Deteksi berbasis ELISA dari mislabeled albacore (Thunnus

alalunga) fillet ikan segar dan beku

Esther Carrera, Marina Terni, Ana Montero, Teresa García, Isabel

González & Rosario Martín

Untuk mengutip artikel ini: Esther Carrera, Marina Terni, Ana

Montero, Teresa García, Isabel González & Rosario Martín (2014)
Deteksi berbasis ELISA dari mislabeled albacore (Thunnus
alalunga) fillet ikan segar dan beku, Imunologi Makanan dan
Pertanian, 25: 4, 569-577, DOI: 10.1080 / 09540105.2013.858310

Untuk menghubungkan ke artikel ini :

https://doi.org/10.1080/09540105.2013.858310
Pangan dan Imunologi Pertanian

ISSN: 0954-0105 (Cetak) 1465-3443 (Online) Beranda homepage:

https://www.tandfonline.com/loi/cfai20
 Diterbitkan online : 18 Nov 2013.

Kirim artikel Anda ke jurnal ini

: 418

Tampilan artikelLihat artikel terkait

Lihat data Crossmark

Mengutip artikel: 9 Lihat artikel mengutip

Syarat & Ketentuan lengkap tentang akses dan penggunaan dapat

ditemukan di https://www.tandfonline.com/ action /
journalInformation? journalCode = cfai20
Food dan Imunologi Pertanian, 2014 Vol. 25, No. 4, 569-577,
http://dx.doi.org/10.1080/09540105.2013.858310

Deteksi berbasis elbacore dari albacore (berdasarkan mislabel (Thunnus alalungaThunnus

alalunga)) fillet ikan segar dan beku
Esther Carreraa*, Marina Ternia, ana Monterosebuah,Teresa Garcíab,Isabel Gonzálezb dan Rosario
Martínb

aDepartamento de Ciencias Farmacéuticas y de la Salud, Facultad de Farmacia, Universidad CEU San Pablo, Madrid, Spanyol;
b
Departamento de Nutrición, Bromatología y Tecnología de los Alimentos, Facultad de
Veterinaria, Universidad Complutense de Madrid, Madrid, Spanyol
(Diterima 23 Juli 2013; diterima 20 Oktober 2013)

Suatu uji imunosorben terkait-enzim tidak langsung (ELISA) telah dikembangkan untuk
identifikasi albacore (Thunnus alalunga) dan diferensiasinya dari spesies scombrid lain
yang kurang bernilai seperti tuna sirip kuning (Thunnus albacares), tuna peluru (Auxis
rochei), bonito atlantik (Sarda sarda), tuna bigeye (Thunnus obesus), tunny kecil
(Euthynnus alleteratus) dan cakalang (Katsuwonus pelamis). Pengujian menggunakan
antibodi poliklonal yang ditumbuhkan pada kelinci terhadap ekstrak protein otot yang
larut dari albacore segar. Antibodi poliklonal ini dibuat khusus untuk spesies dengan
memblokirnya dengan protein otot yang larut secara heterolog, memungkinkan
diskriminasi antara albacore segar dan spesies scombrid lainnya, kecuali tuna yellowfin.
Sebanyak 40 fillet segar dan beku albacore komersial dianalisis, menunjukkan pelabelan
yang salah pada 32,5% sampel albacore. Namun, sampel positif (67,5%) dapat berupa
albacore atau tuna sirip kuning dan harus memerlukan uji DNA sebagai teknik
diskriminatif.
Kata kunci: identifikasi spesies; albacore; ELISA tidak langsung; Scombridae

Pendahuluan Peningkatan dalam perdagangan internasional ikan, meningkatnya konsumsi

makanan laut di seluruh dunia dan berbagai tingkat pasokan dan permintaan spesies ikan tertentu
telah menyebabkan kasus-kasus penipuan ekonomi, di mana satu spesies makanan laut secara
ilegal diganti dengan yang lain. Dalam konteks ini, ketertelusuran produk makanan telah menjadi
prioritas pemerintah untuk kebijakan keamanan dan kualitas pangan yang komprehensif dan
terintegrasi, sebagaimana tercermin dalam undang-undang utama makanan Uni Eropa (Parlemen
dan Dewan Eropa [EC] (2002), No. 178/2002) . Dalam lingkup keterlacakan ikan, Peraturan
178/2002 dilengkapi dengan yang lain (Dewan Eropa [EC] (2000), No. 104/2000 dan Komisi
Eropa [EC] (2001), No. 2065/2001), yang menetapkan pelabelan undang-undang tentang
informasi wajib seperti identifikasi spesies, metode produksi, dan asal geografis ikan pada setiap
langkah produksi dan rantai penjualan. Namun, terlepas dari persyaratan hukum ini, penggantian
nama dan mislabelling makanan laut terjadi secara global pada tingkat yang signifikan, merusak
manajemen perikanan dan upaya konservasi dan, akibatnya, menipu konsumen (Jacquet & Pauly,
2008).

*Penulis yang sesuai. Email: escarrera@ceu.es

© 2013 Taylor & Francis

570 E. Carrera et al.
 Ikan dari keluarga Scombridae, yang termasuk spesies tuna, makarel dan bonito, adalah salah
satu kelompok ikan makanan yang paling populer yang menjadi basis perikanan komersial dan
rekreasi yang penting. Distribusi geografis masing-masing spesies berbeda, seperti halnya nilai
komersialnya, dan banyak dari ikan ini hadir sebagai bahan utama atau sekunder dalam berbagai
makanan yang rentan terhadap penipuan. Dalam konteks ini, ikan albacore (Thunnus alalunga)
adalah tuna putih dengan harga premium yang didistribusikan di seluruh dunia dan sangat dihargai
di kalangan konsumen. Membandingkan harga spesies scombrid di pasar makanan grosir
MercaMadrid (Madrid, Spanyol), harga albacore 1,5 kali lebih tinggi dari harga tuna sirip kuning
(Thunnus albacares) dan tuna bigeye (Thunnus obesus), dan lima kali lebih tinggi dari harga tuna
bullet (Auxis rochei), Atlantik bonito (Sarda sarda),kecil (Euthynnus alleteratusikan) dan
cakalang (Katsuwonus pelamis). Meskipun menurut hukum Eropa, hanya Thunnus alalunga yang
dapat secara komersial diberi label sebagai "tuna daging putih" atau "albacore" (Dewan Eropa [EC]
(2000), No. 104/2000), ikan albacore sering menjadi kandidat target substitusi oleh spesies
Scombridae lain yang kurang berharga tetapi serupa dalam atribut sensorik.
Salah satu prasyarat untuk mematuhi peraturan keterlacakan dan pelabelan Eropa adalah
adanya teknik yang dapat digunakan untuk memasukkan identifikasi spesies ikan sepenuhnya dan
secara rutin ke dalam skema keterlacakan (Martinsohn, 2011). Berbagai metode berbasis protein
telah diterapkan untuk identifikasi spesies ikan, seperti teknik elektroforesis dan kromatografi
(Berrini, Tepedino, Borromeo, & Secchi, 2006; Dreyfuss, Cutrufelli, Mageau, & McNamara,
1997; Gill, 1997; Le Fresne , Popova, Le Vacon, & Carton, 2011; Martinez, Šližytė, & Daukšas,
2007). Metode-metode ini telah menunjukkan nilai yang cukup besar dalam kasus-kasus tertentu,
tetapi mereka tidak nyaman untuk analisis sampel rutin karena mereka relatif mahal, memakan
waktu dan rumit untuk dilakukan. Akibatnya, pada tahun-tahun terakhir identifikasi ikan dan
makanan laut, serta daging, susu dan produk makanan lainnya dilakukan secara istimewa oleh
genetik (Armani, Castigliego, Tinacci, Gianfaldoni, & Guidi, 2012; Carrera et al., 1998; Chuang,
Chen, & Shiao, 2012; Dalmasso et al., 2007; Espiñeira, Gonzalez-Lavín, Vieites, & Santaclara,
2009; Pardo & Pérez-Villareal, 2004) dan teknik imunologis (Carrera et al., 1996).
Metode DNA, khususnya yang didasarkan pada reaksi rantai polimerase (PCR) adalah alat
yang sangat spesifik dan dapat diandalkan yang semakin banyak digunakan untuk tujuan otentikasi
dan penelusuran ikan (Asensio, 2007; Bottero & Dalmasso, 2011). Namun, teknik ini agak mahal
dan kelayakan penggunaan rutin mereka di industri makanan masih tergantung pada penurunan
instrumen dan biaya operasional. Sebagai alternatif, uji imunologis dapat digunakan untuk
mengurangi kesulitan dan biaya uji. Khususnya, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
adalah teknik yang paling banyak digunakan untuk keperluan pengaturan dalam otentikasi spesies
karena spesifisitas, kesederhanaan, sensitivitas dan skrining throughput yang tinggi (Asensio,
Gonzalez, Pavon, Garcia, & Martin, 2008; Fæste & Plassen, 2008; Taylor, Patel, & Jones, 1994).
Selain itu, kemajuan dalam teknologi ELISA yang dicapai dalam beberapa tahun terakhir telah
menyebabkan pengembangan cepat berbagai kit komersial stabil yang mudah digunakan yang
berisi semua komponen yang diperlukan untuk verifikasi spesies cepat di setiap titik rantai
pasokan (Bonwick & Smith, 2004).
 Berdasarkan pertimbangan ini, penelitian ini melaporkan penerapan ELISA tidak langsung
berbasis antibodi poliklonal untuk identifikasi albacore dan diferensiasinya dari spesies scombrid
lain yang kurang bernilai seperti tuna yellowfin, tuna mata besar, tuna peluru, bonito atlantik,
bonito atlantik, sedikit tunny dan tuna cakalang Karena penggantian spesies ikan adalah
Imunologi Pangan dan Pertanian 571

masalah yang tersebar luas di seluruh dunia, pengujian semacam itu akan memberikan alat yang
kuat untuk mencegah praktik ilegal serta melindungi konsumen dari kerugian ekonomi dan
mengurangi potensi risiko kesehatan yang terkait dengan penipuan ikan.

Bahan dan metode Persiapan ekstrak antigenik Sampel otot segar albacore, tuna yellowfin, bullet
tuna, bonito atlantic, tuna bigeye, tuna kecil cakra dan cakalang individu otot asli diperoleh dari
pasar makanan grosir MercaMadrid (Madrid, Spanyol) dan diidentifikasi hadir secara morfologis
karakteristik (Bauchot & Pras, 1993).
Ekstrak protein sarkoplasmik antigenik dari lima sampel albacore otentik diperoleh sebagai
berikut: sampel otot segar 200 g yang representatif dihomogenkan secara menyeluruh dalam 1 L
larutan garam (8,5 g NaCl per L) pada 20 ° C menggunakan blender mekanis (Heidolph Elektro
GmbH & CoKG, Kelheim, Jerman). Protein sarkoplasma terlarut (SP) diekstraksi dari otot dengan
agitasi homogenat selama 2 jam pada 20 ° C. Ekstrak sarkoplasma disentrifugasi pada 2500 g
selama 30 menit pada 10 ° C dan supernatan disaring melalui Whatman no. 1 kertas saring dan
diliofilis.
Kandungan protein dari ekstrak liofilis dihitung dengan BCA Protein Assay Kit (Pierce, Rockford,
IL, USA) menggunakan bovine serum albumin sebagai standar protein. Ekstrak protein
sarkoplasma hetereter dari lima sampel segar referensi masing-masing tuna sirip kuning, tuna
peluru, bonito atlantik, tuna mata besar, tuna kecil dan tuna cakalang diperoleh dengan
menggunakan prosedur yang sama.

Produksi dan pemblokiran antiserum poliklonal Antibodi poliklonal terhadap otot SP dari albacore
segar asli (disebut sebagai anti-ASP antibodi) dibesarkan di kelinci putih jantan Selandia Baru.
Imunisasi dimulai dengan injeksi subkutan dari albacore lyophilised ekstrak protein (5 mg) dalam
0,5 mL larutan garam (9 g NaCl / L) (Braun Medis, SA, Barcelona, Spanyol), emulsi dalam 0,5 ml
Freund'sLengkap Adjuvant (Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO, USA). Enam dosis penguat dibuat
di Freund'sIncomplete Adjuvant yang diterapkan oleh injeksi subkutan setiap 16 hari. Setelah 110
hari, kelinci berdarah dan darah dibiarkan menggumpal selama 1 jam pada suhu kamar dan
kemudian semalam pada suhu 4 ° C. Serum dipulihkan dengan sentrifugasi pada 3000 g selama 10
menit pada suhu 4 ° C dan disimpan dalam suhu beku -20 ° C. Antibodi anti-ASP poliklonal
diencerkan 1/5000 dalam larutan salin fosfat (PBS: 0,14 M ClNa, 0,0015 M KH2PO4, 0,081 M NaHPO4·
12H2O, 0,0027 M KCl, pH 7,2) mengandung 2% Tween 20 (PBST). Antibodi kemudian dibuat spesifik spesies

dengan mencampurnya dengan 0,5 mg / mL ekstrak antigenik terliofilis dari spesies heterologis
atlantic bonito, tuna peluru dan tuna mata besar, diikuti dengan inkubasi selama 24 jam pada 37 °
C dan sentrifugasi selama 10 menit pada 2500 g dan 20 ° C. Setelah sentrifugasi, supernatan yang
mengandung antibodi anti-ASP tersumbat digunakan dalam uji ELISA tidak langsung.

Persiapan sampel ikan Ekstrak cair yang mengandung SP diperoleh dari sampel segar otentik
masing-masing albacore, tuna sirip kuning, tuna peluru, bonito atlantik, tuna mata besar, tuna kecil
dan cakalang mengikuti prosedur yang dijelaskan sebelumnya untuk persiapan ekstrak antigenik,
572 E. Carrera et al.

menghilangkan langkah liofilisasi. Ekstrak cairan yang disaring diencerkan 1/1, 1/10, 1/50 dan
1/100 dalam PBS sebelum dianalisis dengan teknik ELISA.
Selain itu, untuk memeriksa efek dari perawatan termal pada teknik'skemampuan untuk
membedakan spesies sasaran, semua sampel ikan otentik yang homogen dalam blender dengan 1:
2 bagian 0,05 M PBS, pH 7,2 (PBS). Homogenat dipanaskan selama 30 menit dalam autoklaf pada
121 ° C, disentrifugasi pada 1000 g dan supernatan disaring melalui Whatman no. 1 saring kertas
dan simpan pada -20 ° C sampai digunakan dalam prosedur ELISA (Rencová, Svoboda, &
Necidová, 2000).
Empat puluh sampel komersial yang terdiri dari 20 fillet segar dan beku dari individu yang
berbeda diberi label "albacore" diperoleh dari representasi luas pasar lokal dan supermarket di
Madrid (Spanyol). Semua sampel diangkut ke laboratorium dalam kondisi yang terkendali.
Setibanya, mereka segera diproses atau disimpan beku pada -20 ° C sampai digunakan.

ELISA Tidak Langsung Piring mikro-ELISA dengan dasar datar (Costar, Corning, NY, USA)
dilapisi dengan 0,1 mL ekstrak sampel otot yang disaring, diencerkan dalam PBS, pH 7,2. Pelat
diinkubasi selama 1 jam pada 20 ° C dan sumur kemudian dicuci lima kali dengan PBST (PBS
mengandung 1% Tween 20) sebelum dilapisi dengan 0,3 mL susu bubuk skim 2% dalam PBS.
Setelah 30 menit inkubasi pada 20 ° C, piring dicuci lima kali dengan PBST. Kemudian, 0,1 mL
alikuot dari antibodi anti-ASP tersumbat yang diencerkan dalam PBST (1/5000) ditambahkan ke
dalam sumur. Pelat diinkubasi pada pengocok pelat selama 1 jam pada 20 ° C. Setelah mencuci
lima kali lagi dengan PBST untuk menghilangkan antigen heterolog dan antibodi yang tidak
terikat, 0,1 mL alikuot dari imunoglobulin anti-kelinci terkonjugasi peroksidase (DAKO, DK 2600
Glostrup, Denmark) diencerkan dalam PBST (1/2000) ditambahkan ke dalam sumur. Pelat
diinkubasi dengan gemetar selama 1 jam pada 20 ° C dan sumur dicuci lima kali dengan air suling
sebelum penambahan 0,15 mL siap untuk menggunakan solusi substrat dari 3,3'5,5'-
tetramethylbenzidine (Sigma, Saint Louis, Missouri, AS). Setelah 10 menit inkubasi, reaksi
dihentikan dengan penambahan 0,05 mL 1 MH2SO4 untuk masing-masing sumur. Warna kuning dikembangkan oleh konversi,
dan substrat diukur pada 450 nm dengan spektrofotometer (DigiScan Reader, Asys Hitech,
Austria) menggunakan perangkat lunak Digiwin V 3.2.

Hasil dan diskusi Keaslian dan keterlacakan ikan adalah subyek yang sangat memprihatinkan
bagi industri makanan, karena pelabelan yang salah dapat mewakili penipuan komersial dengan
dampak ekonomi dan kesehatan masyarakat (Martinsohn, 2011). Untuk menegakkan kepatuhan
terhadap undang-undang, produsen dan agen pengontrol makanan ditantang untuk
mengembangkan dan menerapkan metode analitik yang sesuai untuk identifikasi ikan yang dapat
mencegah kesalahan deskripsi yang tidak jujur dan memungkinkan penarikan produk secara cepat.
Di antara metode-metode ini, ELISA adalah cara sederhana, efektif dan fleksibel untuk mendeteksi
substitusi spesies ikan di setiap titik rantai pasokan, memberikan uji coba dengan kecepatan dan
otomatisasi dan mengurangi biaya peralatan canggih (Asensio, Gonzalez, Garcia, & Martin, 2008;
Fæste & Plassen, 2008).
Baik antibodi poliklonal maupun monoklonal telah digunakan dalam berbagai pendekatan
berbasis ELISA untuk identifikasi spesies ikan, masing-masing memiliki kelebihan dan aplikasi
yang bermanfaat. Antibodi monoklonal adalah populasi homogen antibodi berdasarkan
hybridoma- menunjukkan aktivitas biologis didefinisikan dan spesifisitas tinggi secara konsisten
Pangan dan Pertanian Imunologi 573

(Harlow & Lane, 1999).Namun, antibodi poliklonal dapat menawarkan kekuatan sinyal yang lebih
baik dengan mengenali campuran epitop antigen yang berbeda, dan lebih toleran terhadap
perubahan kecil dalam sifat antigen. Selain itu, jumlah besar relatif cepat dan murah untuk
diproduksi dibandingkan dengan antibodi monoklonal. Antibodi poliklonal telah berhasil
diproduksi terhadap sejumlah target ikan untuk digunakan dalam berbagai format ELISA untuk
identifikasi spesies. Ini termasuk, misalnya, antibodi terhadap protein parvalbumin dari cod
atlantic (Fæste & Plassen, 2008), protein tropomyosin dari krustasea (Fuller, Goodwin, & Morris,
2006) atau protein yang larut dalam otot dari spesies ikan yang berbeda seperti ikan kerapu, ikan
rongsokan dan Nil bertengger (Asensio, 2007), kerang (Fernández et al., 2002) dan berbagai
spesies ikan pipih (Cespedes et al., 1999). Dalam karya ini, kami melaporkan pengembangan
ELISA tidak langsung menggunakan antibodi poliklonal yang diperoleh terhadap albacore SP asli,
dan aplikasinya untuk membedakan spesies ini dari spesies Scombridae lain yang bernilai lebih
rendah secara komersial dan rentan dicap sebagai albacore di tingkat pasar.
Seperti dapat dilihat pada Gambar 1(a), antibodi anti-ASP poliklonal menunjukkan reaktivitas
ELISA yang kuat terhadap ekstrak antigenik cair dari ikan yellowfin tuna heterogen, tuna peluru,
bonito atlantik, tuna mata besar, tuna kecil dan tuna cakalang. Hasil ini diharapkan, karena ekstrak
antigenik yang digunakan untuk imunisasi mengandung semua protein otot yang larut dari
albacore dan mungkin ada banyak epitop yang dibagi dalam protein yang sama dari spesies
Scombridae terkait lainnya. Oleh karena itu, untuk digunakan dalam ELISA tidak langsung,
antibodi poliklonal anti-ASP diberikan khusus-spesies dengan mencampurkannya dengan ekstrak
antigenik terliofilis dari spesies heterolog dalam proses yang dikenal sebagai “pemblokiran”
(Asensio et al., 2003; Song, Xue, & Han, 2011). Setelah melakukan beberapa percobaan
menggunakan semua spesies ikan heterolog yang termasuk dalam penelitian ini, hasil pemblokiran
optimal diperoleh dengan mencampurkan antibodi anti ASP (diencerkan 1/5000) dengan 0,5 mg /
mL ekstrak antigenik dari bonito atlantic, tuna peluru dan bigeye tuna. Jelas, ketiga spesies ikan
heterolog ini (bonito atlantik, tuna peluru dan tuna mata besar) mengandung protein yang
menunjukkan epitop paling banyak dibagikan dari spesies Scombridae yang diteliti.
Efektivitas prosedur pemblokiran untuk antibodi anti-ASP ditunjukkan pada Gambar 1(b).
Seperti dapat dilihat, setelah antibodi bereaksi silang diblokir oleh protein heterolog, antiserum
anti-ASP mengenali ekstrak antigenik yang dihasilkannya (albacore), meskipun itu menunjukkan
reaktivitas silang yang kuat dengan ekstrak antigenik tuna yellowfin. Hasil ini menunjukkan
bahwa pemblokiran antibodi anti-ASP dengan ekstrak antigen spesies heterolog yang terliofilis
menghilangkan sebagian besar reaksi silang yang ditemukan dengan spesies heterolog tetapi tidak
cukup untuk membedakan albacore dari tuna sirip kuning. Meskipun ini merupakan kerugian
dalam menyusun uji keaslian untuk albacore, kesederhanaan, biaya rendah dan waktu yang singkat
yang diperlukan selama tes ELISA ini membuatnya cocok untuk tujuan penyaringan lapangan
untuk membedakan albacore dan tuna sirip kuning dari sisa spesies scombrid.
Di sisi lain, antibodi poliklonal yang diperoleh terhadap otot asli SP dari albacore asli tidak
menunjukkan reaktivitas ELISA terhadap ekstrak antigenik yang dipanaskan dari albacore, tuna
sirip kuning, tuna peluru, atlantic bonito, tuna mata besar, tuna kecil dan cakalang (hasil tidak
ditunjukkan), dan tidak memungkinkan penggunaannya untuk otentikasi produk yang dipanaskan
dengan albacore.
Setelah kondisi immunoassay ditetapkan, penerapan teknik ELISA dievaluasi lebih lanjut
melalui analisis 40 sampel ikan komersial (fillet) berlabel albacore (20 sampel segar dan 20
sampel beku), yang diperoleh dari representasi luaslokal
pasardi Madrid, Spanyol). Deskripsi salah spesies pada tingkat ini harus dicegah, karena albacore
segar dan beku dianggap oleh para ahli ikan sebagai salah satu pilihan terbaik untuk banyak resep
berkualitas tinggi (Chuang, Chen, & Shiao, 2012; Michelini et al., 2007). Hasil yang diperoleh
dengan menggunakan ELISA tidak langsung yang dijelaskan menunjukkan 13 sampel (32,5%),
dari 40 sampel ikan yang dianalisis, tidak tepat (nilai negatif) di pasar ikan, semuanya sampel
beku. Nilai absorbansi sampel negatif mirip dengan bacaan latar belakang (0,1-0,2), sedangkan
sampel positif mencapai nilai lebih tinggi dari 1,0. Namun, sampel positif (67,5%) dapat berupa
albacore atau tuna sirip kuning karena antibodi anti-ASP tidak dapat membedakan antara kedua
spesies ini. Oleh karena itu, uji DNA akan diperlukan untuk membedakan albacore dari tuna sirip
kuning.
574 E. Carrera et al.

Gambar 1. Analisis ELISA tidak langsung dari ekstrak cairan protein yang larut otot dari albacore
(Thunnus alalunga, ♦), atlantic bonito (Sarda sarda, ▪), tuna peluru (tunaAuxis rochei, ▴),kecil
(Euthynnus alleteratus, ×), tuna cakalang(Katsuwonuspelamis, ж),tuna bigeye(Thunnusobesus,
•)dankuningfin tuna(Thunnusalbacares,+), menggunakan-albacore anti antibodi poliklonal
diencerkan dalam PBST (1/5000) dan peroksidase-terkonjugasi kambing anti-kelinci
imunoglobulin diencerkan dalam PBST (1/2000). Hasilnya ditunjukkan sebelum (a) dan setelah
(b) proses pemblokiran.
Imunologi Pangan dan Pertanian 575

Faktanya, metode DNA berdasarkan teknologi PCR telah berhasil dikembangkan untuk
identifikasi cepat spesies Scombridae dalam sampel mentah dan diproses (Chuang, Chen, & Shiao,
2012; Michelini et al., 2007; Pardo & Pérez -Villareal, 2004; Quinteiro et al., 1998; Ram, Ram, &
Baidoun, 1996; Rehbein et al., 1999). Ini termasuk, misalnya, PCR diikuti oleh analisis filogenetik
untuk otentikasi spesies scombrid menggunakanmitokondria sitokrom b dan sitokrom c oksidase I
sebagai penanda molekuler (Cawthorn, Steinman, & Witthuhn, 2011; Espiñeira, Gonzalez-Lavín,
Vieites, & Santaclara , 2009); polimorfisme panjang fragmen restriksi-PCR (PCR-RFLP) (Aguilar,
Alonso, & Barrero, 2012; Lin & Hwang, 2007); atau PCR waktu-nyata (Chuang, Chen, & Shiao,
2012).
Terlepas dari kenyataan bahwa metode ELISA yang dikembangkan tidak dapat membedakan
albacore dari tuna sirip kuning, aplikasinya memungkinkan penyaringan cepat untuk jumlah
sampel yang tinggi, mengurangi jumlah analisis pasca-DNA untuk otentikasi spesimen albacore.
Kedua prosedur, teknik ELISA dan berbasis PCR, adalah alat pelengkap dan andal untuk deteksi
spesifik dari fillet albacore berlabel tidak tepat.

Referensi Aguilar, A., Alonso, G., & Barrero, M. (2012). Identifikasi spesies komersial tuna
(Thunnus spp.) Di Venezuela menggunakan teknik PCR. Revista Cientifica-Facultad De Ciencias
Veterinarias, 22, 368-375. Armani, A., Castigliego, L., Tinacci, L., Gianfaldoni, D., & Guidi, A.
(2012). Multiplex PCR konvensional dan real-time untuk identifikasi spesies ikan bianchetto
(bentuk remaja dari Sardina pilchardus), rossetto (Aphia minuta), dan es di produk segar,
diasinkan dan dimasak. Kimia Makanan, 133, 184-192. doi:10.1016 / j.foodchem.2011.12.076
Asensio, L. (2007). Metode berbasis PCR untuk otentikasi ikan dan produk perikanan. Tren dalam
Ilmu & Teknologi Pangan, 18, 558-566. doi:10.1016 / j.tifs.2007.04.016 Asensio, L., Gonzalez,
I., Garcia, T., & Martin, R. (2008). Penentuan keaslian makanan dengan enzyme-linked
immunosorbent assay (ELISA). Food Control, 19(1), 1-8. doi:10.1016 / j.food cont.2007.02.010
Asensio, L., Gonzalez, I., Pavon, MA, Garcia, T., & Martin, R. (2008 ). ELISA tidak langsung dan
teknik PCR untuk mendeteksiidentifikasi Kerapu (Epinephelus marginatuskesalahan). Aditif dan
Kontaminan Makanan, 25, 677-683. doi:10.1080 / 02652030701765731 Asensio, L., Gonzalez, I.,
Rodriguez, MA, Hernandez, PE, Garcia, T., & Martin, R. (2003). Pengembangan antibodi
monoklonal untuk ikan kerapu (Epinephelus marginatus) dan bangkai ikan (Polyprion
americanus) menggunakan ELISA tidak langsung. Jurnal Ilmu Pangan, 68, 1900-1903.
doi:10.1111 / j.1365-2621.2003.tb06990.x Bauchot, ML, & Pras, A. (1993). Guía de los peces de
mar de España y Europa [Panduan ikan laut di
Spanyol dan Eropa]. Barcelona: Ediciones Omega, SA Berrini, A., Tepedino, V., Borromeo, V.,
& Secchi, C. (2006). Identifikasi ikan air tawar yang secara komersial berlabel "hinggap" oleh
fokus isoelektrik dan elektroforesis dua dimensi. Kimia Makanan, 96, 163-168. doi:10.1016 /
j.foodchem.2005.04.007 Bonwick, GA, & Smith, CJ (2004). Immunoassays: Sejarah mereka,
perkembangan dan tempat saat ini dalam ilmu dan teknologi pangan. International Journal of
Food Science & Technology, 39, 817-827. doi:10.1111 / j.1365-2621.2004.00855.x Bottero, MT,
& Dalmasso, A. (2011). Identifikasi spesies hewan dalam produk makanan: Evolusi metode
biomolekul. The Veterinary Journal, 190(1), 34-38. doi:10.1016 / j.tvjl.2010.09.024 Carrera, E.,
García, T., Céspedes, A., González, I., Sanz, B., Hernández , PE, & Martín, R. (1998). Identifikasi
salmon Atlantik (salmo salar) dan rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) dengan menggunakan
amplifikasi reaksi berantai polimerase dan analisis restriksi gen mitokondria sitokrom b gen.
Jurnal Perlindungan Pangan, 61, 482-486. Carrera, E., Martín, R., García, T., González, I., Sanz,
B., & Hernández, PE (1996). Pengembangan uji imunosorben terkait-enzim untuk identifikasi
salmon asap (Salmo
576 E. Carrera et al.

Salar), trout (Oncorhynchus mykiss) dan bream (Brama raii). Jurnal Perlindungan Makanan, 59,
521-524. Cawthorn, DM, Steinman, HA, & Witthuhn, R. (2011). Pembentukan pangkalan data
sekuens DNA mitokondria untuk identifikasi spesies ikan yang tersedia secara komersial di Afrika
Selatan. Sumberdaya Ekologi Molekuler, 11, 979-991. doi:10.1111 / j.1755-0998.2011.03039.x
Cespedes, A., Garcia, T., Carrera, E., Gonzalez, I., Fernandez, A., Asensio, L., ... Martin, R.
(1999). Uji imunosorben terkait-enzim tidak langsung untuk identifikasi sol (Solea solea),Eropa
(plakPleuronectes platessa), flounder (Platichthys flesus), dan Greenland halibut (Reinhardtius
hippoglossoides). Jurnal Perlindungan Makanan, 62, 1178-1182. Chuang, PS, Chen, MI, & Shiao,
JC (2012). Identifikasi spesies tuna dengan teknik reaksi berantai polimerase waktu-nyata. Kimia
Makanan, 133, 1055-1061. doi:10.1016 / j.foodchem. 2012.01.076 Dalmasso, A., Fontanella, E.,
Piatti, P., Civera, T., Secchi, C., & Bottero, MT (2007). Identifikasi empat spesies tuna melalui
PCR real-time dan analisis kurva leleh. Veterinary Research Communications, 31, 355-357.
doi:10.1007 / s11259-007-0036-1 Dreyfuss, MS, Cutrufelli, ME, Mageau, RP, & McNamara, AM
(1997). Uji imunodifusi agar-gel untuk identifikasi cepat surimi pollock dalam produk daging
mentah. Jurnal Ilmu Pangan, 62, 972-975. doi:10.1111 / j.1365-2621.1997.tb15018.x Espiñeira,
M., Gonzalez-Lavín, N., Vieites, JM, & Santaclara, FJ (2009). Pengembangan metode untuk
identifikasi scombroid dan spesies pengganti umum dalam produk makanan laut oleh FINS. Kimia
Pangan, 117, 698-704. doi:10.1016 / j.foodchem.2009.04.087 Komisi Eropa. (2001). Peraturan
(EC), No. 2065/2001. Menyusun aturan terperinci untuk penerapan Peraturan Dewan (EC) No.
104/2000 tentang menginformasikan konsumen tentang produk perikanan dan akuakultur. Jurnal
Resmi Masyarakat Eropa, L278, 6-8. Dewan Eropa. (2000). Regulasi (EC) No. 104/2000. Pada
organisasi umum pasar dalam produk perikanan dan akuakultur. Jurnal Resmi Masyarakat Eropa,
L17, 22-52. Parlamien dan Dewan Eropa. (2002). Regulasi (EC) No. 178/2002. Meletakkan
prinsip umum dan persyaratan hukum pangan, membentuk Otoritas Keamanan Pangan Eropa dan
menetapkan prosedur dalam hal keamanan pangan. Jurnal Resmi Masyarakat Eropa, L31, 1-24.
Fæste, CK, & Plassen, C. (2008). Sandwich sandwich ELISA kuantitatif untuk penentuan ikan
dalam
makanan. Jurnal Metode Imunologis, 329, 45-55. doi:10.1016 / j.jim.2007.09.007 Fernández,
A., García, T., Asensio, L., Rodríguez, MA, González, I., Lobo, E. , ... Martín, R. (2002).
Identifikasi spesies kerang Ruditapes decussatus (cangkang karpet beralur), Venerupis romboides
(cangkang karpet kuning) dan Venerupis pullastra (cangkang karpet pullet) oleh ELISA.
Imunologi Pangan dan Pertanian, 14, 65-71. doi:10.1080 / 09540100220137673 Fuller, SDM,
Goodwin, PR, & Morris, GE (2006). Uji immunosorbent terkait-enzim (ELISA) terkait untuk
alergen krustasea utama, tropomyosin, dalam makanan. Imunologi Pangan dan Pertanian, 17, 43-
52. doi:10.1080 / 09540100600572651 Gill, TA (1997). Alat analisis canggih dalam ilmu makanan
laut. Dalam JB Luten, T. Borresen, & J. Oehlenschlager (Eds.), Seafood dari produsen ke
konsumen, pendekatan terintegrasi untuk kualitas (vol. 38, hal. 479-490). Amsterdam: Elsevier
Science Bv. Harlow, E., & Lane, D. (1999). Menggunakan antibodi. Manual laboratorium. New
York, NY: Cold
Spring Harbor Laboratory Press. Jacquet, JL, & Pauly, D. (2008). Rahasia dagang: Mengganti
nama dan memberi label kesalahan pada makanan laut. Kelautan
Kebijakan, 32, 309-318. doi:10.1016 / j.marpol.2007.06.007 Le Fresne, S., Popova, M., Le
Vacon, F., & Carton, T. (2011). Penerapan denaturasi kromatografi cair kinerja tinggi (DHPLC)
untuk identifikasi ikan: Cara baru untuk menentukan komposisi makanan olahan yang
mengandung banyak spesies. Jurnal Kimia Pertanian dan Pangan, 59, 12302-12308.
doi:10.1021 / jf2030242 Lin, WF, & Hwang, DF (2007). Penerapan analisis PCR-RFLP pada
identifikasi spesies
tuna kalengan. Food Control, 18, 1050-1057. doi:10.1016 / j.foodcont.2006.07.001 Martinez, I.,
Šližytė, R., & Daukšas, E. (2007). Elektroforesis dua dimensi resolusi tinggi sebagai alat untuk
membedakan liar dari ikan cod (Gadus morhua) dan untuk menilai komposisi protein klipfish.
Kimia Makanan, 102, 504-510. doi:10.1016 / j.foodchem.2006.03.037
Imunologi Pangan dan Pertanian 577

Martinsohn, JT (2011). Identifikasi spesies ikan. Di Komisi Eropa JRC (Red.), Menangkal
kegiatan ilegal di sektor perikanan. Genetika, genomik, kimia, dan forensik untuk melawan
penangkapan ikan IUU dan untuk mendukung keterlacakan produk ikan (hal. 32-33). Luxemburg:
Kantor Publikasi Uni Eropa. Michelini, E., Cevenini, L., Mezzanotte, L., Simoni, P., Baraldini,
M., De Laude, L., & Roda, A. (2007). Uji reaksi rantai triplex-polimerase satu langkah untuk
otentikasi yellowfin (Thunnus albacares), bigeye (Thunnus obesus), dan cakalang (Katsuwonus
pelamis) DNA tuna dari sampel tuna segar, beku, dan kalengan. Jurnal Kimia Pertanian dan
Pangan, 55, 7638-7647. doi:10.1021 / jf070902k Pardo, MA, & Pérez-Villareal, B. (2004).
Identifikasi spesies tuna kalengan komersial dengan analisis situs pembatasan produk DNA
mitokondria yang diperoleh dengan PCR primer bersarang. Kimia Makanan, 86, 143-150.
doi:10.1016 / j.foodchem.2003.09.024 Quinteiro, J., Sotelo, CG, Rehbein, H., Pryde, SE, Madinah,
I., Pérez-Martín, RI ,. .. Mackie, IM (1998). Penggunaan sekuens mtDNA direct polymerase chain
reaction (PCR) dan PCR- restriksi panjang fragmen polimorfisme metodologi dalam identifikasi
spesies tuna kaleng. Jurnal Kimia Pertanian dan Pangan, 46, 1662-1669. doi:10.1021 / jf970552
+ Ram, JL, Ram, ML, & Baidoun, FF (1996). Otentikasi tuna kalengan dan bonito dengan analisis
urutan dan situs restriksi produk reaksi berantai polimerase DNA mitokondria. Journal of
Agricultural and Food Chemistry, 44, 2460–2467. doi:10.1021/jf950822t Rehbein, H., Mackie,
IM, Pryde, S., Gonzales-Sotelo, C., Medina, I., Perez-Martin, R., ... Rey- Mendez, M. (1999). Fish
species identification in canned tuna by PCR-SSCP: Validation by a collaborative study and
investigation of intra-species variability of the DNA-patterns. Food Chemistry, 64, 263–268.
doi:10.1016/S0308-8146(98)00125-3 Rencová, E., Svoboda, I., & Necidová, L. (2000).
Identification by ELISA of poultry, horse, kangaroo, and rat muscle specific proteins in heat-
processed products. Veterinary Medicine, 45, 353–356. Song, H., Xue, H., & Han, Y. (2011).
Detection of cow's milk in Shaanxi goat's milk with an
ELISA assay. Food Control, 22, 883–887. doi:10.1016/j.foodcont.2010.11.019 Taylor, WJ,
Patel, NP, & Jones, JL (1994). Antibody based methods for assessing seafood authenticity. Food
and Agricultural Immunology, 6, 305–314. doi:10.1080/09540109409354842