Cara Kerja

Tahap 1. Cell lysis

1. Memasukkan 2 ml whole human blood kedalam centrifuge tube 15 ml. Apabila volume
sampel kurang dari 2 ml, dapat ditambahkan PBS dengan volume yang sesuai
2. Menambahkan 200 µl Proteinase K kedalam tabung dan guncang secara perlahan
3. Inkubasi campuran pada suhu 60oC selama 15 menit. Selama inkubasi, guncang tabung
setiap 3 menit
4. Menambahkan 2 ml GD Buffer kedalam tabung dan diguncang secara perlahan
5. Inkubasi campuran pada water bath bersuhu 70oC selama 10 menit untuk memastikan
sampel lysate jernih. Selama inkubasi, digoyangkan tabung setiap 3-5 menit
6. Pada masa Inkubasi, Elution Buffer (1 ml per sampel) dipanaskan pada suhu 70oC (untuk
langkah ke-4, DNA Elution)
Tahap 2. DNA Binding
1. Menambahkan 2 ml Etanol Absolut pada sampel lisat dan vortex selama 10 detik. Jika
muncul presipitasi, maka pecahkan dengan pipetting
2. Menempatkan GD Midi Column pada centrifuge tube 50 ml
3. Memindahkan semua campuran kedalam GD Midi Column
4. Lakukan sentrifugasi pada 3000 x g selama 5 menit
Tahap 3. Wash
1. Menambahkan 2 ml W1 Buffer kedalam GD Midi Column
2. Melakukan sentrifugasi pada 3000 x g selama 3 menit
3. Membuang cairan pada dasar centrifuge tube dan diletakkan GD Midi Column kembali
pada centrifuge tube 50 ml
4. Menambahkan 4 ml Wash Buffer (ditambah etanol) kedalam GD Midi Column
5. Melakukan sentrifugasi pada 3000 x g selama 3 menit untuk membilasnya kembali
6. Membuang kembali cairan pada dasar centrifuge tube dan meletakkan GD Midi Column
kembali pada centrifuge tube 50 ml
7. Melakukan sentrifugasi pada 3000 x g selama 10 menit untuk mengeringkan matriks
Column
Tahap 4. DNA Elution
1. Memindahkan GD Midi Column yang telah dikeringkan kedalam centrifuge tube 50 ml
bersih
2. Menambahkan 500 µl Elution Buffer yang telah dipanaskan atau TE kedalam matriks
Column
3. Melakukan inkubasi pada suhu 60oC selama 3 menit
4. Melakukan sentrifugasi pada 3000 x g selama 2 menit pada suhu ruangan untuk
mengelusikan DNA murni
Tahap 5. Spektrofotometri
1. Mengambil 20 µl DNA murni dari 250 µl DNA murni hasil elusi, dengan menggunakan
mikropipet kemudian dimasukkan kedalam kuvet
2. Memasukkan kuvet kedalam alat spektrofotometri
3. Menjalankan alat spektrofotometri, kemudian mencatat panjang gelombang dan
absorbansi DNA