PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK IKAN TOMAN

(Channa micropeltes) TERHADAP JUMLAH MAKROFAG

(Studi In Vivo pada Tikus Wistar (Rattus norvegicus
Diinduksi Mycobacterium tuberculosis)

Usulan Penelitian Skripsi

Diajukan guna memenuhi sebagian syarat memperoleh
derajat Sarjana Kedokteran Gigi
Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Lambung Mangkurat

Diajukan oleh
Gina Maulida Riani Al-Syams
1711111120009

UNIVERSITAS LAMBUNG MANGKURAT

FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI
PROGRAM STUDI KEDOKTERAN GIGI
BANJARMASIN

Agustus, 2020
 DAFTAR ISI

HALAMAN SAMPUL .................................................................................i

DAFTAR ISI ................................................................................................ii

DAFTAR SINGKATAN ............................................................................vi

DAFTAR TABEL ...................................................................................... vii

DAFTAR GAMBAR ................................................................................viii

BAB 1. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang ...............................................................................1

1.2 Rumusan Masalah ..........................................................................4

1.3 Tujuan Penelitian ............................................................................4

1.3.1 Tujuan Umum.........................................................................4

1.3.2 Tujuan Khusus .......................................................................4

1.4 Manfaat Penelitian .........................................................................5

1.4.1 Manfaat Teoritis .....................................................................5

1.4.2 Manfaat Praktis ......................................................................5

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tuberkulosis ...................................................................................6

2.1.1 Definisi ...................................................................................6

2.1.2 Epidemiologi ..........................................................................6

2.1.3 Klasifikasi...............................................................................7

2.1.3.1 Tuberkulosis Paru .........................................................7

2.1.3.2 Tuberkulosis Ekstra Paru .............................................8

2.1.4 Mekanisme Prolonged Inflammatory pada Tuberkulosis ......8

ii
 2.1.5 Penyembuhan Luka pada Tuberkulosis ..................................9

2.2 Makrofag ........................................................................................9

2.2.1 Definisi ...................................................................................9

2.2.2 Peran Sel Makrofag pada Luka Normal ...............................11

2.2.3 Sel Makrofag pada Luka Tuberkulosis ................................13

2.3 Radikal Bebas dan Stres Oksidatif ...............................................13

2.3.1 Definisi Radikal Bebas .........................................................13

2.3.2 Definisi Stres Oksidatif ........................................................16

2.3.3 Mekanisme Kerusakan Sel karena Stres Oksidatif ...............16

2.3.4 Hubungan Tuberkulosis dengan Stres Oksidatif ..................17

2.4 Ikan Toman...................................................................................18

2.4.1 Toksonomi Ikan Toman .......................................................18

2.4.2 Morfologi Ikan Toman .........................................................19

2.4.3 Kandungan Ikan Toman .......................................................19

2.4.4 Peran Albumin......................................................................20

2.4.5 Peran Asam Lemak ..............................................................21

2.5 Tikus Wistar .................................................................................21

2.6 Kerangka Teori .............................................................................23

2.6.1 Penjelasan Kerangka Teori...................................................24

BAB 3. KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS

3.1 Kerangka Konsep .........................................................................27

3.1.1 Variabel Bebas ....................................................................27

3.1.2 Variabel Terikat...................................................................28

3.1.3 Variabel Terkendali .............................................................28

iii
 3.2 Hipotesis .......................................................................................28

BAB 4. METODE PENELITIAN

4.1 Rancangan Penelitian ...................................................................29

4.2 Populasi dan Sampel.....................................................................29

4.2.1 Populasi ................................................................................29

4.2.2 Sampel ..................................................................................29

4.2.2.1 Kriteria Inklusi ...........................................................29

4.2.2.2 Kriteria Eksklusi .........................................................29

4.2.3 Teknik Pengambilan Sampel ................................................29

4.2.4 Besar Sampel ........................................................................30

4.3 Variabel Penelitian .......................................................................31

4.3.1 Variabel Bebas......................................................................31

4.3.2 Variabel Terikat ....................................................................31

4.3.3 Variabel Terkendali ..............................................................31

4.3.4 Definisi Operasional .............................................................32

4.4 Instrumen Penelitian .....................................................................35

4.4.1 Bahan Penelitian ...................................................................35

4.4.2 Alat Penelitian ......................................................................35

4.5 Lokasi dan Waktu Penelitian ........................................................35

4.5.1 Lokasi Penelitian ..................................................................35

4.5.2 Waktu Penelitian ..................................................................36

4.6 Prosedur Penelitian .......................................................................36

4.6.1 Pembuatan Ekstrak Ikan Toman ..........................................36

4.6.2 Penyimpanan Ekstrak Ikan Toman ......................................37

iv
 4.6.3 Aklimatisasi Hewan Coba ....................................................37

4.6.4 Induksi Tuberkulosis pada Tikus Wistar ..............................37

4.6.5 Perlakuan Hewan ..................................................................38

4.6.6 Tikus yang Dikorbankan dengan Ketamin-Xylazine ............39

4.6.7 Pengambilan Jaringan Tikus Wistar .....................................39

4.6.8 Penanganan Bangkai Tikus ..................................................39

4.6.9 Pembuatan Preparat ..............................................................39

4.6.10 Pewarnaan Hematoksilin Eosin (HE) .................................40

4.6.11 Pengamatan Jumlah Makrofag ...........................................41

4.7 Alur Penelitian..............................................................................42

4.8 Prosedur Pengambilan dan Pengumpulan Data ...........................43

4.9 Cara Pengolahan dan Analisis Data .............................................44

4.9.1 Cara Pengolahan Data ..........................................................44

4.9.2 Analisis Data ........................................................................44

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................... 45

v
 DAFTAR SINGKATAN

AA : Asam Arakidonat

APC : Antigen Precenting Cell

ATP : Adenosin Trifosfat

BTA : bakteri tahan asam

DNA : Deoxyribo Nucleic Acid

ECM : matriks ekstraseluler

HIV : Human Immunodeficiency Virus

HSA : Human Serum Albumin

MCP-1 : monocyte chemoattractant protein 1

MDA : malondialdehid

Mtb : Mycobacterium tuberculosis

M1 : makrofag proinflamasi

M2 : makrofag efferositosis

NADH : Nikotinamida Adenosin Dinukleotida Hidrogen

NF-Kb : nuclear factor kappa b

Nrf2 : nuclear factor-erythroid related factor-2

OAT : Obat Anti Tuberkulosis

PDGF : platelet derived growth factor

ROS : Reactive Oxygen Species

RNA : Ribonucleic acid

SOD : Superoxide dismutase

SPS : sewaktu-pagi-sewaktu

TB : tuberculosis

VEGF : vascular endothelial growth factor

vi
 DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

4.10 Tabel Definisi Operasional.................................................................33

4.11 Tabel Pengumpulan Data ...................................................................42

vii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

2.1 Sel Monosit .....................................................................................................10

2.2 Sel Makrofag ...................................................................................................11

2.3 Ikan Toman (Channa micropeltes) .................................................................18

2.4 Tikus Wistar (Rattus norvegicus) ...................................................................22

2.5 Kerangka Teori ...............................................................................................24

3.1 Kerangka Konsep ............................................................................................28

4.1 Skema Penghitungan Jumlah Sel Makrofag ...................................................41

viii
 BAB 1

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Tuberkulosis (TB) adalah salah satu penyakit infeksi yang disebabkan oleh

Mycobacterium tuberculosis yang sering menyerang jaringan paru (Warren et al,

2017). Berdasarkan data Global Tuberkulosis Report tahun 2019, tuberkulosis

adalah satu dari penyakit yang menjadi 10 penyebab utama kematian di seluruh

dunia dan menjadi penyebab utama kematian dari agen infeksius tunggal (WHO,

2019). Tuberkulosis termasuk penyakit menular yang dapat menyebar dari

seseorang melalui droplet aerosol saat batuk atau bersin. Penyakit TB dapat

menyerang semua usia disertai kondisi klinis yang berbeda-beda maupun tanpa

gejala sama sekali hingga manifestasi klinis yang berat (Kenedyanti dan

Sulistyorini, 2017).

Tuberkulosis masih menjadi perhatian dunia dan belum ada satu negara pun

yang dinyatakan bebas dari tuberkulosis. Prevalensi angka kesakitan dan kematian

yang disebabkan oleh bakteri Mycobacterium tuberculosis cukup tinggi

(Kenedyanti dan Sulistyorini, 2017). Indonesia menempati urutan ketiga untuk

penderita tuberkulosis terbanyak di dunia dengan peningkatan indisensi penderita

tuberkulosis pada tahun 2015 sebanyak 331.703 menjadi 563.879 pada tahun 2018

(Global Tuberkulosis Report, 2019). Prevalensi tuberkulosis di Kalimantan Selatan

meningkat dari tahun 2013 hingga 2018. Berdasarkan data Dinas Kesehatan

Provinsi Kalimantan Selatan tahun 2015 jumlah perkiraan penderita baru TB BTA+

7.615, suspek ditemukan 28.620, dan TB baru BTA+ ditemukan 3.328 dari

3.626.616 penduduk Kalimantan Selatan (Riskesdas, 2018). Prevalensi terjadinya

1
 2

lesi mukosa TB oral dari infeksi yang disebabkan oleh Mycobacterium tuberculosis

adalah 0,1% hingga 5%. Manifestasi klinis yang sering muncul pada rongga mulut

pasien tuberkulosis yaitu lesi mukosa seperti ulseratif, dan lesi tanpa rasa sakit pada

langit-langit mulut, bibir atau lidah (Souza et al, 2016; Rout et al, 2019). Infeksi

bakteri Mycobacterium tuberculosis yang persisten akan menyebabkan

peningkatan produksi ROS sehingga menyebabkan kerusakan dan kematian sel

serta mengganggu fungsi makrofag sehingga mengakibatkan terganggunya fase

inflamasi pada pasien tuberkulosis dan terhambatnya proses penyembuhan luka

(Amaral et al, 2020; Khairunnida et al, 2018). Selain itu pasien tuberkulosis

mengalami penurunan status gizi yang menyebabkan penurunan kadar albumin

(Widiastuti et al, 2019). Pada penelitian Belton dkk juga menyebutkan bahwa lesi

tuberkulosis sangat hipoksik (Belton et al, 2016). Lesi oral yang muncul pada

pasien tuberkulosis merupakan hal yang harus menjadi perhatian karena memiliki

potensi untuk penularan berbagai infeksi dari pasien ke dokter gigi, pasien ke

pasien, serta dokter gigi ke pasien karena kedekatannya dengan rongga hidung dan

mulut pasien (Rout et al, 2019). Oleh sebab itu, diperlukan obat alternatif dari bahan

alami sebagai penyembuh luka pada pasien tuberkulosis.

Salah satu bahan alami yang sering digunakan penduduk di Kalimantan Selatan

sebagai obat herbal untuk mempercepat penyembuhan luka adalah ikan Haruan

(Channa striata) (Sura et al, 2013). Ikan Haruan mengandung albumin sebagai

antioksidan yang dapat mempercepat proses penyembuhan luka. Ekstrak ikan

Haruan secara empiris sudah dipatenkan menjadi obat dan dipasarkan di Indonesia.

Saat ini ikan Haruan sulit ditemukan, harganya yang relatif mahal, dan budidaya

yang cukup sulit, sehingga perlu alternatif lain sebagai pengganti ikan Haruan. Ikan
 3

Toman (Channa micropeltes) lebih mudah dikembangbiakkan karena

regenerasinya yang cepat dan memiliki famili yang sama dengan ikan Haruan

(Apriasari et al, 2019). Ikan Toman mengandung albumin yang dapat digunakan

sebagai alternatif Human Serum Albumin (HSA) yang membantu memenuhi

kebutuhan albumin dalam proses penyembuhan luka. Ikan toman memili

kandungan albumin tertinggi dari famili Channida lainnya yaitu sebesar 5,35%.

Kandungan lain ikan Toman juga ditemukan yaitu zinc, omega-6, dan omega-3.

Asam lemak omega-6 yang berasal dari turunan asam arakidonat (AA) dan

mediator kimia seperti prostaglandin dan lipoxin berperan dalam fase inflamasi

(Fajriani et al, 2018; Apriasari et al, 2019). Asam lemak omega-6 berperan penting

dalam peningkatan jumlah sel makrofag. Pada fase inflamasi makrofag berfungsi

untuk memfagositosis bakteri. Jumlah sel makrofag pada fase inflamasi mencapai

puncaknya pada hari ke-3 setelah terjadinya luka (Khairunnida et al, 2018).

Berdasarkan kandungan tersebut, ekstrak ikan Toman dinilai berpotensi digunakan

sebagai obat herbal yang membantu penyembuhan luka tuberkulosis.

Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa terjadi percepatan penyembuhan

yang signifikan pada hari ke-11 pemulihan luka sayat pada tikus wistar setelah

pemberian ekstrak ikan Toman (Channa micropeltes) dengan dosis 16mL/BB kg

tikus (Murdani et al, 2015). Namun belum ada penelitian mengenai ekstrak ikan

Toman terhadap penyembuhan luka tuberkulosis dengan dosis yang pas.

Berdasarkan latar belakang tersebut, diperlukan adanya uji lebih lanjut

mengenai pengaruh ekstrak ikan Toman (Channa micropeltes) dengan dosis yang

efektif terhadap jumlah makrofag pada tikus Wistar (Rattus norvegicus)

tuberkulosis.
 4

1.2 Rumusan Masalah

Apakah terdapat pengaruh pemberian ekstrak ikan Toman (Channa

micropeltes) terhadap jumlah makrofag tikus Wistar (Rattus norvegicus) model

tuberkulosis?

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan Umum

Membuktikan pengaruh pemberian ekstrak ikan Toman (Channa

micropeltes) terhadap jumlah makrofag pada tikus Wistar (Rattus norvegicus)

model tuberkulosis.

1.3.2 Tujuan Khusus

1. Menganalisis jumlah makrofag tikus Wistar (Rattus norvegicus) model

tuberkulosis selama 14 hari.

2. Menganalisis jumlah makrofag tikus Wistar (Rattus norvegicus) model

tuberkulosis yang diberi ekstrak ikan Toman (Channa micropeltes) dosis 16

mL/kgBB selama 14 hari.

3. Menganalisis jumlah makrofag tikus Wistar (Rattus norvegicus) model

tuberkulosis yang diberi ekstrak ikan Toman (Channa micropeltes) dosis 18

mL/kgBB selama 14 hari.

4. Menganalisis jumlah makrofag tikus Wistar (Rattus norvegicus) model

tuberkulosis yang diberi ekstrak ikan Toman (Channa micropeltes) dosis 20

mL/kgBB selama 14 hari.

5. Menganalisis perbedaan jumlah makrofag tikus Wistar (Rattus norvegicus)

model tuberkulosis, dan tikus Wistar (Rattus norvegicus) model tuberkulosis

 5

yang diberi ekstrak ikan Toman (Channa micropeltes) 16 mL/kgBB, 18

mL/kgBB, dan 20 mL/kgBB selama 14 hari.

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Manfaat Teori

Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi dan sumber

referensi mengenai mekanisme pengaruh esktrak ikan Toman (Channa

micropeltes) terhadap jumlah makrofag tikus Wistar (Rattus norvegicus) model

tuberkulosis selama 14 hari..

1.4.2 Manfaat Praktis

Hasil penelitian ini diharapkan dapat digunakan sebagai alternatif obat dari

ekstrak ikan Toman (Channa micropeltes) untuk mempercepat proses

penyembuhan luka tuberkulosis terutama luka di rongga mulut.

 BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tuberkulosis

2.1.1 Definisi

Tuberkulosis adalah penyakit infeksi yang disebabkan oleh Mycobacterium

tuberculosis dan sering menyerang jaringan paru. Tuberkulosis juga dapat

menyerang tulang, sistem saraf pusat, dan sistem organ lainnya (Kenedyanti dan

Sulistyorini, 2017; Warren et al, 2017). Tuberkulosis merupakan penyakit kronik

dan menular yang ditandai dengan respon penyakit terhadap bakteri berupa jaringan

granulasi nekrotik. Penyakit ini melalui penderita yang menyebar bakteri melalui

udara seperti batuk. Penyakit ini dapat menular dengan cepat pada orang yang

memiliki daya tahan tubuh lemah dan rentan. Kemungkinan lain bahwa

tuberkulosis jauh lebih rentan menyerang orang HIV, kurang gizi, diabetes,

merokok, dan konsumsi alkohol (Sejati dan Sofiana, 2015; WHO, 2019).

2.1.2 Epidemiologi

Sekitar 10 juta orang di dunia terinfeksi tuberkulosis setiap tahun.

Tuberkulosis menyerang siapa saja namun sekitar 90% adalah orang dewasa

dengan rasio pria : wanita yaitu 2 : 1. Tingkat kasus nasional setiap tahunnya

bervariasi mulai kurang dari 50 hingga lebih dari 5.000 per 1 juta populasi (WHO,

2019). Sejak 2013 sebagian besar peningkatan kasus global tuberkulosis banyak

terjadi di India dan Indonesia yaitu dua negara yang menempati peringkatan

pertama dan ketiga dari seluruh dunia dalam insiden kasus per tahun. Pada tahun

2017 jumlah kasus baru tuberkulosis di Indonesia sebanyak 420.994 kasus.

Prevalensi tuberkulosis di Kalimantan Selatan meningkat dari tahun 2013 hingga

6
 7

2018. Berdasarkan data Dinas Kesehatan Provinsi Kalimantan Selatan tahun 2015

jumlah perkiraan penderita baru TB BTA+ 7.615, suspek ditemukan 28.620, dan

TB baru BTA+ ditemukan 3.328 dari 3.626.616 penduduk Kalimantan Selatan

(Riskesdas, 2018; Dinkes Kalsel, 2015; Kemenkes RI, 2018).

2.1.3 Klasifikasi

Menurut Naga 2014, tuberkulosis dapat diklasifikan menjadi dua yaitu

tuberkulosis paru dan tuberkulosis ekstra paru.

2.1.3.1 Tuberkulosis Paru

Sekitar 80% tuberkulosis adalah jenis tuberkulosis paru dari semua

penderita. Tuberkulosis ini menyerang jaringan paru-paru dan merupakan satu-

satunya bentuk tuberkulosis yang mudah tertular kepada manusia lain melalui

bakteri yang keluar dari penderita (Naga, 2014). Menurut Werdhani et al 2011,

klasifikasi paru terbagi menjadi:

1. Tuberkulosis paru BTA positif

a. Minimal 2 dari 3 spesimen dahak SPS hasilnya BTA positif.

b. Foto rontgen dada menunjukkan gambaran tuberkulosis aktof

dan 1 spesimen dahak SPS hasilnya BTA positif.

c. Tidak ada perbaikan setelah pemberian antibiotik non OAT dan

satu atau lebih specimen dahak hasilnya positif setelah 3

spesimen dahak SPS pada pemeriksaan sebelumnya hasilnya

BTA negatif.

2. Tuberkulosis paru BTA negatif

a. Sekurang-kurangnya 3 spesimen dahak SPS hasilnya BTA

negatif.
 8

b. Pada foto toraks abnormal yaitu terdapat gambaran

tuberkulosis.

c. Tidak terdapat perbaikan setelah pemberian antibiotic non

OAT.

d. Dipertimbangkan oleh dokter untuk diberi pengobatan.

2.1.3.2 Tuberkulosis Ekstra Paru

Tuberkulosis ini menyerang organ tubuh selain paru-paru yaitu pleura,

kelenjar limfe, persendian tulang belakang, saluran kencing, dan susunan saraf

pusat. Penyakit tuberkulosis ini dapat menyerang seluruh organ secara bertahap

hingga menyebabkan kematian (Naga, 2014). Menurut Werdhani et al 2011,

tuberkulosis ekstra paru terdiri dari:

1. TB ekstra paru ringan

Menyerang kelenjar limfe, pleuritis eksudativa unilateral tulang

(kecuali tulang belakang), sendi, dan kelenjar adrenal.

2. TB ekstra paru berat

Seperti meningitis, milier, pericarditis, peritonitis, pleuritis eksudativa

bilateral, TB tulang belakang, TB usus, TB saluran kemih dan alat

kelamin.

2.1.4 Mekanisme Prolonged Inflammatory pada Tuberkulosis

Pada infeksi awal Mtb memicu produksi Reactive Oxygen Species (ROS)

yang menyebabkan ketidakseimbangan antara ROS dan antioksidan. Produksi ROS

yang berlebihan akan mengganggu ekspresi mediator proinflamasi, destruksi dan

disfungsi jaringan, serta perubahan struktur molekul. (Amaral et al, 2020;

Widiastuti et al, 2019). Stres oksidatif dapat menginduksi inflamasi melalui aktivasi
 9

NF-kB dan juga sebaliknya, inflamasi dapat melepaskan ROS. Nrf2 dalam proses

inflamasi akan menghambat faktor transkripsi NF-kB untuk menginduksi

pengurangan proses inflamasi. Disregulasi Nrf2 akan menginduksi pengurangan

faktor transkripsi NF-kB dan meningkatkan beberapa gen untuk mengkode ekspresi

mediator inflamasi (Apriasari et al, 2019).

2.1.5 Penyembuhan Luka Pada Tuberkulosis

Infeksi Mtb persisten menyebabkan makrofag yang terinfeksi Mtb akan

mengalami peningkatan peroksidasi lipid, oksidasi DNA, fungsi efektornya rusak,

dan terjadi kematian sel akibat akumulasi ROS yang signifikan. Gangguan pada

makrofag pada tuberkulosis akan berakibat infeksi luka pada patogen yang tidak

difagositosis sehingga terjadi terhambatnya penyembuhan luka (Amaral et al, 2020;

Hidayat et al, 2015). Penderita tuberkulosis juga mengalami penurunan status gizi

khususnya kecukupan energi dan protein. Kekurangan zat gizi pada penderita

tuberkulosis dapat memperparah penyakit dan menunda penyembuhan dengan

menekan respon imun. Kekurangan energi protein kronis pada tuberkulosis paru

menyebabkan penurunan kadar albumin yang merupakan protein yang berperan

dalam penyembuhan luka. Penurunan status gizi akan berpengaruh terhadap

penyembuhan luka karena pada prosesnya membutuhkan asupan protein dan

berbagai vitamin untuk perbaikan dan regenerasi jaringan (Widiastuti et al, 2019;

Marjiyanto et al, 2013; Yuristin dan Apriza, 2018).

2.2 Makrofag

2.2.1 Definisi

Makrofag merupakan produk tahap akhir monosit yang memasuki jaringan

ekstraseluler saat inflamasi. Makrofag adalah sel yang berperan pada peradangan
 10

sebagai reaksi tubuh terhadap benda asing atau mikroba, membersihkan debris

ekstra sel dan fibrin pada lokasi jejas. Makrofag memiliki diameter 15-20 mµ dan

dapat ditemukan di seluruh jaringan ikat dan organ tubuh. Tidak seperti neutrofil,

makrofag dapat bertahan hidup dalam periode yang lebih lama karena tidak mati

setelah fagositosis (Abbas et al, 2016; Tyaj and Kirana, 2015). Makrofag adalah sel

fagosit yang lebih kuat dibandingkan neutrofil bahkan seringkali mampu menelan

hingga 100 bakteri. Makrofag juga dapat menelan partikel yang lebih besar, bahkan

sel darah merah utuh atau kadang parasite malaria. Monosit darah dan makrofag

jaringan berasal dari turunan sel yang sama sehingga seringkali disebut sebagai

system fagosit mononuclear. Beberapa makrofag yang berada di berbagai jaringan

seperti otak, hepar, dan paru tidak berasal dari monosit darah melainkan dari

progenitor di yolk sac atau hepar fetus selama perkembangan organisme (Guyton

dan Hall, 2011; Christina et al, 2015).

Gambar 2.1 Sel Monosit

(Mescher, 2016)
 11

Gambar 2.2 Sel Makrofag

(Abbas, 2016)

2.2.2 Peran Sel Makrofag pada Luka Normal

Makrofag berperan penting dalam proses penyembuhan luka yaitu

mensekresi sirokin proinflamasi dan sebagai anti-inflamasi serta growth factor,

fibroblast dan mensintesis kolagen yang berperan dalam kekuatan tensile strength

luka serta mengisi jaringan luka agar kembali ke bentuk semula, selanjutnya diikuti

oleh sel-sel keratinosit kulit untuk membelah diri dan bermigrasi menjadi re-

epitelisasi kemudian menutup lokasi luka. Selain itu makrofag juga berperan

sebagai Antigen Precenting Cell (APC) kepada limfosit untuk inisiasi respon imun

adaptif dari host. Neutrofil, limfosit dan makrofag adalah sel yang pertama kali

menuju lokasi luka untuk melawan infeksi dan membersihkan debris matriks seluler

serta benda-benda asing. Platelet dan faktor lainnya akan menarik monosit dari

pembuluh darah menuju lokasi luka kemudian akan dimatangkan menjadi

makrofag. Peran penting makrofag dalam pertahana inang yaitu memproduksi

sitokin yang meregulasi inflamasi. Pada fase inflamasi akhir yaitu hari ke-3 luka,

monosit akan berdiferensiasi menjadi makrofag kemudian masuk ke dalam luka

melalui mediasi monocyte chemoattractant protein 1 (MCP-1). Pada keadaan

 12

normal, monosit akan menginfiltrasi luka dan berdiferensiasi menjadi makrofag

proinflamasi (M1) untuk membersihkan luka. Makrofag yang memiliki peran untuk

fagositosis bakteri dan jaringan mati akan berubah menjadi makrofag efferositosis

(M2) yang mensekresi sitokin anti-inflamasi seperti IL-4, IL-10, dan IL-13.

Makrofag M2 menghasilkan sitokin dan growth factor yang menstimulasi

proliferasi fibroblast, produksi kolagen, pembentukan pembuluh darah baru, dan

proses penyembuhan lainnya (Primadina et al, 2019; Handajani et al, 2015; Abbas

et al, 2016).

Makrofag akan mensekresi proteinase untuk degradasi matriks ekstraseluler

(ECM) dan berperan penting unruk membuang benda asing, merangsang

pergerakan sel, dan mengatur pergantian ECM. Pada angiogenesis, makrofag

meregulasi terbentuknya pembuluh baru melalui sekresi tumor necrosis factor-alfa

(TNF-α), vascular endothelial growth factor (VEGF), angiogenin, urokinase dan

platelet derived growth factor (PDGF). Faktor-faktor ini kemudian akan ditangkap

oleh pembuluh darah yang sudah ada lebih dulu kemudian akan direspon sebagai

suatu sinyal sehingga terbentuk suatu cabang pembuluh darah baru. Saat proses

fibrosis, makrofag akan mensekresikan fibroblast growth factor, platelet derived

growth factor (PDGF) dan yang utama yaitu transforming growth factor beta (TGF-

β) kemudian faktor-faktor tersebut ditangkap oleh sel fibroblast sebagai sinyal

untuk pembentukan kolagen dan elastin. Percepatan proses fibrosis juga

dipengaruhi oleh proses fagositosis oleh makrofag yaitu saat makrofag

memfagositosis sel-sel yang mati akibat proses fisiologis dapat meningkatkan

sekresi TGF-β1 (Primadina et al, 2019; Christina et al, 2015).

 13

2.2.3 Peran Sel Makrofag pada Tuberkulosis

Pada tahap awal infeksi, sel-sel kekebalan tubuh terutama makrofag akan

menghasilkan reactive oxygen species (ROS) untuk membantu eliminasi Mtb.

Dalam kondisi fisiologis, terjadi keseimbangan antara kadar peningkatan ROS dan

peningkatan antioksidan untuk menetralkan ROS yang berpotensi berbahaya dalam

jaringan. Keseimbangan antara ROS dan antioksidan pada tuberkulosis sangat

sensitif dan merupakan kunci homeostasis jaringan. Jika keseimbangan ini

terganggu akan mengakibatkan kerusakan sel yang irreversible. Replikasi Mtb yang

berlebihan akan menyebabkan fungsi efektor makrofag rusak. Selain itu, induksi

produksi modulator utama inflamasi yaitu IL-10 sebagai sitokin yang sangat manjur

untuk memodulasi respon kekebalan antimikroba selama infeksi Mtb akan

menghambat fungsi makrofag. Penderita tuberkulosis juga mengalami penurunan

status gizi yang akan menunda penyembuhan dengan menekan respon imun tubuh

dan fungsi makrofag. Fungsi makrofag adalah Antigen-presenting cell (APC) dan

fagositosis professional dimana jika terdapat gangguan maka akan berakibat infeksi

luka pada patogen yang tidak difagositosis sehingga terjadi terhambatnya

penyembuhan luka akibat makrofag tidak menstimulus growth factor dan TGF-β

sehingga terjadi perlambatan pada fase penyembuhan selanjutnya. Sebuah

penelitian juga melaporkan bahwa infeksi Mtb pada makrofag akan menginduksi

aktivasi NF-Kb (Amaral et al, 2020; Widiastuti et al, 2019; Chandrasekaran et al,

2017; Hidayat et al, 2015; Feng et al, 2020).

2.3 Radikal Bebas dan Stress Oksidatif

2.3.1 Definisi Radikal Bebas

 14

Radikal bebas merupakan molekul atau atom yang mengandung satu atau

lebih elektron tidak berpasangan pada orbital terluarnya. Senyawa radikal bebas

muncul akibat berbagai proses kimia yang kompleks dalam tubuh sebagai hasil

samping dari proses oksidasi atau pembakaran sel yang berlangsung pada saat

bernafas, metabolisme sel, olahraga berlebihan, inflamasi atau saat tubuh terpapar

polusi lingkungan. Dalam tubuh, radikal bebas bersifat sangat reaktif dan akan

berinteraksi secara destruktif melalui reaksi oksidasi dengan bagian tubuh

maupun sel-sel tertentu yang tersusun dari lemak, protein, karbohidrat, DNA dan

RNA sehingga akan memicu berbagai penyakit seperti jantung koroner, penuaan

dini, dan kanker. Kerusakan sel yang diakibatkan oleh radikal bebas yaitu

kerusakan struktur DNA, kerusakan membrane sel, kerusakan protein, kerusakan

lipid peroksida, dan menimbulkan autoimun.(Rosahdi et al, 2013; Fakriah et al,

2019).

Reactive oxygen species (ROS) derivate oksigen radikal dan nonradikal

yang berupa molekul luas. ROS memiliki sifat sangat tidak stabil dan reaktif

karena termasuk molekul tidak berpasangan. ROS hanya dapat bertahan dalam

hitungan millisecond sebelum bereaksi dengan molekul lain untuk menstabilkan

diri. Jenis ROS yang paling banyak dipelajari yaitu superoksida (·O-), hydroxyl

(·OH-), dan perhydroxyl (·O2H) karena efeknya yang dapat merusak. Beberapa

sumber ROS dapat berasal dari radiaso rontgen maupun ultraviolet, ion logam

seperti Fe2+, Co2+ dan Cu+ yang bereaksi dengan hydrogen peroksida (H2O2)

menghasilkan radikal OH, nitrit oksida yang merupakan senyawa penting untuk

relaksasi pembuluh darah selain merupakan radikal bebas juga dapat bereaksi

dengan superoksida menghasilkan peroksinitrit kemudian membentuk OH.

 15

Hidrogen peroksida (H2O2) adalah senyawa turunan oksigen yang bersifat

oksidan kuat dan bereaksi lambat dengan substrat organik. Sumber lainnya juga

dapat berasal dari respiratory burst dari makrofag yang teraktifkan. ROS juga

dihasilkan oleh sel dalam tubuh akibat aktivitas pembuatan energi (ATP) yaitu

pada tahap transport elektron terdapat kemungkinan kebocoran elektron sebesar

1-3% kemudian elektron tersebut akan bereaksi dengan oksigen sehingga terjadi

pembentukan superoksida (Widayati, 2012; Suhartono dan Setiawan, 2006; Aziz

et al, 2018).

Superoksida merupakan komponen utama ROS dan diproduksi oleh reaksi

yang dikatalisis oleh berbagai enzim kemudian akan dinetralkan atau dikonversi

menjadi H2O2 oleh enzim Superoxide dismutase (SOD). Radikal superoksida

(·O2) merupakan molekul oksidator lemah, toksisitas rendah, dan lebih bertindak

sebagai prekursor terbentuknya ROS lain. Radikal hidroksil (·OH) merupakan

oksidan yang sangat kuat dan dapat bereaksi dengan semua substrat biologis.

Molekul ini sangat reaktif dapat melangsungkan efeknya dalam batas daerah yang

dekat dengan tempat pembentukannya dan molekul ini juga dapat melangsungkan

efek jarak jauhnya melalui pembentukan radikal bebas yang kurang reaktif

(daughter radicals). Asam hipoklorit (HOCl) merupakan asam lemah dan

merupakan senyawa reaktif yang dapat menyebabkan kerusakan biomulekul

secara langsung atau melalui proses klorinasi. Radikal peroksil (·ROO) dan

aloksil (·RO) merupakan oksidan kuat yang dihasilkan oleh sistem biologis.

Kedua radikal ini terbentuk dari proses peroksidasi lipid dengan pemecahan ·H.

Adanya oksigen menyebabkan radikal peroksil mengoksidasi askorbat dan

 16

NADH sehingga membentuk ·O2 (Aziz et al, 2018; Widayati, 2012; Suhartono

dan Setiawan, 2006).

2.3.2 Definisi Stres Oksidatif

Stress oksidatif merupakan kondisi adanya ketidakseimbangan antara

prooksidan atau radikal bebas yang dipicu oleh kondisi dimana kurangnya

antioksidan disertai produksi radikal bebas berlebih. Stres oksidatif juga

didefinisikan sebagai peningkatan sementara atau peningkatan secara kronis

tingkat produksi ROS berlebih yang mengganggu metabolisme selular, regulasi

sel dan komponen seluler (Susantiningsih, 2015; Gospodaryov dan Lushchak,

2012).

2.3.3 Mekanisme Kerusakan Sel karena Stres Oksidatif

Stress oksidatif dapat menyebabkan kerusakan oksidatif mulai dari kerusakan

tingkat sel, jaringan, hingga ke organ tubuh serta mengakibatkan percepatan

proses penuaan dan munculnya berbagai patogenesis penyakit. Saat produksi

radikal bebas berlebih dan antioksidan kurang maka akan terjadi stress oksidatif.

Radikal bebas akan menyerang molekul stabil terdekat dan mengambil elektron,

kemudian zat yang terambil akan menjadi radikal bebas juga dan memulai suatu

reaksi berantai yang akhirnya terjadi kerusakan sel. Radikal bebas seringkali

bereaksi secara cepat dengan atom lain untuk mengisi orbital yang tidak

berpasangan (Susantiningsih, 2015; Sinaga, 2016). Kerusakan sel secara biologis

karena stres oksidatif disebabkan karena adanya reaksi Fenton dan Harber-Weiss.

Pada reaksi Fenton, H2O2 akan bereaksi dengan Fe2+ menjadi Fe3+ dan radikal

hidroksil (OH). Reaksi Herber-Weiss memerlukan ion Fe3+ dan Cu2+. Pada

reaksi Herber-Weiss, O2 dan H2O2 merupakan substrat yang akan dikatalisasi

 17

oleh ion besi kemudian menghasilkan radikal hidroksil. Radikal hiodroksil adalah

oksidan yang tidak stabil dan sangat reaktif (Suhartono dan Setiawan, 2006;

Maanari et al, 2014; Lukitasari, 2009).

Stress oksidatif yang berkepanjangan akan semakin memberikan kesempatan

ROS untuk merusak membran lipid dari komponen fosfolipid bilayer dinding sel

sehingga menyebabkan kematian sel hingga kerusakan jaringan sekitar sel.

Kerusakan oksidatif yang disebabkan oleh ROS ditandai dengan produksi

Malondialdehid (MDA). MDA adalah indikator umum yang digunakan untuk

menentukan jumlah radikal bebas dan secara tidak langsung dapat menilai

kapasitas oksidan tubuh (Budi et al, 2019; Darwadi et al, 2013; Sinaga, 2016).

2.3.4 Hubungan Tuberkulosis dengan Stres Oksidatif

Beberapa penelitian telah mengaitkan hubungan stress oksidatif dengan

berbagai penyakit paru-paru salah satunya tuberkulosis. Pada tuberkulosis,

makrofag akan menghasilkan ROS untuk membantu melawan infeksi Mtb. Pada

kondisi fisiologis, peningkatan ROS akan bersamaan dengan peningkatan

produksi antioksidan untuk menetralisir efek berbahaya ROS dalam jaringan.

Selama infeksi awal Mtb akan memicu produksi ROS yang intens sehingga

menyebabkan keadaan yang tidak proporsional antara ROS dengan antioksidan.

Akibat interaksi Mtb yang berkelanjutan dengan sistem imun host, Mtb semakin

memicu peningkatan progresif produksi ROS oleh makrofag yang berujung pada

oksidasi berlebih dan peroksidasi lipid. Akibat infeksi Mtb yang persisten,

makrofag yang terinfeksi Mtb akan mengalami peningkatan peroksidasi lipid,

oksidasi DNA, fungsi efektornya rusak, dan terjadi kematian sel akibat akumulasi

ROS yang signifikan. Stres pada makrofag yang berlebihan akan menurunkan
 18

regulasi metabolism seluler yang menyebabkan meningkatan ROS bersamaan

dengan pengurangan antioksidan sehingga memuncak menjadi kerusakan

jaringan yang signifikan. Pada tuberkulosis, ROS menghasilkan produk

sampingan seperti Malondialdehyde (MDA) yang berasal dari reaksi peroksidasi

lipid yang memiliki efek memperparah fungsi sel (Amaral et al, 2020; Widiastuti

et al, 2019).

2.4 Ikan Toman

2.4.1 Taksonomi Ikan Toman

Ikan toman secara taksonomi diklasifikan sebagai berikut:

Ordo : Labyrinthici

Famili : Channidae

Genus : Channa

Species : Channa micropeltes

Gambar 2.3 Ikan Toman (Channa micropeltes) (Helfman et al, 2009)

Penamaan ikan toman disebut toman hanya di Malaysia dan Indonesia saja

sedangkan di daerah lain umumnya ikan toman mempunyai nama yang berbeda

sedangkan di Kalimantan Selatan disebut dengan ikan tauman. Nama internasional

ikan toman adalah Giant snakehead atau dikenal juga dengan Indonesian
 19

snakehead atau Red snakehead. Ikan toman dapat mencapai bobot total maksimum

hingga 20 kg dengan panjang total maksimum 150 cm (Akbar, 2017).

2.4.2 Morfologi Ikan Toman

Ikan toman memiliki tubuh berbentuk silindris, bersisik seperti kepala ular,

bagian perut berwarna putih terang, terdapat garis pada bagian badan, dan berwarna

hitam agak kemerahan. Garis strip dan warna merahnya akan menghilang kemudian

digantikan dengan warna pola hitam keabu-abuan atas dan putih pada bagian perut

seiring bertambahnya usia ikan. Bentuk mulut protractile (dapat disembulkan),

moncong agak runcing, dan gigi taring tajam. Selain itu memiliki permulaan sirip

punggung di depan sirip perut, sirip punggung terpisah dengan sirip ekor dan sirip

ekor membundar. Semua sirip berwarna hitam dengan tepi sedikit kemerahan

kecuali sirip pelvic berwarna putih (Akbar, 2017; Sukmono dan Margaretha, 2017).

2.4.3 Kandungan Ikan Toman

Ikan toman mengandung albumin, seng, asam lemak omega-3, dan asam lemak

omega-6. Ikan toman memiliki kadar albumin tertinggi dari lima keluarga

channidae lainnya yaitu 5,53% dan memiliki kadar protein 19,69%. Albumin

berperan sebagai Human Serum Albumin (HSA) untuk membantu penyembuhan

luka. Pada penelitian Pratama et al 2020 menyebutkan bahwa ikan toman

mengandung 15 asam amino yaitu threonine, valin, lisin, arginin, asam aspartic,

serine, glutamate, glisin, alanin, dan tirosin. Asam lemak omega-6 yang memiliki

turunan asam arakidonat (AA) berperan penting dalam fase inflamasi penyembuhan

luka (Firlianty et al, 2019; Pratama et al, 2020; Fajriani et al, 2018).
 20

2.4.4 Peran Albumin

Albumin merupakan protein monomer yang mudah larut dalam air dan

mengalami koagulasi saat terkena panas. Albumin termasuk antioksidan penting di

dalam serum dan berperan utama dalam mengikat asal lemak bebas, kation

divalens, dan hydrogen oxochloride (HOCL). Dalam ilmu kedokteran, albumin

banyak dimanfaatkan untuk pemulihan jaringan sel tubuh yang terbelah atau

mengalami kerusakan. Sel di dalam tubuh akan kesulitan beregenerasi jika tubuh

kekurangan albumin. Albumin berperan dalam mengikat obat-obatan dan logam

berat yang tidak mudah larut dalam darah. Albumin juga berperan penting untuk

mempertahankan tekanan osmotic antara cairan di dalam dan di luar sel pada fase

inflamasi. Albumin adalah protein fase akut negatif yang jumlahnya akan menurun

pada saat infeksi, luka atau stress. Pada tuberkulosis, kadar albumin mengalami

penurunan disebabkan oleh anoreksia, malnutrisi, dan malabsorbsi (Fitriyani, 2018;

Nurdianty et al, 2019; Prastowo et al, 2016).

Ikan toman mengandung albumin yang merupakan antioksidan

ekstraseluler yang termasuk dalam kelompok sulfhidril (-SH) dan berfungsi sebagai

pengikat radikal bebas. Albumin dapat berikatan dengan ion metal pada proses

pembentukan ROS melalui sulfhidril (-SH) pada albumin yang akan beraksi dengan

ROS. Albumin berperan sebagai pengikat oksigen serta sebagai analis

hidroperoksida untuk senyawa radikal bebas dari proses oksidatif. Albumin sebagai

antioksidan eksogen akan membantu superoxide dismustase (SOD) sebagai

antioksidan endogen untuk mencegah pembentukan ROS dan lipid peroksida.

Albumin juga akan bereaksi dengan polyunsaturated fatty acid (PUFA) untuk

mempertahankan kerusakan akibat radikal bebas. PUFA dapat menghasilkan

 21

produk yang disebut malondialdehyde (MDA) yang merupakan senyawa aldehida

akibat proses peroksidasi lipid (Apriasari et al, 2019).

2.4.5 Peran Asam Lemak

Ikan toman mengandung asam lemak omega-3 dan asam lemak omega-3.

Asam lemak omega-6 yang terkandung dalam ikan toman yang memiliki turunan

asam arakidonat (AA) dapat berperan sebagai proinflamasi dan antiinflamasi. Asam

arakidonat merupakan substrat utama pembentuk eukosanoid jenis tromboksan,

prostasiklin, dan leukotrien. Dengan bantuan enzim siklooksigenase (COX), asam

arakidonat akan dikonversi menjadi eucosanoids jenis prostaglandin (PGE2) dan

turunannya yaitu prostasiklin dan tromboksan. Prostasiklin (PGI2) berperan

menghambat pembekuan darah dan melancarkan aliran darah, sedangkan

tromboksan (TXA2) yang terbentuk di platelet menyebabkan keping darah menyatu

dan membeku. Asam lemak omega-3 juga akan bekerja melibatkan mediator anti-

inflamasi lainnya seperti lipoksin, resolving, dan protectin akan memobilisasi sel

makrofag untuk memakan sel neutrofil dan membersihkan sisa proses fagositosis.

Proses ini mengakhiri proses inflamasi atau biasa disebut dengan resolution (Andrie

dan Sihombing, 2017).

2.5 Tikus Wistar

Tikus Wistar secara taksonomi diklasifikasikan sebagai berikut (Treuting et

al, 2017; Angria, 2019):

Kelas : Mammalia

Divisi : Chordata

Ordo : Rodentia

Famili : Muridae
 22

Genus : Rattus

Spesies : Rattus norvegicus L

Gambar 2.4 Tikus Wistar (Rattus norvegicus) (Sharma et al, 2015)

Tikus sering dijadikan objek dalam penelitian karena lebih mudah dikontrol

dari asupan makanan dan aktivitas fisik sehingga memperkucil terjadinya bias saat

penelitian. Serangkaian percobaan terlebih dahulu dilakukan pada hewan model

sebelum diaplikasikan kepada manusia. Tikus wistar adalah jenis strain tikus yang

banyak digunakan sebagai penelitian laboratorium untuk penelitian biomedik dan

mempelajari keadaan patologis yang kompleks. Tikus ini memiliki ciri-ciri telinga

panjang, kepala lebar, dan memiliki panjang ekor yang selalu kurang dari panjang

tubuhnya. Tikus jantan banyak digunakan untuk penelitian karena periode

pertumbuhan yang lebih lama dibandingkan tikus betina. Pemilihan tikus wistar

putih jantan juga dikarenakan dapat memberikan hasil penelitian yang lebih stabil

karena tidak dipengaruhi oleh siklus estrus dan kehamilan (Fitria et al, 2014;

Angria, 2019; Pramesti et al, 2014).

 23

2.6 Kerangka Teori

Ekstrak ikan
Tuberkulosis Toman

Replikasi Mtb ↑
Infeksi Mtb
Omega 6 Omega 3 Albumin

Fase Inflamasi Makrofag rusak Arachidonic Bekerja Pensinyalan

\ acid dengan NRf2
Makrofag mediator
menginduksi Terhambatnya
fagositosis + COX inflamasi + ARE
ROS

↑ ROS PGE2 ↑ SOD

Fase inflamasi
terganggu
↑ Stress Regulasi
MDA makrofag Senyawa
oksidatif
thiol
Mengatur mengikat
Aktivasi Kerusakan
enzim 15-LO sebagian
NF-Kb sel
ion logam
Mediator Leukotrin
↑ Prolonged antiinflamasi → Lipoksin
inflammatory

Mengikat
Gangguan pada PUFA
makrofag

Gambar 2.5 Skema Kerangka Teori

Keterangan:

: Variabel yang diteliti

: Variabel yang tidak diteliti

 24

2.6.1 Penjelasan Kerangka Teori

Tuberkulosis adalah penyakit infeksi yang disebabkan oleh Mycobacterium

tuberculosis dan sering menyerang jaringan paru. Tuberkulosis juga dapat

menyerang tulang, sistem saraf pusat, dan sistem organ lainnya (Kenedyanti dan

Sulistyorini, 2017; Warren et al, 2017). Pada tahap awal infeksi, sel-sel kekebalan

tubuh terutama makrofag akan menghasilkan reactive oxygen species (ROS) untuk

membantu eliminasi Mtb. Tingkat produksi ROS berlebih juga akan menyebabkan

stres oksidatif yang akan menginduksi inflamasi melalui aktivasi NF-kB dan juga

sebaliknya, inflamasi dapat melepaskan ROS. Produksi ROS yang berlebihan akan

mengganggu ekspresi mediator proinflamasi, destruksi dan disfungsi jaringan, serta

perubahan struktur molekul. Pada tuberkulosis, ROS menghasilkan produk

sampingan seperti Malondialdehyde (MDA) yang berasal dari reaksi peroksidasi

lipid yang memiliki efek memperparah fungsi sel (Amaral et al, 2020; Apriasari et

al, 2019; Widiastuti et al, 2019). Infeksi Mtb persisten menyebabkan makrofag

yang terinfeksi Mtb akan mengalami peningkatan peroksidasi lipid, oksidasi DNA,

fungsi efektornya rusak, dan terjadi kematian sel akibat akumulasi ROS yang

signifikan. Gangguan pada makrofag pada tuberkulosis akan berakibat infeksi luka

pada patogen yang tidak difagositosis sehingga terjadi gangguan pada fase

inflamasi dan terhambatnya penyembuhan luka (Amaral et al, 2020; Hidayat et al,

2015).

Ikan toman mengandung asam lemak omega-6, omega-3, dan albumin.

Asam lemak omega-6 yang terkandung dalam ikan toman yang memiliki turunan

asam arakidonat (AA) dapat berperan sebagai proinflamasi dan antiinflamasi. Asam

arakidonat merupakan substrat utama pembentuk eukosanoid jenis tromboksan,

 25

prostasiklin, dan leukotrien. Dengan bantuan enzim siklooksigenase (COX), asam

arakidonat akan dikonversi menjadi eucosanoids jenis prostaglandin (PGE2).

Prostaglandin berperan pada saat proses inflamasi dan berfungsi untuk

mengaktifkan sistem kerja makrofag (Andrie dan Sihombing, 2017; Khairunnida et

al, 2018). Asam arakidonat juga mengatur mengatur enzim 15-LO (15-

Lipooxigenase) yang terkandung dalam sel-sel neutrofil sehingga leukotrin

bertransisi menjadi lipoksin. Lipoksin berfungsi memblokir infiltrasi sel neutrofil

atau PMN yang mengarah ke peradangan berlebihan sehingga mencegah fase

inflamasi agar tepat waktu dan tidak berkelanjutan yang dapat membahayakan

proses kerja normal sel dan jaringan sel. Fungsi lipoksin juga dapat melemahkan

makrofag proinflamasi (M1) dan menginduksi makrofag anti-inflamasi (M2).

Asam lemak omega-3 juga akan bekerja melibatkan mediator anti-inflamasi lainnya

seperti lipoksin, resolving, dan protectin akan memobilisasi sel makrofag untuk

memakan sel neutrofil dan membersihkan sisa proses fagositosis (Apriasari dan

Puspitasari, 2018; Sonnweber et al, 2018; Andrie dan Sihombing, 2017).

Kandungan albumin pada ikan toman berperan sebagai antioksidan dengan

meningkatkan SOD melalui pensinyalan nuclear factor erythroid2-related (Nrf2).

Sinyal dari ROS dan elektrofil menyebabkan disosiasi Nrf2 dari Keap1 dan

kemudian Nrf2 akan ditranslokasi ke nukleus. Dalam nukleus, NRf2 mengikat

dengan sekuens pengatur yang disebut elemen respons antioksidan atau elemen

respons elektrofil (ARE/EpRE) yang terletak di wilayah promotor gen yang

mengkode antioksidan dan enzim detoksifikasi. Aktivasi Nrf2 menginduksi

peningkatan enzim antioksidan endogen (SOD) dengan mengikat antioxidant

respon element (ARE). Peningkatan aktivitas SOD dapat menetralkan jumlah ROS
 26

yang berlebihan dalam bentuk anion superoksida melalui reaksi katalitik enzim

superoksida dismutase. Nrf2 dalam proses inflamasi juga akan menghambat faktor

transkripsi NF-kB untuk menginduksi pengurangan proses inflamasi. Disregulasi

Nrf2 akan menginduksi pengurangan faktor transkripsi NF-kB dan meningkatkan

beberapa gen untuk mengkode ekspresi mediator inflamasi. Albumin sebagai

antioksidan eksogen juga akan membantu superoxide dismustase (SOD) sebagai

antioksidan endogen untuk mencegah pembentukan ROS dan lipid peroksida.

Albumin juga akan bereaksi dengan polyunsaturated fatty acid (PUFA) untuk

mempertahankan kerusakan akibat radikal bebas. PUFA dapat menghasilkan

produk yang disebut malondialdehyde (MDA) yang merupakan senyawa aldehida

akibat proses peroksidasi lipid (Apriasari et al, 2019). Albumin yang merupakan

antioksidan ekstraseluler yang termasuk dalam kelompok sulfhidril (-SH) dan

berfungsi sebagai pengikat radikal bebas. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa

albumin memiliki sifat antioksidan dengan mengikat tembaga. Protein albumin

yang mengandung thiol plasma dengan gugus sulfhyhidril akan mengikat ion logam

Fe dan Cu sehingga tidak semua bereaksi dengan H2O2 dan radikal hidroksil (OH)

sehingga memutus terjadinya reaksi Fenton dan Harber-Weiss yang merupakan

oksidan sangat reaktif pembentukannya dapat berkurang (Apriasari et al, 2019;

Trujillo et al, 2016; Sitar et al, 2013).

 BAB 3

KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS

3.1 Kerangka Konsep

Variabel Terikat
Variabel Bebas
Jumlah sel makrofag tikus
Ekstrak ikan Toman Wistar (Rattus
(Channa micropeltes) dosis norvegicus) model
16 mL/KgBB, 18 mL/KgBB, tuberkulosis.
dan 20 mL/KgBB.

Variabel Terkendali
• Tikus Wistar (Rattus norvegicus) jenis kelamin jantan, berat 200-300
g, umur 6-8 minggu.
• Tikus Wistar (Rattus norvegicus) diinduksi bakteri Mycobacterium
tuberculosis 60µl (105 bakteri perml) secara intraperitoneal.
• Nutrisi diberikan pakan standar BR2 dan aquabidest dua kali sehari
dan minum air bersih.
• Ekstrak ikan Toman (Channa micropeltes) diberikan secara oral
menggunakan sonde lambung steril.
• Kondisi kandang dalam keadaan bersih dengan suhu 22-25° C.
• Diadaptasikan selama satu minggu dalam suasana laboratorium.

Gambar 3.1 Kerangka Konsep

3.1.1 Variabel Bebas

Variabel bebas dari penelitian ini adalah ekstrak ikan Toman (Channa

micropeltes) dosis 16 mL/KgBB, 18 mL/KgBB, 20 mL/KgBB.

27
 28

3.1.2 Variabel Terikat

Variabel terikat dari penelitian ini adalah sebagai berikut: Jumlah sel makrofag

pada luka punggung tikus wistar.

3.1.3 Variabel Terkendali

Variabel terkendali pada penelitian ini adalah sebagai berikut:

a. Tikus Wistar (Rattus norvegicus) jenis kelamin jantan, berat 200-300 g, umur

6-8 minggu.

b. Tikus Wistar (Rattus norvegicus) diinduksi DM dengan Mycobacterium

tuberculosis 60µl (105 bakteri perml) secara intraperitoneal.

c. Nutrisi diberikan pakan standar BR 2 dan aquabidest dua kali sehari dan

minum air bersih.

d. Ekstrak ikan Toman (Channa micropeltes) diberikan secara oral menggunakan

sonde lambung steril.

e. Kondisi kandang dalam keadaan bersih dengan suhu 22-25° C.

f. Diadaptasikan selama satu minggu dalam suasana laboratorium.

3.2 Hipotesis

a. Terdapat pengaruh pemberian ekstrak ikan Toman (Channa micropeltes) dosis

16 mL/Kg BB, 18 mL/KgBB, dan 16 mL/KgBB secara oral terhadap jumlah

sel makrofag pada luka punggung tikus wistar (Rattus novergicus) yang

diindukusi tuberkulosis selama 14 hari.

b. Terdapat perbedaan jumlah sel makrofag pada tikus Wistar (Rattus norvegicus)

model tuberkulosis, dan tikus Wistar (Rattus norvegicus) yang diberikan

ekstrak ikan Toman (Channa micropeltes) dosis 16 mL/Kg BB, 18 mL/Kg BB,

dan 20 mL/Kg BB di hari ke-15.

 BAB 4

METODE PENELITIAN

4.1 Rancangan Penelitian

Penelitian ini bersifat true experimental dengan rancangan penelitian post test

only with control group design untuk menganalisis jumlah sel makrofag tikus

Wistar (Rattus norvegicus) model tuberkulosis setelah diberikan ekstrak ikan

Toman (Channa micropeltes) dosis 16 mL/KgBB.

4.2 Populasi dan Sampel

4.2.1 Populasi

Populasi pada penelitian ini adalah tikus Wistar (Rattus norvegicus).

4.2.2 Sampel

4.2.2.1 Kriteria Inklusi

a. Tikus Wistar (Rattus norvegicus) jantan.

b. Umur tikus 6–8 minggu.

c. Berat badan tikus 200 – 300 g.

d. Keadaan tikus sehat.

4.2.2.2 Kriteria Eksklusi

a. Tikus mati.

b. Tikus cacat atau luka.

c. Tikus yang sebelumnya pernah diberikan perlakuan untuk penelitian lain

4.2.3 Teknik Pengambilan Sampel

Teknik pengambilan sampel tikus berdasarkan rumus Federer (Supranto,

2007):

(𝑛 − 1)(𝑡 − 1) ≥ 15

29
 30

(𝑛 − 1)(4 − 1) ≥ 15

(𝑛 − 1)(3) ≥ 15

3𝑛 − 3 ≥ 15

3𝑛 ≥ 18

𝑛 ≥6

Keterangan:

n = jumlah ulangan miniman dari tiap perlakuan

t = jumlah perlakuan

4.2.4 Besar Sampel

Berdasarkan rumus teknik pengambilan sampel, didapatkan jumlah sampel

yang digunakan yaitu 6 ekor tikus untuk tiap kelompok.

Kelompok 1 (kontrol negatif) :Tikus Wistar (Rattus norvegicus) model

tuberkulosis yang diberikan pakan BR2 dan

aquabidest saja selama 14 hari.

Kelompok 2 (perlakuan 1): Tikus Wistar (Rattus norvegicus) model tuberkulosis

yang diberikan pakan BR2, aquabidest dan ekstrak

ikan Toman (Channa micropeltes) dosis 16 mL/kgBB

selama 14 hari.

Kelompok 3 (perlakuan 2): Tikus Wistar (Rattus norvegicus) model tuberkulosis

yang diberikan pakan BR2, aquabidest dan ekstrak

ikan Toman (Channa micropeltes) dosis 18 mL/kgBB

selama 14 hari.
 31

Kelompok 4 (perlakuan 3): Tikus Wistar (Rattus norvegicus) model tuberkulosis

yang diberikan pakan BR2, aquabidest dan ekstrak

ikan Toman (Channa micropeltes) dosis 20 mL/kgBB

selama 14 hari.

4.3 Variabel Penelitian

4.3.1 Variabel Bebas

Variabel bebas dari penelitian ini adalah ekstrak ikan Toman (Channa

micropeltes) dosis 16 mL/KgBB, 18 mL/KgBB, 20 mL/KgBB.

4.3.2 Variabel Terikat

Variabel Terikat pada penelitian ini adalah jumlah sel makrofag tikus Wistar

(Rattus norvegicus) model tuberkulosis.

4.3.3 Variabel Terkendali

a. Tikus Wistar (Rattus norvegicus) jenis kelamin jantan, berat 200-300 g, umur

6-8 minggu.

b. Tikus Wistar (Rattus norvegicus) diinduksi tuberkulosis dengan pemberian

Mycobacterium tuberculosis 60µl (105 bakteri perml) secara intraperitoneal.

c. Nutrisi diberikan pakan standar BR2 dan aquabidest dua kali sehari.

d. Ekstrak ikan Toman diberikan secara oral menggunakan sonde lambung steril.

e. Kondisi kandang dalam keadaan bersih dengan suhu 22-25° C.

f. Diadaptasikan selama satu minggu dalam suasana laboratorium.

 32

4.3.4 Definisi Operasional

Tabel 4.1 Definisi Operasional

Variabel Definisi Cara Mengukur Satuan Skala

Operasional dan Alat Ukur

1. Variabel
Bebas
Cairan kuning
Ekstrak ikan atau putih yang
Toman didapat dari Pengukuran mL Rasio
mengukus hasil esktrak
daging ikan ikan Toman
Toman selama menggunakan
±30 menit glass beker 500
dengan suhu 70- ml.
80°C, dicampur
sampai
homogen dan
didapatkan dosis
16 mL/Kg BB,
18 mL/KgBB,
20 mL/KgBB.

2. Variabel
Terikat.

a. Jumlah sel
makrofag Jumlah sel Pengukuran Juta per Rasio
makrofag pada jumlah sel mm3
luka punggung makrofag di
tikus wistar bawah
adalah Jumlah mikroskop
 33

sel makrofag dengan

yang dihitung perbesaran 400
pada jaringan kali pada 5
ikat bagian tepi bidang kamar
luka yang hitung
terdapat pada 5
bidang kamar
hitung.
Makrofag yang
ada didalam
jaringan,
nukleusnya
nampak seperti
biji kacang atau
bentuk ginjal,
disekitarnya ada
granula kecil,
sedangkan
sitoplasmanya
berwarna abu-
abu.

3. Variabel
Terkendali

a. Tikus Wistar
(Rattus Tikus Wistar Timbangan g Rasio
norvegicus) yang digunakan digital
sebagai hewan
 34

percobaan yang
berusia 6-8
minggu dengan
berat 200-300 g.

b. Tikus Tikus Berat badan g Rasio

tuberkulosis tuberkulosis tikus diukur
adalah tikus menggunakan
yang Ketika timbangan
berat badannya analitik
turun sekitar ± laboratorium.
20 g.

Makanan yang
diberikan
kepada tikus - -
c. Nutrisi -
berupa BR2 dan
aquadest steril.

Tikus dipelihara.
d. Kondisi dengan kandang
Celcius Interval
Kandang yang terbuat dari Suhu kandang
material yang diukur dengan
kedap air, kuat, thermometer
dan dibersihkan
2 kali sehari
serta suhu
kandang 22-
◦
25 C yang
terhindar dari
 35

matahari, dan
tidak lembab.

4.4. Instrumen Penelitian

4.4.1 Bahan Penelitian

1. Daging ikan toman untuk pembuatan ekstrak ikan toman.

2. Mycobacterium tuberculosis

3. Etanol 70% untuk membersihkan bulu disekitar punggung setelah dicukur.

4. Ketamine-xylazine untuk anastesi terhadap hewan coba sebelum dikorbankan.

5. Bahan pembuatan preparat: Larutan parafin murni, Buffer Neutral Formalin

(BNF) 10%, alkohol (85% dan 90%), alkohol absolute, dan xilol.

6. Bahan untuk pengecatan Haematoxylin Eosin (HE):

a. Bahan Mayers Haematoxyllin: Haematoxyllin crystal (C10H14O9H2O),

Sodium Jodate (Na J)/Sodium Jodate GR NaLO3, Amonium/Postasium,

Asam Sitrat (C6H8O7H2O), Chloral Hydrate (CCL3 CH(OH)2, Distalled

Water/Aquadest.

b. Larutan stock eosin: eosin, aquabidest, etanol.

Larutan working eosin: stock eosin, aquabidest, etanol, asam asetat glasial.

4.4.2 Alat Penelitian

1. Peralatan pembuatan ekstrak yang terdiri dari alat press Hidrolik alat Centrifuge

PLC Series, beaker glass 500 mL (Pyrex), clean pack, gelas ukur (Pyrex), kain

flanel, kompor gas, termometer, cawan porselin, panci kukus (modifikasi),

tabung reaksi (Pyrex), timbangan analitik (Precisa XB 4200C), botol kaca gelap

300mL, alumunium foil, batang pengaduk.

 36

2. Alat untuk aplikasi obat secara oral yaitu sonde lambung.

3. Alat untuk anastesi hewan coba yaitu spuit injeksi 5 mL.

4. Alat untuk membuat perlakuan yaitu toples transparan, kapas, scalpel dan blade

No. 15.

5. Alat yang digunakan pada hewan coba yaitu, kandang tikus wistar, tempat

makan, botol minuman tikus.

6. Alat untuk aplikasi ekstrak yaitu spuit injeksi.

7. Alat untuk menimbang berat badan tikus yaitu timbangan analitik laboratorium.

8. Alat untuk menyiapkan sediaan jaringan setelah dilakukan pengorbanan tikus:

nierbekken, pinset anatomis, pinset chirurgis, gunting bedah.

9. Alat yang digunakan untuk pembuatan dan pengamatan preparat histologis:

oven untuk pemanasan parafin, cetakan dari plastik untuk embedding,

mikrotom, base mould, kaca preparat, kaca objek, alat yang digunakan untuk

pengecatan dengan hematoxylin eosin, waterbath, kamera yang dihubungkan

dengan komputer, dan mikroskop cahaya (IMERCO IM-910B, made in

Germany).

4.5 Lokasi dan Waktu Penelitian

4.5.1 Lokasi Penelitian

Pembuatan ekstrak, perlakuan hewan coba, dan pembuatan sampel darah

dilakukan di Laboratorium Biokimia FK ULM Banjarbaru.

4.5.2 Waktu Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Januari-April 2021.

4.6 Prosedur Penelitian

4.6.1 Pembuatan Ekstrak Ikan Toman

 37

Pengambilan ikan Toman dilakukan di pasar tradisional yang berada di

Kalimantan Selatan. Berat total ikan Toman yang digunakan sebanyak 18 kg.

Sampel ikan Toman dibersihkan terlebih dahulu dari sisik, darah, kepala dan isi

perutnya, kemudian ditimbang dagingnya sebanyak 16 kg dan dikukus dalam panci

selama ±30 menit dengan suhu 70-80oC. Daging ikan Toman kemudian

dimasukkan ke dalam alat handpress untuk dilakukan pengepresan kemudian

disaring menggunakan kain saring. Ekstrak yang dihasilkan dimasukkan ke tabung

reaksi dan disentrifugasi selama 15 menit pada kecepatan 6000 rpm. Hasil

sentrifungasi berupa cairan yang dipisahkan dengan endapan. Ekstrak yang telah

dipisahkan disimpan dalam beberapa botol kaca gelap.

4.6.2 Penyimpanan Ekstrak Ikan Toman

Penyimpanan ekstrak ikan Toman disimpan di dalam lemari pendingin

dengan suhu ≤ 4oC untuk mencegah terjadinya kerusakan ekstrak akibat oksidasi

dan kontaminasi.

4.6.3 Aklimatisasi Hewan Coba

Sebelum dilakukan penelitian, telah diajukan ke komisi etik (Animal care and

Use Comite) di Fakultas Kedokteran Gigi ULM. Hewan coba sebelum digunakan

perlu dilakukan evaluasi klinis dengan cara dikondisikan dalam lingkungan yang

sesuai selama 7 x 24 jam untuk meyakinkan tidak berpenyakit atau menularkan

penyakit.

Tikus sesuai ciri populasi sejumlah ekor diadaptasikan selama 7 hari dalam

kandang yang jauh dari kebisingan, masing masing kandang berisi ekor. Kandang

hewan coba terbuat dari kotak plastik dengan ukuran 30 x 40 x 15 cm, dan ditutup

dengan anyaman kawat yang bisa dilepas sehingga mudah untuk dibersihkan. Alas
 38

kandang diberi sekam dan diganti setiap dua hari. Hewan coba diberikan pakan

standar BR2 dan minuman dalam botol 100 ml yang dilengkapi pipa kecil.

4.6.4 Induksi Tuberkulosis pada Tikus Wistar (Pemberian Mycobacterium

tuberculosis)

Model tikus tuberkulosis diperoleh dengan diinduksi 60 μL (105 baktei

perml) Mycobacterium tuberculosis melalui intraperitoneal. Berat badan tikus

sebelum diinduksi diperiksa terlebih dahulu menggunakan timbangan digital. Tikus

diberi pakan 2 kali sehari, kemudian berat badan tikus ditimbang setiap hari selama

seminggu. Tikus dinyatakan menderita tuberkulosis ketika berat badannya turun

sebanyak ±20 g.

4.6.5 Perlakuan Hewan

Tikus yang digunakan dikelompokkan dengan metode simple random

sampling, kemudian dibagi menjadi 5 kelompok dan setiap kelompok diberikan

perlakuan sebagai berikut:

Kelompok 1 (kontrol negatif): Tikus Wistar (Rattus norvegicus) model

tuberkulosis yang diberikan pakan BR2 dan

aquabidest saja selama 14 hari.

Kelompok 2 (perlakuan 1): Tikus Wistar (Rattus norvegicus) model tuberkulosis

yang diberikan pakan BR2, aquabidest dan ekstrak

ikan Toman (Channa micropeltes) dosis 16 mL/kgBB

selama 14 hari.

Kelompok 3 (perlakuan 2): Tikus Wistar (Rattus norvegicus) model tuberkulosis

yang diberikan pakan BR2, aquabidest dan ekstrak

 39

ikan Toman (Channa micropeltes) dosis 18 mL/kgBB

selama 14 hari.

Kelompok 4 (perlakuan 3): Tikus Wistar (Rattus norvegicus) model tuberkulosis

yang diberikan pakan BR2, aquabidest dan ekstrak

ikan Toman (Channa micropeltes) dosis 20 mL/kgBB

selama 14 hari.

4.6.6 Tikus Wistar Dikorbankan dengan Ketamin-Xylazine

Pada hari ke-15 tikus pada setiap kelompok dikorbankan dengan diberikan

anastesi secara intraperitoneal menggunakan obat bius campuran ketamine xylazine

dengan perbandingan 1 : 1. Tunggu beberapa menit hingga tikus tersebut tidak

sadarkan diri kemudian baru dilakukan pembedahan dan pengambilan darah.

4.6.7 Pengambilan Jaringan Tikus Wistar

Jaringan yang akan dilakukan pengamatan diambil secara biopsi dengan

teknik biopsi eksisional. Daerah biopsi dilakukan pada daerah dermis luka sayatan

punggung tikus wistar, dengan panjang 1 cm dan sedalam 2 mm.

4.6.8 Penanganan Bangkai Tikus Wistar

Bangkai tikus wistar yang telah diambil jaringannya dibersihkan terlebih

dahulu. Setelah dibersihkan bangkai hewan coba akan dibalut dengan kain yang

kemudian dikuburkan dengan kedalaman ± 25-50 cm.

4.6.9 Pembuatan Preparat

Masing-masing spesimen hasil tikus yang dikorbankan tiap kelompok diambil

untuk membuat sediaan histopatologi mukosa bukal tikus dengan tahapan sebagai

berikut:
 40

1. Tissue fixation: Daerah sayatan dan jaringan difiksasi dalam larutan Buffer

Neutral Formalin (BNF) 10% kurang lebih 24 jam.

2. Tissue trimming: Pemotongan jaringan hasil fiksasi + 1 cm, hasil pemotongan

dimuat dalam embedding casset.

3. Tissue prossesing/dehidrasi dan clearing: Organ yang sudah dimasukkan ke

dalam embedding casset dimuat dalam keranjang dan diputar dengan alat tissue

prossesing + 18 jam dengan tahap berurutan antara lain: Formalin 10% (I)

1 jam, formalin 10% (II) 1 jam, alkohol 85% 1 jam, alkohol 90% (I) 1 jam,

alkohol 90% (II) 1 jam, alkohol absolut (I) 2 jam, alkohol absolut (II) 2 jam,

xylol (I) 2 jam, xylol (II) 2 jam, parafin cair (I) 2 jam, dan parafin cair (II) 3 jam.

4. Blocking/Tissue embedding: Jaringan dipindah ke dalam base mold atau cetakan

yang diisi paraffin cair lalu dilekatkan pada embedding casset sampai dingin,

kemudian simpan dalam kulkas.

5. Cutting/pemotongan blok jaringan: Blok diletakkan di mikrotom kemudian

potong setebal 5 mikron, dipilih hasil potongan yang baik. Hasil potongan

diletakkan di waterbath dengan suhu 37oC-47 oC, dibiarkan hingga tidak ada

kerutan kemudian diambil dengan gelas objek dan dikeringkan.

4.6.10 Pewarnaan Haematoxyllin Eosin (HE)

Preparat yang sudah jadi selanjutnya diwarnai menggunakan metode

pewarnaan Haematoxyllin Eosin (HE) dengan urutan tahap yaitu: 1) xylol (I) 5

menit, 2) xylol (II) 5 menit, 3) xylol (III) 5 menit, 4) alkohol absolut (I) 3 menit, 5)

alkohol absolut (II) 3 menit, 6) alkohol 80% 3 menit, 7) alkohol 70% 3 menit, 8)

Aquabidest/air mengalir sampai bersih, 9) Mayer Haematoxyllin 2-5 menit, 10)

Aquabidest/air mengalir sampai bersih, 11) Eosin 5-10 menit, 12) alkohol 70% 3
 41

menit, 13) alkohol 80% 3 menit, 14) alkohol absolut (I) 3 menit, 15) alcohol

absolut(II) 3 menit, 16) xylol (I) 5 menit, 17) xylol (II) 5 menit, 18) xylol(III) 5

menit, 19) xylol(IV) 5 menit, dan 20) mounting.

4.6.11 Pengamatan Jumlah Makrofag

Pembuatan sediaan HPA dengan melakukan biopsi pada kulit punggung dan

difiksasi dengan memasukkan sediaan segar tersebut ke dalam larutan Neutral

Buffer Formalin (NBF) 10%. Sediaan yang telah difiksasi tersebut ditanam dalam

parafin dan dipotong tipis dengan mikrotom setebal 5 mikron. Selanjutnya

potongan tipis sediaan tersebut diletakkan diatas slide mikroskop dan dilakukan

pewarnaan dengan HE. Setelah kering diberi kaca penutup.

Pengamatan dilakukan dengan menghitung jumlah makrofag pada jaringan

ikat area tepi luka yang terdapat sel inflamasi. Sediaan histopatologi diamati

menggunakan mikroskop cahaya diawali dengan perbesaran terkecil berurutan dari

40 kali, 100 kali, dan 400 kali. Makrofag akan dihitung menggunakan pembesaran

400 kali pada 5 lapang pandang. Gambaran sel makrofag nukleusnya nampak

seperti biji kacang atau bentuk ginjal, disekitarnya terdapat granula kecil dan

sitoplasmanya berwarna abu-abu. Jumlah sel makrofag yang terlihat dihitung

jumlahnya dan dibandingkan pada setiap kelompok.

 42

4.7 Alur Penelitian

Perizinan Etical Clearence

Daging ikan Toman 24 ekor tikus Wistar

dibersihkan dan dicuci.
Daging ikan dikukus dengan
suhu 70-80°C selama 30 menit
dan dipres dengan handpress.
Ekstrak disentrifugasi 15
menit dengan kecepatan 6000
rpm lalu diambil cairannya.
diaklimatisasi selama
satu minggu.
24 ekor tikus Wistar diinjeksi
Mycobacterium tuberculosis
60µl (105 bakteri perml)
secara intraperitoneal.
Tikus Wistar tuberkulosis

Kelompok Kelompok Kelompok Kelompok kontrol

perlakuan 1: perlakuan 2: perlakuan 3: negatif:
6 ekor tikus Wistar 6 ekor tikus Wistar 6 ekor tikus Wistar 6 ekor tikus Wistar
diberi pakan BR2, diberi pakan BR2, diberi pakan BR2, diabetes diberi
aquabidest dan aquabidest dan aquabidest dan pakan BR2 dan
ekstrak ikan Toman ekstrak ikan Toman ekstrak ikan Toman aquabidest selama
16 mL/kgBB 18 mL/kgBB 20 mL/kgBB 14 hari.
.dengan sonde dengan sonde dengan sonde
lambung selama 14 lambung selama 14 lambung selama 14
Tikus dianestesi dengan ketamine xylazine untuk dikorbankan
hari. hari. hari.
Pengambilan jaringan pada hari ke-15

Perhitungan jumlah sel makrofag dengan pembuatan blok parafin dan

pewarnaan HE kemudian diamati di bawah mikroskop dengan pembesaran 400x
yang diamati di bawah mikroskop pembesaran 400 kali
Analisis Data Hasil
 43

Gambar 4.1 Skema Penghitungan Jumlah sel Makrofag Tikus Wistar model
tuberkulosis pada Pemberian Ekstrak ikan Toman dosis 16mL/kgBB,
18mL/kgBB, dan 20mL/kgBB.
4.8 Prosedur Pengambilan dan Pengumpulan Data

Data yang diperoleh adalah data primer yaitu data yang diperoleh langsung oleh

peneliti pada subjek penelitian melalui hasil preparat pembuatan histopatologi luka

punggung tikus wistar dengan dihitung jumlah sel makrofagnya. Data dikumpulkan

kemudian dicatat.

4.2 Tabel Pengumpulan Data

Kelompok

Kontrol Kelompok Perlakuan

Tikus Wistar Tikus Wistar Tikus Wistar

Tikus Wistar
tuberkulosis tuberkulosis tuberkulosis
tuberkulosis
yang diberi yang diberi yang diberi
Sampel yang diberi
pakan BR2 , pakan BR2 , pakan BR2 ,
pakan BR2
aquabidest, aquabidest, aquabidest,
dan
dan ekstrak dan ekstrak dan ekstrak
aquabidest
ikan Toman 16 ikan Toman 18 ikan Toman 20
saja
mL/kgBB mL/kgBB mL/kgBB
(Kontrol (-))
(Perlakuan 1) (Perlakuan 2) (Perlakuan 3)

No Makrofag Makrofag Makrofag Makrofag

1.

2.

3.

4.

5.

6.
 44

4.9 Cara Pengolahan dan Analisis Data

4.9.1 Cara Pengolahan Data

Data yang diperoleh dari hasil pemeriksaan diolah melalui proses editing,

tabulasi dan pengelompokan data, kemudian dilakukan analisis statistik. Editing

atau penyuntingan bertujuan untuk mengeroksi data, meliputi kebenaran dan

kelengkapan data. Tabulasi dan pengelompokan data adalah memindahkan data

yang terkumpul ke dalam table dan dikelompokan sesuai variabel penelitian,

Pengolahan data diproses menggunakan progam computer SPSS 26.0 for Windows.

4.9.2 Analisis Data

Data yang diperoleh diuji normalitasnya dengan uji Shapiro-Wilk, kemudian

dilakukan uji homogenitas varian Levene’s Test. Jika data yang diperoleh

terdistribusi normal dan homogen (p>0,05) maka data akan dianalisis parametrik

One-Way Anova dengan tingkat kepercayaan 95% (p=0,05) untuk melihat adanya

pengaruh pemberian kapsul ekstrak ikan Toman terhadap jumlah sel neutrofil dan

monosit yang mengalami perbedaan bermakna. Jika data yang diperoleh tidak

memenuhi salah satu persyaratan analisis parametrik maka dapat dilakukan uji

statistik non parametrik dengan Kruskal-Wallis (Dahlan, 2014).

45
 DAFTAR PUSTAKA

Akbar J. Potensi dan Tantangan Budi Daya Ikan Rawa (Ikan Hitaman dan Ikan
Putihan) di Kalimantan Selatan: Unlam Press; 2014. p. 77-78.

Abbas AK, Lichtman AH, Pillai S. Imunologi Dasar Abbas: Fungsi dan Kelainan
Sistem Imun. 5th Indonesia Edition: Elsevier; 2016.

Amaral EP, Vinhaes CL, Souza DO, Noguiera B, Akrami KM, Andreade BB. The
Interplay Between Systemic Inflammation, Oxidative Stress, and Tissue
Remodeling in Tuberculosis. Antioxidan and Redox Signaling. 2020; 00 (00):
3-9.

Andrie M, Sihombing D. Efektivitas Sediaan Salep yang Mengandung Ekstrak Ikan

Gabus (Channa striata) pada Proses Penyembuhan Luka Akut Stadium II
Terbuka pada Tikus Jantan Galur Wistar. Pharm Sci Res. 2017; 4 (2): 98.

Angria N. Undur-Undur (Myrmeleon sp.) sebagai Antidiabetik. Ponorogo: Uwais

Inspirasi Indonesia; 2019.

Apriasari ML, Puspitasari D. Effect of Channa micropeltes for Increasing

Lymphocyte and Fibroblast Cells in Diabetic Wound Healing. Journal of
Medical Sciences. 2018; 18 (4): 206-209.

Apriasari ML, Ainah Y, Febrianty E, Carabelly AM. Antioxidant Effect of Channa

micropeltes in Diabetic Wound of Oral Mucosa. International Journal of
Pharmacology. 2019; 15 (1): 138-141.

Aziz MA, Krisnadi SR, Setiabudiawan B, Handono B. Pengaruh Pemberian

Vitamin D3 terhadap Kadar Reactive Oxygen Species (ROS) pada Sel PHM-
41 yang Mengalami Hipoksia. Majalah Kedokteran Bandung. 2018; 50 (3):
195.

Belton M et al. Hypoxia and Tissue Destruction in Pulmonary TB. THORAX. 2016;
71 (12): 8.

Budi AR, Kadri H, Asri A. Perbedaan Kadar Malondialdehid pada Dewasa Muda
Obes dan Non-Obes di Fakultas Kedokteran Universitas Andalas. Jurnal
Kesehatan Andalas. 2019; 8 (2): 23-24.

Chandrasekaran P, Saravanan N, Bethunaickan R, Tripathy S. Malnutrition:

Modulator of Immune Response in Tuberculosis. Frontiers in Immunology.
2017; 1: 3-4.

45
 46

Christina, Hana BB, Fransisca C, Kristin K, Caroline, Sudiono J. Peran Monosit

(Makrofag) pada Proses Angiogenesis dan Fibrosis. Prosiding Seminar
Nasional Cendekiawan Lembaga Penelitian Universitas Trisakti; 2015. p.
255-257.

Darwadi RP, Aulanni’am, Mahdi C. Pengaruh Terapi Kurkumin terhadap Kadar

Malondialdehid (MDA) Hasil Isolasi Parotis dan Profil Tikus Putih yang
Terpapar Lipopolisakarida (LPS). Kimia Student Journal. 2013; 1 (1): 134.

Dinas Kesehatan Provinsi Kalimantan Selatan. Profil Kesehatan Provinsi

Kalimantan Selatan Tahun 2015: Dinas Kesehatan Provinsi Kalimantan
Selatan; 2015. p. 17-18.

Fajriani N, Carabelly AN, Apriasari ML. The Effect of Toman Fish Extract
(Channa micropeltes) on Neutrophil in Diabetes Mellitus Wound Healing.
Dentino. 2018; 3 (1): 15-16.

Fakriah, Kurniasih E, Adriana, Rusydi. Sosialisasi Bahaya Radikal Bebas dan

Fungsi Antioksidan Alami bagi Kesehatan. Jurnal Hasil-Hasil Penerapan
IPTEKS dan Pengabdian kepada Masyarakat. 2019; 3 (1): 2-3.

Feng et al. Differential Responses by Human Macrophages to Infection with

Mycobacterium tuberculosis and Non-Tuberculosis Mycobacteria. Frontiers
in Microbiology. 2020; 11 (116): 3.

Firlianty, Hermansyah, Samosir W. Kajian Efektivitas Ekstrak Gel Ikan Toman

(Channa micropeltes) pada Luka Bakar Mencit (Mus musculus).
EnviroScienteae. 2019; 15 (2): 188.

Fitria L, Sarto M. Profil Hematologi Tikus (Rattus norvegicus Berkenhout, 1769)

Galur Wistar Jantan dan Betina Umur 4, 6, dan 8 Minggu. Biogenesis Jurnal
Ilmiah Biologi. 2014; 2 (2): 94.

Fitriyani E. Pengaruh Suhu dan Waktu Ekstraksi Ikan Toman (Channa micropeltes)
Menjadi Serbuk Albumin. Jurnal Galung Tropika. 2018; 7 (2): 103.

Gospodaryov D, Lushchak V. Oxidative Stress: Cause and Consequence of

Disease. Intechopen. 2012: 14.

Hall, JE. 2012. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. 12th ed.
Philadelphia; Elsevier.

Handajani J, Fatimah S, Asih R, Latif A. Penurunan Kadar IL-1β Makrofag

Terpapar Agregat Bakteri Actinomycetemcomitans setelah Pemberian
 47

Minyak Atsiri Temu Putih. Majalah Kedokteran Gigi Indonesia. 2015;1 (2):
131.

Helfman GS, Collete BB, Facey DE, Bowen BW. The Diversity of Fishes. 2nd
Edition. Oxford: Wiley Black-Well; 2009.

Hidayat FK, Elfiah U, Sofiana KD. Jumlah Makrofag pada Luka Insisi Full
Thickness yang Diberi Umbi Bidara Upas (Merremia mammosa (Lour)) pada
Tikus Wistar Jantan. e-Journal Pustaka Kesehatan. 2015; 3 (3): 389.

Kenedyanti E, Sulistyotini L. Analisis Mycobacterium tuberculosis dan Kondisi

Fisik Rumah dengan Kejadian Tuberkulosis Paru. Jurnal Berkala
Epidemiologi. 2017; 5 (2): 153.

Khairunnida, Carabelly AN, Apriasari ML. The Effect of Giant Snakehead (Channa
micropeltes) Extract on The Number of Macrophage in Diabetes Melitus
Wound Healing (In Vivo Study on the Back of Male Wistar Rat (Rattus
novergicus). Dentino. 2018; 3 (2): 190-193.

Lukitasari A. Pembentukan Senyawa Oksigen Reaktif. Jurnal Kedokteran Syiah

Kuala. 2009; 9 (1): 35.

Maanari CP, Suryanto E, Pontoh J. Aktivitas Penangkal Radikal Hidroksil Fraksi

Flavonoid dari Limbah Tongkol Jagung pada Tikus Wistar. Jurnal MIPA
UNSRAT Online. 2014; 3 (2): 137.

Marjiyanto, Murtutik L, Suwarni A. Hubungan Kadar Albumin dengan

Penyembuhan Luka pada Pasien Post Operasi Laparatomy di Ruang Mawar
Rumah Sakit Slamet Riyadi Surakarta. Jurnal Ilmu Keperawatan Indonesia.
2013; 1 (1): 81.

Mescher AL. Junqueira’s Basic Histology Text and Atlas. 14th ed. Indiana:
McGraw-Hill Education; 2016.

Murdani OJ, Andrie M, Taurina W. Uji Efek Penyembuhan Luka Sayat Ekstrak
Ikan Toman (Channa micropeltes) Secara Oral pada Tikus Jantan Galur
Wistar yang Diinduksi Streptozotocin. Jurnal Mahasiswa Farmasi Fakultas
Kedokteran UNTAN. 2016; 3 (1): 5.

Naga SS. Buku Panduan Lengkap Ilmu Penyakit Dalam. Diva Press (Angota
IKAPI). Jogyakarta; 2014.

Nurdianty AV, Apriasari ML, Carabelly AN. The Effect of Topical Toman
(Channa micropeltes) Fish Extract on The Number of Neutrophil Cells in
 48

Diabetes Melitus Wound Healing (In Vivo Study on Male Wistar (Rattus
novergicus) Rat’s Back). Dentino. 2019; 4 (2): 111.

Pramesti R, Widyastuti N. Pengaruh Pemberian Jus Daun Ubi Jalar (Ipomoea

batatas (L) Lam) terhadap Kadar Kolesterol LDL Tikus Wistar Jantan (Rattus
norvegicus) yang Diberi Pakan Tinggi Lemak. Journal of Nutrition College.
2014; 3 (4): 707.

Prastowo A, Lestariana W, Nurdjanah S, Sutomo R. Keefektifan Ekstra Putih Telur

terhadap Peningkatan Albumin dan Penurunan IL-1β pada Pasien
Tuberkulosis dengan Hipoalbuminemia. Jurnal Gizi Klinik Indonesia. 2014;
10 (3): 117.

Pratama WW, Nursyam H, Hariati AM, Islamy A, Hasan V. Short Communication:

Proximate Analysis, Amino Acid Profile and Albumin Concentration of
Various Wights of Giant Snakehead (Channa micropeltes) from Kapuas
Hulu, West Kalimantan, Indonesia. Biodiversitas. 2020; 21 (3): 1198.

Primadina N, Basori A, Perdanakusuma DS. Proses Penyembuhan Luka Ditinjau

dari Aspek Mekanisme Seluler dan Molekuler. Qanun Medika. 2019; 3 (1):
34-35.

Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas). Badan Penelitian dan Pengembangan

Kementrian Kesehatan RI tahun 2018.

Rosahdi TD, Kusmiyati M, Wijayanti FR. Uji Aktivitas Daya Antioksidan Buah
Rambutan Rapiah dengan Metode DPPH. Jurnal Istek. 2013; 7 (1): 1-2.

Rout P, Modipalle V, Hedge SS, Patel N, Uppala S, K Shettyy P. Prevalence of

Oral Lesions in Tuberculosis: A Cross Sectional Study. Med Prim Care.
2019; 8 (12): 3822.

Sejati A, Sofiana L. Faktor-Faktor Terjadinya Tuberkulosis. Jurnal Kesehatan

Masyarakat. 2015; 10 (2): 123.

Sharma TK, Singh R, Yadav VK. Toxic Effect of Titanium (Tio2) on Wistar Rat
(Rattus norvegicus) Injected by Intravenously. Journal of Materials Sciense
and Nanotechnology. 2015; 3 (1).

Sinaga FA. Stress Oksidatif dan Status Antioksidan pada Aktivitas Fisik Maksimal.
Jurnal Generasi Kampus. 2016; 9 (2): 182.

Sitar ME, Aydin S, Cakatay U. Human Serum Albumin and Its Relation with
Oxidative Stress. Clin Lab. 2013; 59: 4-6.
 49

Sonnweber T, Pizzini A, Nairz M, Weiss G, Tancevski I. Arachidonic Acid

Metabolites In Cardiovascular and Metabolic Disease. International Journal
of Molecular Sciences. 2018; 19: 5.

Souza BC, Lemos VMA, Munerato MC. Oral Manifestation of Tuberculosis: A

Case-Report. The Brazilian Journal of Infection Disease. 2016; 20 (2): 212.

Suhartono E, Setiawan B. Radikal Bebas, Antioksidan, dan Penyakit. Banjarmasin:

Pustaka Banua; 2006. p. 14-19, 124,161-162.

Sukmono T, Margaretha M. Ikan Air Tawar di Ekosistem Bukit Tiga Puluh.

Yayasan Konservasi Ekosistem Hutan Sumatera dan Frankfurt Zoological
Society; 2017. p. 85.

Supranto J. Teknik Sampling untuk Survey dan Eksperimen. Jakarta: PT Rineka

Cipta; 2007.

Sura GM, Carabelly AN, Apriasari ML. Aplikasi Ekstrak Haruan (Channa striata)
100% pada Luka Punggung Mencit (Mus musculus) terhadap Jumlah
Neutrophil dan Makrofag. Jurnal PDGI. 2013; 62 (2): 41.

Susantiningsih T. Obesitas dan Stres Oksidatif. Jurnal Kedokteran Universitas

Lampung. 2015; 5 (9): 90.

Tjay TH, Kirana R. Obat-obat Penting (Khasiat Penggunaan dan Efek-efek

Sampingnya). Edisi V, Cetakan Pertama Agustus 2007. Jakarta: PT. Elex
Media Komputindo; 2007. p. 330.

Treuting PM, Dintzis SM, Montine KS. Comparative Anatomy and Histology A
Mouse, Rat, and Human atlas 2nd Edition. London: Academic Press; 2018. p.
3.

Trinaya et al. Pengaruh Teh Kombinasi Bunga Euphorbia Mili dan Propolis
terhadap Jumlah Nodulus Limfatikus dan Diameter Sentrum Germinativum
pada Limpa Mencit yang Diinfeksi Mycobacterium Tuberculosis. E-Jurnal
Medika. 2019; 8 (6): 3.

Trujillo M, Alvarez B, Radi R. One- and Two- Electron Oxidation of Thiols:

Mechanisms, Kinetics, and Biological Fates. Free Radical Research. 2016;
50(2): 150-152.

Warren E, Teskey G, Venketaraman V. Effector Mechanism of Neutrophils within

the Innate Immune System in Response to Mycobacterium tuberculosis
Infection. Journal of Clinical Medicine. 2017; 6 (15): 2.
 50

Werdhani, R.A. Patofisiologi, Diagnosis, dan Klasifikasi Tuberkulosis.

Departemen Ilmu Kedokteran Komunitas, Okupasi, dan Keluarga; 2010. p.
1–18.

Widayati E. Oxidasi Biologi, Radikal Bebas, dan Antioxidant. Jurnal UNISSULA.

2012; 50 (128): 2-5.

Widiastuti Y, Darmono S, Sofro MAU. Pengaruh Suplementasi Probiotik dan

Selenium terhadap Respon Imun NLR (Neutrophil Lymphocyte Count
Ratio), Haemoglobin dan Albumin pada Tikus Wistar yang Diinduksi
Mycobacterium Tuberculosis. Journal of Nutrition College. 2019; 8 (1): 39.

World Health Organization. Global Tuberculosis Report. World Health

Organization; 2019. p. 3-6.

Yuristin D, Apriza. Faktor-Faktor yang Berhubungan dengan Penyembuhan Luka

Post Op Seksio Sesaria di RSUD Bangkinang Tahun 2018. PREPOTIF
Jurnal Kesehatan Masyarakat. 2018; 2 (1): 20.