam asetat dan sitrat, masing-masing.

Proses pretreatment ekstraksi menggunakan metode Sadowska untuk menghapus pengotor

seperti senyawa non-kolagen yang ikut terlarut, lipid, dan pigmen yang membuat dan rasa tidak

enak
Kandungan Cangkang Kepiting

Kepiting (Scyllasp.) merupakan salah satu bahan baku hasil perairan dari filum krustase

yang memiliki potensi untuk dikembangkan. Menurut data produksi KKP (2013), volume

ekspor kepiting melonjak 25,76% menjadi lebih dari 19.000 ton senilai 198 juta dolar AS.

Berdasarkan data Kementerian Kelautan dan Perikanan (KKP), ekspor kepiting dan produk

olahannya mencapai 19.786 ton pada Januari-Juni 2013. Selama ini pemanfaatan kepiting

masih terbatas hanya sebagai kebutuhan pangan. Pemanfaatan limbah cangkang kepiting masih

kurang diperhatikan yang beredar dipasaran. Menurut Irawati dan Utami (2007), pemanfaatan

cangkang kepiting di Indonesia masih belum optimal. Pemanfaatan limbah cangkang yang

menjadi permasalahan lingkungan belum sepenuhnya ditangani, namun dengan memberikan

perlakuan terhadap cangkang menjadi salah satu alternatif penyelesaian limbah cangkang.

Limbah cangkang krustase mengandung 30-40% protein, 30-50% kalsium karbonat, dan 20-

30% kitin. Tingginya kandungan kalsium karbonat menjadikan solusi alternatif untuk

menangani limbah cangkang kepiting.11,12

Kandungan Kalsium Karbonat Pada Cangkang Kepiting

Limbah cangkang krustase mengandung 30-40% protein, 30-50% kalsium karbonat,

dan 20-30% kitin.12 Tingginya kandungan kalsium karbonat menjadikan solusi alternatif untuk

menangani limbah cangkang kepiting. Kalsium merupakan mineral paling banyak terdapat

dalam tubuh, yaitu 1,5-2% dari berat badan orang dewasa atau kurang lebih sebanyak 1kg.

Kalsium mengatur pekerjaan hormon-hormon dan faktor pertumbuhan. Berdasarkan jumlah

ini, 99% berada didalam jaringan keras, yaitu tulang dan gigi.13
Kandungan kolagen pada cangkang kepiting

Penelitian oleh Wilson Jr. dkk menemukan kandungan kalogen pada biokompatibilitas

pada cangkang kepiting. Kultur sel in vitro menggunakan fibroblas murine L929 digunakan

sebagai penilaian awal biokompatibilitas pada cangkang kepiting. Tingkat interaksi yang tinggi

diamati antara sel dengan partikel cangkang kepiting yang termineralisasi dan

terdemineralisasi. Serat kolagen mineral juga terlihat pada observasi hari ke 6 . Kumpulan

kolagen dapat dilihat sebagai 2-5 μm serat panjang dalam orientasi paralel dan 100 nm diameter

penampang serat kolagen dalam orientasi tegak lurus.

Serat-serat kolagen menampilkan pita tipis yang merupakan karakteristik dari pola pita

67 nm untuk kolagen. Satu fitur lain yang berbeda adalah penampilan fitur elektron padat kecil

yang terdistribusi mengindikasikan fase mineral terdistribusi pada permukaan serat kolagen.

Penampilan serat kolagen termineralisasi dalam spesimen yang diimplantasikan dengan

demineral cangkang kepiting merupakan hasil yang sangat menarik. Serat kolagen dewasa

terlihat yang juga menampilkan karakteristik pola pita 67 nm dan daerah padat elektron fase

mineral. Sementara hasil yang serupa terjadi pada kedua kasus, hasil ini menunjukkan bahwa

cangkang kepiting yang didemineralisasi dapat menginduksi mineralisasi pembentukan

kolagen pada tahap awal dalam proses penyembuhan.14

RINGKASAN

Salah satu solusi yang dapat ditawarkan adalah dengan mengganti suplemen-suplemen

berbahan dasar sintetis dengan bahan dasar alami. Salah satunya adalah tulang ikan. Tulang

merupakan bagian penting dari ikan, sekitar 10–15% dari total massa ikan adalah tulang dari

kepala dan vertebra. Jaringan tulang ikan dibangun dari matriks ekstra seluler organik yang

ditutupi dengan hidroksiapatit. Berdasarkan hasil penelitian, tingkat Ca dalam abu tulang ikan
hampir sama untuk semua spesies mulai dari 304 g/kg abu tulang ikan pada ikan salmon,

hingga 325 g/kg abu tulang ikan pada ikan saithe, kecuali untuk ikan haring besar dan ikan

kuda tenggiri yang menunjukkan kadar 367 g/kg abu tulang ikan. Selain kandungan mineral

yang dibutuhkan oleh tubuh, tulang ikan juga mengandung growth factor yang berguna bagi

tubuh. Ekstrak tulang ikan merupakan suatu terobosan baru bila dibandingkan dengan

cangkang telur ayam dan cangkang kepiting, dalam pemanfaatannya sebagai suplemen

kalsium. Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk meningkatkan pengetahuan mengenai aspek

kandungan mineral dan mikronutrien pada tulang ikan dan kualitas penyerapannya pada tubuh

manusia. Ini akan dapat digunakan untuk mengembangkan penurunan angka kejadian

osteoporosis.
 DAFTAR PUSTAKA

1. Heo, S. Y. et al. Fish bone peptide promotes osteogenic differentiation of MC3T3-E1

pre-osteoblasts through upregulation of MAPKs and Smad pathways activated BMP-2
receptor. Cell Biochem. Funct. (2018). doi:10.1002/cbf.3325
2. Dolińska, B., Jelińska, M., Szulc-Musioł, B. & Ryszka, F. Use of eggshells as a raw
material for production of calcium preparations. Czech J. Food Sci. (2016).
doi:10.17221/59/2016-CJFS
3. Helland, S., Refstie, S., Espmark, Å., Hjelde, K. & Baeverfjord, G. Mineral balance
and bone formation in fast-growing Atlantic salmon parr (Salmo salar) in response to
dissolved metabolic carbon dioxide and restricted dietary phosphorus supply.
Aquaculture (2005). doi:10.1016/j.aquaculture.2005.03.032
4. Liaset, B., Julshamn, K. & Espe, M. Chemical composition and theoretical nutritional
evaluation of the produced fractions from enzymic hydrolysis of salmon frames with
ProtamexTM. Process Biochem. (2003). doi:10.1016/S0032-9592(02)00251-0
5. Toppe, J., Albrektsen, S., Hope, B. & Aksnes, A. Chemical composition, mineral
content and amino acid and lipid profiles in bones from various fish species. Comp.
Biochem. Physiol. - B Biochem. Mol. Biol. (2007). doi:10.1016/j.cbpb.2006.11.020
6. Nemati, M., Huda, N. & Ariffin, F. Development of calcium supplement from fish
bone wastes of yellowfin tuna (Thunnus albacares) and characterization of nutritional
quality. Int. Food Res. J. (2017).
7. Straub, D. A. Calcium supplementation in clinical practice: A review of forms, doses,
and indications. Nutrition in Clinical Practice (2007).
doi:10.1177/0115426507022003286
8. Hanzlik, R. P. Relative Bioavailability of Calcium from Calcium Formate, Calcium
Citrate, and Calcium Carbonate. J. Pharmacol. Exp. Ther. (2005).
doi:10.1124/jpet.104.081893
9. Darmanto, Y. S., Agustini, T. W., Swastawati, F. & Al Bulushi, I. The effect of fish
bone collagens in improving food quality. Int. Food Res. J. (2014).
10. Rafael, M. S., Laizé, V. & Cancela, M. L. Identification of Sparus aurata bone
morphogenetic protein 2: Molecular cloning, gene expression and in silico analysis of
protein conserved features in vertebrates. Bone (2006).
doi:10.1016/j.bone.2006.06.021
11. Trisnawati, E., Andesti, D. & Saleh, A. PEMBUATAN KITOSAN DARI LIMBAH
CANGKANG KEPITING SEBAGAI BAHAN PENGAWET BUAH DUKU
DENGAN VARIASI LAMA PENGAWETAN. J. Tek. Kim. (2013).
12. Arbia, W., Arbia, L., Adour, L. & Amrane, A. Chitin extraction from crustacean shells
using biological methods -A review. Food Technol. Biotechnol. (2013).
13. Almatsier, S. Prinsip Dasar Ilmi Gizi. Gramedia Pustaka Utama (2009).
doi:http://dx.doi.org/10.1002/ca.22400
14. Wilson, O. C., Gugssa, A., Mehl, P. & Anderson, W. An initial assessment of the
biocompatibility of crab shell for bone tissue engineering. Mater. Sci. Eng. C (2012).
doi:10.1016/j.msec.2011.06.012