Nama : Nindi Anjarwati Mohamad

Nim : 442417016
Kelas : Kimia B
ANALISIS JURNAL BIOTEKNOLOGI

“Production of hepatitis B surface antigen in transgenic plants for oral

immunization”

Penemuan imunogen yang cocok untuk vaksinasi HBV berasal dari studi antigen
permukaan (HBsAg), yang diproduksi dalam jumlah berlebihan dalam sel hati individu yang
terinfeksi. Beberapa protein amplop ini dikeluarkan dari sel-sel hati dan dapat diperoleh kembali
dalam serum dalam bentuk partikel yang menyerupai virus (VLPs). VLPs, yang terdiri dari
HBsAg dan lipid membran, ditemukan sangat imunogenik dan akan memperoleh antibodi
spesifik untuk HBV otentik. Dengan menggunakan alat-alat biologi molekuler, gen yang
mengkode HBsAg diekspresikan dalam sel-sel ragi, dari mana VLP imunogenik dapat dipanen
menggunakan teknologi isolasi / refolding protein. Simpanse yang diimunisasi dengan HBsAg
yang berasal dari ragi dilindungi dari infeksi ketika ditantang dengan HBV Kemudian,
ditentukan bahwa imunisasi pelindung pada manusia diindikasikan oleh antibodi anti-HBsAg
serum pada tingkat ≥ 10 mIU / ml Perlindungan berkorelasi ini adalah dasar untuk lisensi vaksin
suntik saat ini.
HBsAg memiliki setidaknya dua dan sebanyak empat domain spanning membran; baik N
dan C termini terkena lumen ER. Struktur biologis berskala nanometer berkumpul dengan
polimerisasi sub unit yang sama dengan menggunakan sejumlah kecil sumur kontak ikatan yang
ditentukan. Kekuatan pendorong untuk polimerisasi adalah pembentukan interaksi ikatan yang
menguntungkan karena sub unit bebas dimasukkan ke dalam polimer yang tumbuh. Untuk
protein amplop seperti HBsAg, dua langkah penting dalam proses polimerisasi adalah integrasi
polipeptida yang benar ke dalam membran ER, dan pembentukan ikatan silang disulfida di antara
sub-unit protein. HBsAg yang diekspresikan dalam sel-sel ragi berkurang secara kimiawi setelah
ekstraksi untuk menyebabkan pembentukan ikatan disulfide.
sistem ekspresi HBsAg berbasis tanaman memungkinkan pengujian strategi imunisasi
oral hanya dengan memberi makan sampel tanaman. Ekspresi HBsAg dalam daun tembakau
transgenik menghasilkan VLP dengan ukuran rata-rata 22 nm. Ketika digunakan untuk imunisasi
parenteral tikus, VLP tembakau memicu respons imun sel B dan sel yang sebanding dengan
vaksin yang diturunkan dari ragi. Namun, karena kemungkinan degradasi protein dalam usus,
penyajian antigen vaksin melalui rute oral membutuhkan tingkat imunogen yang jauh lebih
tinggi daripada pemberian parenteral. Peningkatan kadar HBsAg dalam jaringan tanaman akan
meningkatkan kegunaan tanaman sebagai sumber antigen rekombinan. Penelitian ini dirancang
untuk menentukan apakah pengiriman HBsAg oral yang diproduksi dalam jaringan tanaman
transgenik dapat merangsang serum anti-HBsAg, dan untuk mengembangkan vektor ekspresi
yang akan meningkatkan ekspresi HBsAg pada tanaman.
 Imunisasi oral dengan kentang mentah. Kami sebelumnya menunjukkan bahwa HBsAg
yang diekstraksi dari daun tembakau transgenik mengandung VLP, dan bahwa imunisasi
parenteral tikus dengan ekstrak ini menimbulkan respons sel T Band yang serupa dengan yang
ada pada vaksin komersial. Kami mengembangkan kentang transgenik yang mengekspresikan
HBsAg dalam umbi untuk digunakan dalam pengiriman oral. Konstruksi gen hal PAT-HB
mengandung promotor patatin khusus umbi untuk mendorong transkripsi.
Imunisasi oral dihasilkan dari aktivasi jaringan limfoid di usus. Sel M khusus mengenali
struktur partikulat, seperti bakteri atau virus, dan memindahkannya ke sel B dan T yang
mendasarinya untuk memulai respons imun. Protein yang larut adalah imunogenik yang buruk;
Oleh karena itu pembentukan VLP oleh subunit HBsAg mungkin diperlukan untuk vaksin oral
yang efektif. Kami ditentukan oleh sedimentasi gradien sukrosa bahwa HBsAg dalam umbi
kentang transgenik adalah. Eksperimen ini dibatasi oleh jumlah total jaringan umbi yang dapat
dicerna tikus dalam 24 jam dan jumlah HBsAg yang diproduksi di dalam umbi. Dosis yang lebih
tinggi kemungkinan akan menyebabkan respon imun yang lebih kuat, mungkin tanpa
menggunakan tambahan oral, meskipun jaringan umbi itu sendiri mungkin bertindak sebagai
adjuvant karena mengandung inhibitor proteinase Untuk mengatasi kemungkinan ini, kita
membutuhkan jaringan tanaman yang dapat dimakan yang menghasilkan kadar HBsAg yang
lebih tinggi, dan karenanya kami memfokuskan upaya pada peningkatan akumulasi HBsAg pada
tanaman.
Analisis vektor ekspresi baru. Kami membangun serangkaian vektor ekspresi HBsAg.
menggunakan virus mosaik kembang kol (CNMV) 35S yang bersifat konstitutif konstitutif.
Kami memeriksa UTRs dari tembakau etch virus (TEV) dan virus mosaik tembakau (TMV),
sinyal peptida dari protein penyimpanan vegetatif kedelai (VSP), peptida transit plastid, dan tiga
berbeda urutan mengapit. Karena posisi transgen dan jumlah salinan berbeda-beda, level mRNA
dalam garis transgenik individual bisa sangat berbeda. Untuk memungkinkan perbandingan
antara vektor, kami menghasilkan beberapa garis kentang individu untuk setiap konstruksi dan
menganalisis daun untuk HBsAg dan mRNA Kami memperhitungkan efek transkripsional
dengan membandingkan tingkat akumulasi Hbsag per unit mRNA dalam jalur independen.
Dengan demikian efek ekspresi dari vektor yang berbeda dapat dilihat di antara variasi
transkripsi acak menggunakan kemiringan plot protein HBsAg vs mRNA, dilambangkan dengan
P / R Kami menghargai bahwa setiap individu dapat mengubah metabolisme protein karena
mutasi penyisipan T-DNA. Namun, kami menganggap kemungkinan ini jauh.
 Dalam sel mamalia, HBsAg mengalami ikatan silang yang luas dalam kompartemen pra-
Golgi pasca-ER yang tanpa protein disulfide isomerase (PDI). Jadi antar-jemput vesikel yang
menyelamatkan dan mendaur ulang protein residen ER yang menampilkan C-terminal KDEL
dapat mewakili kompartemen yang sama dalam sel tanaman. Kombinasi peptida sinyal dan
KDEL dapat menghasilkan peningkatan lebih lanjut, dan percobaan ini sedang berlangsung.

Kesimpulan

Berhubungan dengan penggunaan tanaman transgenik untuk vaksin hepatitis B oral.

Pertama, kami menunjukkan bahwa antigen dari patogen manusia non-enterik (HBV) dapat
imunogenik oral ketika diproduksi dan dikirim dalam jaringan tanaman tanpa teknologi proses.
Kedua, kami mengidentifikasi strategi untuk meningkatkan konten HBsAg dari jaringan
tanaman. Informasi yang dihasilkan membuka peluang untuk studi praklinis dan klinis HBsAg di
masa depan sebagai vaksin oral, dengan fokus yang lebih rinci pada komunikasi antara cabang
humoral dan mukosa dari sistem kekebalan tubuh, yang mungkin sangat penting bagi komersial
pengembangan dari vaksin nabati. Kombinasi pengiriman oral dan parenteral akhirnya terbukti
paling efisien, dan karenanya harus dipelajari. Menggunakan tanaman kentang transgenik yang
dikembangkan sebagai bagian dari penelitian ini, kami terus mengevaluasi imunogenisitas oral
pada tikus. Meskipun penelitian ini belum lengkap, mereka menunjukkan bahwa peningkatan
kadar protein sesuai dengan respon imun yang lebih kuat dan lebih lama baik dalam imunisasi
primer dan meningkatkan rezim.