*Corresponding author:Jurusan Kimia FMIPA UNSRAT, Jl. Kampus Unsrat, Manado, Indonesia 95115; Email address:
msanparis@gmail.com
Published by FMIPA UNSRAT (2013)
120 JURNAL MIPA UNSRAT ONLINE 2 (2) 119-123
ditambahkan pereaksi Lieberman Burchard. Adanya glukosidase diinkubasi selama 5 menit dengan
triterpenoid ditunjukkan dengan terjadinya warna ekstrak kulit batang matoa dengan konsentrasi
merah jingga atau ungu, sedangkan adanya steroid berbeda (5, 12.5, 25 dan 50 ppm) dan buffer fosfat
ditunjukkan dengan adanya warna biru. (0.1 M) pH 7.2, kemudian ditambahkan sukrosa
(c) Analisis Senyawa Flavanoid (90 mM) sebagai substrat dan diinkubasi pada suhu
37oC selama n menit (waktu inkubasi efektif), dan
Sebanyak 0,5 g ekstrak dipanaskan selama
diencerkan dengan buffer fosfat pH 7,2 sampai
lima menit di dalam tabung reaksi. Selanjutnya
tanda batas 50 mL. Campuran reaksi kemudian
ditambah beberapa tetes HCl pekat. Kemudian
ditentukan kadar glukosa yang terbentuk dengan
ditambahkan 0,2 g bubuk Mg. Hasil positif
metode gula pereduksi Lane–Eynon. Dibuat juga
ditunjukkan dengan timbulnya warna merah tua
sistem reaksi kontrol yaitu tanpa penambahan
dalam waktu 3 menit.
ekstrak. Persentase penghambatan α-glukosidase
(d) Analisis Senyawa Saponin dihitung dengan rumus:
Sebanyak 2 g sampel tumbuhan yang telah [ ] [ ]
dihaluskan dimasukkan ke dalam tabung reaksi, % Inhibisi = [ ]
ditambah air suling sehingga seluruh cuplikan Keterangan:
terendam, dididihkan selama 2-3 menit, dan [GK] = Kadar gula pereduksi kontrol (enzim + substrat)
selanjutnya didinginkan, kemudian dikocok kuat- [GE] = Kadar gula pereduksi perlakuan (enzim + substrat +
kuat. Hasil positif ditunjukkan dengan terbentuknya ekstrak).
buih yang stabil.
(e) Analisis Senyawa Tannin 3. Hasil dan Pembahasan
Sebanyak 0,5 g ekstrak ditambah metanol 5 3.1. Ekstraksi Kulit Batang Matoa
mL sampai sampel terendam semuanya dan Rendemen ekstrak kulit batang matoa yang
disaring. Kemudian ditambahkan 2 tetes NaCl 10% diperoleh adalah sebanyak 33% atau sama dengan
dan larutan FeCl3 1%. Hasil positif ditunjukkan 16,5 g ekstrak dalam 50 g serbuk batang kulit
dengan terbentuknya warna biru kehitaman atau matoa. Hasil ekstrak etanol diperoleh berupa
hijau menunjukkan adanya tanin terkondensasi. granul berwarna kuning. Ekstrak etanol ini
2.3.4. Isolasi Enzim α-Glukosidase selanjutnya dianalisis fitokimia dan diuji aktivitas
Prosedur isolasi α-glukosidase dilakukan inhibitor α-glukosidase.
menurut prosedur standar (Katekhaye et al., 2013). 3.2. Analisis Fitokimia
Tikus wistar jantan (>180 g) dipersiapkan dengan
puasa selama 24 jam kemudian dianastesi, dibedah Dari hasil analisis fitokimia secara kualitatif
dan diambil bagian usus. Usus tersebut dibersihkan ditemukan terdapat kandungan metabolit sekunder
dengan larutan garam dan lapisan epitel (jaringan pada ekstrak etanol kulit batang matoa. Hasil
mukosa) dikumpulkan dengan menggores analisis fitokimia menunjukan bahwa ekstrak etanol
permukaan luminal secara tegas dengan spatula. kulit batang matoa mengandung senyawa flavonoid,
Jaringan mukosa yang telah digores dihomogenisasi tanin, terpenoid dan saponin yang secara rinci
dalam larutan buffer fosfat pH 7,4 yang diringkas dalam Tabel 1.
mengandung 1% Triton x 100, dan kemudian
disentrifugasi pada 6000 rpm selama 25 menit. Tabel 1. Hasil analisis fitokimia ekstrak kulit
Fraksi supernatan ditambahkan butanol (1:1) dan batang matoa
disentrifugasi pada 6000 rpm selama 25 menit. Analisis Hasil Tes
Lapisan berair yang terbentuk adalah enzim
terkonsentrasi α-enzim glukosidase yang akan Alkaloid -
digunakan dalam penelitian. Isolat kasar α-
Steroid -
glukosidase yang diperoleh kemudian ditentukan
volume dan waktu inkubasi efektif yang dibuat Saponin +
dengan sistem reaksi yang dikembangkan yaitu n Triterpenoid +
mL (0.5, 1, dan 2 mL) isolat kasar α-glukosidase
Tanin +
diinkubasi dengan 4 mL sukrosa 90 mM selama n
menit (30, 60 dan 120 menit) kemudian diencerkan Flavonoid +
pada volume akhir 50 mL dan ditentukan kadar Keterangan : (-) : tidak terdeteksi
glukosa yang terbentuk (metode Lane-Eynon). (+) : terdeteksi
Penentuan ini dikembangkan dengan mengacu
pada enzim invertase sintetik yang telah diketahui Tabel 1 menunjukkan bahwa ektrak etanol kulit
kemampuan hidrolisisnya. batang matoa positif mengandung flavonoid, tanin,
terpenoid dan saponin serta negatif untuk alkaloid
2.3.5. Pengujian Aktivitas Inhibitor α-Glukosidase dan steroid sehingga dari hasil tersebut dapat
Aktivitas inhibitor α-glukosidase ditentukan ditarik suatu hipotesis bahwa bukan senyawa
berdasarkan Matsui et al., (1996) yang dimodifikasi. alkaloid dan steroid yang berperan sebagai inhibitor.
Sebanyak n mL (volume efektif) isolat kasar α- Hal yang menarik perhatian dalam analisis ini
122 JURNAL MIPA UNSRAT ONLINE 2 (2) 119-123
adalah kenampakkan warna merah tua pada dapat dibaca, hal ini diduga karena volume α-
analisis flavonoid dengan intensitas yang sangat glukosidase tidak mencukupi untuk menghidrolisis
kuat. Ini adalah identik untuk senyawa flavonol sukrosa menjadi glukosa. Berbeda dengan volume
sesuai dengan teori Farnsworth (1966). α-glukosidase 2 mL yang diinkubasi 60 menit
Kenampakan warna ini pada dasarnya memberikan kadar glukosa sebanyak 1,624 mg/mL
mengisyaratkan senyawa yang mempunyai inti α- yang artinya 5,310 % dari sukrosa dihidrolisis
benzopyron dan warna merah tua tersebut menjadi glukosa dan fruktosa. Ketika waktu
disebabkan oleh terbentuknya garam flavilium dari inkubasi untuk volume 2 mL ditingkatkan menjadi
reduksi HCl dan Mg (Achmad, 1986).. 120 menit peningkatan terhadap total gula
pereduksi menjadi 1,662 mg/mL atau 5,433 % dari
3.3. Isolasi Enzim α-glukosidase
sukrosa terhidrolisis menjadi glukosa dan fruktosa.
Sumber enzim yang digunakan dalam Dari data ini kemudian disimpulkan untuk
penelitian ini adalah isolat kasar α-glukosidase dari menggunakan volume α-glukosidase sebanyak 2 mL
jaringan mukosa usus halus tikus jantan wistar. dengan waktu inkubasi 120 menit sebagai volume
Adapun isolat kasar α-glukosidase diisolasi menurut dan waktu inkubasi efektif untuk sistem reaksi yang
prosedur Katekhaye et al. (2013) yang dimodifikasi.
dikembangkan.
Isolat kasar α-glukosidase yang diperoleh adalah
cairan bening kekuningan sebanyak 20,5 mL yang 3.4. Pengujian aktivitas inhibitor α-glukosidase
kemudian akan digunakan dalam pengujian Analisis efek penghambatan enzim α-
inhibitornya. Proses isolasi ini dilakukan pada suhu glukosidase oleh ekstrak etanol kulit batang matoa
40C. dilakukan menggunakan ekstrak dengan
Hasil isolat kasar enzim yang diperoleh tidak konsentrasi 50, 25, 12,5 dan 5 ppm. Hasil
diketahui total protein yang terkandung, untuk itu penelitian menunjukkan ekstrak etanol kulit batang
dalam mengembangkan assay dalam penelitian ini matoa mampu menghambat aktivitas enzim α-
diperlukan suatu acuan untuk menentukan volume glukosidase. Persentase inhibisi masing-masing
ideal yang sesuai untuk sistem reaksi ini yakni ekstrak berbeda pada tiap konsentrasinya. inhibisi
waktu inkubasi dan volume enzim yang diperlukan. berturut-turut untuk konsentrasi 5 ppm dan 12,5
Pengembangan assay dalam sitem reaksi ini ppm adalah sebesar 18,58% dan 25,01%.
diadaptasi dari metode yang dikembangkan Perbandingan persentase inhibisi ekstrak kulit
Marsilawati (2011) dan mengacu pada Katekhaye et batang matoa pada masing-masing konsentrasi
al. (2013). Hasil penentuan volume efektif ini ditunjukkan dalam Tabel 3.
dijelaskan dalam Tabel 2.
Tabel 3. Hasil Pengujian Persentase Inhibisi α-
Tabel 2. Hasil Penentuan Volume dan Waktu Glukosidase
Inkubasi Efektif Konsentrasi
Waktu Total Gula Inhibisi
Volume Ekstrak Keterangan
Inkubasi Pereduksi (%)
(mL) (ppm)
(menit) (mg/mL)
5 19,56 Terhambat
0.5 (Invertase) 30 2,912
12,5 24,79 Terhambat
0.5 30 Tidak terbaca
25 100 Terhambat
1 30 Tidak terbaca
50 100 Terhambat
2 60 1,624
Tabel 3 menunjukkan bahwa persentase
2 120 1,662 inhibisi ekstrak etanol kulit batang matoa terhadap
Dari Tabel 2, dapat ditarik suatu penjelasan α-glukosidase meningkat sesuai peningkatan
bahwa semakin banyak volume α-glukosidase yang konsentrasi. Persentase inhibisi tertinggi ditemui
digunakan maka semakin besar daya hidrolisis pada ekstrak dengan konsentrasi 25 ppm dan 50
enzim pada volume substrat tetap. Begitu pula ppm. Peningkatan persentase inhibisi terjadi karena
dengan waktu inkubasi, semakin lama waktu pada konsentrasi tinggi terdapat lebih banyak zat
inkubasi pada rentang (30 – 120 menit) maka terlarut komponen aktif metabolit sekunder yang
semakin besar daya hidrolisis pada volume enzim terkandung dalam ekstrak kulit batang matoa yang
dan substrat tetap. Daya hidrolisis enzim dapat memiliki kemampuan menghambat aktivitas α-
dilihat dari pembentukan gula pereduksi. Kadar glukosidase. Persentase inhibisi ekstrak 12,5 ppm
glukosa yang dihidrolisis invertase adalah 2,912 lebih besar dibandingkan ekstrak 5 ppm artinya zat
mg/mL artinya hampir semua sukrosa terurai terlarut yang memiliki aktivitas penghambatan α-
menjadi gula pereduksi glukosa dan fruktosa dan glukosidase lebih banyak pada konsentrasi 12,5
dapat dikatakan bahwa sistem reaksi yang ppm dibandingkan dengan konsentrasi lainnya.
dikembangkan ini dapat digunakan. Untuk volume Pada konsentrasi ekstrak 25 ppm dan 50 ppm total
α-glukosidase 0.5 mL dan 1 mL dalam analisis gula gula yang terbentuk tidak dapat ditentukan dengan
pereduksi Lane-Eynon kadar gula pereduksi tidak metode analisis Lane-Eynion sehingga persentase
JURNAL MIPA UNSRAT ONLINE 2 (2) 119-123 123
inhibisi terhadap keduanya tidak dapat dihitung dan Dennis, L. K., E., Braunlwalnd, S., Hauser, D., Longo, J.
diasumsikan bahwa aktivitas enzim diinhibisi L., Jameson dan A. S., Fauci. 2005. Harrison’s
sempurna oleh ekstrak pada konsentrasi 25 ppm Principles of Internal Medicine. Mc Graw Hill, New
dan 50 ppm. York.
Analisis fitokimia menunjukkan bahwa Farnsworth, N. R. 1966. Biological and Phitochemical
ekstrak etanol kulit batang matoa mengandung Screening of Plant. J. Pharm. Sci. 55: 255-276.
senyawa flavonoid yang ditandai dengan tingginya Harborne, J. B. 1987. Metode Fitokimia: Penuntun
intensitas warna merah tua pada uji flavonoid. Dari Cara Modern Menganalisis Tumbuhan.
hasil analisis tersebut diperkirakan komponen aktif Padmawinata, I Sudiro, penerjemah. Bandung:
utama yang menghambat aktivitas α-glukosidase Institut Teknologi Bandung.
adalah flavonoid. Hal ini sejalan dengan Thu Phan et
Hartika, R. 2009. Aktivitas Inhibisi Α-Glukosidase
al. (2013) yang melaporkan bahwa komponen
Ekstrak Senyawa Golongan Flavonoid Buah
flavonoid dari Epimedium brevicornum memberikan
Mahkota Dewa. [skripsi]. Bogor: Departemen
penghambatan kuat dan spesifik terhadap α-
Kimia Fakultas Matematika Dan Ilmu
glukosidase. Analisis elusidasi struktur yang
Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor.
dilaporkan oleh Thu Phan et al. (2013) bahwa
baohuoside I adalah satu-satunya senyawa yang Ho, E. dan Bray, T. M. 1999. Antioxidants, NFKB
menghambat α-glukosidase. Berdasarkan analisis activation, and diabetogenesis. Proceeding of
kualitatif menunjukkan bahwa ekstrak etanol kulit The Society for Experimental Biology and
batang matoa positif terhadap uji Wilstater yang Medicine 222: 205-213.
artinya mengandung flavonoid golongan flavonol. Kim, S.D., dan H.J. Nho. 2004. Isolation And
Baohuoside I adalah flavonoid golongan flavonol, Characterization of α-glucosidase Inhibitor from
dan sesuai dengan Hartika (2009) yang The Fungus Ganoderma Lucidum. Journal of
mengungkapkan bahwa flavonol memberikan daya Microbiology 42: 223 - 227.
inhibisi terbesar dari beberapa isolat flavonoid Katekhaye, S.D., dan D.M. Nagmoti. α-glucosidase
mahkota dewa. and α-amylase InhibitoryActivities of
Mekanisme inhibisi terhadap enzim pada Pithecellobium dulce Bark and Leaves.
dasarnya dibagi menjadi dua yaitu inhibitor yang Phytopharmacology 4(1): 123 – 130.
bekerja secara tidak dapat balik (irreversible) dan Lau, Harper, W., A. Hanna, V. Woo, K.G. Dawson, J.
dapat balik (reversible) (Lehninger 1994). Dalam François, L. MacCallum, M. Clement, S. Simpson,
inhibisi terhadap enzim α-glukosidase oleh ekstrak dan M. Hopkins. 2008. Pharmacologic
etanol kulit batang matoa belum diketahui melalui Management of Type 2 Diabetes. Canadian
mekanisme yang mana. Sesuai analisis fitokimia Journal of Diabetes 32: 158–162.
pada ekstrak yang memberikan konstituen utama
flavonoid, maka dapat diperkirakan mekanisme Lehninger, A. L. 1994. Dasar-Dasar Biokimia,
inhibisi untuk ekstrak kulit batang matoa mengikuti Thenawidjaja, penerjemah. Jakarta: Erlangga.
mekanisme inhibisi flavonoid. Ho dan Bray (1999) Matsui, T., C. Yoshimoto, K. Osajima, T. Oki, dan Y.
mengungkapkan mekanisme inhibisi dari flavonoid Osajima, Y. 1996. In Vitro Survey of α-
terhadap enzim α-glukosidase adalah melalui ikatan glucosidase Inhibitory Food Components.
hidroksilasi dan substitusi pada cincin β. Prinsip Bioscience, Biotechnology and Biochemistry 60:
penghambatan ini yaitu menghasilkan penundaan 2019–2022.
hidrolisis karbohidrat dan absorbsi glukosa serta Marsilawati, I. D. A. 2011. Penentuan Kandungan
menghambat metabolisme sukrosa menjadi Sukrosa pada Gula Aren dengan Metode
glukosa. Enzimatik. [Skripsi]. Universitas Sam Ratulangi,
Manado.
4. Kesimpulan Pasaribu, G. 2010. Inhibition Activity of Alpha
Ekstrak etanol kulit batang matoa mampu Glucosidase from Several Stem Bark of Raru.
menginhibisi α-glukosidase dan dapat dimanfaatkan Jurnal Penelitian Hasil Hutan 29(1): 10–19.
sebagai agen antihiperglikemik. inhibisi pada Pujiyanto, S dan R.S. Ferniah. 2010. Aktifitas
konsentrasi 5; 12,5; 25 dan 50 ppm berturut-turut Inhibitor Alpha-Glukosidase Bakteri Endofit PR-3
adalah 19,56; 24,79; 100%, dan 100 %. yang Diisolasi dari Tanaman Pare (Momordica
charantia). Bioma. 12(1): 1–5..
Daftar Pustaka Thu Phan, M. A., Jin, W., Jingyi T., Yan Z. L., dan Ken
Achmad, S.A. 1986. Kimia Organik Bahan Alam. N. 2013. Evaluation of α-glucosidase inhibition
Karnunika, Jakarta. potential of some flavonoids from Epimedium
brevicornum. LWT-Food Science and Technology
Badan Pengawas Obat dan Makanan. 2009.
53: 492-498.
Diabetes mellitus. Informasi Produk Terapetik.
19(1): 1-12.