Persyaratan operasi utama untuk bioreaktor

Persyaratan operasi utama untuk bioreaktor dapat dibagi menjadi 3 kelompok:

1. Kemandulan;

2. Pencampuran / aerasi sebagai faktor pertukaran massa yang penting;

3. Pemantauan dan kontrol proses.

Untuk memenuhi persyaratan ini, desain bioreaktor harus dilaksanakan dengan profesionalisme
yang sesuai, dan kinerja teknisnya (perawatan permukaan, lasan) harus berkualitas tinggi.

Kemandulan

Salah satu karakteristik komparatif kualitas utama dari bioreaktor yang berbeda adalah kemampuan untuk
memberikan fermentasi steril. Persyaratan ini ditentukan sebagian besar oleh konstruksi bioreaktor dan
kualitas perawatan permukaan. Semua faktor risiko non-sterilitas yang dianggap lebih lanjut terutama terkait
dengan pengamanan penyegelan kedap udara pada berbagai tahap proses dan kualitas perawatan
permukaan. Faktor risiko non-sterilitas yang paling karakteristik yang mungkin dari sudut pandang konstruksi
adalah sebagai berikut:

1. Kotak isian mixer, sensor dan port penyisipan perangkat lain

Salah satu jalur paling umum untuk penyakit menular yang masuk ke bioreaktor adalah
isian kotak pencampur. Tidak selalu mudah untuk memberikan penyegelan yang efektif dan
rotasi drive yang tidak terhalang. Terlepas dari ini, servis rutin kotak isian pengemudi harus
dipastikan untuk menghindari akumulasi infeksi di sana. Untuk mencegah masalah yang
berhubungan dengan kotak isian, penggerak bioreaktor dibuat berdasarkan prinsip
penggerak magnet. Dalam hal ini, torsi ditransfer dengan bantuan medan magnet.
Akibatnya, kapal bioreaktor dapat sepenuhnya disegel. Saat menyegel port sensor dan
perangkat lain (pasokan komponen yang dititrasi dan diumpankan, pengambilan sampel,
penerapan kemostat, dll.), Harus diperhitungkan bahwa menyegel hanya dengan kekuatan
operator '

1
 2. "Kantong", ketidakmerataan dan kelemahan lainnya untuk akumulasi
infeksi di dalam pembuluh bioreaktor.

Di dalam bioreaktor, infeksi dapat terakumulasi di tempat-tempat di mana penyimpangan dan

ketidakrataan terjadi. Di tempat-tempat seperti itu, mikroorganisme menular dapat "menyembunyikan
diri". Oleh karena itu, bagian bawah di dalam reaktor harus dibulatkan, tidak boleh ada sudut akut, dan
permukaan harus dipoles.

3. " Pengambilan sampel, metode dan konstruksi yang tidak dipertimbangkan

Ketika mengambil sampel, uap, nyala api dan kondisi lain yang memastikan sterilitas harus
disediakan, sehingga setelah penghentian percepatan sampel, infeksi "tidak akan berhasil"
masuk ke dalam larutan fermentasi.

4. Filtrasi aliran udara inlet dan outlet.

Udara harus disuplai ke dalam bioreaktor melalui saringan udara porositas yang sesuai sehingga
dapat menahan sumber infeksi yang mungkin. Aliran udara masuk sebelum filtrasi juga dapat disuplai
melalui pipa, yang sedang dipanaskan. Dengan demikian, oleh aksi termal, upaya dilakukan untuk
memerangi kemungkinan infeksi setidaknya sebagian.

5. Pemeliharaan overpressure.

Penting untuk menjaga tekanan berlebih (0,2-0,5 bar) di ruang atas bioreaktor (yaitu antara
solusi fermentasi dan penutup bioreaktor) untuk memastikan perlindungan terhadap
pendapatan infeksi. Pendapatan infeksi melalui saluran udara outlet terhambat dengan
menggunakan filter udara outlet.

6. Transfer panas yang merata dan efektif.

Penting untuk menyediakan suhu sterilisasi dengan konsumsi energi bahkan mungkin dan juga
untuk menyediakan bahwa pemanasan akan merata. Jika pemanasan di dalam bioreaktor tidak
merata, ada risiko bahwa akan ada zona di dalam kapal dengan suhu sterilisasi yang tidak
mencukupi.

Selain itu, selama proses sterilisasi, sensor, perangkat, koneksi, dan unit lain tidak boleh
kehilangan sifatnya. Ini berarti bahwa hanya sensor yang dapat disterilkan (yaitu yang tidak
mengubah sifatnya setelah efek sterilisasi) dan karet atau bahan lain, dengan suhu kerja
setidaknya 150 ° C, harus digunakan untuk menyegel.

2
Pencampuran / aeriasi sebagai faktor transfer massa yang penting

Pencampuran dan aerasi bukan satu-satunya faktor yang menentukan pertukaran massa apa yang akan
terjadi dalam bioreaktor atau bagaimana mikroorganisme akan tumbuh. Hal ini ditentukan oleh sifat-sifat strain
mikroorganisme dan pilihan nutrisi seimbang, proses proses, dll. Biarkan faktor-faktor ini tetap untuk teknologi,
tetapi kita akan membahas apa yang akan menguntungkan bioreaktor dalam hal ini.

Mengenai evaluasi peran pencampuran, 2 sudut pandang ekstrim agak meluas:

• Ahli mikrobiologi sering mengatakan: "Mengapa pencampuran memiliki peran

penting dalam proses fermentasi? Semuanya sederhana - jika tekanan parsial oksigen
terlarut (pO) 2) terlalu rendah, maka diperlukan pencampuran yang lebih intensif. Dan jika
revolusi mixer menyebabkan masalah dalam mengatasi busa dan gangguan lainnya, maka
kami tidak meningkatkan pencampuran dan mempertimbangkan 2 tidak cukup ".

• Sementara "pencampuran orang" mengatakan: "Oh, tidak begitu sederhana dengan

pencampuran! Pertama, jika rezim pencampuran dan aerasi yang salah dipilih - pertukaran massa pada

daya input yang sama berkurang secara dramatis. Kedua, pilihan sistem pencampuran yang salah sudah

pada daya input kecil ("pencampuran orang", tidak seperti ahli mikrobiologi, biasanya tidak mengatakan

"revolusi mixer" untuk mengkarakterisasi pencampuran, melainkan menggunakan "daya yang

diperkenalkan dengan mixer") dapat menyebabkan kerusakan mekanis ireversibel untuk mikroorganisme

sensitif. Ketiga, tidak ada gunanya peningkatan konsumsi udara menyebabkan memburuknya pertukaran

massa ". Dan setidaknya ada 6 argumen lagi yang menyatakan betapa pentingnya pencampuran dalam

budidaya mikroorganisme.

Tapi apa kebenarannya?

Untuk menghapus itu, pertama-tama, mari kita hitung hasil pencampuran:

• Dispersi gelembung udara;

• Transfer massa dari gelembung udara (yaitu suplai oksigen) ke cairan dan kemudian ke sel;

• Pasokan komponen nutrisi ke sel (lebih tepatnya, aglomerat sel);

• Pencegahan sedimentasi;
• Menyediakan transfer panas;
• Kelarutan komponen nutrisi yang kurang larut.

3
• Proses transfer massal selama budidaya mikroorganisme dijelaskan dalam gambar berikut:

Seperti yang telah disebutkan di divisi "Desain cekungan pada bioreaktor laboratorium", jenis mixer
yang paling luas adalah turbin Rushton standar. Pada kecepatan rotasi konstan mixer, mereka
memastikan daya input tertinggi. Ini sangat praktis dari sudut pandang pemilihan rezim budidaya.
Lebih lanjut akan ditunjukkan bahwa ada, bagaimanapun, fermentasi, di mana turbin standar bukan
solusi terbaik. Tentu saja, ada fermentasi di mana peran pencampuran relatif sepele. Namun dalam
kasus ini sebagai keteraturan pencampuran / aerasi yang berbeda harus dipertimbangkan:

1. Minimal dan batas maksimal rotasi mixer.

Terlepas dari PO 2 nilai-nilai (atau parameter pertumbuhan atau respirasi alternatif lainnya), tidak
dianjurkan untuk memilih kecepatan rotasi mixer lebih rendah dari batas kritis yang ditentukan
secara empiris min. Batas ini, n min, dipilih sehingga yang berikut tidak akan muncul:

Hai Pengendapan;
" Meninggal zona ".

Sementara, pilihan batas kritis n maks dari kecepatan rotasi maksimal mixer ditentukan oleh
fenomena berikut:

Hai Berbusa;
Hai Fluktuasi permukaan cairan, yaitu "melambai", karenanya, juga cairan
penguapan.

4
2. Hubungan percampuran / aerasi.

Ketika memilih nilai-nilai intensitas pencampuran dan aerasi dan interaksi timbal balik
relatifnya, hal-hal berikut harus diperhitungkan:

Hai Untuk meningkatkan intensitas transfer oksigen dan komponen lainnya

Intensitas, pertama-tama, kami sarankan untuk memulai dengan peningkatan kecepatan rotasi
mixer, dan, hanya ketika n> n maks mulai secara bertahap meningkatkan jumlah udara Q yang
diperlukan untuk aerasi. Sebelum itu, nilai Q dipilih cukup untuk memberikan aerasi yang stabil.
Biasanya itu adalah 1 vvm (jumlah vvm dari udara yang dimasukkan versus volume kerja
bioreaktor). Artinya, jika kita mendefinisikan konsumsi udara dalam l / mnt, maka jumlah udara
yang diperkenalkan Q akan sama dengan volume kerja bioreaktor.

Hai Pada nilai kecepatan rotasi yang relatif rendah dari mixer, peningkatan
jumlah udara yang disuplai harus dihindari sejauh efek "banjir" dimulai. Apa efek
"flooding" dan bagaimana transfer di dalamnya dari keadaan "loading" akan
dijelaskan oleh ilustrasi berikut:

Seperti yang dapat dilihat dalam ilustrasi - ketika rezim "banjir" terjadi, gelembung udara terkonsentrasi
hanya di bagian tengah reaktor, dan mereka tersebar dengan buruk. Karenanya, keadaan pencampuran /
aerasi seperti itu sangat tidak diinginkan untuk pertumbuhan mikroorganisme.

Perlu dicatat bahwa transfer dari "memuat" ke "banjir" memiliki sifat histeresis. Ini berarti bahwa,
ketika jumlah udara yang diperkenalkan Q berkurang, efek "banjir" menghilang pada konsumsi
udara daripada yang mulai.

Perlu dicatat bahwa, ketika efek "banjir" dimulai, turbin Rushton standar bukan lagi varian
mixer yang paling cocok. Dalam kasus ini, sistem pencampuran yang paling tepat adalah
Chemineer CD-6 atau BT-6, serta Scaba AB 6SRGT (juga disebut mixer Smith). Dengan
demikian, mixer

5
 konstruksi memastikan pengambilan gelembung udara secara intensif dalam arah radial juga pada nilai
kecepatan rotasi minor dari mixer. Akibatnya, gelembung udara tidak bisa melakukan apa pun selain
mematuhi dispersi. Dengan menggunakan jenis mixer ini, pada dasarnya dimungkinkan untuk meningkatkan
jumlah udara Q di mana efek "flooding" terjadi.

3. Budidaya mekanis mikroorganisme sensitif

Pada bagian ini terutama budidaya mikroorganisme miselia

akan dijelaskan, karena pencampuran budaya yang lebih
sensitif memiliki aspek lain, yaitu budidaya budaya ini bahkan
dalam rezim turbulen minimal tidak diizinkan.

Mencampur mikroorganisme jamur miselia dengan a

turbin Rushton standar, pertukaran massa dalam proses budidaya hanya meningkat hingga
kecepatan rotasi tertentu dari mixer, dan, dengan peningkatan lebih lanjut dalam kecepatan
rotasi mixer, parameter pertukaran massa bahkan mulai menjadi lebih buruk. Alasan untuk
fenomena ini adalah kerusakan mekanis ireversibel sel. Tentu saja, rotasi kritis mixer ini tidak
benar-benar diperbaiki dan tergantung pada berbagai faktor:

Hai Strain mikroorganisme;

Hai Komposisi nutrisi;
Hai Rezim aerasi;
Hai Jumlah biomassa yang tumbuh (pada biomassa yang lebih besar, kritis
kecepatan rotasi mixer biasanya menurun, karena dalam kasus ini, mikroorganisme
miselium lebih sulit untuk "melarikan diri" dari zona pencampuran intensif lokal);

Hai Dan faktor-faktor lain yang menentukan sifat reologi dan medium
kondisi sel.

Ekato Intermig adalah salah satu mixer paling luas untuk budaya miselia.
Jenis mixer ini terdiri dari dua mixer yang bawah dan atas. Dalam
kombinasi ini, aliran aksial dihasilkan dalam mixer, dan konstruksi ujung
radial mixer mencukupi
pencampuran radial. Dengan demikian, genap

distribusi energi yang dimasukkan oleh mixer ke seluruh volume

bioreaktor dipastikan, menghasilkan penurunan gaya geser maksimal.

Solusi konstruksi lain untuk pencampuran budaya miselia adalah apa yang disebut "sistem pencampuran aliran
balik". Dalam sistem pencampuran ini, mixer bawah menghasilkan

6
aliran aksial ke atas, sedangkan mixer atas - ke bawah. Bentuk bilah pencampur memastikan aliran eddy yang
cukup, yaitu, sebagai hasil dari komponen tangensial, sistem pencampuran yang diberikan memastikan
distribusi energi yang diperkenalkan secara mekanis (yaitu tegangan geser rendah) dan juga tingkat dispersi
yang memadai.

Pemantauan dan kontrol proses

Bagian integral dari bioreaktor berkualitas tinggi adalah pengontrol proses. Pengontrol seperti itu biasanya
dirancang khusus untuk merek bioreaktor tertentu. Ini agak terkait dengan fakta bahwa proses budidaya
mikroorganisme memiliki persyaratan yang relatif tinggi sehubungan dengan presisi dan kecanggihan. Semua ini
terlepas dari kenyataan bahwa hampir semua bioreaktor memantau dan mengatur nilai-nilai yang sama sebenarnya
selalu berbeda.

Skema pemantauan dan kontrol dari proses fermentasi yang khas ditunjukkan pada ilustrasi berikut:

Suhu, pH, pO 2 dan busa adalah parameter yang biasanya dikontrol dan dipantau dalam bioreaktor.

7
Suhu

Suhu adalah parameter penting dari fermentasi, karena, dalam budidaya banyak mikroorganisme,
penyimpangan suhu beberapa derajat dapat mengurangi secara dramatis pertumbuhan dan
produktivitas biosintesis. Suhu budidaya biasanya dipantau dengan akurasi setidaknya ± 0,5 ° C.
Untuk pengukuran suhu, sensor Pt100 stainless steel biasanya digunakan. Suhu dalam bioreaktor
laboratorium dikendalikan oleh salah satu cara berikut:

1. Sebuah pemanas terletak di dalam bejana bioreaktor, dan pendinginan dipastikan oleh

pipa dinding tipis yang terletak di penutup atas, yang terhubung dengan katup
elektromagnetik dengan air pendingin.
2. Pemanasan dan pendinginan berlangsung dalam termostat, dan air termostatt ini,
dengan bantuan pompa, bersirkulasi melalui jaket bioreaktor.

Varian 1 tidak terlalu rumit, dan memastikan solusi konstruktif yang lebih ekonomis. Varian ini bekerja
sangat baik untuk bioreaktor kecil dengan volume hingga sekitar 5 liter. Varian 2 memastikan distribusi
panas yang lebih merata di seluruh volume bioreaktor, yang sangat penting dalam budidaya
mikroorganisme.

Dalam proses pengaturan suhu, alasan utama ketidaktepatan regulasi adalah parameter PID yang
salah dipilih. Ini memanifestasikan dirinya sebagai osilasi suhu.

Untuk mengatur suhu secara tepat, hambatan utama sering kali adalah porsi minimal yang terlalu tinggi dari
air pendingin. Jadi katup di saluran pasokan air pendingin harus disesuaikan. Faktor lain untuk akurasi
pengaturan adalah luas dan kerapatan permukaan perpindahan panas, karena jika kelembaman tinggi
maka sulit untuk mencapai akurasi yang lebih tinggi.

pH

Kontrol pH didasarkan pada perbandingan "set point" yang disesuaikan dan nilai riil pH. Untuk
pengukuran pH, praktis hanya elektroda yang dapat disterilkan (paling sering elektroda
"Mettler-Tolede") digunakan. Kontrol nilai pH dipastikan dengan bantuan pompa peristaltik (tabung
silikon biasa digunakan), yang sesuai dengan pengukuran asam dan alkali. Biasanya, penyesuaian
"set point" terdiri dari pH yang lebih rendah min dan pH lebih tinggi maks nilai-nilai. Jika pH berada di
antara kedua nilai ini, maka tidak ada pengaruh yang terjadi. Penyesuaian pH "titik setel" tersebut
diterapkan untuk mencegah overdosis larutan titrasi. Di sisi lain, batas pengaturan pH "sempit" tidak
diperlukan untuk keberhasilan proses budidaya. Harus disebutkan bahwa pengukuran pH harus
akurat (± 0,02 unit pH), karena dinamika perubahan nilai pH memberikan informasi berharga tentang
kinetika proses.

8
PO 2 ( tekanan parsial oksigen terlarut)

Salah satu aspek yang paling spesifik dari pemantauan fermentasi adalah PO 2 pengukuran dan kontrol. PO 2 kontrol
adalah karakteristik hanya untuk proses fermentasi. Ada beberapa perbedaan 2 prinsip kontrol:

1. Memvariasikan kecepatan rotasi mixer n, dengan asumsi pO2 ~ n.

2. Menggabungkan perubahan kecepatan rotasi mixer n dan jumlah
inlet udara terkompresi Q. Diasumsikan bahwa pO 2 ~ n, pO 2 ~ Q. Biasanya n diatur terlebih dahulu hingga
mencapai salah satu nilai pembatas - n min atau n maks, dan peraturannya
adalah menyadari oleh bervariasi Q.
Jika n dan Q telah mencapai nilai pembatas, tetapi pO 2 tidak dalam batas yang diperlukan,
maka efek pengaturan tidak terjadi.
3. Mengumpankan substrat atau salah satu komponennya. Diasumsikan pO itu 2 adalah
sebanding dengan intensitas makan. Penyuapan biasanya dilakukan dengan pompa peristaltik
yang terkontrol. Terkadang varian ini dikombinasikan dengan pengaturan kecepatan rotasi mixer
dan aliran pasokan oksigen atau udara
Q.

Di pO 2 peraturan, saat menyesuaikan parameter, berikut ini harus diperhitungkan:

1. pO 2 biasanya disesuaikan dalam% dari yang tetap. PO yang disesuaikan 2 nilai

memiliki batas bawah dan atas. Perbedaan antara kedua batas ini biasanya 10 - 20%.

2. Parameter penting dalam pO 2 kontrol adalah batas kontrol mixer

kecepatan rotasi n: n min dan N maks. Artinya, saat mengendalikan pO 2, n hanya akan bervariasi dalam
kisaran ini. Batas-batas ini ditentukan untuk menghilangkan berbagai fenomena yang tidak diinginkan:

1. n min pilihan ditentukan:

Sebuah.
untuk mengamankan tingkat pencampuran sebagian turbulen minimal;

b. oleh dispersi gelembung dijamin;

c. oleh sedimentasi yang dicegah.

2. n maks Pilihan ditentukan oleh:

Sebuah. pengaturan rezim berbusa intensif;
b. kerusakan mekanis ireversibel sel;
c. fluktuasi permukaan cair dan penguapan.

Busa

Penampilan busa adalah fenomena yang sangat tidak diinginkan, karena selama penampilannya, ada
risiko kehilangan bagian penting dari kaldu fermentasi. Sementara

9
ada berbusa, tidak mungkin untuk melakukan analisis berkualitas tinggi dan
pengukuran. Ada dua metode yang biasa digunakan atau kombinasinya untuk menghilangkan busa:

1. Pengukuran tambahan antifoam, berdasarkan informasi yang diberikan oleh

sensor busa. Impuls yang diberikan relatif rendah, dengan jeda panjang dan waktu pengukuran yang
terbatas. Kontrol tambahan ini diperlukan untuk menghindari kemungkinan overdosis, jika tidak,
parameter pertukaran massa dapat menurun secara dramatis.

2. Pengukuran busa secara mekanis. Untuk keperluan ini, drive atas dengan khusus
disk-type atau tipe lain dari mixer pemecah busa mekanis dipasang di penutup atas
bioreactor. Jika berbusa intensif dimulai, maka pemecahan busa secara mekanis tidak akan
membantu.

Solusi optimal adalah kombinasi dari kedua metode. Penerapan Varian 1 lebih banyak digunakan dalam
bioreaktor skala laboratorium.

10