GEN pertama kali terdeteksi dan dianalisis oleh Men-del, dan kemudian banyak ilmuwan lain,

dengan mengikuti pola penularannya dari generasi ke generasi (Bab 2). Studi-studi ini,
sementara sangat menjelaskan sifat pewarisan pada organisme hidup, tidak memberikan
wawasan tentang struktur atau komposisi molekul gen.

Studi selanjutnya menetapkan korelasi yang tepat antara pola penularan gen dari generasi ke
generasi (segregasi dan bermacam-macam independen) dan perilaku kromom selama reproduksi
seksual, khususnya divisi pengurangan meiosis dan pembuahan (Bab. 3). Eksperimen ini dan
yang terkait memberikan bukti awal yang kuat bahwa gen biasanya terletak pada kromosom.
Dengan demikian, dalam mengajukan pertanyaan tentang dasar kimia keturunan, para ilmuwan
mulai dengan menyelidiki komposisi biokimia kromosom.

Apa pun komposisi kimianya, jelas bahkan pada zaman Mendel bahwa materi genetik harus
memenuhi dua persyaratan utama.

1. Fungsi atau replikasi genotipe. Materi genetik harus mampu menyimpan informasi genetik
dan mentransmisikan informasi ini dengan setia dari orang tua kepada keturunan, dari generasi
ke generasi (meskipun, seperti yang akan kita lihat di Bab 11, materi genetik kadang-kadang
mengalami perubahan yang diwariskan sesekali yang disebut mutasi).

2. Fungsi pbenotipe atau ekspresi gen. Bahan genetik harus mengendalikan perkembangan
fenorip organisme, baik itu virus, bacerium, tanaman, atau hewan seperti manusia. Yaitu,
materi genetik harus menentukan pertumbuhan dan diferensiasi organisme dari zigot bersel
tunggal hingga dewasa dewasa. Untuk mengendalikan proses komposisi ini, materi genetik
tidak hanya harus mengekspresikan dirinya secara akurat, tetapi setiap gen harus bertindak pada
waktu dan tempat yang tepat untuk menjamin bahwa hati terdiri dari sel-sel hati, sistem saraf
sel-sel saraf, dan sebagainya. pada (lihat Bab 10 dan 15).

Kromosom terdiri dari dua jenis molekul zanik besar (makromolekul) yang disebut protein asam
nukleat. Asam nukleat terdiri dari dua jenis: asam ayribonukleat (DNA) dan asam ribonukleat A).
Selama bertahun-tahun, ada jarak yang cukup besar di antara para ilmuwan mengenai mana dari
ketiga romolekul ini yang membawa informasi genetik. Selama 1940-an dan awal 1950-an,
beberapa pengalaman elegan dilakukan yang dengan jelas menetapkan bahwa informasi ini
berada di dalam asam nukleat dan bukan dalam protein. Lebih khusus, percobaan ini merah
bahwa informasi genetik berada di dalam DNA. beberapa virus sederhana, bagaimanapun, RNA
membawa informasi ic; virus-virus khusus ini mengandung VA.)

DNA, BAHAN GENETIK

Beberapa baris bukti tidak langsung telah lama menyatakan bahwa DNA mengandung informasi
genetik organisme hidup. Yang paling penting, hasil yang diperoleh dengan menggunakan
beberapa prosedur eksperimental yang berbeda menunjukkan bahwa sebagian besar DNA
terletak di kromosom, sedangkan RNA dan protein juga berlimpah di sitoplasma. Selain itu, ada
korelasi yang tepat antara jumlah DNA per sel dan jumlah set kromosom per sel. Yaitu,
sebagian besar sel somatik dari organisme diploid, misalnya, mengandung tepat dua kali jumlah
DNA daripada sel kuman haploid atau gamet dari spesies yang sama. Akhirnya, komposisi
molekul DNA dalam semua sel yang berbeda dari suatu organisme adalah sama (dengan
pengecualian langka), sedangkan komposisi RNA dan protein bervariasi, baik secara kualitatif
maupun kuantitatif dari satu sel ke sel lainnya. Meskipun korelasi ini sangat menunjukkan
bahwa DNA adalah bahan genetik, mereka tidak membuktikannya. Untungnya, bukti langsung
telah menetapkan bahwa informasi genetik dikodekan dalam DNA.

Transformasi dalam Pneumococcus

Bukti langsung pertama yang menunjukkan bahwa materi genetik adalah DNA daripada protein
atau RNA diterbitkan oleh OT Avery, CM Macleod, dan M. McCarty pada tahun 1944. Mereka
menunjukkan bahwa komponen sel bertanggung jawab atas fenomena ... transformasi dalam
bakteri Diplococcus pneumoniae (pneu- mococcus) adalah DNA. Transformasi adalah cara
rekombinasi (pertukaran atau transfer informasi genetik antara organisme atau dari satu
organisme ke organisme lain) yang terjadi pada beberapa, tetapi tidak semua, spesies bakteri.
Ini tidak melibatkan kontak langsung antara sel-sel bakteri atau mediasi oleh vektor seperti virus
(lihat Bab 8, hal. 206-208).

Fenomena transformasi adalah discov. dipersembahkan oleh Frederick Griffith pada tahun 1928.
Harus ditekankan bahwa meskipun percobaan Griffith menunjukkan terjadinya transformasi pada
pucococcus dan dengan demikian mengatur panggung untuk karya Avery. MacLeod, dan
McCarty, mereka tidak memberikan bukti bahwa ĐNA terlibat dalam hal apa pun.

Pneumokokus, seperti semua organisme hidup lainnya, menunjukkan variabilitas genetik yang
dapat dikenali oleh adanya berbagai fenotipe (Tabel 5.1). Dua karakteristik fenotipik yang
penting dalam demonstrasi transformasi Griffith adalah (1) ada atau tidak adanya kapsul
polisakarida (polimer gula kompleks) di sekitarnya dan (2) jenis kapsul, yaitu, komposisi molekul
spesifik polisakarida hadir dalam kapsul. Ketika ditanam di media yang sesuai (seperti agar
darah) di Tabel 5.1 Karakteristik Strain Diplococcus pneumoniae Ketika Tumbuh pada Medium
Agar Darah.

Meskipun sel-sel Tipe R tidak terbungkus, mereka membawa gen-gen yang akan mengarahkan
sintesis jenis tertentu (antigenik Tipe II atau III) kapsul jika blok dalam pembentukan kapsul tidak
ada. Ketika sel tipe R bermutasi kembali, kapsul tipe (II atau III) dienkapsulasi ditentukan oleh
gen-gen ini. Dengan demikian, sel R yang berasal dari sel Tipe IIS disebut Tipe IIR. Ketika
sel-sel Tipe IIR ini bermutasi kembali ke sel-sel Tipe S yang dienkapsulasi, kapsul-kapsul tersebut
dari Tipe II.

cawan petri, pneumokokus dengan bentuk kapsul besar, koloni halus dan dengan demikian
disebut Tipe S. Pneumokokus yang dienkapsulasi ini cukup patogen bagi sebagian besar mamalia
(mis., menyebabkan pneumonia pada manusia). Virus pneumokokus (penyebab penyakit) tipe S
ini bermutasi menjadi bentuk novirulen (atau nonpathogenik) yang tidak memiliki kapsul
polisakarida (pada frekuensi sekitar satu sel dalam 107). Pneumococci yang tidak berkapsul dan
nonvirulent membentuk koloni kecil yang memiliki permukaan kasar ketika tumbuh pada media
agar darah dan oleh karenanya disebut Tipe R (Tabel 5.1). (Kapsul polisakarida diperlukan untuk
virulensi karena melindungi sel bakteri terhadap fagositosis oleh leukosit.) Ketika kapsul hadir,
mungkin ada beberapa jenis antigenik yang berbeda (Tipe II, III, dll.), Tergantung pada spesifik
komposisi molekul polisakarida dan, tentu saja, pada akhirnya pada genotipe sel.

Jenis kapsul yang berbeda dapat diidentifikasi secara imunologis. Jika sel Tipe II disuntikkan ke
dalam aliran darah kelinci, sistem kekebalan kelinci akan menghasilkan antibodi (satu set khusus
protein besar yang fungsinya untuk melindungi organisme terhadap zat asing seperti
makromolekul, virus, dan bakteri; lihat Bab 16 ) yang bereaksi secara spesifik dengan sel Tipe II.
Antibodi Tipe II seperti itu akan menggumpalkan pneumokokus Tipe II tetapi bukan
pneumokokus Tipe III, dan sebaliknya.

Penemuan Griffith yang tak terduga adalah bahwa jika ia menginfeksi pneumokokus Tipe IIIS yang
terbunuh dengan panas (virulen ketika hidup) ditambah pneumokokus Tipe IIR hidup (nonviruen)
menjadi tikus, banyak tikus yang meninggal karena pneumonia, dan sel-sel hidup Tipe IIIS adalah
pulih dari bangkai (Gbr. 5.1). Ketika tikus disuntik dengan pneumokokus Tipe IIIS yang terbunuh
secara panas saja (Gbr. 5.1, atas), tidak ada tikus yang mati. Virulensi yang diamati karena itu
bukan karena beberapa sel Type IIIS yang selamat dari perlakuan panas. Penting untuk dicatat
bahwa pneumokokus virulen hidup pulih dari bangkai adalah polisakarida Tipe III, karena
diketahui bahwa sel Tipe R yang tidak terenkapsulasi dapat bermutasi kembali menjadi sel Tipe S
yang dienkapsulasi dengan virulen. Ketika mutasi tersebut terjadi dalam sel Tipe IIR, namun, sel
yang dihasilkan akan menjadi Tipe IIS, bukan Tipe IIIS. Dengan demikian, "transformasi" sel-sel
Type IIR nonvirulent menjadi sel-sel Type IIIS yang virulen tidak dapat dijelaskan dengan mutasi,
melainkan beberapa komponen dari sel-sel Type IIIS yang mati ("prinsip transformasi") harus
mengubah sel-sel Type IIR yang hidup menjadi Type IIIS.

Eksperimen selanjutnya menunjukkan bahwa fenomena yang dijelaskan oleh Griffith, yang
sekarang disebut transformasi, tidak dimediasi dengan cara apa pun oleh inang yang hidup.
Fenomena yang sama terjadi pada tabung reaksi ketika sel Tipe IIR hidup ditanam di hadapan sel
Tipe IIIS mati atau ekstrak sel Tipe IIIS. Karena jelas ditunjukkan bahwa fenotipe baru, Tipe IIIS,
adalah turun temurun, yaitu, disebabkan oleh perubahan genotipe sel yang diwariskan secara
permanen, demonstrasi transformasi secara rapi mengatur panggung untuk menentukan dasar
kimia dari faktor keturunan dalam pneumococcus. . Yang tersisa adalah menentukan
komponen ekstrak sel apa yang bertanggung jawab untuk transformasi.

Bukti bahwa "" Prinsip Transformasi "Adalah DNA"

Prinsip transformasi "ditunjukkan menjadi DNA pada tahun 1944 ketika Avery, MacLeod, dan
McCarty menerbitkan hasil dari serangkaian eksperimen yang ekstensif dan melelahkan.
Mereka menunjukkan bahwa jika DNA yang sangat murni dari TVDe IIIS pneumococci hadir
dengan pneu- mococci Tipe IIR, beberapa pneumococci ditransformasikan ke Tipe IIIS (Gambar
5.2). Tetapi bagaimana orang bisa yakin bahwa DNA itu benar-benar murni? Membuktikan
kemurnian lengkap dari setiap zat makromolekul sangat sulit. Mungkin persiapan DNA
mengandung beberapa molekul protein dan kontaminasi

(Gambar 5.1 tikus )

Demonstrasi Griffith tentang transformasi pada pneumococcus. Ketika terbunuh dengan panas
(S untuk pembentukan koloni halus) pneumokokus tipe III disuntikkan ke tikus, tikus tidak
mengembangkan pneumonia. Demikian pula, ketika hidup nonenkapsulasi (ditunjuk R untuk
pembentukan koloni kasar) sel tipe II disuntikkan ke tikus, tikus tidak menunjukkan efek buruk.
Injeksi pneumokokus Tipe IIIS yang hidup mengakibatkan pneumonia berat dan kematian banyak
tikus. Anehnya, injeksi sel Tipe IIIIS yang terbunuh dengan panas (virulen jika hidup) bersama
dengan sel Tipe IIR yang hidup (nonvirulen) menyebabkan kematian banyak tikus.

protein bertanggung jawab atas transformasi yang diamati. Eksperimen paling definitif dalam
"bukti" Avery, MacLecd, dan McCarty bahwa DNA adalah prinsip transformasi melibatkan
penggunaan enzim (protein yang mengkatalisasi reaksi metabolisme spesifik) yang menurunkan
DNA, RNA, atau protein. Dalam percobaan terpisah, DNA yang sangat murni dari sel Tipe IIIS
diperlakukan dengan (1) deoksiribonuklease ("DNase," yang mendegradasi DNA), (2)
ribonuklease ("RNase," yang mendegradasi RNA), atau (3) protease (yang terdegradasi) protein)
dan kemudian diuji kemampuannya untuk mengubah sel Tipe IIR menjadi Tipe IIIS. Hanya
DNase yang memiliki efek pada aktivitas transformasi persiapan DNA; itu secara otomatis
menghilangkan semua aktivitas transformasi (Gbr. 5.2).

Meskipun mekanisme molekuler dimana ransformasi terjadi tetap harus dikerjakan 1

penyelidikan berikutnya, hasil yang diperoleh oleh sangat dan rekan kerja dengan jelas
menetapkan bahwa informasi geografis dalam pneumococcus hadir di NA. Kita sekarang tahu
bahwa segmen DNA dalam iromosom pneumokokus yang membawa informasi geologi yang
menentukan sintesis Tipe III kapsul secara fisik diintegrasikan ke dalam kromosom sel penerima
Tipe IIR oleh proses rekombinasi spesifik yang terjadi selama transformasi (lihat Bab 8).

"Eksperimen Hershey-Chase"

Bukti langsung tambahan yang menunjukkan bahwa DNA adalah materi genetik diterbitkan pada
1952 oleh A. D. Heryy (pemenang Hadiah Nobel 1969) dan M. Chase. Percobaan ini
menunjukkan bahwa informasi genetik dari virus bakteri tertentu (bacteriophage T2) hadir dalam
DNA. Hasil mereka, meskipun mungkin kurang pasti dari hasil Avery, Macleod, dan Mc. Carty,
memiliki dampak besar pada penerimaan oleh ilmuwan DNA sebagai bahan genetika. Dampak
besar ini tidak diragukan lagi adalah hasil dari kesederhanaan yang elegan dari apa yang disebut
"eksperimen Hershey-Chase." Virus adalah organisme hidup terkecil, mereka hidup setidaknya
dalam arti bahwa reproduksi mereka dikendalikan oleh informasi genetik yang disimpan dalam
nukleat.

(Gambar 5.2 hal 95)

Bukti Avery, MacLeod, dan McCarty bahwa "prinsip transformasi" adalah DNA. Transformasi
pneumokokus Tipe IIR ke Tipe IIIS dapat ditunjukkan dengan menggunakan DNA yang sangat
murni dari sel Tipe IIIS serta menggunakan sel Tipe IIIS yang terbunuh dengan panas. Bukti
bahwa komponen aktif adalah DNA dan bukan jumlah kecil RNA atau protein yang terkontaminasi
dicapai dengan memperlakukan DNA murni dengan enzim DNase, RNase, dan trypsin (protease),
yang sangat spesifik mendegradasi DNA, RNA, dan protein, masing-masing. secara aktif.
Pengobatan dengan RNase atau protease tidak berpengaruh pada kemampuan persiapan DNA
yang dimurnikan untuk mengubah sel Tipe IIR menjadi Tipe IIIS. Pengobatan DNase
menghancurkan aktivitas transformasi persiapan DNA.

asam melalui proses yang sama pada organisme seluler. Virus, hovever, adalah parasit obligat
aselular yang hanya dapat bereproduksi dalam sel inang yang sesuai. Reproduksi mereka
sepenuhnya tergantung pada mesin metabolisme (ribosom, sistem penghasil energi, dll) dari
inang. Virus telah sangat berguna dalam mempelajari banyak proses genetik karena strukturnya
yang sederhana dan komposisi kimianya (banyak mengandung hanya protein dan asam nukleat)
dan reproduksi mereka yang sangat cepat (15-20 menit untuk beberapa virus bakteri dalam
kondisi optimal).

Bacteriophage T2, yang menginfeksi basil bersama, Escherichia coli, tersusun atas sekitar 50
persen DNA dan sekitar 50 persen protein (Gbr. 5.3). Eksperimen sebelum 1952 menunjukkan
bahwa semua reproduksi bakteri T2 terjadi dalam sel E. coli. Oleh karena itu, ketika Hershey
dan Chase menunjukkan bahwa DNA partikel virus memasuki sel, sedangkan sebagian besar
protein virus tetap teradsorpsi ke bagian luar sel, ini sangat menyiratkan bahwa informasi genetik
yang diperlukan untuk reproduksi virus ada dalam DNA. Dasar untuk Hershey-Chase Percobaan
adalah bahwa DNA mengandung fosfor tetapi tidak ada belerang, sedangkan protein
mengandung belerang tetapi tidak ada fosfor. Dengan demikian, Hershey dan Chase dapat
secara spesifik memberi label baik (1) DNA fag dengan pertumbuhan dalam media yang
mengandung isotop radioaktif dari fosfor, 32P, di tempat isotop normal, 3'P, atau (2) mantel
protein fag dengan pertumbuhan dalam medium yang mengandung sulfur radioaktif, 35S,
menggantikan isotop normal, 32-an (Gambar 5.3). Ketika partikel fag T2 berlabel 35S dicampur
dengan sel E.coli selama beberapa menit dan kemudian dikenakan kekuatan geser dengan
menempatkan sel yang terinfeksi dalam blender Waring, ditemukan bahwa sebagian besar
radioaktivitas (dan dengan demikian protein) dapat dihapus dari sel tanpa mempengaruhi
produksi fag progeni. Ketika fag T2 di mana DNA diberi label dengan 3P digunakan,
bagaimanapun, pada dasarnya semua radioaktivitas ditemukan di dalam sel, yaitu, itu tidak dapat
dihilangkan dengan mencukur dalam blender. Mantel fag yang dicukur dipisahkan dari sel yang
terinfeksi oleh sentrifugasi berkecepatan rendah yang membuat sel (sedimen) sementara
meninggalkan partikel fag ditangguhkan. Hasil ini menunjukkan bahwa DNA.

Gambar 5.3 hal 96

"Eksperimen rHershey-Chase": bukti bahwa DNA adalah bahan genetik. Dalam bakteriofag T2.
Escherichia coli terinfeksi dengan fag berlabel 32p (abel-DNA), dan setelah diberi waktu untuk
infeksi, sel-sel tersebut diaduk dalam blender, yang mengikis oat fag. Mantel fag pada sel yang
terinfeksi kemudian dipisah dengan cara sentrifugasi. Radioaktivitas diukur dalam pelet sel baru
(sedimen) dan dalam suspensi mantel fag. Sebagian besar radioaktivitas ditemukan dalam sel.
Ketika percobaan yang sama dilakukan dengan menggunakan fag dengan protein berlabel 35S,
hasilnya sangat berbeda. Sebagian besar kegiatan radio ditemukan dalam suspensi mantel fag;
sangat sedikit yang memasuki sel inang. Karena reproduksi fag (baik sintesis DNA maupun
sintesis protein baru) terjadi di dalam sel yang terinfeksi, dan karena hanya fag DNA yang
memasuki sel inang, DNA, bukan protein, harus membawa informasi genetik. (Berdasarkan R.
Sagar dan F. J. Rvan, Cell Heredity, Wiley, New York, 1961.)

Virus memasuki sel inang, sedangkan mantel protein muncul di luar sel. Karena virus progeni
dibendung di dalam sel, hasil Hershey dan Chase menyatakan bahwa informasi genetik yang
mengarahkan tesis molekul DNA dan tepukan protein dari virus progeni harus ada dalam DNA
arental. Selain itu, partikel progeni sendiri mengandung scme dari 32P, tetapi tidak ada 35-an
fag induk.

Namun, percobaan Hershey-Chase tidak: memberikan bukti jelas bahwa fag T2 materi genetik
adalah DNA. Sejumlah besar 35S (dan kami protein) ditemukan disuntikkan ke DNA inang
dengan DNA. Dengan demikian, orang selalu dapat berdebat bahwa sebagian kecil dari protein
fag mengandung informasi asli. Namun, baru-baru ini, dimungkinkan untuk mengembangkan
kondisi di mana proteksi (sel dengan dinding dihilangkan) dari E. coli dapat terinfeksi dengan DNA
fage murni. Fag progenik infektif normal diproduksi dalam percobaan ini, yang disebut
eksperimen transfeksi, membuktikan bahwa bahan genetik virus bakteri tersebut adalah DNA.
RNA sebagai Bahan Genetik dalam Virus Kecil.

Karena semakin banyak virus diidentifikasi dan dipelajari. menjadi jelas bahwa banyak dari
mereka mengandung RNA dan protein, tetapi tidak ada DNA. Dalam semua kasus yang diteliti
hingga saat ini, jelas bahwa "virus RNA" ini menyimpan informasi genetik mereka dalam asam
nukleat daripada dalam protein seperti halnya semua organisme lain, meskipun dalam virus ini
asam nukleatnya adalah RNA. Salah satu percobaan pertama yang menetapkan RNA sebagai
bahan genetik dalam virus RNA adalah apa yang disebut percobaan rekonstitusi dari H.
Fraenkel-Conrat dan B. Singer, yang diterbitkan pada tahun 1957. Fraenkel-Conrat dan Singer
sederhana, tetapi definitif,