merepresi Autoimunitas di

Myasthenia Gravis via Langsung Target IL-37

Folikel Th dan Sel B

saat ini sebagai Chen, Lizhen

dari 29 Februari 2020. Informasi ini Meiying Li, Hui Li, Jie Gong, Zhuo Liu, Liwen Zhu, Zhengjuan Lu, Huiping
Tao Wang, Mei-Ling Jiang, Runjing Cao, Fan, Qun Xue, Jianquan Shi,
Hailan Meng, Chenhui Wang, Yun Xu dan Cun-Jin Zhang Jingping Shi,

Downloaded from
J Immunol dipublikasikan secara online 28 Februari 2020
http://www.jimmunol.org/content/early/2020/02/27/jimmun
ol.1901176

http://www.jimmunol.org/
MengapaJI ? Kirimkan online.

• Cepat Ulasan! 30 hari* dari pengajuan ke keputusan awal

• Tidak ada Triage!Setiap pengajuan Ulasan dengan berlatih para ilmuwan

• Cepat Publikasi! 4 minggu dari penerimaan publikasi

at UCL Library Services on February 29, 2020

* rata-rata

abonemen http://jimmunol.org/subscription
Informasi tentang berlangganan The Journal of Immunology adalah online di:

Kirim permintaan izin hak cipta di:

perizinan http://www.aai.org/About/Publications/JI/copyright.html

Alerts email http://jimmunol.org/alerts

Menerima email gratis-peringatan ketika artikel baru mengutip artikel ini. Mendaftar di:

The Journal of Immunology diterbitkan dua kali setiap bulan dengan

The American Association of Immunologists, Inc.,

Association of 1451 Rockville Pike, Suite 650, Rockville, MD 20852
Inc All rights reserved. Hak cipta © 2020 oleh The American
Cetak ISSN: 0022-1767 online ISSN: 1550-6606. Immunologists,
Diterbitkan 28 Februari 2020, doi: 10,4049 / jimmunol.1901176
The Journal of Immunology

IL-37 merepresi Autoimunitas di Myasthenia Gravis melalui Langsung Target

folikuler Th dan Sel B

Zhuo Liu, *, †, ‡, x, {, 1 Liwen Zhu, *, ‖, 1 Zhengjuan Lu, * Huiping Chen, * Lizhen Fan, * Qun Xue, # Jianquan Shi, ** Meiying
Li, †† Hui Li, ‡‡ Jie Gong, xx Jingping Shi, {{Tao Wang, ‖‖ Mei-Ling Jiang, * Runjing Cao, * Hailan Meng, *, †, ‡, x, { Chenhui
Wang, ##, *** Yun Xu, *, †, ‡, x, { dan Cun-Jin Zhang *, †, ‡, x, {

IL-37 adalah fi ed faktor kekebalan tubuh-penekan baru identifikasi; Namun, fungsi, sumber seluler, dan mekanisme IL-37 dalam kekebalan humoral andMyasthenia gravis
(MG) masih belum jelas. Dalam studi ini, kami menemukan IL-37 secara substansial menurunkan regulasi dalam serum dan PBMC pasien MG dibandingkan dengan kontrol

Downloaded from
yang sehat. Semakin rendah IL-37 dikaitkan dengan penyakit lebih parah (skor MG kuantitatif) dan lebih tinggi folikel Th (TFH) Tfh17 dan sel B nomor /. Arus analisis cytometry
mengungkapkan bahwa IL-37 terutama diproduksi oleh CD4 + Sel T tanpa tumpang tindih dengan subset Th1, Th17, dan TFH pada pasien MG. Peraturan IL-37 + T cell jarang
diungkapkan Foxp3 dan CD25 tapi diproduksi banyak IL-4. TFH dan sel B menyatakan tingkat tinggi SIGIRR, reseptor IL-37, pada pasien MG. Mekanis, IL-37 secara langsung
obligasi untuk SIGIRR, ditekan proliferasi, produksi sitokin dari TFH dan sel B, dan sekresi autoantibodi melalui penghambatan STAT3 sinyal di TFH dan sel B. The Journal of
Immunology,

http://www.jimmunol.org/
2020, 204: 000-000.

M
yang Penurunan transmisi neuromuskular dan kelemahan otot konsekuen. MG fatal
disebabkan oleh Abs autoreaktif menyerang sambungan sekali kelemahan yang terlibat otot pernapasan dan mengakibatkan gagal napas.
yasthenia gravis (MG)
neuromuskuler, adalah penyakit
menyebabkan autoimunotot
kelemahan klasik
rangka Yang pertama-line pengobatan untuk MG termasuk iv Ig, pertukaran plasma,
dan fatigability (1-4). Meskipun asetilkolin reseptor nicotinic (AChR) autoantibodi pengobatan imunomodulator, cholinesterase inhibitor, thymectomy, dan pengobatan
terdeteksi dalam serum dari 85% kasus, Abs menargetkan otot-spesifik kinase suportif (7, 10, 11-13). Hampir semua pasien MG perlu pengobatan jangka panjang,
(musk) atau lipoproteinrelated protein 4 (LRP4) terdeteksi di sebagian besar serum namun respon terapi sering bervariasi (11, 12).
pasien MG AchR-negatif (2, 5, 6). The immunopathogenic ACHR Ab di

at UCL Library Services on February 29, 2020

persimpangan neuromuskular termasuk aktivasi lisis komplemen tergantung dari
membran postsynaptic, yang mengakibatkan AChR internalisasi dan mengganggu
mengikat antara asetilkolin dan ACHR (7-9). Meskipun Agrin mengikat LRP4
merupakan langkah kunci untuk mengaktifkan musk, anti-LRP4 Ab gangguan
aktivasi Musk. Anti-Musk Ab disebabkan degradasi Musk dan menyebabkan
penyebaran cluster AChR dan degenerasi terminal saraf (7, 9). Penghinaan umum
dari autoantibodi ini
Folikel Th (TFH) sel memainkan peran penting selama gangguan autoimun
(14-16). TFH difasilitasi sel B untuk produksi Ab oleh interaksi direktori dan produksi
efektor sitokin IL-21. TFH sel dilengkapi dengan IL-21R dan IL-6R, yang keduanya
penting untuk diferensiasi dan fungsi berkelanjutan TFH (17). Jumlah tersebut
ditingkatkan atau aktivasi sel TFH mengakibatkan hiperproliferasi sel B autoreaktif
dan kelebihan Abs, yang berkontribusi pada eksaserbasi autoimunitas

* Departemen Neurologi, Drum Tower Hospital, Sekolah Kedokteran dan Negara Kunci Laboratorium Diterima untuk publikasi tanggal 26 September 2019. Diterima untuk publikasi 26 Januari
Bioteknologi Farmasi, Universitas Nanjing, Nanjing, Jiangsu 2020.
210.008, Cina; † Lembaga Ilmu Pengetahuan Otak, Nanjing University, Nanjing, Jiangsu
Karya ini didukung oleh National Science Foundation Alam Cina (Hibah 81.701.235, 81.991.514, dan
210.008, Cina; ‡ Jiangsu Kunci Laboratorium Molekuler Kedokteran, Fakultas Kedokteran Universitas Nanjing,
81.200.876), Dana Penelitian Fundamental untuk Universitas Central (Grant 021414380446), Badan Penelitian
Nanjing, Jiangsu 210008, Cina; x Provinsi Jiangsu Stroke Pusat Diagnosis dan Terapi, Nanjing, Jiangsu 210008,
dan Pengembangan Program Kunci Provinsi Jiangsu Cina (Grant BE2016610) , dan Provinsi Jiangsu Key Medis
Cina; {Nanjing Neuropsychiatry Klinik Medical Center, Nanjing, Jiangsu 210008, Cina; ‖ Medical School dari
Disiplin (Grant ZDXKA2016020).
Nanjing Medical University, Nanjing, Jiangsu 210.029, Cina; #Department Neurologi, The First Af fi liated Rumah
Sakit Soochow University, Jiangsu 215006, Cina;
C.-JZ dirancang dan disusun penelitian ini. C.-JZ dan YX dikoordinasikan penelitian ini.
* * Departemen Neurologi, Rumah Sakit Nanjing Pertama, Nanjing University Medical, Jiangsu 210.029, Cina; †† Departemen
C.-JZ, Z. Liu, dan LZ fi setengah jadi sebagian besar percobaan dan menganalisis data.
Neurologi, Rumah Sakit Maanshan Rakyat, Maanshan, Anhui 243.000, Cina; ‡‡ Departemen Neurologi, Rumah Z. Lu, HC, LF, TW, M.-LJ, RC, dan HM membantu dengan eksperimen. Z. Liu,
Sakit Provinsi Jiangsu Pengobatan Tradisional Cina, The Af fi liated Rumah Sakit Nanjing University of Chinese QX, Jianquan Shi, ML, HL, JG, dan Jingping Shi membantu dengan koleksi sampel. CW disediakan diskusi yang
Medicine, Nanjing, Jiangsu 210.029, Cina; xx Departemen Neurologi, The First Af fi liated Rumah Sakit Nanjing bermanfaat dan konstruktif. Alamat korespondensi dan permintaan cetak ulang Dr Cun-Jin Zhang, Departemen
Medical University, Nanjing, Jiangsu Neurologi Tower Rumah Sakit Drum, Sekolah Kedokteran dan Negara Kunci Laboratorium Bioteknologi Farmasi,
Universitas Nanjing, 321 Zhongshan Road, Nanjing, Jiangsu 210008, Cina. Alamat E-mail:
210.029, Cina; {{Departemen Neurologi, The Af fi liated Rumah Sakit Otak dari Nanjing Medical University,
zhangcunjin516@163.com Singkatan yang digunakan dalam artikel ini: ACHR, reseptor asetilkolin; HC, kontrol
Nanjing, Jiangsu 210.029, Cina; ‖‖ Departemen Bedah Jantung, Nanjing Menara Rumah Sakit Drum, The Af fi
yang sehat; LRP4, terkait lipoprotein protein 4; MG, myasthenia gravis; Musk, otot-spesifik kinase; QMG, skor
liated Rumah Sakit Medical School dari Nanjing University, Nanjing 210008, Cina; ## Kunci Laboratorium
MG kuantitatif; SEB, staphylococcal enterotoksin B; TFH, folikel Th; Treg, T. peraturan
Molekuler Biofisika Departemen Pendidikan, Teknik Pusat Penelitian Nasional untuk Nanomedicine, College of
Life Science dan Teknologi, Huazhong Universitas Sains dan Teknologi, Wuhan 430074, Cina; dan *** Wuhan
Institute of Biotechnology, Wuhan 430070, Cina

1 ZL dan LZ kontribusi sama. ORCIDs: 0000-0003-2169-186X (LZ); 0000-0002-4964-9332 (HC); 0000-00016792-8143 hak cipta 2020 oleh The American Association of Immunologists, Inc. 0022-1767 / 20 / $ 37.50

(RC).

www.jimmunol.org/cgi/doi/10.4049/jimmunol.1901176
2 PENGAWAS PERAN DAN MEKANISME IL-37 DI MG
gangguan, termasuk MG (18-20). Kami telah menunjukkan bahwa frekuensi sel TFH
beredar yang secara signifikan lebih tinggi pada pasien MG dan penyakit lupus
eritematosus sistemik dibandingkan dengan kontrol yang sehat (HC) dan terkait
dengan produksi autoantibodi (21-23). Folikel sel regulator T adalah jenis sel yang
unik sebagian berbagi karakteristik dengan baik T regulator (Treg) dan sel TFH dan
terbatas respon sel B diperantarai sel TFH (24-26). Apakah faktor-faktor lain juga
langsung mengatur TFH dan fungsi sel B selama gangguan autoimun masih harus
dijelaskan.
IL-37 baru-baru ini diidentifikasi sebagai penekan bawaan di Peradangan dan
kekebalan (27-30). Telah mengungkapkan bahwa IL-37 ditekan bawaan di
Peradangan oleh produksi menurunkan regulasi dari inflamasi sitokin, ekspresi faktor
transkrip, dan aktivasi kinase signaling (28, 31). Selain itu, IL-37 ditekan aktivasi sel
T efektor, seperti Th17 dan sel Th2 (32, 33). Efek protektif IL-37 telah disarankan
dalam berbagai di inflamasi dan penyakit autoimunitas model fl, seperti iskemia
miokard, kolitis eksperimental, cedera tulang belakang, sindrom metabolik, psoriasis,
rheumatoid arthritis, dan peradangan usus penyakit (33-40). Dua mekanisme IL-37
dalam menekan reaksi imun telah diusulkan. Intraseluler IL-37 translokasi ke nuklir
adalah peristiwa penting untuk memodulasi ekspresi proin peradangan gen, yang
diperlukan aktivasi caspase-1 (41, 42). Ekstraseluler IL-37 menggabungkan dengan
permukaan sel IL-18R Sebuah ditambah yatim umpan IL-1 keluarga reseptor 8
(SIGIRR, juga disebut IL-1R8) untuk membentuk kompleks dan transduce anti-in
sinyal Peradangan fungsional (43-45). Namun, selular sumber, fungsi, dan
mekanisme IL-37 di MG masih belum diketahui.
Meskipun peran patogenik dari TFH dan sel B telah mapan di humoral kekebalan
dan autoantibodi produksi, apakah IL-37- atau IL-37-memproduksi sel bisa mengatur
respon imun humoral TFH / B diperantarai sel masih belum pasti. Dalam studi ini,
kami menemukan IL-37 berkurang pada pasien MG dan berhubungan dengan
tingkat keparahan penyakit dan TFH / Tfh17 / jumlah sel B. Kami menemukan CD4 + T
cell adalah sumber seluler dominan untuk produksi IL-37 pada penyakit MG. Data
kami menunjukkan TFH dan sel B menyatakan tingkat tinggi SIGIRR, reseptor IL-37.
IL-37 stimulasi pada TFH dan sel B mengakibatkan berkurang proliferasi sel,
peradangan sitokin produksi, dan sekresi Ag-spesifik otoantibodi, yang dimediasi
oleh menurunkan regulasi STAT3 induksi dan fosforilasi di TFH dan sel B. Secara
kolektif, kami perintisan mengungkapkan peran IL-37 di TFH dan B diperantarai sel
produksi autoantibodi di MG.
Bahan dan metode
peserta
Subyek direkrut dari Drum Tower Rumah Sakit Nanjing University Medical School, Rumah Sakit
Nanjing Pertama, Pertama Af fi liated Rumah Sakit Soochow University, Rumah Sakit Maanshan
Rakyat, Rumah Sakit Provinsi Jiangsu Pengobatan Tradisional Cina, The First Af fi liated Rumah
Sakit Nanjing Medical University, dan The Af fi liated Rumah Sakit otak Nanjing University
Medical. Informed consent diperoleh dari semua peserta. Penelitian ini disetujui oleh komite etika
Rumah Sakit Drum Tower. Sebanyak 18 pasien MG dengan positif anti-AChR Ab dan 18 usia
dan jenis kelamin-cocok HC direkrut dalam penelitian ini. Kriteria inklusi adalah 1) con fi rmed
MG diagnosis didasarkan pada kombinasi dari sejarah klinis, pemeriksaan fisik, hasil tes
kelelahan, respon positif terhadap pengujian neostigmin, respon decremental untuk stimulasi
saraf berulang, dan adanya anti-AChR; dan 2) usia 0,18 y. Kriteria eksklusi adalah 1) lainnya
hidup bersama gangguan autoimun; 2) kelainan darah sistemik; 3) infeksi selama 8 minggu
sebelumnya; 4) dosis besar pengobatan kekebalan tubuh-supresif atau IVIG di baru-baru ini 3
mo; dan 5) kanker. Semua pasien yang terlibat dalam penelitian ini adalah awal onset (dengan
usia saat onset, 50 y) dan yang semuanya tidak diobati atau diobati dengan dosis rendah obat
imunosupresif (dosis harian maksimum
prednison 10 mg / d). Selain itu, pasien tidak hadir thymoma atau hiperplasia thymus dan tidak
thymectomized pada saat pengumpulan darah. Pada saat pendaftaran, informasi demografis
dan klinis, termasuk sejarah utuh penyakit, manifestasi klinis, pemeriksaan neurologis, dan
kuantitatif MG skor (QMG), dikumpulkan dari semua pasien.
Koleksi darah dan PBMC isolasi
Enam mililiter sampel darah dikumpulkan dari vena ke tabung EDTA dan diproses untuk serum
dan PBMC terpisah di 4 h. sampel serum diperoleh dengan sentrifugasi darah pada 1500 rpm
selama 5 menit, dan palet yang diresuspensi dengan menggunakan 1 3 PBS. Untuk isolasi
PBMC, sel-sel diresuspensi yang lembut ditambahkan ke permukaan 2 ml limfosit-memisahkan
menengah (TBD Sains, Tianjin, Cina) dalam kondisi steril, diikuti dengan sentrifugasi pada 2000
rpm selama 20 menit, dengan percepatan dan perlambatan kecepatan 1 ramp . Sel-sel lembut
dikumpulkan dan dicuci dua kali dengan DMEM untuk menghapus puing-puing. Sel disuspensi
dengan FBS yang mengandung 10% DMSO di Nalgene Mr. Frosty dan disimpan pada 2 80C
selama 24 jam dan kemudian ditransfer ke nitrogen cair sampai analisis.
Downloaded from
ELISA
Tingkat serum manusia IL-37 diukur dengan komersial ELISA kit (CUSABIO, Wuhan, Cina),
mengikuti instruksi dari pabriknya. Protokol serupa juga digunakan untuk pengukuran sitokin
lainnya. Secara singkat, 50 m l serum dan standar diencerkan ditambahkan ke masing-masing
dengan baik dan diinkubasi pada suhu kamar selama 1 jam. Setelah mencuci selama tiga kali,
http://www.jimmunol.org/
biotin-terkonjugasi capture Ab ditambahkan dan diinkubasi pada suhu kamar selama 2 jam.
Setelah mencuci, 100 m l dari HRP diencerkan ditambahkan ke masing-masing selama 30 menit.
Kami benar-benar disedot fluida dan menambahkan 100 m l substrat TMB selama 30 menit untuk
memungkinkan reaksi untuk menyelesaikan. Reaksi dihentikan dengan menambahkan 100 m l
menghentikan solusi. absorbansi dibaca pada OD 450 pada pembaca lempeng TECAN, dan
konsentrasi ditentukan sesuai dengan kurva standar.
ekstraksi RNA dan kuantitatif RT-PCR
at UCL Library Services on February 29, 2020
Jumlah RNAwas diekstrak dari PBMC menggunakan RNeasy Mini Kit (QIAGEN
NV, Venlo, Belanda). Untuk mRNA transkripsi terbalik, 1 m g dari total RNA diubah menjadi cDNA
dalam 20- m Volume reaksi l menggunakan transkripsi kit terbalik (Thermo Fisher Ilmiah fi c)
mengikuti instruksi dari pabriknya. Kuantitatif RT-PCR dilakukan pada perangkat Applied
Biosystems StepOnePlus Real-time PCR. Primer berikut digunakan dalam penelitian ini:
manusia IL-37, ke depan 5 9- CAGTGAGGTCAGCGATTAGGAA-3 9 dan reverse 5 9- TTAGTGAGCAGGTTTGGT
9;
dan manusia b- aktin, maju 5 9- CACCATTGGCAATGAGCGGTTC-3 9
dan reverse 5 9- AGGTCTTTGCGGATGTCCACGT-3 9. Tingkat mRNA relatif IL-37 dihitung
sebagai 2 2 D ct dan hasilnya disajikan sebagai produksi kali lipat dari b- aktin.
CFSE pewarnaan
The CFSE pewarnaan dilakukan dengan menggunakan CellTrace CFSE Sel Proliferasi Kit (C34554;
Thermo Fisher Ilmiah fi c). Secara singkat, sel-sel dihentikan dalam 2 ml DMEM pada konsentrasi 1 3 10
6 -10 7 / ml dan diinkubasi dengan CFSE (1: 1000) selama 9 menit. mililiter sepuluh dari DMEM dingin
yang mengandung 10% FBS telah ditambahkan ke tabung dan dicampur secara menyeluruh. Setelah
centrifuge pada 1500 rpm selama 5 menit, sel-sel sudah siap untuk percobaan.
arus cytometry
The Abs berikut dibeli fromBioLegend: CD19 (clone: ​H1B19), CD138 (clone: ​DL-101), CD4 (klon:
OKT4 dan RPA-T4), CD8 (clone: ​SK1), CD3 (klon: UCHT1 dan H1B19), CXCR5 (clone:
​J25ZD4), PD-1 (clone: ​EH12.2H7), IFN- g ( clone: ​4S.B3), IL-4 (clone: ​MP4-25D2), CD68 (clone:
​y1 / 82A), dan CD14 (clone: ​M5E2). The Abs berikut dibeli dari Invitrogen: Foxp3 (clone:
​PCH101), IL-17 (clone: ​74DEC17), dan CD25 (clone: ​BC96). IL-37 Ab dibeli dari eBioscience
(clone: ​47D12).
Untuk pewarnaan permukaan sel, PBMC diinkubasi dengan fl Abs orescence-label selama
30 menit pada 4C dan dicuci dua kali, diikuti oleh aliran cytometry analisis. Untuk pewarnaan
intraseluler, PBMC dirangsang dengan ionomycin (500 ng / ml; Sigma-Aldrich) dan PMA (20 ng /
ml; Sigma-Aldrich) selama 4 jam, diikuti dengan inkubasi dengan GolgiStop (1: 500; BD
Biosciences) untuk 2 lebih h. Sel dicuci satu kali dan diinkubasi dengan permukaan sel Abs
selama 30 menit pada 4C. Setelah mencuci, sel fi xed dengan Fiksasi / Permeabilisasi Solusi Kit
The Journal of Immunology
(554.714; BD Biosciences) atau eBioscience Foxp3 / Transkripsi Factor Pewarnaan Buffer Set
(00-5523-00; eBioscience) selama 20 menit dan dicuci satu waktu. Sel-sel kemudian diinkubasi
dengan Abs terhadap sitokin intraseluler selama 1 jam pada 4C. Untuk Foxp3 pewarnaan, sel-sel
yang bernoda selama 1 jam pada suhu kamar.
Sel dianalisis dengan aliran cytometer dan dianalisa lebih lanjut menggunakan FlowJo V10.
In vitro TFH / B cell kokultur
Arus cytometry diurutkan sel diberi label dengan CFSE dan unggulan di piring 96-baik dengan
putaran bawah. Sebanyak 1 3 10 5 sel TFH dan 1 3 10 5
Sel-sel B yang cocultured di RPMI 1640 medium lengkap yang mengandung 10% FCS saja atau
dengan RIL-37 manusia (50 ng / ml; PeproTech, Rocky Hill, NJ) atau Fc (manusia) kontrol (10
mg / ml; Enzo Life Sciences, Farmingdale , NY) selama 5 d di hadapan superantigen
staphylococcal enterotoksin B (SEB) 20 ng / ml. supernatan dikumpulkan untuk analisis ELISA.
Western blot
Sel-sel berbudaya segaris di radioimmunoprecipitation assay buffer lisis (89.900; Thermo Fisher
Ilmiah fi c) mengandung proteinase inhibitor selama 30 menit di atas es. Setelah sentrifugasi
selama 20 menit pada 10.000 rpm, supernatan dipindahkan ke tabung lain. lysates lima
mikroliter menjadi sasaran pengukuran konsentrasi protein mengikuti instruksi dari Protein Pierce
BCA Assay Kit (23225; Thermo Fisher Ilmiah fi c). Sebanyak 5 3 buffer loading ditambahkan ke
lisat protein dan dipanaskan pada 100C selama 5 menit. lisat sel dijalankan pada 10%
SDS-PAGE gel, dan protein dipindahkan ke mengaktifkan membran PVDF. Kemudian, membran
diblokir oleh susu 5% selama 1 jam pada suhu kamar dan dipotong menjadi dua bagian untuk
inkubasi dengan spesifik primer Abs semalam. Semua Abs primer (STAT3 dan p-STAT3 dari Sel
Signaling, SIGIRR dari R & D Sistem, dan GAPDH dari Santa Cruz Bioteknologi) diencerkan
pada 1: 1000. Setelah mencuci dengan PBS dengan Tween 20 dan inkubasi dengan HRP Abs
sekunder (1: 5000; dari Abcam) dan ECL, membran menjadi sasaran untuk pemindaian gambar.
In vitro TFH polarisasi
Manusia naif CD4 + Sel T diisolasi dengan menggunakan Naïve Pan T Sel Isolasi Kit
(130-097-095; MACS) mengikuti instruksi dari pabriknya. Sembilan puluh enam juga piring
dengan fl sel-mengikat di pantat yang preincubated dengan CD3 dan CD28 selama 24 jam pada
4C. piring dicuci dua kali dengan air steril sebelum sel-sel unggulan. Sel T naif yang terpolarisasi
ke sel TFH oleh stimulasi dengan IL-21 + IL-6 di hadapan anti-IFN- g dan anti-IL-4 untuk 5 d.
Polarisasi medium RPMI 1640 mengandung 10% FBS, 1% penisilin / streptomisin, 1% Na
piruvat, 0,1% B-mercaptoethanol, dan 2% HEPES.
Analisis statistik
Data dinyatakan sebagai mean 6 SEM dan dianalisis dengan versi Prism
5.00 software (GraphPad Software, La Jolla, CA). Pasien dan kontrol dibandingkan secara
deskriptif dengan menggunakan 3 2 tes untuk langkah-langkah kategoris dan Mahasiswa t tes
antara dua kelompok. analisis korelasi Pearson dilakukan untuk menilai hubungan antara
variabel kontinu. Perbedaan dianggap signifikan pada p, 0.05.
hasil
IL-37 adalah secara signifikan berkurang pada pasien MG
Untuk menyelidiki kemungkinan peran dan mekanisme IL-37 di MG, 18 gender dan
usia-cocok pasien MG dan HC direkrut untuk penelitian ini (Tabel I). Arus analisis
cytometry dari PBMC menunjukkan bahwa persentase dan jumlah IL-37-memproduksi
sel-sel secara signifikan berkurang MG dibandingkan dengan HC (Gbr. 1A-C). Kami
divalidasi hasil ini melalui menganalisa Il37 produksi mRNA di PBMC oleh RT-PCR.
secara konsisten, Il37 mRNA juga sangat berkurang dalam kelompok MG berbeda
dengan kelompok HC (Gambar. 1D). Telah dilaporkan bahwa intraseluler IL-37 dan
ekstraseluler IL-37 protein ditekan respon kekebalan tubuh melalui mekanisme yang
berbeda (41-45); dengan demikian, kita lanjut mengukur IL-37 sekresi dalam serum dari
MG dan HC kelompok. Dibandingkan dengan HC, secara signifikan menurunkan
regulasi IL-37 yang diamati dalam serum MG (Gambar. 1E). Hasil ini menunjukkan
bahwa IL-37 dapat memainkan peran penting dalam
3
respon imun pasien MG dan berdampak pada produksi autoantibodi.
IL-37 terkait dengan keparahan penyakit, TFH / Tfh17, dan jumlah sel plasma
Kami lebih meneliti dampak IL-37 pada keparahan penyakit dan respon imun dengan
analisis regresi linear. Kami menemukan produksi berkurang dari IL-37 dalam serum
adalah secara signifikan berhubungan dengan tinggi QMG (Gbr. 2A), menunjukkan
IL-37 dapat menekan patogenesis MG. Kami dan lain-lain telah melaporkan bahwa
sel TFH adalah pendorong utama proliferasi sel B dan produksi Ab (23, 46-49).
Salah satu pertanyaan penting adalah apakah IL-37 mengatur fungsi sel TFH dan B
atau nomor di MG. Kami menentukan kadar CD4 + CXCR5 + PD1 + TFH sel dan
menemukan sel TFH yang meningkat secara substansial di MG dibandingkan
dengan HC (Gbr. 2B, 2C). tingkat yang lebih rendah dari IL-37 dikaitkan lebih tinggi
TFH frekuensi (Gambar. 2D), menunjukkan IL-37 dapat mempengaruhi fungsi TFH
dan membatasi jumlah TFH. Kami sebelumnya menemukan Tfh17 adalah salah satu
Downloaded from
subset kunci sel TFH untuk peradangan sitokin produksi. Kami diteliti lebih lanjut
terkait antara serum IL-37 dan Tfh17. Secara konsisten, IL-37 juga secara signifikan
terkait dengan frekuensi sel Tfh17 (Gambar. 2E). B sel dan sel plasma berfungsi
sebagai sumber utama produksi autoantibodi pada penyakit autoimun humoral. Kami
menentukan hubungan antara sel-sel IL-37 dan B dan sel plasma (CD19 2 CD138 +)
oleh aliran cytometry dan linear regresi. Data kami menunjukkan bahwa IL-37 yang
erat terkait dengan sel B dan sel plasma dalam darah pasien MG (Gbr. 2F-I),
http://www.jimmunol.org/
menunjukkan peran penting dari IL-37 di TFH / sel B berpartisipasi respon imun dan
produksi Ab di MG .
CD4 + sel adalah sumber utama utama IL-37 produksi di MG
at UCL Library Services on February 29, 2020
Sebuah studi sebelumnya menunjukkan sel plasma bisa menjadi sumber produksi
IL-37 di periodontitis kronis (50), sedangkan penelitian lain melaporkan bahwa tipe
sel lainnya, seperti makrofag dan monosit, juga dapat menjadi sumber utama IL-37
produksi PBMC setelah stimulasi dengan agonis dari TLRs (51, 52). Untuk saat ini,
pengetahuan tentang sumber seluler dari IL-37 dalam pengaturan penyakit masih
terbatas. Kami menentukan produksi IL-37 di CD11b + sel, lgy6G + neutrofil, CD68 +
makrofag, dan CD14 + monosit; Namun, tak satu pun dari terdeteksi IL-37
ditemukan di populasi ini. Kami lebih fokus pada CD19 + B sel dan subset sel T untuk
analisis IL-37 produksi. sel B menyatakan diabaikan IL-37 (Gambar. 3A, 3B), dan
mayoritas IL-37 diproduksi oleh sel CD3 + T (Gambar. 3C, 3D). Analisis CD4 + T sel
dan sel CD8 + T mengungkapkan bahwa CD8 + T cell diproduksi minimal IL-37 dan
CD4 + sel berkontribusi mayoritas IL-37 produksi (Gambar. 3E-H). Beberapa
peradangan CD4 + subset sel T dapat memperoleh fenotipe peraturan dalam kondisi
penyakit spesifik (53-55); kami menyelidiki IL-37 ekspresi dalam Th17, Th1, dan
populasi TFH dan menemukan IL-37 + CD4 + T cell jarang mengungkapkan penanda
tanda tangan di atas peradangan Th sel (Gambar. 3I-L). Temuan ini menyarankan
berbeda IL-37-mengekspresikan CD4 + bagian sel T di MG dan terlibat dalam
patogenesis MG.
IL-37 + CD4 + Sel T dibagi karakteristik dengan sel IL-4 + T, tetapi tidak sel Foxp3 +
atau CD25 + Treg
Foxp3 + atau CD25 + sel T CD4 adalah sel Treg tradisional dan telah terbukti
sebagai sumber utama kunci IL-37 (56, 57). IL-37 disarankan sebagai salah satu
protein yang dilepaskan oleh sel-sel Treg untuk mengerahkan fungsi imunosupresif
nya (56, 57). Tanpa diduga, sekitar 97,1 6 0,91% IL-37-memproduksi sel T yang
Foxp3 negatif, dengan hanya 2,4 6 0,43% sel IL-37 + CD4 + T menyatakan
 PENGAWAS PERAN DAN MEKANISME IL-37 DI MG

Tabel I. Karakteristik klinis pasien MG dan HC

MG ( n = 18) HC ( n = 18) p Nilai

Pria, n (%) 8 (44,4) 8 (44,4)

Umur (y) 45.9 6 3.0 42,3 6 2.8 0,38
otot okular, n (%) 18 (100) -
otot orofaringeal, n (%) 0 (0) -
otot tungkai, n (%) 14 (77.8) -
penyakit autoimun lainnya 0 0
thymoma 0 0
tiroidektomi 0 0

Ditampilkan adalah mean 6 SEM (Mahasiswa t uji). Strip (-) menunjukkan tidak tersedia.

Foxp3 (Gambar. 4A, 4B). Demikian pula, hampir semua IL-37 + CD4 + T adalah stimulasi sangat mengurangi produksi IgG sel cocultured (Gambar. 5C),
CD25 negatif (Gambar. 4C), menunjukkan IL-37 + CD4 + T adalah populasi yang menunjukkan efek penghambatan kuat dari IL-37 pada sel TFH dan B. Meskipun
berbeda yang berbeda dari sel Treg tradisional. IL-4 ini penting untuk regulasi IL-21 telah diakui sebagai sitokin tanda tangan dari TFH, kami sebelumnya

autoimun di Peradangan di CNS dengan mempromosikan makrofag ke M2 fenotip
(58). Kami menemukan IL-37 + CD4 + T sel sebagian besar tumpang tindih dengan
IL-4-positif sel T (Gbr. 4D-F), menunjukkan IL-37 + CD4 + T cell mungkin subtipe sel
Th2 atau berbeda untuk Th2-seperti sel selama MG patogenesis.
Downloaded from
ditemukan Bcl-2 adalah salah satu sitokin kunci yang dihasilkan oleh diaktifkan sel
TFH dan B selama produksi Ab (21). Tingkat kedua IL-21 dan Bcl-2 secara signifikan
berkurang setelah IL-37 perlakuan (Gambar. 5D, 5E), menunjukkan IL-37 secara
langsung menghambat aktivasi sel TFH / B.

SIGIRR diperlukan untuk efek IL-37 pada sel TFH dan B melalui menekan

IL-37 ditekan TFH-dimediasi proliferasi sel B, produksi Ab, dan
sekresi sitokin
Kami berhipotesis bahwa IL-37 secara langsung membatasi TFH-dimediasi B
proliferasi sel dan fungsi. Untuk menyelidiki hipotesis ini, CXCR5 + PD1 + CD4 + TFH
dan CD19 + sel B yang diurutkan oleh aliran cytometry dan kemurnian yaitu 0,95%.
sel B diberi label dengan CFSE yang berbudaya dengan sel TFH pada 1: 1 rasio di
hadapan superantigen SEB selama 5 d. Sel-sel cocultured distimulasi dengan IL-37
dari hari 0 selama 5 d untuk menilai efek dari IL-37 pada proliferasi sel B dan fungsi
http://www.jimmunol.org/
STAT3 signaling
Kami selanjutnya menyelidiki bagaimana IL-37 diberikan efek penekan pada TFH /
B-dimediasi respon imun humoral. Kami ditentukan apakah diurutkan TFH dan B sel
dari darah pasien MG mengungkapkan SIGIRR, reseptor IL-37. Data kami
menunjukkan bahwa kedua sel TFH dan B menyatakan tingkat tinggi SIGIRR (Gambar.
6A), menyarankan TFH dan sel B yang mungkin secara langsung menanggapi IL-37
stimulasi. Sel-sel B diurutkan distimulasi dengan IL-21, sitokin tanda tangan TFH, untuk
mempromosikan ekspansi sel B. IL-37 yang ditambahkan pada hari 0 untuk menyelidiki

at UCL Library Services on February 29, 2020

sel TFH / B. Kami menemukan IL-37 pengobatan secara signifikan membatasi direktori efek penghambatan IL-37 pada sel B IL-21-dirangsang. Dari catatan, IL-37
ekspansi sel B yang ditentukan oleh CFSE (Gambar. 5A, 5B). Ag-spesifik IgG Ab pengobatan secara signifikan mengurangi sel B pada hari 5 dibandingkan dengan
diproduksi oleh sel B dalam supernatan diukur dengan ELISA. Secara konsisten, kelompok IL-21-dirangsang (Gambar. 6B). Kami telah menemukan IL-37 direpresi
IL-37

GAMBAR 1. IL-37 ekspresi berkurang di MG dibandingkan dengan HC. ( SEBUAH - C) Gating strategi dan aliran cytometry analisis IL-37 tingkat protein dalam
CD45 + Sel-sel myeloid dalam darah perifer pasien MG dan HC. persentase ( B) dan jumlah mutlak ( C) IL-37 + sel dihitung. ( D) Analisis RT-PCR dari IL-37 mRNA di PBMC dari MG dan HC. Hasilnya
dihitung sebagai kali lipat dari mRNA di HC. ( E) analisis ELISA dari disekresikan IL-37 protein dalam serum dari dua kelompok. Setiap titik menunjukkan satu sampel. Data yang mewakili dua percobaan
independen ( n = 18 per kelompok). Berarti 6 SEM.
* p, 0,05, ** p, 0,01, *** p, 0.001 (berpasangan Student dua-tailed t uji). 4
 5

Downloaded from
percobaan independen ( n = 18 per kelompok). Berarti 6 SEM. Asosiasi dianalisis dengan regresi linier. *** p, 0.001 (berpasangan Student dua-tailed t uji). The Journal of Immunology

http://www.jimmunol.org/
PBMC dari MG dan kontrol ( G). Kadar sel-sel plasma dihitung sebagai persentase total CD45 + sel ( H). ( SAYA) Hubungan antara serum IL-37 dan persentase sel plasma. Data yang mewakili dua

at UCL Library Services on February 29, 2020

GAMBAR 2. IL-37 dikaitkan dengan tingkat keparahan penyakit dan tingkat TFH / Tfh17 dan sel plasma. ( SEBUAH) Hubungan antara serum IL-37 dan
QMG. ( B dan C) Gating strategi TFH ( B) dan kuantifikasi ( C). ( D - F) Hubungan antara IL-37 dan frekuensi sel TFH ( D), Tfh17 sel ( E), dan sel B ( F). ( G dan H) Gating strategi sel plasma (CD19 2 CD138 +) di

produksi IL-21 yang dirilis oleh TFH (Gambar. 5D) dan ingin tahu apakah IL-37
mampu menekan diferensiasi TFH. Untuk menilai pertanyaan ini, sel-sel T naif
diurutkan dari PBMC segar terpolarisasi ke TFH oleh IL-21 dan IL-6 stimulasi. IL-37
perawatan secara substansial mengurangi jumlah TFH (Gambar. 6C). Sebaliknya,
merobohkan SIGIRR oleh jepit rambut pendek RNA dihapuskan efek IL-37 pada
kedua B dan sel TFH (Gambar. 6B, 6C). IL-21 atau IL-6 adalah ligan klasik untuk
aktivasi STAT3 sinyal, yang meningkatkan kemungkinan bahwa IL-37 mungkin
menekan STAT3 induksi atau fosforilasi di B dan TFH sel. sel diurutkan TFH dan B
dirangsang dengan IL-21, atau IL-21 ditambah IL-37 selama 1 jam, dan tingkat total
STAT3, terfosforilasi STAT3, ditentukan oleh Western blot. Data kami menunjukkan
bahwa IL-37 stimulasi secara signifikan mengurangi STAT3 induksi dan fosforilasi
(Gambar. 6D). Kami menentukan dampak dari IL-37 pada STAT3 produksi sitokin
hilir B dan TFH sel. Kami menemukan Bcl2, protein hilir aktivasi STAT3, itu secara
signifikan berkurang setelah pengobatan IL-37 secara SIGIRR-dependent (Gambar.
6E, 6F). Hasil ini menunjukkan bahwa IL-37 obligasi langsung ke SIGIRR pada
kedua sel TFH dan B dan ditekan
B / fungsi TFH dan diferensiasi melalui penindasan STAT3 signaling (Gbr. 7).
Diskusi
Kami sebelumnya melaporkan bahwa sirkulasi sel TFH yang secara signifikan
diperkaya pada pasien MG tanpa kelainan thymus dan berkorelasi dengan keparahan
penyakit. Kami juga menunjukkan bahwa TFH dan bagian yang Tfh17 diproduksi
substansial IL-21 untuk mempromosikan sel plasma dan sel B ekspansi dan produksi
autoantibodi, yang menunjukkan peran patogenik penting dari TFH di MG.
Menurunkan regulasi sel T regulator folikel kontribusi terhadap gangguan dari TFH
(23). Namun, apakah ada faktor regulasi lain yang terlibat dalam respon imun sel TFH
dan B di MG masih belum jelas. Dalam studi saat ini, kami melaporkan IL-37 berfungsi
sebagai kekebalan tubuh-regulator dalam kekebalan humoral melalui SIGIRR untuk
menghambat dari STAT3 sinyal di TFH / Tfh17 dan sel B, sehingga modulasi
patogenesis MG. MRNA dan protein produksi IL-37 yang sangat berkurang di MG
dibandingkan dengan HC. Dari catatan, IL-37 tingkat yang secara signifikan terkait
dengan kedua tingkat keparahan penyakit dan TFH / Tfh17 / jumlah sel B. Kedua sel
TFH dan B menyatakan tinggi
 PENGAWAS PERAN DAN MEKANISME IL-37 DI MG

sel double-positif total IL-37 + sel. Data yang mewakili tiga percobaan independen ( n = 18 per kelompok). Berarti 6 SEM. 6

Downloaded from
http://www.jimmunol.org/
CD4 + sel T total IL-37 + sel ( B, D, F, dan H). ( saya - K) CD3 + CD4 + sel terjaga keamanannya untuk aliran cytometry analisis IL-37 ekspresi dalam IFN- g +, IL-17 +, atau CXCR5 + subset sel T. ( L) Kuantifikasi

at UCL Library Services on February 29, 2020

GAMBAR 3. IL-37 terutama diproduksi oleh CD4 + Sel T tanpa tumpang tindih dengan peradangan Th himpunan bagian. ( SEBUAH - H) CD45 + atau CD45 + CD3 + sel-sel
gated untuk aliran cytometry analisis IL-37 ekspresi dalam sel subtipe yang berbeda seperti yang ditunjukkan ( SEBUAH, C, E, dan G). Kuantifikasi dari IL-37 + sel B-positif, CD3 + sel T, CD8 + sel T, atau

tingkat SIGIRR, reseptor IL-37. Stimulasi SIGIRR dengan IL-37 sangat menghambat
sinyal STAT3, jalur kunci mengontrol diferensiasi TFH dan fungsi dan B diferensiasi
sel, proliferasi, dan aktivasi sel TFH dan B. Secara konsisten, IL-37 stimulasi
mengurangi proliferasi sel B CSFE-label dan produksi Ab di TFH / B kokultur sel
assay. Temuan ini menunjukkan bahwa IL-37 merupakan faktor regulasi penting
dalam TFH dan B respon humoral kekebalan sel-obat dari pasien MG.
Monosit, makrofag, sel dendritik, B dan plasma sel, et al., Telah dilaporkan
sebagai kemungkinan sumber mendominasi dari IL-37 produksi pada kondisi
penyakit yang berbeda dan model hewan (50, 51). Sumber seluler dari IL-37 masih
kontroversial, yang mungkin karena adanya ligan yang berbeda yang mengatur
produksi IL-37 dalam kondisi penyakit yang berbeda. Misalnya, stimulasi PBMC
manusia dengan agonis dari TLR-1-6 dan -9 melaju ekspresi IL-37 terutama di
monosit (81-91%) dan 6-8% dalam sel T (50, 51), sedangkan plasma sel menjabat
sebagai sumber utama untuk produksi IL-37 di periodontitis kronis (50). Kami
menemukan CD4 + T cell adalah sumber utama dari IL-37 produksi. Meskipun IL-37
dapat dilepaskan oleh sel Treg, salah satu himpunan bagian kunci dari CD4 sel T
(56, 57), tiba-tiba, sel-sel T yang paling memproduksi adalah Foxp3 dan CD25
negatif pada pasien MG. Salah satu kemungkinan adalah bahwa IL-37 ekspresi Treg
adalah
juga diatur oleh sinyal yang unik. IL - 37 dilaporkan sangat disajikan dalam sel Treg
pasien melanoma. Selain itu, media kondisi melanoma mampu merangsang IL - 37
ekspresi dalam sel Treg di kedua mRNA dan protein tingkat secara signifikan (57).
Sementara itu, disregulasi Treg dilaporkan dikaitkan dengan gangguan IL-37 fungsi /
ekspresi (56). Kami dan kelompok lain telah dilaporkan bahwa tingkat Treg yang
sangat berkurang dalam darah pasien MG, dan penyebab gangguan Treg masih
belum pasti. Salah satu kemungkinan adalah bahwa beberapa faktor yang tidak
diketahui terbatas ekspansi Treg serta IL-37 ekspresi dalam Treg pasien MG, yang
memerlukan penyelidikan lebih lanjut.
Peraturan sel TFH dan B terlalu aktif adalah pos pemeriksaan kunci dalam
penyakit imun humoral. IL-4 telah dilaporkan sebagai regulator penting dari untuk SSP
autoimun peradangan dengan mempromosikan makrofag ke M2 fenotip (58).
Menariknya, kami menemukan IL-37 + sel T menghasilkan banyak IL-4, menunjukkan
IL-37 + sel T dapat berbagi karakteristik dengan sel Th2, yang berada di luar
pemahaman saat sel Th2. IL-37 secara langsung ditekan kedua sel TFH dan B,
menunjukkan IL-37 + T cell adalah mungkin regulator baru sel TFH dan B. Beberapa
pertanyaan tetap ditentukan. Misalnya, apakah IL-37 + T cell adalah populasi yang
berbeda yang mengeluarkan IL-4 atau bagian dari sel Th2 memerlukan penyelidikan
lebih lanjut dengan menganalisis faktor-faktor transkripsi dan mekanisme pengaturan.
 7

+ T sel total 37 IL-sel + CD4 T ( E dan F). Data merupakan perwakilan dari tiga percobaan independen ( n = 18 per kelompok). Berarti 6 SEM. The Journal of Immunology

digunakan sebagai kontrol positif. ( D - F) CD3 + CD4 + sel terjaga keamanannya untuk aliran cytometry analisis IL-37 ekspresi dalam sel T IL-4-positif di MG dan HC ( D). Persentase IL-37 + IL-4 2 dan IL-37 + IL-4

dan kuantifikasi ( B) IL-37 ekspresi dalam sel Foxp3 +. ( C) Jenis sel yang ditunjukkan yang terjaga keamanannya untuk fl ow cytometry analisis dan ekspresi CD25, permukaan sel penanda Treg. CD25 + CD4 + sel

Downloaded from
GAMBAR 4. Peraturan IL-37 + T cell jarang diungkapkan Fopx3 dan CD25, tetapi berbagi karakteristik dengan Th2. ( SEBUAH dan B) CD3 + CD4 + sel terjaga keamanannya untuk fl ow cytometry analisis ( SEBUAH)

SIGIRR telah diidentifikasi sebagai regulator negatif menekan IL-1R signaling dan
mTOR (59). Ekspresi SIGIRR telah dilaporkan pada sel epitel, makrofag, sel-sel
kanker, dan beberapa subset sel T, seperti Th2 dan Th17 (59-63). Untuk
pengetahuan kita, sel TFH dan B belum diselidiki untuk ekspresi SIGIRR
sebelumnya. Dengan kombinasi aliran cytometry berbasis pemilahan sel dan
http://www.jimmunol.org/
dalam peraturan dari TFH dan B fungsi sel. IL-37 diaktifkan SIGIRR signaling oleh
direktori interaksi protein-protein (45). Dalam studi ini, kami menemukan IL-37
ditekan sel TFH dan B dengan cara SIGIRRdependent (Gbr. 7).
Kami sebelumnya melaporkan bahwa aktivasi STAT3 tidak hanya meningkatkan

at UCL Library Services on February 29, 2020

Western blot, kami menemukan bahwa kedua sel TFH dan B menyatakan SIGIRR ekspansi dan fungsi TFH, Tfh17, dan sel B, tetapi juga dipromosikan Tfh17 dan
fungsional, yang kemajuan pemahaman kita diferensiasi sel B (21), yang mengangkat hipotesis bahwa apakah IL-37-SIGIRR
sumbu menekan TFH dan

GAMBAR 5. IL-37 ditekan TFH-dimediasi proliferasi sel B, produksi Ab, dan TFH / B sitokin sel rilis in vitro. sel TFH dan B diurutkan
dari darah pasien MG oleh aliran cytometry dan cocultured pada 1: 1 rasio di hadapan superantigen SEB selama 5 d. ( SEBUAH dan B) Arus analisis cytometry proliferasi sel B ditunjukkan oleh CFSE
pewarnaan ( SEBUAH) dan kuantifikasi sel B proliferasi ( B). ( C) Produksi Ag-spesifik IgG diukur dengan ELISA dalam supernatan pada hari 5. ( D dan E) analisis ELISA dari IL-21 dan Bcl-2 yang
diproduksi oleh TFH dan B sel dalam supernatan di hari 5. Data yang mewakili dua percobaan independen ( n = 4-6 per kelompok). Berarti 6 SEM. * p, 0,05, ** p, 0,01, *** p, 0.001, **** p, 0,0001
(berpasangan Student dua-tailed t uji).
 PENGAWAS PERAN DAN MEKANISME IL-37 DI MG

Downloaded from
IL-37-memproduksi yang secara signifikan berkurang. Kehilangan penindasan IL-37 pada TFH dan B sel hasil dalam produksi potensial dari autoantibodi dan eksaserbasi MG. 8

GAMBAR 6. IL-37 obligasi langsung ke SIGIRR pada TFH dan sel B dan menghambat STAT3 sinyal. ( SEBUAH) sel TFH dan B diurutkan dari darah pasien MG
oleh aliran cytometry dan dianalisis dengan Western blot dengan Ab terhadap protein SIGIRR. ( B dan C) sel B diurutkan atau sel T naif diperlakukan seperti yang ditunjukkan. gen SIGIRR adalah

http://www.jimmunol.org/
knocked down oleh shRNA (SIG-shRNA), dan bergegas shRNA (Ctrl-shRNA) digunakan sebagai kontrol. Jumlah sel B dan sel TFH dianalisis dengan aliran cytometry di hari 5. ( D) sel diurutkan TFH dan
B dicampur pada 1: 1 ransum dan dirangsang dengan IL-21 dan IL-37 selama 1 jam; lisat sel menjadi sasaran Western Blot untuk analisis STAT3 dan p-STAT3. ( E dan F) Diurutkan sel B dan sel T naif
diperlakukan seperti yang ditunjukkan. Sekresi Bcl2 dalam supernatan dianalisis dengan ELISA pada hari 5. Data yang mewakili dua percobaan independen ( n = 4-6 per kelompok). Berarti 6 SEM. ** p, 0,01,

* * * p, 0.001, **** p, 0,0001 (berpasangan Student dua-tailed t uji).

tubuh dengan sangat mengurangi gangguan autoantibody-dimediasi pada sambungan neuromuskuler dan kelemahan otot yang terkait. Dalam darah pasien MG, sel CD4 + T IL-37- dan

fungsi sel B / diferensiasi oleh modulasi STAT3 sinyal. Kami menemukan IL-37 Secara kolektif, TFH-dimediasi produksi autoantibodi telah diakui sebagai
stimulasi secara signifikan menurunkan regulasi STAT3 induksi IL-21 yang dikuatkan mekanisme sentral dalam beberapa penyakit autoimun humoral, termasuk MG (15,

at UCL Library Services on February 29, 2020

dan fosforilasi. Sejalan dengan hasil ini, IL-37 perawatan sangat dilemahkan TFH 16, 21, 23, 47, 64). fi kami nding TFH dan B fungsi sel yang IL-37-SIGIRR AXIS
diferensiasi / sitokin produksi dan produksi Ab sel B, proliferasi, dan produksi sitokin. langsung ditekan memperluas wawasan kita dalam memahami mekanisme regulasi
Dalam studi ini, kami diidentifikasi bahwa IL-37-SIGIRR-STAT3 signaling kritis sel TFH dan B. Hasil kami menunjukkan bahwa sel-sel IL-37 dan IL-37 + T mungkin
mengatur TFH dan B sel-obat respon imun humoral (Gbr. 7). pos pemeriksaan di TFH dan B sel- dimediasi penyakit autoimun.

IL-21-dirangsang STAT3 aktivasi serta sekresi STAT3 sitokin hilir, seperti IL-21 dan Bcl2, di TFH / Tfh17 dan sel B. Dengan demikian, IL-37 memainkan peran kunci dalam homeostasis kekebalan

protein yang sangat diekspresikan pada permukaan sel dari kedua sel TFH dan sel B, untuk menghambat aktivasi sel, proliferasi, dan produksi autoantibodi. IL-37 yang mampu menekan

GAMBAR 7. Fungsi dan mekanisme IL-37-memproduksi CD4 + T sel di MG. Beredar CD4 + sel T berfungsi sebagai sumber seluler utama IL-37, yang mengikat untuk SIGIRR reseptor yang disebut,
The Journal of Immunology 9

31. Luo, Y., X. Cai, S. Liu, S. Wang, C. A. Nold-Petry, M. F. Nold, P. Bufler,

pengungkapan
D. Norris, C. A. Dinarello, and M. Fujita. 2014. Suppression of antigen-specific adaptive immunity by IL-37
The authors have no financial conflicts of interest. via induction of tolerogenic dendritic cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 111: 15178–15183.

32. Moretti, S., S. Bozza, V. Oikonomou, G. Renga, A. Casagrande, R. G. Iannitti,

References M. Puccetti, C. Garlanda, S. Kim, S. Li, et al. 2014. IL-37 inhibits inflammasome activation and disease
severity in murine aspergillosis. PLoS Pathog. 10: e1004462.
1. Nations, S. P., G. I. Wolfe, A. A. Amato, C. E. Jackson, W. W. Bryan, and
R. J. Barohn. 1999. Distal myasthenia gravis. Neurology 52: 632–634.
33. Ye, L., B. Jiang, J. Deng, J. Du, W. Xiong, Y. Guan, Z. Wen, K. Huang, and
2. Conti-Fine, B. M., M. Milani, and H. J. Kaminski. 2006. Myasthenia gravis: past, present, and future. J. Clin.
Z. Huang. 2015. IL-37 alleviates rheumatoid arthritis by suppressing IL-17 and IL-17-triggering cytokine
Invest. 116: 2843–2854.
production and limiting Th17 cell proliferation.
3. Meriggioli, M. N., and D. B. Sanders. 2009. Autoimmune myasthenia gravis: emerging clinical and biological
J. Immunol. 194: 5110–5119.
heterogeneity. Lancet Neurol. 8: 475–490.
34. Wu, B., K. Meng, Q. Ji, M. Cheng, K. Yu, X. Zhao, H. Tony, Y. Liu, Y. Zhou,
4. Gilhus, N. E. 2012. Myasthenia and the neuromuscular junction. Curr. Opin.
C. Chang, et al. 2014. Interleukin-37 ameliorates myocardial ischaemia/ reperfusion injury in mice. Clin.
Neurol. 25: 523–529.
Exp. Immunol. 176: 438–451.
5. Zhang, B., J. S. Tzartos, M. Belimezi, S. Ragheb, B. Bealmear, R. A. Lewis,
35. McNamee, E. N., J. C. Masterson, P. Jedlicka, M. McManus, A. Grenz,
W. C. Xiong, R. P. Lisak, S. J. Tzartos, and L. Mei. 2012. Autoantibodies to lipoprotein-related protein 4 in
C. B. Collins, M. F. Nold, C. Nold-Petry, P. Bufler, C. A. Dinarello, and
patients with double-seronegative myasthenia gravis. Arch. Neurol. 69: 445–451.
J. Rivera-Nieves. 2011. Interleukin 37 expression protects mice from colitis.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 108: 16711–16716.
6. Hoch, W., J. McConville, S. Helms, J. Newsom-Davis, A. Melms, and
36. Coll-Miro´, M., I. Francos-Quijorna, E. Santos-Nogueira, A. Torres-Espin,
A. Vincent. 2001. Auto-antibodies to the receptor tyrosine kinase MuSK in patients with myasthenia gravis
P. Bufler, C. A. Dinarello, and R. Lo´pez-Vales. 2016. Beneficial effects of IL-37 after spinal cord injury in
without acetylcholine receptor antibodies. Nat. Med. 7: 365–368.
mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 113: 1411–1416.

Downloaded from
37. Ballak, D. B., J. A. van Diepen, A. R. Moschen, H. J. Jansen, A. Hijmans,
7. Gilhus, N. E., G. O. Skeie, F. Romi, K. Lazaridis, P. Zisimopoulou, and
G. J. Groenhof, F. Leenders, P. Bufler, M. V. Boekschoten, M. Mu¨ller, et al.
S. Tzartos. 2016. Myasthenia gravis - autoantibody characteristics and their implications for therapy. Nat.
2014. IL-37 protects against obesity-induced inflammation and insulin resistance. [Published erratum
Rev. Neurol. 12: 259–268.
appears in 2015 Nat. Commun. 6: 6039.] Nat. Commun. 5: 4711.
8. Sine, S. M. 2012. End-plate acetylcholine receptor: structure, mechanism, pharmacology, and disease. Physiol.
Rev. 92: 1189–1234.
38. Chen, Z., S. Wang, L. Li, Z. Huang, and K. Ma. 2018. Anti-inflammatory effect of IL-37-producing T-cell
9. Koneczny, I., and R. Herbst. 2019. Myasthenia gravis: pathogenic effects of autoantibodies on
population in DSS-induced chronic inflammatory bowel disease in mice. Int. J. Mol. Sci. 19: 3884.
neuromuscular architecture. Cells 8: E671.
10. Gilhus, N. E., and J. J. G. M. Verschuuren. 2015. Myasthenia gravis: subgroup classification and therapeutic
39. Teng, X., Z. Hu, X. Wei, Z. Wang, T. Guan, N. Liu, X. Liu, N. Ye, G. Deng,

http://www.jimmunol.org/
strategies. Lancet Neurol. 14: 1023–1036.
C. Luo, et al. 2014. IL-37 ameliorates the inflammatory process in psoriasis by suppressing
11. Maggi, L., and R. Mantegazza. 2011. Treatment of myasthenia gravis: focus on pyridostigmine. Clin. Drug
proinflammatory cytokine production. J. Immunol. 192: 1815–1823.
Investig. 31: 691–701.
40. Kim, M. S., A. R. Baek, J. H. Lee, A. S. Jang, D. J. Kim, S. S. Chin, and
12. Skeie, G. O., S. Apostolski, A. Evoli, N. E. Gilhus, I. K. Hart, L. Harms,
S. W. Park. 2019. IL-37 attenuates lung fibrosis by inducing autophagy and regulating TGF- b 1 production
D. Hilton-Jones, A. Melms, J. Verschuuren, and H. W. Horge. 2006. Guidelines for the treatment of
in mice. J. Immunol. 203: 2265–2275.
autoimmune neuromuscular transmission disorders. Eur. J. Neurol. 13: 691–699.
41. Sharma, S., N. Kulk, M. F. Nold, R. Gra¨f, S. H. Kim, D. Reinhardt,
C. A. Dinarello, and P. Bufler. 2008. The IL-1 family member 7b translocates to the nucleus and
13. Gilhus, N. E., S. Tzartos, A. Evoli, J. Palace, T. M. Burns, and
down-regulates proinflammatory cytokines. J. Immunol. 180: 5477–5482.
J. J. G. M. Verschuuren. 2019. Myasthenia gravis. Nat. Rev. Dis. Primers 5: 30.
14. Schaerli, P., K. Willimann, A. B. Lang, M. Lipp, P. Loetscher, and B. Moser.
42. Bulau, A. M., M. F. Nold, S. Li, C. A. Nold-Petry, M. Fink, A. Mansell,
2000. CXC chemokine receptor 5 expression defines follicular homing T cells with B cell helper function. J.
T. Schwerd, J. Hong, A. Rubartelli, C. A. Dinarello, and P. Bufler. 2014. Role of caspase-1 in nuclear
Exp. Med. 192: 1553–1562.
translocation of IL-37, release of the cytokine, and IL-37 inhibition of innate immune responses. Proc. Natl.
15. Fazilleau, N., L. Mark, L. J. McHeyzer-Williams, and M. G. McHeyzerWilliams. 2009. Follicular helper T cells:

at UCL Library Services on February 29, 2020

Acad. Sci. USA 111: 2650–2655.
lineage and location. Immunity 30: 324–335.

43. Kumar, S., C. R. Hanning, M. R. Brigham-Burke, D. J. Rieman, R. Lehr,

16. Crotty, S. 2011. Follicular helper CD4 T cells (TFH). Annu. Rev. Immunol. 29:
S. Khandekar, R. B. Kirkpatrick, G. F. Scott, J. C. Lee, F. J. Lynch, et al. 2002. Interleukin-1F7B
621–663.
(IL-1H4/IL-1F7) is processed by caspase-1 and mature IL-1F7B binds to the IL-18 receptor but does not
17. Vinuesa, C. G., M. A. Linterman, D. Yu, and I. C. MacLennan. 2016. Follicular helper T cells. Annu. Rev.
induce IFN-gamma production.
Immunol. 34: 335–368.
Cytokine 18: 61–71.
18. Vinuesa, C. G., S. G. Tangye, B. Moser, and C. R. Mackay. 2005. Follicular B helper T cells in antibody
44. Li, S., C. P. Neff, K. Barber, J. Hong, Y. Luo, T. Azam, B. E. Palmer, M. Fujita,
responses and autoimmunity. Nat. Rev. Immunol. 5: 853–865.
C. Garlanda, A. Mantovani, et al. 2015. Extracellular forms of IL-37 inhibit innate inflammation in vitro and
in vivo but require the IL-1 family decoy receptor IL-1R8. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 112: 2497–2502.
19. King, C., S. G. Tangye, and C. R. Mackay. 2008. T follicular helper (TFH) cells in normal and dysregulated
immune responses. Annu. Rev. Immunol. 26: 741–766.
45. Nold-Petry, C. A., C. Y. Lo, I. Rudloff, K. D. Elgass, S. Li, M. P. Gantier,
A. S. Lotz-Havla, S. W. Gersting, S. X. Cho, J. C. Lao, et al. 2015. IL-37 requires the receptors IL-18R a and
20. Vinuesa, C. G., I. Sanz, and M. C. Cook. 2009. Dysregulation of germinal centres in autoimmune disease. Nat.
IL-1R8 (SIGIRR) to carry out its multifaceted anti-inflammatory program upon innate signal transduction. Nat.
Rev. Immunol. 9: 845–857.
Immunol. 16: 354–365.
21. Zhang, C. J., C. Wang, M. Jiang, C. Gu, J. Xiao, X. Chen, B. N. Martin, F. Tang,
E. Yamamoto, Y. Xian, et al. 2018. Act1 is a negative regulator in T and B cells via direct inhibition of
46. Simpson, N., P. A. Gatenby, A. Wilson, S. Malik, D. A. Fulcher, S. G. Tangye,
STAT3. Nat. Commun. 9: 2745.
H. Manku, T. J. Vyse, G. Roncador, G. A. Huttley, et al. 2010. Expansion of circulating T cells resembling
22. Luo, C., Y. Li, W. Liu, H. Feng, H. Wang, X. Huang, L. Qiu, and J. Ouyang.
follicular helper T cells is a fixed phenotype that identifies a subset of severe systemic lupus
2013. Expansion of circulating counterparts of follicular helper T cells in patients with myasthenia gravis. J.
erythematosus. Arthritis Rheum.
Neuroimmunol. 256: 55–61.
62: 234–244.
23. Zhang, C. J., Y. Gong, W. Zhu, Y. Qi, C. S. Yang, Y. Fu, G. Chang, Y. Li, S. Shi,
47. Choi, J. Y., J. H. E. Ho, S. G. Pasoto, V. Bunin, S. T. Kim, S. Carrasco,
K. Wood, et al. 2016. Augmentation of circulating follicular helper T cells and their impact on autoreactive B
E. F. Borba, C. R. Gonc¸alves, P. R. D. Costa, E. G. Kallas, et al. 2015. Circulating follicular helper-like T
cells in myasthenia gravis. J. Immunol. 197: 2610–2617.
cells in systemic lupus erythematosus: association with disease activity. Arthritis Rheum. 67: 988–999.

24. Yang, Y., M. Zhang, Y. Ye, S. Ma, L. Fan, and Z. Li. 2017. High frequencies of circulating Tfh-Th17 cells in
48. Ma, J., C. Zhu, B. Ma, J. Tian, S. E. Baidoo, C. Mao, W. Wu, J. Chen, J. Tong,
myasthenia gravis patients. Neurol. Sci. 38: 1599–1608.
M. Yang, et al. 2012. Increased frequency of circulating follicular helper T cells in patients with rheumatoid
arthritis. Clin. Dev. Immunol. 2012: 827480.
25. Linterman, M. A., W. Pierson, S. K. Lee, A. Kallies, S. Kawamoto, T. F. Rayner,
49. Zhu, C., J. Ma, Y. Liu, J. Tong, J. Tian, J. Chen, X. Tang, H. Xu, L. Lu, and
M. Srivastava, D. P. Divekar, L. Beaton, J. J. Hogan, et al. 2011. Foxp3+ follicular regulatory T cells control
S. Wang. 2012. Increased frequency of follicular helper T cells in patients with autoimmune thyroid
the germinal center response. Nat. Med. 17: 975–982.
disease. J. Clin. Endocrinol. Metab. 97: 943–950.

26. Sage, P. T., and A. H. Sharpe. 2015. T follicular regulatory cells in the regulation of B cell responses. Trends 50. Jing, L., S. Kim, L. Sun, L. Wang, E. Mildner, K. Divaris, Y. Jiao, and

Immunol. 36: 410–418. S. Offenbacher. 2019. IL-37- and IL-35/IL-37-producing plasma cells in chronic periodontitis. J. Dent. Res. 98:

27. Dunn, E., J. E. Sims, M. J. H. Nicklin, and L. A. J. O’Neill. 2001. Annotating genes with potential roles in the 813–821.

immune system: six new members of the IL-1 family. Trends Immunol. 22: 533–536.
28. Nold, M. F., C. A. Nold-Petry, J. A. Zepp, B. E. Palmer, P. Bufler, and
C. A. Dinarello. 2010. IL-37 is a fundamental inhibitor of innate immunity. Nat. Immunol. 11: 1014–1022.
29. Boraschi, D., D. Lucchesi, S. Hainzl, M. Leitner, E. Maier, D. Mangelberger,
G. J. Oostingh, T. Pfaller, C. Pixner, G. Posselt, et al. 2011. IL-37: a new antiinflammatory cytokine of the
IL-1 family. Eur. Cytokine Netw. 22: 127–147.
30. Cavalli, G., and C. A. Dinarello. 2018. Suppression of inflammation and acquired immunity by IL-37. Immunol.
Rev. 281: 179–190.
51. Rudloff, I., S. X. Cho, J. C. Lao, D. Ngo, M. McKenzie, C. A. Nold-Petry, and
M. F. Nold. 2017. Monocytes and dendritic cells are the primary sources of interleukin 37 in human immune
cells. J. Leukoc. Biol. 101: 901–911.
52. McCurdy, S., Y. Baumer, E. Toulmin, B. H. Lee, and W. A. Boisvert. 2017. Macrophage-specific expression
of IL-37 in hyperlipidemic mice attenuates atherosclerosis. J. Immunol. 199: 3604–3613.
53. Irvin, C., I. Zafar, J. Good, D. Rollins, C. Christianson, M. M. Gorska, R. J. Martin, and R. Alam. 2014.
Increased frequency of dual-positive TH2/TH17 cells in bronchoalveolar lavage fluid characterizes a
population of patients with severe asthma. J. Allergy Clin. Immunol. 134: 1175–1186.e7.
10
54. Hovhannisyan, Z., J. Treatman, D. R. Littman, and L. Mayer. 2011. Characterization of
interleukin-17-producing regulatory T cells in inflamed intestinal mucosa from patients with inflammatory
bowel diseases. Gastroenterology 140: 957–965.
55. Voo, K. S., Y. H. Wang, F. R. Santori, C. Boggiano, Y. H. Wang, K. Arima,
L. Bover, S. Hanabuchi, J. Khalili, E. Marinova, et al. 2009. Identification of IL-17-producing FOXP3+
regulatory T cells in humans. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 106: 4793–4798.
56. Shuai, X., L. Wei-min, Y. L. Tong, N. Dong, Z. Y. Sheng, and Y. M. Yao. 2015. Expression of IL-37
contributes to the immunosuppressive property of human CD4+CD25+ regulatory T cells. Sci. Rep. 5:
14478.
57. Osborne, D. G., J. Domenico, Y. Luo, A. L. Reid, C. Amato, Z. Zhai, D. Gao,
M. Ziman, C. A. Dinarello, W. A. Robinson, and M. Fujita. 2019. Interleukin-37 is highly expressed in
regulatory T cells of melanoma patients and enhanced by melanoma cell secretome. Mol. Carcinog. 58:
1670–1679.
58. Ponomarev, E. D., K. Maresz, Y. Tan, and B. N. Dittel. 2007. CNS-derived interleukin-4 is essential for the
regulation of autoimmune inflammation and induces a state of alternative activation in microglial cells. J.
Neurosci. 27: 10714–10721.
59. Gulen, M. F., Z. Kang, K. Bulek, W. Youzhong, T. W. Kim, Y. Chen,
C. Z. Altuntas, K. Sass Bak-Jensen, M. J. McGeachy, J. S. Do, et al. 2010. The receptor SIGIRR
suppresses Th17 cell proliferation via inhibition of
THE REGULATORY ROLE AND MECHANISM OF IL-37 IN MG
the interleukin-1 receptor pathway and mTOR kinase activation. Immunity
32: 54–66.
60. Bulek, K., S. Swaidani, J. Qin, Y. Lu, M. F. Gulen, T. Herjan, B. Min,
R. A. Kastelein, M. Aronica, M. Kosz-Vnenchak, and X. Li. 2009. The essential role of single Ig IL-1
receptor-related molecule/toll IL-1R8 in regulation of Th2 immune response. J. Immunol. 182: 2601–2609.
61. Qin, J., Y. Qian, J. Yao, C. Grace, and X. Li. 2005. SIGIRR inhibits interleukin-1 receptor- and toll-like
receptor 4-mediated signaling through different mechanisms. J. Biol. Chem. 280: 25233–25241.
62. Zhao, J., K. Bulek, M. F. Gulen, J. A. Zepp, G. Karagkounis, B. N. Martin,
H. Zhou, M. Yu, X. Liu, E. Huang, et al. 2015. Human colon tumors express a dominant-negative form of
SIGIRR that promotes inflammation and colitis-associated colon cancer in mice. Gastroenterology 149:
1860–1871.e8.
63. Xiao, H., M. F. Gulen, J. Qin, J. Yao, K. Bulek, D. Kish, C. Z. Altuntas, D. Wald,
C. Ma, H. Zhou, et al. 2007. The toll-interleukin-1 receptor member SIGIRR regulates colonic epithelial
homeostasis, inflammation, and tumorigenesis.
Immunity 26: 461–475.
64. Pfeifle, R., T. Rothe, N. Ipseiz, H. U. Scherer, S. Culemann, U. Harre,
J. A. Ackermann, M. Seefried, A. Kleyer, S. Uderhardt, et al. 2017. Regulation of autoantibody activity by
the IL-23-T H 17 axis determines the onset of autoimmune disease. Nat. Immunol. 18: 104–113.
Downloaded from
http://www.jimmunol.org/
at UCL Library Services on February 29, 2020