Isoform dan Reseptor VEGF di Sistem Saraf

Ekspresi dan fungsi isoform VEGF

Pada awal perkembangan vertebrata, sel endotel mengembun menjadi pembuluh darah dalam proses
yang disebut vaskulogenesis (Risau dan Flamme, 1995). Proses ini terjadi pertama secara ekstraembrionik
untuk membuat pembuluh darah kantung kuning telur dan kemudian dalam embrio yang tepat untuk
menimbulkan aorta dorsal, vena kardinal, dan arteri lengkung faring. Diferensiasi sel endotel tergantung
pada VEGF, dan oleh karena itu vaskulogenesis gagal ketika ekspresi VEGFA dihapuskan oleh penargetan
gen pada tikus, menyebabkan kematian embrionik awal (Carmeliet et al., 1996; Ferrara et al., 1996).

Di sebagian besar jaringan embrionik, VEGF-A disintesis sebagai kumpulan tiga isoform utama sebagai
konsekuensi dari penyambungan alternatif; pada manusia, mereka terdiri dari 121, 165 atau 189 asam
amino dan karena itu disebut VEGF121, VEGF165 dan VEGF189. Isoform tikus yang sesuai disebut
VEGF120, VEGF164 dan VEGF188, karena semuanya adalah satu asam amino yang lebih pendek (ditinjau
oleh Ruhrberg, 2003). Ekspresi salah satu isoform VEGFA menyelamatkan cacat pembuluh darah dan
mematikan sistem gugur Vegfa penuh pada tikus (Carmeliet et al., 1999; Ruhrberg et al., 2002; Stalmans
et al., 2002). Ini dijelaskan oleh kemampuan masing-masing isoform untuk menginduksi diferensiasi dan
proliferasi sel endotel (mis. Ruhrberg et al., 2002). Namun, rasio relatif dari isoform VEGF-A yang berbeda
bervariasi dalam jaringan yang berbeda (Ng et al., 2001) karena mereka memiliki peran spesifik selama
tahap perkembangan pembuluh darah selanjutnya, yang berhubungan dengan afinitas diferensial mereka
untuk matriks ekstraseluler dan berbagai VEGF -A reseptor. Dengan demikian, uji biokimiawi
mengungkapkan bahwa isoform VEGF189 manusia dengan dua domain pengikatan heparin
dipertahankan dalam matriks ekstraseluler setelah sekresi, sedangkan VEGF165, yang hanya mengandung
satu domain pengikat heparin, sebagian terikat-matriks dan sebagian dapat difusible; VEGF121 tidak
memiliki domain pengikat heparin dan merupakan isoform yang paling difus (Park et al., 1993).
Difusibilitas isoform dianggap mencerminkan afinitas diferensial mereka untuk heparan sulfat
proteoglikan (HSPGs) dalam matriks ekstraseluler, meskipun bukti genetik atau fisiologis lainnya bahwa
HSPG penting untuk VEGFA yang disebabkan oleh peristiwa pensinyalan yang diinduksi isoform masih
kurang.

Semua isoform VEGF-A berikatan dengan reseptor tirosin kinase transmembran VEGFR1 (FLT1) dan
VEGFR2 (FLK1 atau KDR), sedangkan dua reseptor non-tirosin kinase dari keluarga neuropilin, NRP1 dan
NRP2, lebih disukai mengikat VEG164 (Gbr. 1B) ( Ulasan oleh Ruhrberg, 2003). Satu studi terbaru
melaporkan bahwa VEGF121 juga mengikat NRP1 dalam sel endotel (Pan et al., 2007). Namun, signifikansi
pengamatan ini untuk pertumbuhan pembuluh belum ditetapkan secara in vivo dan tidak setuju dengan
kesamaan cacat pola neuronal pada tikus yang kekurangan NRP1 atau VEGF164 tetapi mengekspresikan
VEGF120 (lihat di bawah).

Reseptor VEGF di Neuron

Reseptor VEGF-A dalam neuron VEGFR2 telah terlibat sebagai reseptor VEGF-A untuk pensinyalan
kelangsungan hidup pada neuron dewasa secara in vitro (mis. Ogunshola et al., 2002; Oosthuyse et al.,
2001; Sondell et al., 2000). Dalam kesepakatan, ekspresi paksa VEGFR2 dalam motoneuron meningkatkan
kelangsungan hidup mereka dalam model tikus degenerasi motoneuron seperti ALS (Storkebaum et al.,
2005). Namun, menghilangkan VEGFR2 pada progenitor neuron atau pada keturunannya tidak jelas
merusak morfogenesis otak atau viabilitas pada tikus, menunjukkan bahwa VEGFR2 tidak memiliki peran
umum dalam kelangsungan hidup neuron (Haigh et al., 2003). Sebagai gantinya, VEGFR2 dapat
menyampaikan sinyal VEGF-A dalam subset neuron tertentu, misalnya untuk mengontrol pathfinding
akson melintasi garis tengah sumsum tulang belakang (lihat di bawah). Selain itu, VEGFR2 dapat bertindak
dalam kompleks dengan NRP1 dan semaforin reseptor plexin D1 untuk menyampaikan sinyal semaphorin
dalam panduan akson (Bellon et al., 2010).

Alternatif VEGF-A reseptor tirosin kinase VEGFR1 diekspresikan dalam beberapa jenis neuron dewasa dan
berkembang (mis. Islamov et al., 2004; Yang et al., 2003). Persyaratan genetik untuk VEGFR1 sebagai
reseptor VEGF-A khusus dalam garis keturunan saraf belum diperiksa sejauh ini, tetapi kita tahu bahwa
tikus yang tidak memiliki aktivitas tirosin kinase VEGFR1, mirip dengan tikus yang tidak memiliki saraf
VEGFR2, menjalani setidaknya morfogenesis otak yang normal. (Hiratsuka et al., 1998). Namun, sebuah
studi baru-baru ini menyarankan bahwa VEGFR1 mungkin mengatur neurogenesis secara negatif (lihat
Daftar Istilah, Kotak 1) dengan mengatur kadar VEGF-A (lihat di bawah) (Wittko et al., 2009). Reseptor
VEGF-A non-tirosin kinase NRP1 diregulasi pada neuron dan endotelium setelah iskemia SSP (Zhang et al.,
2001), tetapi studi knockout tikus atau eksperimen fisiologis yang sama belum menentukan apakah
neuropilin terutama bertindak sebagai reseptor VEGF-A di situasi dewasa ini, atau apakah mereka
berfungsi sebagai reseptor untuk molekul panduan akson dari keluarga semaphorin kelas 3 (Raper, 2000).
Sebaliknya, beberapa penelitian embrionik telah memberikan bukti konklusif bahwa NRP1 memang
menyampaikan sinyal VEGF-A dalam subpopulasi neuron yang berkembang, termasuk neuron
branchiomotor (FBM) wajah, sel-sel ganglion retina (RGC) dan neuron hormon pelepas gonadotropin
(GnRH).

Secara keseluruhan, tampak bahwa VEGFR1, VEGFR2 dan NRP1 semuanya diekspresikan dalam subtipe
berbeda dari neuron dewasa dan perkembangan, tetapi hanya VEGFR2 dan NRP1 yang sejauh ini telah
terbukti secara otonom mempengaruhi perilaku neuron yang terdiferensiasi selama embriogenesis. Peran
potensial untuk reseptor VEGF dalam generasi neuron dibahas pada bagian berikut.

Peran VEGF pada Nyeri Kronik

VEGF-A secara luas diakui untuk mengatur fungsi dan integritas pembuluh darah. Namun, perubahan
dalam ekspresi VEGF-A dan profil pensinyalan sangat terkait dengan sejumlah patologi terkait
angiogenesis seperti diabetes, artritis dan kanker, yang semuanya terkait dengan perkembangan nyeri
kronis. VEGF-A bertindak terhadap neuron sensorik dengan menginduksi pertumbuhan neuron sensorik
dan kelangsungan hidupnya [2, 4, 5], dan dalam penelitian awal tikus dapat disoroti peran VEGF-A dalam
nyeri inflamasi. Keluarga VEGF-A terdiri dari sejumlah subtipe isoform yang berbeda, dengan splicing
alternatif exon 8 yang memunculkan VEGF-Axxxa (pemilihan lokasi sambatan proksimal) dan VEGF-Axxxb
(pemilihan lokasi selektif distal 8b ekson) [6]. Konten ekson yang berbeda memberikan masing-masing
isoform sinyal yang berbeda dan atribut fungsional yang unik dibandingkan dengan isoform sejenis [2, 4].
Oleh karena itu memahami keseimbangan isoform VEGF-A pro dan anti-nosiseptif ini dan kontrol
pemilihan lokasi ekson 8 splice sangat penting dalam pengembangan efek analgesik.

Famili VEGF-A mengekspresikan sinyal melalui reseptor tirosin kinase VEGF R1 dan VEGF R2 di samping
reseptor neuropilin. VEGFR2 diekspresikan pada serabut saraf A bermielin dan serabut saraf sensorik C
tanpa mielin dan diaktifkan dalam model tikus dari nyeri neuropatik. Aktivitas tersebut dikaitkan dengan
peningkatan VEGFA xxxa dan berkurangnya ekspresi VEGF-Axxxb di sistem saraf perifer (DRG, kulit) [7]
dan sistem saraf pusat (saraf tulang belakang) [3]. Administrasi VEGFxxxa mensensitisasi serabut saraf C
nosiseptor sensitif secara mekanis yang mengarah pada peningkatan transmisi sinyal rasa sakit dan
pengembangan alodinia mekanik [7]. Hal ini dimediasi oleh potensi reseptor transien vaniloid 1 (TRPV1)
dan aktivitas saluran TRPA1. VEGF-A165a mempotensiasi capsaicin (agonis TRPV1) menginduksi respons
neuron sensorik DRG dan fosforilasi TRPV1. Akibatnya, hiperalgesia mekanik dimediasi VEGF-A165a
sepenuhnya dihapuskan setelah ablasi pensinyalan TRPV1 baik melalui tikus KO TRPV1 atau
penghambatan farmakologis [7]. Penting untuk dicatat bahwa VEGF-A165b anti-angiogenik menekan
TRPV1 dan TRPA1 yang dimediasi oleh aktivasi neuron sensorik DRG, sensitisasi serabut saraf C dan nyeri
neuropatik [7], independen dari aktivitas yang diinduksi VEGF-A165a, oleh karena itu bersifat anti-
nosiseptif.

Neuron sensorik memiliki kemampuan bawaan untuk beradaptasi dengan stres di mana selama penyakit
seperti diabetes atau trauma saraf perifer, sensitisasi sentral diinduksi di dalam sumsum tulang belakang.
Perawatan intratekal untuk menargetkan sensitisasi sentral sumsum tulang belakang dengan VEGF-A165b
mengarah pada peningkatan ambang batas penarikan pada hewan yang naif dan mengurangi nyeri
neuropatik [3]. Penyambungan alternatif dengan memilih konten eksonal menghasilkan keluarga protein
yang luas yang memungkinkan perluasan fungsi fisiologis dari gen tunggal. Kami telah mengidentifikasi
bahwa ekspresi VEGF-Axxxa (target exon8a) bergantung pada serine arginine protein kinase 1 (SRPK1) -
serine arginine splice factor (SRSF1) penyambungan alternatif dalam sejumlah patologi serta keadaan
nyeri kronis [3, 7]. Penghambatan SRPK1 mencegah ekspresi VEGF-Axxxa dan akibatnya mengarah pada
peningkatan proporsi isoform anti-nosiseptif VEGF-Axxxb, sehingga nyeri kronis terhambat [3, 7].
Mengidentifikasi peristiwa penyambungan alternatif utama memungkinkan penyempurnaan desain agen
penghilang rasa sakit dengan mencegah pembentukan mediator pro-nosiseptif seperti VEGF-Axxxa
meskipun mempertahankan isoform kunci penting lainnya (VEGF-Axxxb).

Peran VEGF dalam Nyeri Neuropatik

Reseptor VEGF-A di neuron

Peran VEGF-A dalam neurogenesis

Peran VEGF-A dalam neuronal patterning

Peran VEGF-A dalam pemandu akson

Peran VEGF-A dalam migrasi neuron

Peran VEGF-A dalam dendritogenesis dan fungsi neuron

Peran VEGF-B dalam pemanjangan dan percabangan neurit

Peran VEGF-B dalam stimulasi pertumbuhan neuron pada saraf yang cedera

Peran VEGF dalam meningkatkan jumlah akson termielin

Peran VEGF dalam migrasi sel Schwann