Kita hepalisa

1. PENDAHULUAN

Hepatitis Virus yang disebabkan oleh Virus Hepatitis B disebut sebagai “Serum Hepatitis”. 1-5% orang
yang terinfeksi bertindak sebagai pembawa kronis virus HBV. Bagian utama dari pembawa kronis
mensekresi hepatitis Bsurface antigen (HBsAg) ke dalam darah dan sekresi tubuh lainnya seperti air liur
dan cairan vagina. Pembawa kronis ini berpotensi menular ke orang seronegatif lainnya. Virus hepatitis
B milik keluarga virus DNA yang diselimuti , Hepadnavirus. Virus terkait dalam kelompok ini
menyebabkan hepatitis kronis. HBsAg telah diterima sebagai seromarker universal dan paling andal
dalam kasus infeksi HBV akut karena kemunculannya hampir 2-4 minggu sebelum tingkat ALT menjadi
abnormal dan 3-5 minggu sebelum timbulnya gejala atau penyakit kuning sebagai sistem deteksi dini
untuk infeksi hepatitis. Dalam kebanyakan kasus infeksi HBV, masa inkubasi bervariasi dari 40 hari
hingga 6 bulan. Dalam HBVs, keragaman antigenik diakui di antigen permukaan. Partikel-partikel HBsAg
mengandung antigen “a” yang umum, dihubungkan dengan dua set penentu yang saling eksklusif, “d”
atau “y” dan “w” atau “r” yang memberikan empat tipe utama - adw, adr, ayw dan ayr.

2. PENGGUNAAN TERINTENDED

Hepalisa dirancang untuk deteksi kualitatif in-vitro antigen permukaan Hepatitis B (HBsAg) serum atau
plasma yang tidak manusiawi dan digunakan sebagai tes skrining untuk pengujian darah yang
dikumpulkan sebelum totransfusi

3. PANDUAN TEKNOLOGI PENTINGNYA KLINIS UNTUK HEPATITIS B VIRUS (HBV)

HBsAg: Pertama terdeteksi selama masa inkubasi 6-8 minggu sebelum munculnya gejala. Ini dapat
muncul pada awal 2 minggu dan umumnya menghilang dalam waktu 3-4 bulan setelah paparan. Ini
adalah penanda infeksi HBV yang paling dapat diandalkan & universal. Dalam kondisi karier dan kronis,
penyakit ini bertahan lebih dari 6 bulan.

Anti-HBs: Penampilan mungkin membutuhkan beberapa minggu / bulan setelah pembersihan HBsAg
menyebabkan periode 'jendela'. Indikator terbaik pemulihan & kekebalan terhadap HBV. Kuantisasi
memungkinkan skrining pra-vaksinasi & tindak lanjut dari respons pasca-vaksinasi.

HBeG: Muncul dalam waktu 1 minggu setelah HBsAg, berlangsung 3-6 minggu & menghilang sebelum
pembersihan HBsAg. Keberadaannya menunjukkan keadaan yang sangat menular, kecuali pada mutan
sebelum inti . Kegigihan> 10 minggu menunjukkan perkembangan menjadi kondisi karier kronis /
hepatitis.

Anti-HBe: Muncul sebelum pembersihan HBsAg, menunjukkan penurunan infektivitas dan merupakan
prognosis yang baik untuk penyelesaian infeksi.

IGM anti-HBc: Muncul sebelum gejala, ditemukan pada titer tinggi untuk waktu singkat selama tahap
acutedisease yang mencakup periode 'jendela' serologis, menurun ke tingkat rendah selama pemulihan.
Penanda infeksi baru-baru ini. Ini membedakan antara hepatitis akut & kronis.
Total anti-HBc: Muncul 4-10 minggu setelah penampilan HBsAg, bertahan selama bertahun-tahun /
seumur hidup, oleh karena itu merupakan penanda yang menonjol dari paparan HBV. Ini adalah satu-
satunya indikator infeksi pada periode jendela.

HBV-DNA: Deteksi kadar rendah oleh PCR, memungkinkan diagnosis infeksi akut / kronis / karier & juga
memantau respons terhadap pengobatan interferon. Semua antigen dan virus DNA polimerase bentuk
di atas penanda diagnostik yang berguna untuk HBV

4. PRINCIPLE HEPALISA

adalah enzim fase padat terkait immunosorbent assay (ELISA) berdasarkan prinsip "DirectSandwich".
Microwell dilapisi dengan antibodi Monoclonal dengan reaktivitas tinggi untuk HBsAg. Sampel
ditambahkan dalam sumur diikuti dengan penambahan enzim konjugat (poliklonalantibodi yang terkait
dengan Horseradish Peroxidase (HRPO)). Kompleks sandwich dibentuk di dalam sel dimana HBsAg (dari
sampel serum) "terperangkap" atau "diapit" antara konjugat antibodi dan antibodi HRPO. Konjugasi
yang tidak terikat kemudian dicuci dengan buffer cuci. Jumlah peroksidase terikat sebanding dengan
konsentrasi HBsAg yang ada dalam sampel. Setelah penambahan buffer substrat dan kromogen, warna
biru berkembang. Intensitas warna biru yang dikembangkan sebanding dengan konsentrasi HBsAg dalam
sampel. Untuk membatasi enzim-substratereaksi, larutan berhenti ditambahkan dan warna kuning
berkembang yang akhirnya dibaca pada 450nmspektrophotometrik.

5. URAIAN SIMBOL YANG DIGUNAKAN

Berikut ini adalah simbol grafis yang digunakan dalam atau ditemukan pada produk dan kemasan J.
Mitra diagnostik. Simbol ini adalah yang paling umum muncul pada perangkat medis dan kemasannya.
Mereka dijelaskan secara lebih rinci dalam Standar Inggris dan Eropa EN ISO 15223-1: 2016.

10. KOLEKSI SPESIMEN & PENANGANAN1.

Hanya sampel serum manusia atau plasma harus digunakan untuk tes. Sambil menyiapkan
serumsamples, keluarkan serum dari gumpalan sesegera mungkin untuk menghindari hemolisis. Sampel
freshserum / plasma lebih disukai.2. Spesimen harus bebas dari kontaminasi mikroba dan dapat
disimpan pada 2-80C untuk satu minggu, atau beku pada -200C atau lebih rendah. Hindari pembekuan
dan pencairan berulang-ulang. 3. Jangan gunakan sampel yang tidak aktif karena penggunaannya dapat
memberikan hasil yang salah. Sampel hiperlipemik hemolisis dan hiperterik dapat memberikan hasil
yang keliru.4. Jangan menggunakan Sodium Azide sebagai pengawet karena ini menonaktifkan peroxidas
lobak.

11. PERINGATAN & TINDAKAN PENCEGAHAN: KIT INI MENGANDUNG BAHAN ASLI MANUSIA. TIDAK ADA
METODE UJI CANOFFER JAMINAN LENGKAP YANG MANUSIA PRODUK DARAH TIDAK AKAN
TRANSMITINFEKSI. PENGENDALIAN NEGATIF, PENGENDALIAN POSITIF & SEMUA SAMPEL UNTUK DIUJI,
DAPAT DITANGANI SEBAGAI MAMPU MENDAPAT INFEKSI PENGIRIMAN.

1. Penggunaan sarung tangan sekali pakai dan pakaian biohazard yang tepat, SANGAT
DIANJURKAN DIREKOMENDASIKAN saat menjalankan tes.
 2. tangan, JANGAN MELAKUKAN UJI.

3. Jangan merokok, minum atau makan di daerah di mana spesimen atau reagen kit sedang
ditangani.

4. Uji coba hanya untuk penggunaan diagnostik in vitro dan harus dijalankan oleh orang yang
kompeten saja. tidak pipet melalui mulut.

6. Semua bahan yang digunakan dalam pengujian dan sampel harus didekontaminasi dalam
larutan natriumhypochlorite 5% selama 30-60 menit. sebelum dibuang atau dengan autoclaving pada
121ºC pada 15psi selama 60 menit. Jangan mengautoklaf bahan atau larutan yang mengandung natrium
hipoklorit. Mereka harus dibuang sesuai dengan prosedur keselamatan yang ditetapkan.

7. Cuci tangan dengan sabun atau deterjen yang sesuai, setelah penggunaan kit. Konsultasikan
dengan dokter segera jika terjadi kecelakaan atau kontak dengan mata, jika bahan yang terkontaminasi
tertelan atau kontak dengan tusukan atau luka pada kulit.

8. Pil harus didekontaminasi segera dengan Sodium Hypochlorite atau yang lainnya sesuai
dengan desinfektan.

9. Larutan aspal mengandung sulfur AC id. Jika asam sulfat bersentuhan dengan kulit, basuhlah
dengan air. Jika kena mata, bilas dengan air berlebih.

10. Semua bahan yang digunakan dalam pengujian dan sampel harus dibuang dengan cara yang
akan mengaktifkan virus.

12. PENGOLAHAN SPESIMEN

(A) Tes SAMPLE HEPALISA BEKU paling baik digunakan dengan sampel segar yang belum dibekukan dan
dicairkan. Namun sebagian besar sampel beku akan bekerja dengan baik jika prosedur yang disarankan
di bawah ini diikuti. Biarkan sampel beku mencair dalam posisi vertikal di rak. Jangan kocok sampelnya.
Ini memungkinkan partikel untuk mengendap di bagian bawah. Jika centrifuge tersedia, sampel harus
disentrifugasi. (10.000 rpm selama 15 menit.)

(B) TRANSPORTASI Jika spesimen akan diangkut, spesimen harus dikemas sesuai dengan Peraturan
Pemerintah saat ini mengenai transportasi agen etiologi.

13. PERHATIAN UNTUK PENGGUNAAN

Performa pengujian optimal memerlukan kepatuhan yang ketat terhadap prosedur pengujian yang
dijelaskan dalam masing-masing.

1. Jangan menggunakan komponen kit di luar tanggal kedaluwarsa yang dicetak pada kit.

2. Bawa semua reagen & sampel ke suhu kamar (20- 30oC) sebelum digunakan.
 3. Jangan menggabungkan reagen dari batch yang berbeda, karena mereka dioptimalkan untuk
batch individu untuk memberikan hasil terbaik.

4. Hindari kontaminasi mikroba reagen. Penggunaan tip sekali pakai steril direkomendasikan
saat menghilangkan alikuot dari botol reagen.

5. Karena untuk pertukaran tutup reagen dapat terkontaminasi. Perawatan harus diambil saat
menangani reagen untuk menghindari kontaminasi dalam bentuk apa pun.

6. Gunakan sampel serum yang baru dikumpulkan, bersih untuk pengujian. Usahakan untuk
menghindari sampel keruh, serum plasma atau lipemic.

7. Gunakan ujung yang terpisah untuk setiap sampel dan kemudian buang sebagai limbah
biohazardous.

8. Semua langkah pemipaan harus dilakukan dengan sangat hati-hati dan akurat. Kontaminasi
silang antara reagen dan sampel akan membatalkan hasil.

9. Jangan biarkan microwell mengering setelah pengujian dimulai.

10. Jalankan kontrol negatif dan positif di setiap pengujian untuk mengevaluasi validitas kit.

11. Waktu penguburan tidak boleh bervariasi lebih dari + 2 mnt.12. Cegah penguapan selama
inkubasi sampel dengan menutup strip dengan strip sealer. Penghapusan ini sebelum mencuci.

13. Air yang didistilasi atau dideionisasi harus digunakan untuk persiapan penyangga pencuci

14. Pencucian sumur sangat penting untuk kinerja pengujian. Kelebihan reagen atau pencucian
ke sumur yang berdekatan harus dicegah selama pencucian, yang dapat menyebabkan hasil yang salah
karena efek carry over.

15. Berhati-hatilah saat menyiapkan solusi substrat yang berfungsi dan gunakan kiat terpisah
untuk pengencer TMB dan pengencer TMB.

16. Persiapkan solusi substrat yang berfungsi hanya 10 menit sebelum menambahkan dalam
sumur.

17. Jika warna biru atau partikel putih muncul dalam larutan substrat yang berfungsi maka
jangan gunakan itu. Ambil wadah dan tips dan siapkan lagi.

18. Hindari paparan cahaya yang kuat selama pengujian.

19. Pastikan bahwa strip microwell diratakan dalam pemegang strip. Sebelum membaca, seka
bagian bawah pita microwell dengan hati-hati dengan jaringan penyerap yang lembut untuk
menghilangkan kelembapan.
 20. Jika tersedia, pembaca microwell yang berisi filter referensi dengan pengaturan pada 620
atau 630nm harus digunakan. Penggunaan filter referensi meminimalkan gangguan karena microwell
yang buram, tergores, atau tidak beraturan. Namun, jika filter referensi tidak tersedia,
absorbancemungkin dibaca pada 450 nm tanpa filter referensi.

21.Jika ada keraguan proses harus diulang

14. PERSIAPAN REAGEN

Pra-panaskan inkubator hingga +37 ° C.

Bawa paket foil ke suhu kamar (20-25 ° C) sebelum dibuka untuk mencegah kondensasi pada strip pita
angin.

A. Menghilangkan jumlah strip yang diperlukan. diperlukan untuk pengujian dan tempatkan di penahan
strip. Ambil penahan strip dengan jumlah strip yang diperlukan, dengan mempertimbangkan bahwa, dua
negatif dan dua kontrol positif harus dimasukkan dalam menjalankan sambil membuka kit segar. Namun
satu atau dua strip satu kontrol negatif dan satu positif dan untuk strip lebih banyak setidaknya dua
kontrol positif dan dua positif harus dimasukkan dalam setiap run berikutnya.

B. Sumur yang tidak digunakan harus disimpan pada 2-8oC, dengan dessicant dalam kantong aluminium
dengan penjepit &tongkat. Microwell stabil selama 30 hari pada 2-8ºC dari tanggal pembukaan kantong
tertutup, ketika disimpan dengan desicant bersama dengan penjepit & batang. Perhatian: Tangani strip
microwell dengan hati-hati. Jangan menyentuh permukaan luar bagian bawah thewells.

Persiapan Penyangga Pencuci yang Bekerja:

a) Periksa konsentrat penyangga pencuci untuk mengetahui keberadaan kristal garam. Jika ada kristal
dalam larutan, cuci dengan air hangat dengan suhu 37OC sampai semua kristal larut.

B) Siapkan setidaknya 25ml. (1ml. Buffer cuci pekat dengan 24 ml air) dari washbuffer yang berfungsi
untuk setiap strip yang digunakan. Aduk rata sebelum digunakan.

c) Campurkan 20 ml. dari 25X wash buffer berkonsentrasi dengan 480ml. air suling atau deionisasi.
WorkingWash Buffer stabil selama 2 bulan bila disimpan pada 2-8 ° C

Persiapan Konjugasi Kerja: Encerkan konjugat konsentrat 1:50 dalam pengencer konjugat. Jangan
menyimpan konjugasi yang berfungsi. Siapkan pengenceran baru untuk setiap pengujian dalam wadah
gelas bersih. Tentukan jumlah solusi konjugat kerja yang harus disiapkan dari tabel di bawah ini.
Campurkan larutan secara menyeluruh sebelum digunakan.

15. PROSEDUR MENCUC

I1.Pencucian yang tidak lengkap akan mempengaruhi hasil tes.

2. Aduk isi sumur sepenuhnya ke dalam wadah limbah. Kemudian isi sumur sepenuhnya dengan
penyangga pencuci menghindari limpahan penyangga dari satu sumur ke yang lain dan biarkan meresap
(sekitar 30 detik). Bersihkan sepenuhnya dan ulangi prosedur pencucian dan rendam 5 kali tambahan
untuk total 6 kali pencucian.

3. Mesin cuci otomatis jika digunakan harus disesuaikan dengan baik untuk mengisi masing-
masing sumur sepenuhnya tanpa pengisian berlebih

4. Ketuk terbalik pada lembar penyerap sampai tidak ada tetesan muncul pada lembar, berhati-
hatilah agar tidak melemahkan sumur

16. PROSEDUR UJI

petunjuk prosedur harus benar-benar dipatuhi. Cocokkan dengan stripholder dengan jumlah strip
HEPALISA yang diperlukan. Urutan prosedur harus diikuti dengan hati-hati. Atur sumur kontrol uji dalam
konfigurasi horizontal atau vertikal. Konfigurasi tergantung pada perangkat lunak pembaca.

1. Tambahkan 100 μl Kontrol Negatif di masing-masing sumur. A-1 dan B-1 masing-masing.

2. Tambahkan 100 μl Kontrol Positif di C- 1 & D-1 sumur.

3. Menambahkan 100 μl sampel di setiap sumur, mulai dari E1

.4. Menambahkan 50μI konjugasi enzim yang bekerja untuk setiap sumur. Goyangkan piring
secara perlahan selama 2-3 detik untuk menyatukan sampel & konjugasi.

5. Tutup piring dan inkubasi dalam inkubator pada suhu 37oC + 1oC selama 60 menit.

6. Dute encerkan konsentrat pembersih cucian dengan air suling hingga pengenceran 1:25.

7 .Pada akhir masa inkubasi, keluarkan piring dari inkubator dan cuci dengan washbuffer yang
berfungsi

WASHING: Mencuci dapat dilakukan dengan ELISA WASHER atau secara manual sebagai berikut:

a). Kosongkan sumurnya). Tambahkan 300-350μl larutan pencuci yang bekerja ke dalam masing-masing
sumur dan berikan waktu rendam 30 detik.

c). Kosongkan wells.

d). Cuci bersih masing-masing enam kali secara total.

E). Setelah pencucian keenam, ketuk keringkan Microwell beberapa kali pada jaringan penyerap.

8. Ketuk sumur setelah dicuci dan tambahkan 100μI larutan substrat yang berfungsi di semua
sumur.

9. Tutup piring dengan aluminium foil dan inkubasi di ruangan suhu (20-25 ° C) selama 30 menit
dalam gelap.
 10. Hentikan reaksi dengan menambahkan 100μl larutan stop ke masing-masing sumur, campur
dengan lembut.

11. Bacalah absorbansi pada 450 nm. dalam 30 menit dalam ELISA READER. (Pengukuran
Bichromaticabsorbance dengan panjang gelombang referensi 600-650 nm direkomendasikan saat
tersedia)

18. PENAFSIRAN HASIL Absorbansi sampel yang tidak diketahui dibandingkan dengan nilai cut-off yang
dihitung.

A) Spesimen uji dengan nilai absorbansi (OD) kurang dari nilai cut-off tidak reaktif dan mungkin dianggap
negatif untuk HBsAg.

b) Uji spesimen dengan nilai absorbansi (OD) lebih besar dari atau sama dengan nilai cut-off adalah
reaktif untuk HBsAg oleh HEPALISA.

c) Spesimen uji dengan nilai absorbansi dalam 10% di bawah cut off harus dipertimbangkan untuk
kehadiran HBsAg dan harus diuji ulang dalam duplikat.

d) Spesimen dengan nilai absorbansi yang sama atau lebih besar dari nilai cut-off dianggap awalnya
reaktif dengan kriteria Hepalisa. Spesimen asli harus diuji ulang dalam rangkap dua.

E) Jika kedua nilai serapan sampel rangkap duplikat kurang dari nilai cutoff, spesimen dianggap non-
reaktif.

F) Jika salah satu duplikat tes ulang nilai serapan sampel sama dengan atau lebih besar dari thecutoff
atau baik nilai duplikat ulang sama dengan atau lebih besar dari cutoff, spesimen dianggap reaktif
dengan kriteria HEPALISA. Dianjurkan konfirmasi lebih lanjut dengan tes EIA lain atau tes konfirmasi

20. BATASAN UJI

1. Tes harus digunakan untuk mendeteksi HBsAg hanya dalam serum atau plasma dan tidak pada cairan
tubuh lain.

2. Ini hanya tes skrining dan hanya akan menunjukkan ada atau tidaknya Hepatitis BSurface Antigen
dalam spesimen. . Semua sampel reaktif harus dikonfirmasi oleh uji konfirmasi. Oleh karena itu untuk
diagnosis pasti, riwayat klinis pasien, simtomatologi dan juga data serologis harus dipertimbangkan.
Hasil harus dilaporkan hanya setelah mematuhi prosedur di atas.

3. Hasil positif palsu dapat diperoleh karena adanya antibodi Rf, pasien dengan penyakit autoimun,
masalah hati, gangguan ginjal, dan sampel antenatal.

21. DISCLAIMER GARANSI EKSPRES TERBATAS

Pabrikan membatasi garansi pada test kit, sebanyak test kit akan berfungsi sebagai uji diagnostik inin
vitro dalam batasan dan spesifikasi seperti yang dijelaskan dalam instruksi manual produk, ketika
digunakan secara ketat sesuai dengan instruksi. terkandung di dalamnya. pabrikan menyangkal segala
jaminan yang tersurat maupun tersirat termasuk jaminan tersurat atau tersirat terkait dengan kelayakan
diperjualbelikan, kesesuaian untuk penggunaan, atau utilitas tersirat untuk tujuan apa pun. Tanggung
jawab pabrikan terbatas pada penggantian produk atau pengembalian uang pembelian atas harga
produk dan dalam hal apa pun tidak bertanggung jawab atas klaim dalam bentuk apa pun untuk jumlah
yang lebih besar dari harga pembelian barang sehubungan dengan kemungkinan kerusakan yang dapat
diklaim. Pabrikan tidak akan bertanggung jawab kepada pembeli atau pihak ketiga atas cedera,
kerusakan, atau kerugian ekonomi, bagaimanapun disebabkan oleh produk dalam penggunaan atau
dalam aplikasi di sana.