KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa karena atas
berkat dan rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan proposal usulan penelitian
yang berjudul “Aktivitas Antioksidan Senyawa Flavonoid pada Ekstrak Daun
Tenggulun (Protium Javanicum Burm. F)” dapat diselesaikan dengan baik.
Proposal Usulan penelitian ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh
gelar Sarjana Sains (S.Si) di Program Studi Kimia Fakultas MIPA Universitas
Udayana.
Penyusunan proposal usulan penelitian ini tidak lepas dari bantuan,
bimbingan, dan pengarahan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, dengan
kerendahan hati penulis mengucapkan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada :
1. Ibu Dra. Ni Made Puspawati, M.Phil.,Ph.D. selaku Pembimbing I dan Ibu
Dr. Dra. I.A. Raka Astiti Asih, M.Si. selaku Pembimbing II dan
Pembimbing Akademik, yang telah memberikan dorongan dan semangat
serta dengan penuh kesabaran memberikan bimbingan dan masukan.
2. Bapak Dr. Drs. I Made Sukadana, M.Si., selaku Koordinator Program Studi
Kimia Fakultas MIPA Universitas Udayana.
3. KPTA program studi kimia yang banyak membantu dalam proses tugas
akhir.
4. Seluruh staf Dosen di lingkungan Program Studi Kimia Fakultas MIPA
Universitas Udayana.
5. Orang tua serta semua teman-teman yang telah memberikan semangat dan
bantuan baik moril maupun fisik.
Penulis menyadari bahwa proposal usulan penelitian ini masih jauh dari
kesempurnaan. Oleh karena itu, penulis mohon maaf dan diharapkan saran serta
masukan yang membangun dari semua pihak sehingga penulis dapat membuat
laporan yang lebih baik untuk kedepannya.

Jimbaran, 25 Oktober 2019

Penulis

i
 DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN ..................................................................... ii
KATA PENGANTAR ................................................................................. iii
DAFTAR ISI ................................................................................................ iv
DAFTAR TABEL ........................................................................................ v
DAFTAR GAMBAR .................................................................................... vi
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... vii
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang ........................................................................................ 1
1.2 Rumusan Masalah ................................................................................... 5
1.3 Tujuan Penelitian .................................................................................... 5
1.4 Manfaat Penelitian ................................................................................... 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tumbuhan Tenggulun .............................................................................. 6
2.1.1 Taksonomi Tumbuhan Tenggulun ....................................................... 6
2.1.2 Ekologi dan Penyebaran ....................................................................... 7
2.1.3 Manfaat dan Kandungan kimia Tumbuhan Tenggulun ....................... 7
2.2 Flavonoid ................................................................................................ 8
2.3 Radikal Bebas dan Stres Oksidatif........................................................... 10
2.4 Antioksidan .............................................................................................. 12
2.4.1 Uji Aktivitas Antioksidan dengan DPPH ............................................. 14
2.5 Isolasi Flavonoid ..................................................................................... 16
2.5.1 Ekstraksi ............................................................................................... 16
2.5.2 Maserasi ............................................................................................... 17
2.5.3 Partisi ................................................................................................... 17
2.6 Pemisahan dan Pemurnian ...................................................................... 18
2.6.1 Kromatografi Lapis Tipis ...................................................................... 18
2.6.2 Kromatografi kolom .............................................................................. 19
2.7 Metode Identifikasi ................................................................................. 20
2.7.1 Uji Fitokimia ......................................................................................... 20
2.7.2 Spektrofotometri Inframerah ................................................................. 21
2.7.3 Spektrofotometri UV-Vis ...................................................................... 22
BAB III METODE PENELITIAN
3.1 Bahan dan Peralatan Penelitian ................................................................ 29
3.1.1 Bahan penelitian .................................................................................... 29
3.1.2 Alat penelitian ....................................................................................... 29
3.2 Tempat Penelitian..................................................................................... 29
3.3 Prosedur Penelitian................................................................................... 30
3.3.1 Penyiapan sampel ................................................................................. 30
3.3.2 Analisis kadar air sampel ..................................................................... 30
3.3.3 Ekstraksi sampel.................................................................................... 31
3.3.4 Pemisahan secaara partisi ekstrak kental metanol daun tenggulun ....... 31
3.3.5 Skrining fitokimia ................................................................................ 31
3.3.6 Penentuan Kandungan Total Flavonoid ............................................... 32
3.3.7 Penentuan Aktivitas Antiokasidan ........................................................ 34

ii
3.3.8 Isolasi Flavonoid ................................................................................. 36
3.3.9 Identifikasi ......................................................................................... 37
DAFTAR PUSTAKA................................................................................. 38

iii
 DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 2.1 Tingkat Kekuatan Antioksidan ...................................................... 16
Tabel 2.2 Frekuensi Gugus Pada Inframerah ................................................. 21
Tabel 2.3 Rentang serapan spektrum UV-Vis Flavonoid .............................. 23
Tabel 2.4 Penafsiran Spektrum NaOMe ........................................................ 25
Tabel 2.5 Penafsiran Spektrum NaOAc ......................................................... 26
Tabel 2.6 Penafsiran Spektrum NaOAc/H3BO3- ............................................ 27
Tabel 2.7 Penafsiran Spektrum AlCl3 dan AlCl3/HCl ................................... 28

iv
 DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1 Daun Tenggulun ......................................................................... 6
Gambar 2.2 Struktur kerangka dasar flavonoid ............................................. 9
Gambar 2.3 Mekanisme antioksidan molekul flavonoid ............................... 9
Gambar 2.4 Reaksi penagkapan radikal DPPH oleh antioksidan .................. 15
Gambar 2.5 Spektrum serapan UV Flavonoid ............................................... 23

v
 DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1 Skema ekstraksi dan partisi ........................................................ 43
Lampiran 2 Pemurnian dan identifikasi ......................................................... 54

vi
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Stress oksidatif adalah meningkatnya jumlah radikal bebas di dalam tubuh,

sehingga terjadi ketidakseimbangan antara radikal bebas dengan antioksidan

endogen. Kejadian inilah menyebabkan menurunnya kemampuan tubuh untuk

menetralisir radikal bebas sehingga dapat terjadi gangguan fungsi sel. Faktor

internal utama yang menimbulkan stress oksidatif salah satunya adalah oksidasi

fosforilasi akibat melakukan aktivitas fisik maksimal. Pembentukan radikal bebas

merupakan kondisi fisiologis yang memegang perananan penting dalam proses

terjadinya suatu penyakit degeneratif, seperti diabetes, kanker, dan jantung serta

proses penuaan (Winarsi, 2007).

Radikal bebas adalah atom atau molekul yang tidak stabil dan sangat reaktif

karena mengandung satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan pada orbital

terluarnya. Elektron tidak berpasangan tersebut menyebabkan radikal bebas sangat

reaktif yang kemudian akan menangkap atau mengambil elektron dari senyawa lain

seperti protein, lipid, karbohidrat, dan DNA untuk menetralkan diri. Reaksi ini akan

berlangsung secara terus-menerus dalam tubuh dan apabila tidak dinetralkan maka

akan menimbulkan berbagai macam penyakit seperti kanker, jantung, katarak,

penuaan dini serta penyakit degeneratif lainnya. Oleh karena itu tubuh memerlukan

suatu substansi penting berupa antioksidan yang mampu mengikat radikal bebas

sehingga tidak dapat menginduksi suatu penyakit (Kikuzaki et al., 2002).

Antioksidan adalah suatu senyawa yang dapat mencegah reaksi-reaksi

radikal berlanjut sehingga secara otomatis dapat mencegah kerusakan sel normal,

1
 8

protein, dan lemak yang pada akhirnya mencegah penyakit degeneratif (Arifin dan

Ibrahim, 2018). Antioksidan mempunyai peranan yang sangat penting bagi

kesehatan tubuh manusia karena fungsinya dapat menghambat dan menetralisir

terjadinya reaksi oksidasi yang melibatkan radikal-radikal bebas. Proses

penghambatan dari antioksidan biasanya terjadi pada saat reaksi-reaksi inisiasi atau

propagasi pada reaksi oksidasi lemak atau molekul lainnya di dalam tubuh dengan

cara menyerap dan menetralisir radikal bebas atau mendekomposisi peroksida

(Zheng and Wang, 2001).

Berdasarkan sumbernya, antioksidan dibagi menjadi dua yaitu antioksidan

dari dalam tubuh (endogen) dan luar tubuh (eksogen). Antioksidan endogen yaitu

antioksidan yang berupa enzim seperti: Superoksida Dismutase (SOD), katalase

(CAT), dan glutathione peroksidase (GPx) sedangkan antioksidan eksogen dapat

berasal dari alam (antioksidan alami) dan antioksidan sintetik. (Heo et al., 2005;

Vadlapudi et al., 2012).

Senyawa antioksidan alami umumnya merupakan kelompok senyawa fenol

salah satu diantaranya adalah flavonoid (Munhoz et al., 2014). Flavonoid adalah

suatu kelompok senyawa fenol terbesar ditemukan di alam (Harborne, 1987).

Flavonoid merupakan suatu senyawa polifenol atau aromatik alam dengan 15 atom

karbon pada inti dasarnya yang mampu menstabilkan radikal bebas yang ada di

dalam tubuh. Secara umum kerangka dasar flavonoid bersifat polar karena memiliki

gugus -OH yang membentuk ikatan hidrogen, namun beberapa flavonoid bebas

bersifat kurang polar (Tanaya et al., 2019). Flavonoid yang ditemukan oleh Fowler

et al (2009) menunjukkan aktivitas biokimia antioksidan, antivirus, antibakteri, dan

antikanker. Senyawa golongan flavonoid merupakan salah satu jenis senyawa yang

8
 9

memiliki aktivitas antioksidan. Flavonoid berpotensi sebagai antioksidan karena

mampu menyumbangkan ion H+ pada senyawa radikal bebas, salah satu tumbuhan

yang berpotensi sebagai antioksidan adalah tumbuhan tenggulun.

Tenggulun (Protium javanicum Burm. F.) merupakan salah satu tumbuhan

dari genus protium yang secara tradisional daunnya telah digunakan oleh

masyarakat di Bali sebagai obat sakit perut, obat batuk, dan obat diare (Kriwiyanti,

1997). Hasil uji pendahuluan dari ekstrak metanol daun tenggulun menggunakan

metode test Willstatter dihasilkan perubahan warna dari hijau muda menjadi kuning

dan menggunakan metode Bate-Smith dihasilkan perubahan warna menjadi merah

bata, yang menunjukkan adanya kandungan flavonoid dalam ekstak daun

tenggulun.

Penelitian yang dilakukan oleh Santos et al. (2012) menyatakan kandungan

resin pada Protium heptaphyllum March (Burseraceae) mengandung komponen

mayor berupa senyawa triterpen pentasiklik α, β-amirin yang secara farmakologi

digunakan sebagai antiinflamasi, antinociceptiv, antioksidan, antipruritik,

gastroprotektif, dan hepatoprotektif. Berdasarkan penelitian Tanamatayarat (2016)

Skrining fitokimia ekstrak etanol dari tumbuhan Protium serratum (Burseraceae)

mengandung flavonoid, tannin, alkaloid, triterpenoid, steroid, dan gula. Ekstrak

etanol daun tumbuhan Protium serratum (Burseraceae) memiliki aktivitas

antioksidan tertinggi dengan IC50 (4,34 ± 0,09) μg/mL, sementara pada kulit buah

memiliki aktivitas antioksidan (7,20 ± 0,35) μg/mL dan pada akar (5,35 ± 0,37)

μg/mL.

Penelitian yang dilakukan oleh Adfa et al. (2010) menyatakan bahwa dalam

fraksi etil asetat ekstrak daun tenggulun (Protium javanicum Burm. F.)

9
 10

mengandung flavonoid jenis kuersetin. Suirta (2016) melaporkan bahwa ekstrak

batang tenggulun mengandung flavonoid, terpenoid dan fenolik dan bersifat aktif

sebagai antioksidan dengan efektivitas daya redam terhadap radikal DPPH lebih

dari 80%.

Berdasarkan pendekatan kemotaksonomi, dan dari hasil uji pendahuluan

ekstrak metanol daun tenggulun, didapat hasil positif mengandung senyawa

flavononid. Sejauh ini belum ada penelitian yang mengkaji aktivitas antioksidan

senyawa flavonoid pada ekstrak daun tenggulun, maka penulis tertarik untuk

menguji aktivitas antioksidan ekstrak daun tenggulun secara in vitro dengan metode

DPPH dan mengidentifikasi golongan senyawa flavonoid yang terkandung dalam

ekstrak daun tenggulun.

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang yang telah dikemukakan, dapat dirumuskan

permasalahan :

1. Golongan senyawa flavonoid apakah yang terkandung pada ekstrak

daun tenggulun?

2. Berapakah nilai IC50 senyawa flavonoid yang terkandung dalam ekstrak

daun tenggulun terhadap radikal DPPH?.

1.3 Tujuan Penelitian

1. Mengetahui golongan senyawa flavonoid yang terkandung pada ekstrak

daun tenggulun.

2. Mengetahui aktivitas antioksidan senyawa flavonoid dalam ekstrak

daun tenggulun dalam meredam radikal DPPH.

10
 11

1.4 Manfaat Penelitian

Hasil penelitian ini diharapakan dapat memberikan informasi kepada

masyarakat mengenai aktivitas antioksidan yang terkandung didalam daun

tenggulun, dan dapat dijadikan alternatif sumber antioksidan.

11