Nama : Hartiningsih

NIM : 201802486

Prodi : S1 Kesehatan Masyarakat

Mikroskopi

Langsung Pengamatan mikroskopis digunakan untuk mendeteksi leptospira dalam cairan tubuh,
memeriksa pertumbuhan kultur dll. Dark Field Mikroskopi adalah metode yang biasa, tetapi
imunostaining berguna dalam keadaan khusus tertentu Darkfield dan kontras fase: Leptospira terlihat
sebagai batang motil yang aktif, tipis, dan aktif. , Bergerak dengan karakteristik gerak berputar cepat
dan menyentak. Kira-kira, 10 leptospira / mL diperlukan agar satu sel per bidang dapat dilihat oleh
mikroskop lapangan gelap. Namun, kepositifan mikroskop darkfield menurun dari 100% menjadi 90,9%
dengan peningkatan durasi infeksi selama lebih dari 1 minggu. Kerugian lain dari teknik ini adalah
bahwa diagnosis positif palsu dan negatif palsu dapat dengan mudah dibuat bahkan di tangan yang
berpengalaman [24]. Pewarnaan histokimia: Berbagai pewarnaan histopatologis telah digunakan untuk
mendeteksi leptospira pada spesimen klinis. Yang pertama digunakan adalah noda perak. Noda Wrthin-
Starry banyak digunakan sekarang [25]. Immunostaining: Ini dapat digunakan untuk menemukan
leptospira di mana mereka langka, atau di mana ada bahan yang menghalangi penggunaan mikroskop
darkfield. Tetapi setiap imunosatin membutuhkan antibodi primer khusus untuk serovar yang dicari,
sendiri atau dalam kumpulan atau campuran antibodi untuk serovar yang berbeda. Terlalu banyak
varietas dalam kolam akan mencairkan satu pun, sehingga diperlukan konjugat antisera titer tinggi.
Dengan kata lain, itu mungkin tidak menguntungkan pada infeksi awal [26].

Budaya

Media cairan digunakan untuk kultur primer. Hasil yang lebih besar dan pertumbuhan yang lebih cepat
diperoleh di media Tween (oleate) -albumin seperti EMJH (Ellinghausen, McCullough, Johnson, Harris)
daripada media dengan serum kelinci (8-10% v / v). Media dengan rifampisin, neomisin, actidione
digunakan untuk isolasi primer dari sampel yang terkontaminasi. Kultur organisme ini memakan waktu
hampir 3 bulan dan karenanya, tidak praktis untuk diagnosis segera. Organisme memiliki waktu
penggandaan yang relatif lama (6-8 jam atau lebih). Selain itu, mereka adalah organisme yang sangat
infeksius yang membutuhkan fasilitas 'Keamanan Hayati tingkat II' [27].

Metode Molekuler

Direct Polymerase Chain Reaction (PCR) pada spesimen memungkinkan diagnosis yang cepat dan
langsung, setidaknya pada tahap awal dan tahap pemulihan infeksi. Reaksi mendeteksi DNA leptospiral
dalam spesimen, turun ke jumlah yang sangat kecil setara dengan kandungan DNA sekitar 10 leptospira
atau kurang. Keterbatasan diagnosis leptospirosis berbasis PCR adalah ketidakmampuan sebagian besar
tes PCR untuk mengidentifikasi serovar yang menginfeksi [28]. Sebuah studi pada 103 pasien meningitis
yang tidak diketahui penyebabnya menunjukkan bahwa 39,08% positif oleh PCR, 3,88% oleh ELISA &
8,74% oleh MAT [29]. PCR dan PCR / RFLP bersarang untuk amplifikasi gen RNA ribosom 16S. DNA
genom leptospiral diekstraksi dari sampel serum manusia yang diduga. DNA dikeringkan dengan udara,
dilarutkan dalam buffer TE (10 mMTris-HCl, pH 8,0, 0,1 mM EDTA), dan disimpan pada suhu -20 ° C
sampai digunakan. DNA dikuantifikasi oleh elektroforesis gel agarosa dan spektrofotometri dengan
menghitung A 260 / A 280 rasio dan nilai A 260 untuk menentukan kotoran protein dan konsentrasi
DNA. DNA Leptospira diamplifikasi dengan menggunakan primer. Primer ini memperkuat semua spesies
Leptospira yang patogen dan non-patogen [30].
Metode Serologis dan Tidak Langsung Lainnya

Sebagian besar kasus leptospirosis didiagnosis dengan serologi. Antibodi dapat terdeteksi pada hari ke 6
sampai 10 dan mencapai level puncak dalam tiga hingga empat minggu. Tingkat antibodi kemudian
secara bertahap menurun tetapi tetap dapat dideteksi selama bertahun-tahun.

Uji Aglutinasi Mikroskopis (MAT) [31]

MAT adalah uji sensitif, tetapi karena heterogenitas antigenik Leptospira spp. membutuhkan sejumlah
besar asantigen serovar. Selain itu, itu tidak akan berguna pada tahap awal penyakit ketika antibodi
terhadap Leptospira spp. tidak ada atau, jika ada, berada pada level rendah di CSF. Hasil positif
didefinisikan sebagai peningkatan titer 4 kali lipat antara spesimen akut dan konvalesen. Sebuah titer
tunggal melebihi 1: 200 atau titer serial melebihi 1: 100 menunjukkan leptospirosis, tetapi tidak ada
yang diagnostik. Beberapa pasien memiliki bukti serologis infeksi sebelumnya dengan kelompok
leptospiralsero yang berbeda. Dalam kasus ini, diagnosis serologis diperumit lebih lanjut oleh “respons
anamnestik”, di mana kenaikan titer antibodi biasanya diarahkan terhadap serovar yang menginfeksi
dari paparan sebelumnya.

Uji Imun Linked Immunosorbent (ELISA)

Tes ini bergantung pada deteksi antibodi IgM yang muncul dalam darah sehari lebih awal dari yang
digunakan dalam MAT. Seringkali ada korelasi yang buruk antara hasil MAT dan ELISA pada serum
individu. Standar rujukan adalah MAT, antibodi IgM menjadi terdeteksi selama minggu pertama
penyakit, memungkinkan diagnosis untuk dikonfirmasi dan pengobatan dimulai sementara itu
tampaknya paling efektif, tingkat antibodi umumnya rendah atau tidak ada selama infeksi awal [32, 33].

Meskipun uji aglutinasi mikroskopis dianggap sebagai standar emas dalam diagnosis leptospirosis,
penggunaannya sebagai tes diagnostik rutin di laboratorium klinis terbatas. Tes ini rumit dan
membosankan untuk penggunaan rutin. Banyak penelitian telah menunjukkan Pan Bio ELISA lebih
sensitif daripada MAT untuk mendeteksi kasus di awal penyakit akut [34]. Antibodi IgM mulai muncul
selama minggu pertama penyakit meskipun tingkat antibodi rendah atau tidak terdeteksi sejak awal
penyakit. Leptospirosis dapat didiagnosis berdasarkan keberadaan antibodi IgM oleh Pan Bio ELISA,
dalam sampel serum tunggal yang dikumpulkan selama fase akut penyakit. Sampel pemulihan yang
diambil setelah dua minggu diperlukan untuk mengkonfirmasi hasilnya. Keterbatasan menggunakan
sampel serum tunggal dalam demonstrasi antibodi IgM adalah tidak adanya antibodi yang sangat awal
dalam infeksi atau persistensi antibodi. Antibodi IgM pada leptospirosis bertahan untuk waktu yang
lama dengan tingkat penurunan yang bervariasi [35]. Sampel serum tunggal yang diambil selama
penyakit demam akut dengan gejala leptospirosis adalah bukti dugaan infeksi, dan karenanya
memerlukan konfirmasi dengan pengujian lebih lanjut.

Konsentrasi bakteri lebih sedikit dalam serum daripada darah segar. Studi yang membandingkan PCR
dan IgM telah menunjukkan PCR saja menjadi kurang sensitif dibandingkan tes serologis selama
perjalanan penyakit; itu adalah metode yang paling sensitif dalam sampel tersebut tanpa antibodi yang
dapat dibuktikan dikumpulkan selama tahap awal penyakit [36,37]. Oleh karena itu penggunaan PCR
dalam kombinasi dengan IgM ELISA akan meningkatkan sensitivitas diagnosis leptospirosis pada fase
pertama penyakit.

Menguji ELISA in-house dengan bakteri yang diolah dan direbus formalin dari spesies antara
Leptospirafainei sebagai antigen untuk mendeteksi antibodi IgM spesifik Leptospira. Sampel, diuji oleh
MAT sebagai uji referensi, digunakan untuk mengevaluasi ELISA. Nilai kappa adalah 0,92 (interval
kepercayaan 95% 0,88-0,96), yang menunjukkan kesepakatan yang sangat baik antara MAT dan ELISA.
Kinerja keseluruhan ELISA in-house ini menunjukkan penerapan sebagai tes skrining cepat untuk
diagnosis leptospirosis di rangkaian terbatas sumber daya dan di rumah sakit dan laboratorium di mana
MAT tidak tersedia [38].

Uji Haemaglutinasi Tidak Langsung (IHA)

Tes IHA adalah metode diagnosis yang cepat dan mudah dilakukan yang didasarkan pada antibodi
spesifik-genus. Namun, hasil yang berlawanan telah diperoleh melalui berbagai penelitian yang
dilakukan untuk menemukan sensitivitas dan spesifisitas IHA pada infeksi awal. Telah terbukti memiliki
sensitivitas 92% dan spesifisitas 95% dibandingkan dengan MAT. Dapat disimpulkan bahwa IHA memiliki
lingkup yang sangat terbatas dalam mendiagnosis infeksi Leptospirain sebelum 8 hari [39].

Uji Leptodipstick

Ini adalah uji yang mendeteksi antibodi IgM spesifik Leptospira dalam serum manusia [40].

Kesimpulan

Ketika menggunakan sampel tunggal yang dikumpulkan selama fase akut awal penyakit, hasil Pan Bio
IgM ELISA dapat memberi kita diagnosis dugaan leptospirosis. Sangat awal dalam infeksi bahkan
mungkin gagal mendeteksi keberadaan antibodi. PCR adalah teknik sensitif dan spesifik yang dapat
mendeteksi keberadaan DNA pada tahap paling awal penyakit, sehingga PCR bersama-sama dengan
IgM ELISA dapat digunakan untuk mengkonfirmasi diagnosis, sejak awal pada tahap akut infeksi.

References
[1] Wu W, Bao L, Wu Q, Li S, Huang W. World Health Organization. Leptospirosis
worldwide. Wkly Epidemiol Rec. 1999;74:237–242.647. [PubMed] [Google Scholar]

[2] Rebecca P, Deborrah D. Overview of the epidemiology, microbiology, and pathogenesis of

Leptospira spp. in humans. Microbes Infect. 2000;2:1265–76. [PubMed] [Google Scholar]

[3] Everard JD, Everard COR. Leptospirosis in the Caribbean. Rev. Med. Microbiol. 1993;4:114–
22. [Google Scholar]

[4] John JT. Emerging and reemerging bacterial pathogens in India. Indian J Med Res. 1996;103:4–
18. [PubMed] [Google Scholar]

[5] Roy S, Biswas D, Vijayachari P, Sugunan AP, Sehgal SC. A clone of

Leptospirainterroganssensustricto is the major cause of leptospirosis in the Archipelago of the
Andaman & Nicobar Islands, India. Letters in Applied Microbiology. 2005;41:179–
85. [PubMed] [Google Scholar]
[6] Turner LH. Leptospirosis I. Trans R. Soc Trop Med Hyg. 1967;61:842–55. [PubMed] [Google
Scholar]

[7] Chernukha YG, Shishkina ZS, Baryshev PM, Kokovin IL. The dynamics of IgM and IgG
antibodies in leptospiral infection in man. Zentralbl. Bakteriol.Mikrobiol. Hyg. 1976;236:336–
43. [PubMed] [Google Scholar]

[8] Silva MV, Camargo ED, Batista LA, et al. Behaviour of specific IgM, IgG and IgA class
antibodies in human leptospirosis during the acute phase of the disease and during convalescence. J.
Trop. Med. Hyg. 1995;98:268–72. [PubMed] [Google Scholar]

[9] Cumberland PC, Everard COR, Wheeler JG, Levett PN. Persistence of anti-leptospiralIg M, IgG
and agglutinating antibodies in patients presenting with acute febrile illness in Barbados 1979-
1989. Eur J Epidemiol. 2001;17:601–08. [PubMed] [Google Scholar]

[10] Brandão AP, Camargo ED, da Silva ED, Silva MV, Abrão RV. Macroscopic agglutination test
for rapid diagnosis of human leptospirosis. J ClinMicrobiol. 1998;36:3138–42. [PMC free
article] [PubMed] [Google Scholar]

[11] Turner LH. Leptospirosis II. Serology. Trans. R. Soc. Trop. Med.Hyg. 1968;62:880–
89. [PubMed] [Google Scholar]

[12] Pike RM. Laboratory-associated infections: summary and analysis of 3921 cases. Health Lab.
Sci. 1976;13:105–14. [PubMed] [Google Scholar]

[13] Amouriaux Merièn P, Perolat P, Branton G, Saint IG. Polymerase Chain Reaction for detection
of Leptospira spp. In clinical samples. Journal of Clinical Microbiology. 1992;30:2219–24. [PMC
free article] [PubMed] [Google Scholar]

[14] World Health Organization. Leptospirosis worldwide. Epidemiol. Rec. 1999;74:237–

42. [PubMed] [Google Scholar]

[15] Uhlenhuth P, Fromme W. Experimentelle Untersuchungenüber die sogenannte Weilsche

Krankheit (ansteckende Gelbsucht) Med Klin. 1915;44:1202–03. [Google Scholar]

[16] Stimson AM. Note on an organism found in yellow-fever tissue. Public Health
Rep. 1907;22:541–542a. [Google Scholar]

[17] Kmety E, Dikken H. Classification of the species Leptospirainterrogans and history of its
serovars. Groningen, The Netherlands: University Press Groningen; 1993. [Google Scholar]

[18] Diesch SL, McCulloch WF. Isolation of pathogenic leptospiresv from waters used for
recreation. Public Health Rep. 1966;81:299–304. [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]

[19] Babudieri B. Animal reservoirs of leptospirosis. Ann NY Acad Sci. 1958;70:393–

413. [PubMed] [Google Scholar]

[20] Waitkins SA. Leptospirosis as an occupational disease. Br J Ind Med. 1986;43:721–25. [PMC
free article] [PubMed] [Google Scholar]

[21] Terry J, Trent M, Bartlett M. A cluster of leptospirosis among abattoir workers. Commun Dis
Intell. 2000;24:158–60. [PubMed] [Google Scholar]

[22] Kelley PW. Infectious diseases. 2nd ed. Philadelphia, Pa: W. B.Saunders; 1998. Leptospirosis,
p. 1580-1587. In S. L. Gorbach, J. G.Bartlett, and N. R. Blacklow (ed.) [Google Scholar]

[23] Edwards GA, Domm BM. Human leptospirosis. Medicine. 1960;39:117–56. [PubMed] [Google
Scholar]

[24] Turner LH. Leptospirosis III. Maintenance, isolation and demonstration of leptospires. Trans R
Soc Trop Med Hyg. 1970;64:623–46. [PubMed] [Google Scholar]

[25] Ellis WA, Brien JJO, Neill SD, Ferguson HW, Hanna J. Bovine leptospirosis: microbiological
and serological findings in aborted fetuses. Vet. Rec. 1982;110:147–50. [PubMed] [Google Scholar]
[26] Uip DE, Amato Neto V, Duarte MS. Diagnosticoprecoce da leptospirosepordemonstracao de
antigenosatravés de exameimuno-histoquíminoemmúsculo da panturrilha. Rev Inst Med Trop Sao
Paulo. 1992;34:375–81. [PubMed] [Google Scholar]

[27] Johnson RC, Harris VG. Differentiation of pathogenic and saprophytic leptospires. 1. Growth at
low temperatures. J Bacteriol. 1967;94:27–31. [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]

[28] Bal AE, Gravekamp C, Hartskeerl RA, MezaBrewster JD, Korver H, Terpstra WJ. Detection of
leptospires in urine by PCR for early diagnosis of leptospires. J Clin Microbiol. 1994;32:1894–
98. [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]

[29] Romero EC, Billerbeck AEC, Lando VS, Camargo ED, Souza CC, Yasuda PH. Detection of
leptospira DNA in patients with Aseptic meningitis by PCR. J Clin Microbiol. 1998;36:1453–
55. [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]

[30] Sedigheh Z, Neda S, Mandana A. Molecular epidemiology of leptospirosis in northern iran by

nested polymerase chain reaction/restriction fragment length polymorphism and sequencing
methods. Am J Trop Med Hyg. 2010;82(5):899–903. [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]

[31] Galton MM, Powers DK, Hall AM, Cornell RG. A rapid microscopic-slide screening test for
the serodiagnosis of leptospirosis. Am J Vet Res. 1958;19:505–12. [PubMed] [Google Scholar]

[32] Terpstra WJ, Ligthart GS, Schoone GJ. ELISA for the detection of specific IgM and IgG in
human leptospirosis. J. Gen. Microbiol. 1985;131:377–85. [PubMed] [Google Scholar]

[33] Terpstra WJ, Ligthart GS, Schoone GJ. Serodiagnosis of human leptospirosis by enzyme-
linked-immunosorbent-assay (ELISA) Zentbl. Bakteriol. 1980;247:400–05. [PubMed] [Google
Scholar]

[34] Levett PN, Branch SL, Whittington CU, Edwards CN, Paxton H. Two methods for rapid
serological diagnosis of acute leptospirosis. Clin Diagn Lab Immunol. 2001;8:349–51. [PMC free
article] [PubMed] [Google Scholar]

[35] Ahmed SN, Shah S, Ahmed FMH. Laboratory diagnosis of leptospirosis. J Postgrad
Med. 2005;51:195–200. [PubMed] [Google Scholar]

[36] Ooteman MC, Vago AR, Koury MC. Evaluation of MAT, IgM ELISA and PCR methods for
the diagnosis of human leptospirosis. Journal of Microbiological Methods. 2005;65(2):247–
57. [PubMed] [Google Scholar]

[37] Fonseca de A C, Teixeira de Freitas VL. Polymerase chain reaction in comparison with
serological tests for early diagnosis of human leptospirosis. Trop Med Inst
Health. 2006;11(11):1699–707. [PubMed] [Google Scholar]

[38] Pascale B, Muriel V, Mathieu P. Evaluation of an in-house ELISA using the intermediate
species Leptospirafainei for diagnosis of leptospirosis. J Med Microbiol. 2013;62(Pt_6):822–
27. [PubMed] [Google Scholar]

[39] Imamura S, Matsui H, Ashizawa Y. Indirect hemagglutination test for detection of leptospiral
antibodies. Jpn J Exp Med. 1974;44:191–97. [PubMed] [Google Scholar]

[40] Gussenhoven GC, Menno AWG van Der Moorn, Marga GA, Goris WJ, Terpstra RA, et al.
LEPTO Dipstick, a dipstick assay for the detection of Leptospira-specific IgM antibodies in human
sera. Journal of Clinical Microbiology. 1997;35:92–97. [PMC free article] [PubMed] [Google
Scholar]