UJI VALIDITAS FOKUS DIAGNOSTIC HBsAg STRIP UNTUK DETEKSI

HBsAg DENGAN ELISA SEBAGAI STANDAR BAKU

Kalma *)

*) Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Makassar

Abstrak

Hepatitis merupakan masalah kesehatan masyarakat yang serius baik di dunia maupun di Indonesia karena
jumlah penderita yang semakin meningkat. Indonesia menempati urutan ketiga jumlah penderita hepatitis B
terbanyak di Asia sesudah Cina dan India, khusus di kota Makassar termasuk daerah endemisitas yang tinggi.
Permasalahan dalam penelitian ini adalah masih banyak laboratorium klinik yang belum memiliki fasilitas yang
lengkap terutama dalam pemeriksaan HBsAg dengan menggunakan automatic metode ELISA, oleh karena itu
metode imunokromatografi merupakan pilihan untuk melakukan pemeriksaan HBsAg, salah satunya adalah Fokus
Diagnostic. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui validitas hasil pemeriksaan fokus diagnostic untuk
deteksi HBsAg dengan ELISA sebagai standar baku. Penelitian uji diagnostik dengan rancangan potong silang
dilakukan di Balai Besar Laboratorium Kesehatan Makassar periode September – Desember 2013. Data dianalisis
dengan melakukan uji Validitas untuk mengetahui sensitivitas, spesifisitas, nilai ramal positif dan nilai ramal
negatif. Hasil penlitian didapatkan sensitivitas 94,11%, spesifisitas 100%, nilai ramal positif 100%, dan nilai ramal
negatif 92,85%. Simpulan metode imunokromatografi Fokus Diagnostic dapat digunakan untuk deteksi HBsAg
dalam spesimen.

Kata kunci : ELISA, HBsAg, imunokromatografi, validitas

PENDAHULUAN kedalam tubuh. Pada hepatitis akut gejalanya jelas,

A. Latar Belakang
Hepatitis merupakan masalah kesehatan
masyarakat yang serius baik di dunia maupun di
Indonesia karena jumlah penderita yang semakin
meningkat. Sekitar 2 milyar orang pernah terkena
penyakit ini dan diperkirakan 380 juta penduduk
dunia yang mengidap hepatitis, di Indonesia jumlah
penderita hepatitis B diperkirakan mencapai 15 juta
orang, sekitar 50 % dari jumlah tersebut berpotensi
menjadi hepatitis kronis (Dalimartha S, 2004).
Saat ini Indonesia menempati urutan ketiga,
jumlah penderita hepatitis B terbanyak di Asia
sesudah Cina dan India, namun kepedulian terhadap
penyakit ini masih rendah, khusus di kota Makassar
termasuk daerah dengan endemisitas yang tinggi.
Penelitian di Makassar pada 2011-2012 ditemukan
8,4 % atau 84.000 penduduk adalah penderita
hepatitis B kronis (Luthfi Parewangi, 2013).
Penderita hepatitis tidak tau bagaimana dan
kapan mereka terinfeksi virus ini, gejala muncul
beberapa minggu atau bulan setelah virus masuk
tetapi pada hepatitis kronis gejalanya tidak nampak
dan baru muncul setelah organ hati dalam keadaan
yang sangat parah. Penularan virus hepatitis B sulit
dielakkan, oleh karena itu pemeriksaan laboratorium
sangat penting dilakukan untuk mengetahui
keberadaan infeksi hepatitis B (Hardjoeno, 2007).
Pemeriksaan imunoserologi untuk HBsAg
umumnya dilakukan dengan metode ELISA
(Enzyme Linked Imunosorbent Assay), dan
imunokromatografi. Metode ELISA merupakan
pemeriksaan HBsAg yang dijadikan Standar baku
namun masih jarang dilakukan di laboratorium
sederhana, hal ini disebabkan karena metode
tersebut biayanya relatif mahal,memerlukan
peralatan khusus, rumit dan agak lama dibanding
dengan metode imunokromatografi.
Metode imunokromatografi yang sering
disebut rapid test biayanya relatif murah, tidak
memerlukan peralatan khusus, praktis dan cepat,
hasil dapat dibaca dalam 15 menit sehingga banyak

8
Media Analis Kesehatan Vol. V No.1, Mei 2014
rumah sakit yang menggunakan metode tersebut
(Handojo I, 2003).
Salah satu imunokromatografi yang biasa
digunakan adalah fokus diagnostic HBsAg strip.
Untuk kepentingan diagnosis meode pemeriksaan
laboratorium yang digunakan sebaiknya
mempunyai nilai sensitifitas dan spesifisitas yang
tinggi untuk menghindari salah diagnosis. Untuk itu
peneliti ingin mengetahui nilai sensitifitas dan
spesifitas fokus diagnostic HBsAg strip untuk
deteksi HBsAg dengan metode ELISA sebagai
standar baku atau gold Standar.
Berdasarkan uraian tersebut, maka dapat
dirumuskan masalah pada penelitian ini sebagai
berikut : Berapa nilai sensitifitas, spesifisitas, nilai
ramal positif dan nilai ramal negative fokus
diagnostic HbsAg strip.
B. Rumusan Masalah
Rumusan masalah dalam penelitian ini adalah
bagaimana perbandingan Tuberkulosis metode
Imunokromatografi ABON Rapid Card anti-TB dan
mikroskopik Basil Tahan Asam (BTA) di Balai
Besar Kesehatan Paru Makassar ?
C. Tujuan Penelitian
Adapun tujuan dari penelitian ini adalah untuk
menentukan nilai sensitifitas, nilai spesifisitas, nilai
ramal positif dan nilai ramal negative fokus
diagnostic HbsAg strip
D. Manfaat Penelitian
Penelitian ini diharapkan bermanfaat sebagai
bahan informasi atau masukkan bagi Analis
Kesehatan dan atau tenaga laboratorium kesehatan
tentang validitas perangkat diagnotik fokus
diagnostic HBsAg strip. Selain itu dapat digunakan
sebagi referensi peneliti selanjutnya dalam rangka
pengembangan ilmu pengetahuan, khususnya
Imunokromatografi.
METODE PENELITIAN
A. Jenis Penelitian
Penelitian ini bersifat deskriptif, dimaksudkan
untuk menentukan nilai sensitifitas dan spesifisitas
metode imunokromatografi Fokus Diagnostic
HBsAg Strip untuk mendeteksi HBsAg dengan
metode ELISA sebagai Standar baku.
Desain penelitian ini menggunakan cross
sectional yaitu dengan melakukan pemeriksaan satu
kali pada pasien selaku sampel Sampel penelitian
adalah pasien suspek hepatitis yang memeriksakan
diri di Balai Besar Laboratorium Kesehatan (BBLK)
Makassar sebanyak 60 orang sampel.
B. Bahan dan Instrumen Penelitian
1. Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan dalam penelitian yaitu
Hepalisa HBsAg Indec Diagnostic , aquabides,
Media Analis Kesehatan Vol. V No.1, Mei 2014
Fokus Diagnostic HBsAg Strip, dan specimen
Serum.
2. Instrumen Penelitian
Instrumen yang digunakan pada penelitian ini
antara lain: Mikroplate/mikrowel, mikropipet/
klinipet, tips, tabung reaksi, Centrifuge, alat untuk
pemeriksaan ELISA.
C. Pengumpulan Data
1. Prosedur Pengujian Fokus Diagnostic HBsAg
Strip
a. Strip dicelupkan ke daklam spesimen serum,
ditunggu beberapa menit lalu diangkat.
b. Dibiarkan sampai 15 menit, kemudian dibaca
hasil deteksi. Hasil uji tidak boleh dibaca
setelah lewat dari 15 menit (fokus diagnostic).
2. Pemeriksaan HBsAg Metode ELISA
Specimen serum dan reagen, dibiarkan pada
suhu ruangan.
Alat ELISA (Frofesional Lab-Adaltis)
dinyatakan, sampel dan reagen dimasukkan pada
alat tersebut sesuai dengan posisinya masing-
masing.
Alat diprogram untuk pemeriksaa HBsAg,
masukkan jumlah dan kode sampel pada alat
prosedur tampil pada layar monitor.
Specimen serum dan reagen, dibiarkan pada
suhu ruangan.
Alat ELISA (Frofesional Lab-Adaltis) dinya
takan, sampel dan reagen dimasukkan pada alat
tersebut sesuai dengan posisinya masing-masing.
Alat diprogram untuk pemeriksaa HBsAg,
masukkan jumlah dan kode sampel pada alat
prosedur tampil pada layar monitor.
1. Control negatif 50 ul diisi kedalam baris B1 dan
C1, control positif 50 ul diisi kedalam baris D1,
selanjutnya diisi oleh 50 ul sampel.
2. Enzyme conjugate 50 ul ditambahkan kedalam
sumur masing-masing sumur kecuali A1.
3. Inkubasi 80 menit pada suhu 370, kemudian
cuci 6 kali dengan buffer yang sudah di
encerkan.
4. Substrat/TMB A 50 μl dan TMB B 50 μl diisi
kedalam semua sumur, goyang hingga
bercampur dengan baik.
5. Di inkubasi pada tempat yang gelap selama 30
menit pada suhu ruangan.
6. Larutan stop 100 μl di tambahkan kedalam
semua sumur.
a. Hasil terbaca pada alat mikro ELISA melalui
optik density pada 450 nm.
HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
A. Hasil Penelitian
Berdasarkan hasil penelitian uji validasi fokus
diagnostic HBsAg strip untuk deteksi HBsAg
9
dengan metode ELISA sebagai standar baku, dengan Pemeriksaan benar = 58 (32 positif benar + 26
sampel penelitian sebanyak 60 orang pasien di negatif benar)
Balai Besar Laboratorium Kesehatan Makassar Pemeriksaan palsu = 2 (dua positif palsu dan nol
didapatkan hasil sebagai berikut:. negatif palsu)
Tabel 1. Hasil pemeriksaan HBsAg dengan metode Sensitivitas, spesifisitas dan nilai prediksi hasil
ELISA sebagai gold standar penelitian ini adalah sebagai berikut.
32
Hasil pemeriksaan HBsAg dengan metode Sensitivitas : x 100% = 94.11 %
ELISA 32 + 2
Positif Negatif Jumlah 26
Spesifisitas : x 100% = 100 %
n % N % N % 26 + 0

34 56.67 26 43.33 60 100 32

Nilai ramal positif : x 100% = 100 %
Hasil pemeriksaan HBsAg menggunakan 32 + 0
metode ELISA sebagai standar baku terhadap 60
spesimen serum dengan hasil 34 (56.67%) sampel 26
positif dan 26 (43.33%) sampel negatif.. Nilai ramal negatif: x 100% = 92.85 %
Tabel 2. Hasil deteksi HBsAg dengan fokus 26 + 2
diagnostic HBsAg strip sebagai teknik
yang diuji B. Pembahasan
Virus hepatitis B (VHB) merupakan virus
DNA yang tergolong virus hepadnaviridae yang
Hasil deteksi HBsAg dengan fokus diagnostic
dapat dibedakan atas tiga macam partikel virus,
HBsAg strip
yaitu partikel bulat, partikel tubular dan partikel
Positif Negatif Jumlah dane. Bagian luar dari virus ini adalah protein
envelope lipoprotein, sedangkan bagian dalam
n % N % N %
berupa nukleokapsid atau core. Nukleukapsid
32 53.34 28 46.66 60 100 mengandung kode genetik virus hepatitis B yang
terdiri DNA beruntai ganda parsial dengan panjang
3200 nukleotida. Genom virus hepatitis B berbentuk
Hasil deteksi atau pemeriksaan HBsAg dengan sirkuler ini memiliki empat open reading frame
menggunakan Fokus Diagnostic HBsAg Strip (ORF) yang saling tumpang tindih secara parsial
terhadap 60 spesimen serum dengan hasil 32 protein envelope yang dikenal sebagai antigen
(53.34%) positif dan 28 (46.66%) sampel negatif. surface atau selubung HbsAg.
Hasil deteksi atau pemerikdaan HBsAg Proses replikasi virus hepatitis B berlangsung
menggunakan fokus diagnostic HBsAg strip cepat. siklus hidup hepatitis B dimulai dengan
sebagai teknik yang diuji dibandingkan dengan hasil menempelnya virion virus hepatitis B pada reseptor
ELISA sebagai standar baku, dinilai pada tabel 3. di permukaan sel hati. Setelah terjadi fusi membran,
Tabel 3. Hasil teknik fokus diagnostic HBsAg strip partikel core kemudian ditransfer ke sitosol dan
dan hasil ELISA sebagai standar baku selanjutnya dilepaskan ke dalam nukleus (genome
release). DNA virus hepatitis B yang masuk ke
Teknik ELISA
sebagai dalam nukleus mula-mula berupa dua untai DNA
Teknik diagnosis HBsAg standard baku yang tidak sama panjang (partly double stranded)
+ -
yang kemudian akan terjadi proses DNA repair
berupa memanjangnya rantai DNA yang pendek
+
3
0 (DNA+ sehingga menjadi dua untai DNA yang sama
Fokus diagnostic HBsAg strip sebagai 2
panjang (fully double stranded) atau covalently
teknik yang diuji
- 2 26 closed circle DNA (ccDNA) (Harjono, 2003).
Terdapat berbagai metode diagnosis
laboratorium yang dapat digunakan dalam
Positif benar : 32 .positif palsu :0
pemeriksaan serologi HBsAg. Salah satu metode
Negatif benar : 26 negatif palsu :2
yang banyak dipakai oleh berbagai rumah sakit dan
telah banyak dikembangkan yaitu metode
10
Media Analis Kesehatan Vol. V No.1, Mei 2014
imunokromatografi. Selain biayanya yang relatif
murah, metode ini juga memiliki nilai praktis yang
tinggi. Waktu yang dibutuhkan untuk mendapatkan
hasil tes juga relatif singkat (Handojo I, 2003).
Penelitian ini menggunakan metode
imunokromatografi fokus diagnostic sebagai teknik
yang diuji dengan ELISA sebagai standar baku.
Dari 60 sampel pemeriksaan HBsAg didapatkan
hasil pada metode ELISA jumlah sampel yang
hasilnya positif sebanyak 34 sampel sedangkan pada
metode imunokromatografi fokus diagnostic
sebanyak 32 sampel positif.
Dari hasil penelitian ini menunjukkan validasi
HBsAg metode imunokromatografi fokus diagnostic
dalam mendeteksi antigen spesifik memberikan
hasil sebagai berikut. Sensitivitasnya adalah
94.11%, spesifisitasnya 100%, sedangkan nilai
ramal positifnya 100% dan nilai ramal negatifnya
92.85%. Dari 60 sampel yang diperiksa ternyata
didapat dua sampel yang hasilnya berbeda antara
kedua metode tersebut. Ini terjadi karena kedua
sampel tersebut kadarnya masih sangat rendah
sehingga pada metode imunokromatografi fokus
diagnostic belum dapat terdeteksi, sedangkan pada
metode ELISA kadar yang sangat rendah dapat
terdeteksi. Metode ELISA sangat sensitiv sehingga
dapat mendeteksi antigen dengan konsentrasi yang
rendah dan memiliki nilai sensitivitas 98% - 100%.
Disamping itu sangat cocok untuk skrining massal
karena dalam satu kali pembacaan bisa sampai 96
tes. Harus diperhatikan hal-hal yang dapat
mempengaruhi hasil pemeriksaan sehingga hasil
positif yang diperoleh bukan positif palsu. Adapun
hal-hal yang mempengaruhi seperti kestabilan dari
reagen, sampel dan waktu inkubasi. Reagen dari
ELISA sangat tidak stabil terhadap zat-zat lain,
mikroorganisme. Oleh karena itu persiapan reagen
harus selalu dibuat baru sebelum bekerja, wadah dan
aquades yang digunakan harus benar-benar bersih
dan steril karena akan mempengaruhi reaksinya.
Disamping itu waktu inkubasi harus tepat dan
sampel yang digunakan tidak boleh hemolisis.
Sedangkan pada metode imunokromatografi tidak
begitu peka terhadap hal-hal tersebut di atas
sehingga faktor kesalahan dapat dihindari, namun
konsentrasi sampel yang sangat rendah belum
terdeteksi namun hanya dalam bentuk kualitatif.
Atas dasar hasil dan pembahasan penelitian ini
dapat ditarik suatu kesimpulan: Validitas Fokus
diagnostic HBsAg Strip untuk deteksi HBsAg
dengan ELISA sebagai standar baku didapatkan
sensitivitas 94.11%, spesifisitasnya 100%, nilai
ramal positif 100% dan nilai ramal negatif 92.85%.
Dengan demikian Fokus Diagnostic HBsAg Strip
dapat digunakan untuk mendeteksi HBsAg dalam
suatu spesimen atau bahan pemeriksaan.
Media Analis Kesehatan Vol. V No.1, Mei 2014
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Atas dasar hasil dan pembahasan penelitian ini
dapat ditarik suatu kesimpulan: Validitas Fokus
diagnostic HBsAg Strip untuk deteksi HBsAg
dengan ELISA sebagai standar baku didapatkan
sensitivitas 94.11%, spesifisitasnya 100%, nilai
ramal positif 100% dan nilai ramal negatif 92.85%.
B. Saran
Dengan demikian Fokus Diagnostic HBsAg
Strip dapat digunakan untuk mendeteksi HBsAg
dalam suatu spesimen atau bahan pemeriksaan.
DAFTAR PUSTAKA
Baratawidjaja KG, 2002. Imunologi Dasar, Edisi V,
Jakarta, Fakultas kedokteran Universitas
Indonesia
Dalimartha S, 2004. Ramuan Tradisional Untuk
Pengobatan Hepatitis, Cetakan ke-7.
Jakarta, Penebar Swadaya
Handojo I, 2003. Pengantar Imunologi Dasar,
Cetakan 1, Surabaya, Airlangga
University
Hardjoeno , 2007. Kapita Selekta Hepatitis Virus
Dan Interpretasi Hasil Laboratorium,
Lembaga Penerbitan Universitas
Hasanuddin (LEPHAS)
Jawetz, Melnick, Adelberg’s. 2005. Mikrobiologi
Kedokteran (Medical Microbiology).
Buku 2, Edisi Pertama, Jakarta: Salemba
Medika.
Rantam FA, 2003. Metode Imunologi, Cetakan I,
Surabaya, Airlangga University
Sastroasmoro S dan Ismael S, 1995. Dasar Dasar
Penelitian Klinik. Jakarta: Bina Aksara
11