ANTIBODI

(FUNGSI, STRUKTUR, GENETIK)

Disulfide bond

Carbohydrate

CL
VL

CH2 CH3
CH1
Hinge Region
VH

Dr. Tetty Aman Nasution,MMedSc

Departemen Mikrobiologi
FK-USU
The Immune Response - Overview
Humoral and cellular immunity
(antibody mediated or cellular)
The big picture…Integration of innate and adaptive immunity
 ANTIBODI
• Protein yang mengandung bahan
larut tanpa sel, disebut “globulin”
– Immunoglobulin (Ig)
– Pemisahan secara elektroforesis, Ig
terbanyak gamma, juga ada alfa & beta
–CCiri-ciri
c ya yang
g pe
penting
t g ada 2 yaitu:
ya tu
spesifisitas dan aktivitas biologik
 Immunoglobulins

• Molekul Glycoprotein yang diproduksi oleh

sel plasma akibat respon terhadap imunogen
dan berfungsi sebagai Antibodi

+ -
albumin
Amount of protein

globulins

ά1 ά2 β γ Immune serum
2  Ag adsorbed serum

Mobility
 Produksi Antibodi
) Immunoglobulin (Ig) dibentuk oleh sel plasma,
berasal dari proliferasi sel B, akibat kontak
d
dengan A
Antigen
ti

) Antibodi
A tib di tterbentuk
b t k secara spesifik
ifik iinii akan
k
mengikat antigen baru lainnya yang sejenis
 Specificity and Biological Activity
• Spesifisitas (Specificity)
– Struktur antibodi Æ memiliki hypervariable
yp region
g atau
complementary-determining region (CDR)
– Berikatan secara khusus & terbatas pada struktur antigen
tertentu

• Aktivitas Biologik (Biological Activity)

– Neutralization toxin dan aktivitas virus
– Immobilisasi dari mikroorganisme
– Agglutination (clumping) dari microorganisme
– Berikatan dengan Ag terlarut menuju peristiwa precipitation
(phagocytosis)
– A
Activating
ti ti complement
l t system
t : memfasilitasi
f ilit i lysis,
l i dan
d
fagositosis
Constant and Variable Regions
Antibody Structure

CH
VH
CL
VL
 Struktur Light & Heavy Chains
• Analisis Struktur
– Papain digestion (Porter,1959)
– Enzim papain memecah pd hinge region
• 3 fragments (MW = 150,000 Da), 45,000 Da/each
• Fab fragments (Fragmen antigen binding)
– Tetap memiliki sifat Antibodi, mengikat Ag
– Bereaksi dengan
g determinan Antigen
g dan hapten
p
– Univalent
– 2 fragmen yang identik
• Fc fragment (fragment crystallizable)
– Dapat dikristalkan dari larutan
– Tidak dapat mengikat Ag
– Menunjukkan fungsi biologis sesudah Ag diikat oleh Fab
 Struktur Light & Heavy Chains
• Pemecahan oleh enzim Pepsin
– Memecah pada asam amino sebelum ikatan disulfid
– Divalent fragment disebut sebagai F(ab’)2
– Terbentuk beberapa Fc subfragments

• INTRA-chain disulfide bond membentuk

immunoglobulin-fold domains (loops in the chains)
• Loops ini membentuk antiparallel b-pleated sheets yg
merupakan karakteristik molekul Ab dan anggota dari
immunoglobulin superfamily
 Struktur Light & Heavy Chains
• 2 jenis rantai ringan (Light chain) tdd 230 aa
) Κ and λ chains (kappa dan lambda)

– Setiap orang akan memproduksi kedua type L chain

– Rasio Κ dan λ chains bervariasi antar species

• (mouse: 95% Κ; human: 60% Κ)

– Pada tiap orang, L chains Ig molecule selalu

kedua2nya Κ atau λ, ttp TIDAK PERNAH salah satu

 Struktur Light & Heavy Chains
• 5 klas yang berbeda (isotypes) dari Heavy chain
– Berbeda secara serologis
serologis, dalam jumlah CHO dan
dari ukuran
– Berhubungan dengan perbedaan fungsi biologik

Ig Class (isotype) H Chain

I M
IgM (M )
(Mu) μ
IgD (Delta) δ
IgG (Gamma) γ
IgA (Alpha) α
IgE (Epsilon) ε
 Fungsi Antibodi
)Berikatan dengan reseptor permukaan dari
virus dan mencegah masuk ke dalam sel
(
(inactivation).
)
)Berikatan dengan toxin yg larut dan
menyebabkan presipitasi (neutralization)
(neutralization).
)Merangsang (induksi) fagositosis
)Aktivasi Complement System menyebabkan
sel lisis setelah serangan mikroorganisme
 Types of adaptive immunity: Extracellular pathogens

RESPONDING EFFECTOR
MICROBE LYMPHOCYTES MECHANISMS FUNCTIONS

Block
B Y invasion,
infection and

Y eliminate
pathogens.
Th Neutralise
toxins
Extra cellular B lymphocytes Secreted
pathogen helped by T antibody
helper cells

T helper cells are activated by antigens presented by MHC class II molecules

Effector Mechanisms vs. Extracellular Pathogens & Toxins

NEUTRALISATION
Toxin

Bacterium

` `

Adhesion to Toxin release

host cells blocked blocked

Prevents Prevents
in asion
invasion toxicity
NEUTRALISING ANTIBODIES
 Effector Mechanisms Against Extracellular Pathogens

OPSONISATION

Bacteria in extracellular space

+
Ab

OPSONISATION Antibody receptor Phagocytosis

binding
Effector Mechanisms Against Extracellular Pathogens

COMPLEMENT Activation
Bacteria in plasma
Lysis
y

+
Ab &
COMPLEMENT

Opsonisation Complement & Phagocytosis

Fc receptor
binding
 Types of adaptive immunity: Extracellular pathogens

RESPONDING EFFECTOR
MICROBE LYMPHOCYTES MECHANISMS FUNCTIONS

Cytokines that

Th activate
macrophages
to kill
phagocytosed
p g y
T helper pathogens
lymphocytes
Phagocytosed activated by
pathogen antigen
ti presented
t d
Cytokines
in macrophage by MHC class II
molecules
 Types of adaptive immunity:
Intracellular pathogens

RESPONDING EFFECTOR
MICROBE
C O LYMPHOCYTES
OC S MECHANISMS
C S S FUNCTIONS
C O S

Kill infected
cells and
remove
CTL reservoirs of
pathogen
pathogen.
Exposes
pathogens to
Intracellular Abs and
replication Cytotoxic T innate
Apoptosis immunity
(e.g. Leishmania, lymphocyte
viruses))

Cytotoxic T cells are activated by antigens presented by MHC class I

 Fragment Immunoglobulin :
Hubungan Struktur & Fungsi

Ag Binding

Complement Binding Site

Binding to Fc
Receptors
Placental Transfer
 Antigen Presentation
)Antigen yg masuk melalui usus akan
dihancurkan oleh gut-associated lymphoid
tissues (GALT)
( )
)Antigen yg masuk melalui kulit atau
respiratory tract akan dihancurkan secara
local atau ditransport ke local lymph nodes.
)Antigen yg memasuki darah akan disaring di
d l
dalam spleen.
l
 Antigenic
g Determinant / Epitope
p p

)Tempat
p spesifik
p dari antigen
g yyang
g berikatan
dengan antibodi disebut antigenic
determinant atau epitope.
epitope
)Kebanyakan antigen memiliki berbagai jenis
epitopes yang merangsang antibodi yang
berbeda disebut sebagai polyclonal.
)Immune response tunggal terhadap suatu
antigen disebut sebagai monoclonal.
monoclonal
 Three-Dimensional Structure
)Each domain folds into a very similar three-
dimensional structure
)In the variable domain there are three
hypervariable loops that form the antigen
bi di site
binding it
)Changing the length and amino acid sequence
of the hypervariable loops does not disturb the
three dimensional structure
three-dimensional
 IgG molecule

Used with permission from: Dr. Mike Clark, Immunology Division,

Department of Pathology Cambridge University, Cambridge, England
 Immunological Memory
)Primary immune response adalah paparan 1x
d i antigen
dari ti t h d immune
terhadap i system.
t

)Secondary
y immune response
p terjadi
j pada saat
p
paparan berikut terhadap antigen yang sama.

)Secondary response disebabkan oleh adanya

memory cells yg terbentuk pada paparan yang
pertama.
 Dasar genetik dari heterogenitas Antibodi
• Isotypic variation
– Dimiliki oleh semua individu yang sehat
– 5 subklas dari Ig terdapat dlm gen manusia
• Allotypic variation
– Perbedaan genetik antara individu
– Tdk semua individu sehat memiliki allotype yang khusus
– Perbedaan allotypic dr locus yg diketahui biasanya melibatkan
perubahan pada 1 atau 2 aa di constant region dari heavy chain
• Idiotypic variantion
– Variasi pd variable domain, khususnya pd hypervariable region
– Biasanya spesifik pada individual klon antibody
– Dasar genetik dari idiotypic variability belum sepenuhnya diketahui
 Classes of Antibodies
)Lima kelas antibodi (IgA, IgD, IgE, IgG, and
IgM) dapat dibedakan dari komposisi Heavy
chain

)Perbedaan
Perbedaan dari Heavy chains (pada tail
regions) menyebabkan perbedaan fungsi dari
masing2 kelas antibodi
 IgG
• Structure
– Monomer (7S)

IgG1, IgG2 and IgG4 IgG3

 Biological Properties of IgG

– Komponen utama Ig serum, BM : 160.000 Da

– 75% serum Ig & 15% total protein dalam serum
– Tersebar merata antara ruang
g intra &
extravascular
– 4 subclasses : IgG1, IgG2, IgG3, IgG4
– IgG1,
g , IgG2
g g 4 Æ half life lbh kurang
and IgG g 23 hari
terpanjang dari semua Ig isotypes (IgG3 sekitar 7 hr)
– Paling sesuai untuk Immunisasi Pasif
 Biological Properties of IgG
• Agglutinasi dan pembentukan presipitat
• Opsonisasi, krn sel2 fagosit, monosit & makrofag
mempunyai reseptor utk Fc dari IgG shg mempererat
hubungan fagosit dan sel sasaran
• Ab-dependent,
Ab d d t C Cell-Mediated
ll M di t d C
Cytotoxicity
t t i it (ADCC)
– Bagian Fab berikatan dgn target cell dan bagian Fc
berikatan dgn Fc receptor pd NK cells utk menuju killer
cell di target
• Aktivasi dari Complement, netralisasi Toxin (dgn cara
menghambat active site), Immobilisasi dari Bacteria
• Netralisasi Virus (menghambat attachment, penetrasi dan
viral coat shedding)
 Biological Properties of IgG
• Imunoglobulin
I l b li yang d
dapatt menembus
b plasenta
l t
diperantarai oleh Fc

• Kehamilan 3-
3-4 bln, tjd peningkatan yg cepat dari IgG ibu

• Se
Setelah
ea u umur
u 5b
bln,, fetus
e us mulai
u a menghasilkan
e g as a IgMg & IgA
g
dlm jumlah yang kecil

• 3-4 bl
bln setelah
t l h kkelahiran,
l hi llevell IIgG
G ib
ibu mulai
l i menurun &
infant mulai menghasilkan Ig G sendiri

• Penyerapan IgG ibu dlm colostrum diperoleh akibat

berikatan IgG
g dgn
g Fc receptors
p dlm jjaringan
g intestinal

• Berkaitan dgn erythroblastosis fetalis (Rh incompatibility)

 IgM
• Structure
– Pentamer (19S)
– Extra domain (CH4)
– J chain
h i (joining
(j i i chain)
h i ) J Chain

CH4
 Biological Properties of IgM
• Ig pertama yang terbentuk setelah immunisasi
• Macroglobulin (M), dengan BM = 900,000 Da
• Memiliki extra CH domain
• Pentamer molecule (tdd 5 rantai polipeptida)
• Memiliki ikatan disulfid tambahan antara Fc portions dengan
rantai
t i polipeptida
li tid J chain
h i
• 5 Ag combining sites
• Ditemukan lebih banyak pada ruang intravascular
• Half life dalam 5 hari
 Biological Properties of IgM
• Tidak menembus placenta
• Hanya kelas Ig yang disintesis oleh fetus (5 bulan
kehamilan)
g
• Peningkatan level IgM
g ppd fetus menunjukkan
j
congenital atau perinatal infeksi
• Isotype pertama yang disintesis setelah imunisasi
terhadap T-dependent Ag
• Kadar IgM yang meninggi biasanya menunjukkan
infeksi yang baru terjadi atau paparan thd Ag
Biological Properties of IgM

• IgM molecule bersifat efisien thd agglutinasi

• Natural antibodi, isohemagglutinins terhadap Red
Blood Cell (RBC) Ag dari golongan darah A,B,O
• Aktivasi dari complement
• Bentuk pertahanan pertama yang paling penting
terhadap infeksi bakteri
• Tidak sensitif thd neutralisasi toxin dan
p virus
neutralisasi terhadap
 IgA
• Structure
S
– Serum - monomer
– Secretions (sIgA)
• Dimer (11S)
• J chain
• Secretory component

Secretory Piece J Chain

 Biological Properties of IgA
ƒJumlah sedikit dlm serum, tp lbh tinggi dlm btk IgA sekretori
(sIgA) dlm cairan sekresi sal. Napas, sal. Cerna, sal. Kemih, air
mata, keringat, ludah, dan air susu, BM= 165.000 Da
ƒ Ig
I terbanyak
t b k pada
d permukaan
k mukosa
k
ƒ IgA dibentuk sel plasma dlm sel epitel lamina propria selaput
lendir (bukan sel B)
B), ke lumen sal cerna
cerna, jg melepas secretory
piece utk membtk sIgA yg terlindung dr pencernaan enzim
ƒ Penting pada imunitas neonatus
ƒ Kadar IgA yg tinggi dlm serum, pd infeksi kronik sal. Napas dan
cerna spt TB, sirosis alkoholik, peny. Coeliac, kolitis ulseratif dan
peny. Crone
ƒ Fungsi
g : agglutinasi,
gg memudahkan fagositosis,
g opsonisasi
ƒ Mengaktifkan komplemen melalui jalur alternatif
Origin of Secretory Component of
sIgA
• Structure
S uc u e IgD
– Monomer
– Tail piece

Tail Piece
Biological Properties of IgD

• Kadar sangat rendah dalam sirkulasi

• Peka terhadap degradasi oleh proses
proteolitik
• Komponen permukaan utama dari sel B dan
petanda diferensiasi sel B yang matang
• Tidak mengikat komplemen
• IgD ditemukan bersama IgM pd permukaan
sel B sebagai reseptor antigen
• Structure
S uc u e IgE
– Monomer
– Extra domain (CH4)

CH4
 Biological Properties of IgE

– Ig dengan jumlah paling sedikit dalam serum

• Berikatan dgn basophil dan mast cells (tidak
memerlukan ikatan Ag)

– Berperan pada Reaksi Alergi

– Berperan pada Infeksi Parasit (Helminths)

• Berikatan dengan Fc receptor pd eosinophils

– Tidak berikatan dengan complement

 Reaksi Alergi
)Berikatan dan cross-linking dr Antigen pada
IgE molecule yang terikat pd mast cells atau
basophil kemudian memicu sekresi amines
(khususnya histamine) melalui exocytosis.
)Menyebabkan
Menyebabkan dilatasi dan peningkatan
permeabilitas pembuluh darah
)Pd keadaan normal, membantu lymphocyte
p p
dan antibodi msk ke tempat peradangan
g
 AN ALLERGIC REACTION
EARLY
VASOACT IVE MEDIATORS
OR
MAST IL-5 ACUTE
CELL
IL-4

IgE EOS
ALLERGEN B CELL

IL-4
IL-5

Th2 MAST
LATE
CELL

DENDRITIC CELL
ANTIBODY FUNCTIONS
ANTIBODY FUNCTIONS