MODUL 6 KLONING DNA .

TUGAS PJJ –MODUL 6

KLONING DNA

1. Pada proses ligasi DNA dengan enzim ligase, diperlukan buffer yang komposisinya
mengandung ATP.
Jelaskan mengapa diperlukan ATP dalam proses ligase DNA tersebut.

2. Sel E.coli yang membawa plasmid pGEM-T Easy yang tersisipi DNA asing pada MCS-nya
akan tumbuh sebagai koloni sel yang berwarna putih pada media agar yang mengandung
ampisilin, IPTG dan X-Gal, sedangkan sel E.coli yang membawa plasmid pGEM-T Easy tanpa
DNA sisipan akan tumbuh sebagai koloni sel yang berwarna biru.

a. Jelaskan mengapa terjadi perbedaan warna koloni tersebut.

b. Gambarkan struktur kimia X-Gal (5-bromo-4-kloro-3-indol--D-galaktosida) tuliskan

persamaan reaksinya jika dihidrolisis oleh enzim -galaktosidase.

3. E.coli sendiri sebenarnya memiliki gen -galaktosidase tapi pada E.coli JM109 yang
digunakan pada kloning, gen -galaktosidase-nya telah didelesi.

a. Jelaskan apa yang dimaksud dengan delesi gen.

b. Jelaskan mengapa pada kloning dengan metode seleksi biru-putih harus menggunakan sel
E. coli yang gen -galaktosidase-nya sudah didelesi?

4. Galaktosa adalah substrat untuk enzim -galaktosidase (yang dikode oleh gen lacZ). Jelaskan
mengapa pada proses kloning dengan plasmid pGEM-T Easy, tidak menggunakan galaktosa
sebagai substrat.

5. Jika suatu gen akan dikloning ke dalam masing-masing plasmid di bawah ini menggunakan
sel E.coli sebagai inang:

(i) pGEM-T Easy dan

(ii) plasmid pBAD

Jelaskan bagaimana perbedaan kloning dan identifikasi hasil kloning dari kedua plasmid
tersebut seperti pada tabel:

(peta plasmid dapat dilhat pada halaman berikutnya)

a.
Kloning ke
Proses Kloning
Plasmid pGEM-T Easy Plasmid pBAD
Cara memperoleh
gen target yang
akan diisolasi
Perlakuan terhadap
plasmid
Perlakuan terhadap
gen yang akan
disisipkan

PRAKTIKUM GENETIKA DAN BIOLOGI MOLEKULER RFK

MODUL 6 KLONING DNA .

Identifikasi hasil Kloning ke

klonig Plasmid pGEM-T Easy Plasmid pBAD
Media seleksi harus
mengandung
Cara identifikasi
awal
Identifikasi untuk
konfirmasi

PRAKTIKUM GENETIKA DAN BIOLOGI MOLEKULER RFK