Abstrak

D.K.F. MEIJER, G.A. VERMEER dan G. KWANT, Ekskresi hafafluorenium pada

manusia dan tikus, J. Eropa Farmakol 14 (1971) 280-285. Ekskresi urin dan bilier
dari senyawa amonium bisquaternary, hexafluorenium (Hfl), diselidiki pada 12
pria muda yang sadar (ekskresi urin) dan pada 6 pasien sadar dengan drainase
empedu postcholecystectomy (ekskresi bilier). Pada kedua kelompok tidak lebih
dari 5-20% dari dosis yang disuntikkan muncul dalam urin dalam 24 jam. Sejumlah
besar Hfl (27-48% dari dosis yang disuntikkan) dalam empedu pasien empedu
fistula menunjukkan bahwa ekskresi empedu adalah rute utama eliminasi. Pada
tikus pola ekskresi serupa: 1 jam setelah injeksi 35% ditemukan dalam empedu
sementara hanya 4% yang bisa terdeteksi dalam urin. Kromatografi lapis tipis.
Menyarankan bahwa Hfl diekskresikan dalam empedu dan urin dalam bentuk
yang tidak berubah. Plot semilogaritmik dari tingkat ekskresi urin menunjukkan
bahwa obat menghilang dengan cepat dari plasma (tl / 2 = 10-20 hujan) diikuti
oleh proses eliminasi yang lebih lambat (Wz = 2-4 jam).

1. PENDAHULUAN

Senyawa amonium heksafluorenium (Mylaxen ®) (Hfl) bisquaternary

ammonium digunakan dalam anestesi dalam kombinasi dengan
suxamethonium. Itu Dia mengklaim bahwa Hfl dikombinasikan dengan dosis
yang sangat kecil suxamethonium dapat memberikan relaksasi otot lengkap
tanpa terjadinya nyeri otot pasca operasi(Campbell et al., 1969; Dick et al., 1969;
Figueroa, 1968; Cecconello et al., 1965; Jobidon et al., 1964; Kok et al., 1962;
Foldes et al., 1960). Hfl memiliki sejumlah efek farmakologis seperti: aktivitas
seperti curarel pada dosis tinggi (Macri, 1954; Torda et al., 1967), penghambatan
cholinesterase (Foldes et al., 1960) dan efek non-curare-like pada motor -Piring
akhir otot rangka (Nastuk et al., 1964). Sangat sedikit yang diketahui tentang
distribusi, biotransformasi dan ekskresi senyawa. Cavallito et al. (1956)
menunjukkan bahwa aksi melumpuhkan ditingkatkan oleh senyawa larut-lipid
yang tidak efektif yang membuat mereka menyarankan bahwa obat tersebut
dapat menempati tempat kehilangan lipofilik. Dalam penelitian pendahuluan
pada anjing, tidak ada zat yang tidak berubah yang dapat diambil dari urin
(Cordaro et al., 1955).

Studi partisi mengkonfirmasi bahwa Hfl sangat luar biasa larut dalam lemak
(Meijer dan Weitering, 1970) sedangkan Para penulis yang sama menunjukkan
bahwa obat ini sangat terkonsentrasi dalam empedu dari hati tikus perfusi yang
terisolasi. Kami sekarang telah menyelidiki ekskresi HF urin dan empedu pada
manusia dan tikus.

2. METODE

2.1. Ekskresi urin pada manusia

Sukarelawan pria muda yang sehat menerima dosis Hfl dengan injeksi intravena,
lebih dari satu menit. Selama pemberian obat dan untuk 30 hujan lagi

Subjek berbaring. Respirasi muncul untuk tidak terpengaruh oleh dosis yang
digunakan. Sampel urin dikumpulkan hingga 17 jam setelah injeksi. Dosisnya
adalah 5 mg per 70 kg berat badan (4 subyek), 10 mg per 70 kg berat badan (4
subyek) dan 15 mg per 70 kg (4 subyek). (Dosis klinis bervariasi dari 20 hingga 35
mg / 70 kg). Spesimen kontrol urin dikumpulkan dari masing-masing sukarelawan
sebelum injeksi obat. Subjek mengosongkan kandung kemihnya segera sebelum
injeksi.

2.2. Ekskresi empedu pada pria angkat Enam pasien (1, 2, 3 wanita; 4, 5, 6 pria)
dengan drainase empedu total sukarela untuk penelitian ini. Masing-masing
menerima 5 mg Hfl i.v. 3 hingga 4 hari setelah kolesistektomi untuk kolelitiasis.
Pada pasien yang diteliti tes konvensional fungsi hati normal. Empedu
dikumpulkan setelah berbagai interval hingga 30 jam. Pada beberapa pasien
ekskresi Hfl pada urin diteliti waktu yang sama. Para pasien tidak menerima yang
lain obat-obatan atau diet khusus.
2.3. Ekskresi urin dan empedu pada tikus

Tikus Wistar jantan dengan berat 200-250 g dibius

dengan natrium pentobarbital, diintubasi

dan bernafas secara artifisial. Perut dibuka

dan saluran empedu dikanulasi dengan polietilen

kanula Kanula serupa ditempatkan di jugularis

urat nadi Hfl (1 mg / kg) diberikan 15-30rain

setelah sayatan ditutup lebih dari 5 menit

periode Dosis dalam saline 0,5 ml disuntikkan di atas a

periode 5 hujan dan dicuci dengan volume yang sama

dari saline. Segera setelah injeksi total

dosis, empedu dikumpulkan selama tiga periode 20 menit.

Selama percobaan pada lampu pemanas itu digunakan

masing-masing hewan menjaga suhu tubuh normal.

Pada akhir percobaan perut itu

buka lagi dan urin diambil dari kandung kemih.

2.4. Ekstraksi sampel urin dengan etilen diklorida

5 ml urin atau empedu diekstraksi pada pH basa

(KI-glisin penyangga. Cohen, 1963b) dengan 7 ml etilena

diklorida Setelah sentrifugasi, fase organik

Saya dikirim. Ekstraksi fase berair

Saya diulang dua kali. Ekstrak etilen diklorida adalah

disatukan dan diuapkan ke volume kecil

(0,2 ml). Jumlah Hfl yang diketahui ditambahkan ke urin dan

Empedu hampir sepenuhnya dikeluarkan dari air

fase setelah tiga ekstraksi dengan etilen diklorida.

2.5. Kromatografi lapis tipis

Ekstrak etilen diklorida dari urin dan empedu

sampel dan empedu murni dioleskan ke silika gel

Piring bersama dengan ekstrak etilen diklorida dari

kontrol urin, jumlah referensi Hfl yang diketahui di

kontrol salin, urin, atau empedu. Pelat dikembangkan

dengan aseton-1N HC1 (1: 4) atau isopropranol-

1N HC1 (1: 1). Bintik-bintik divisualisasikan dengan penyemprotan

pereaksi alkaloid iodoplatinate (Hexachloroplatin

Merck); Setidaknya 0,5 / Jg obat terdeteksi.

Reaktan ini memberikan reaksi warna dengan organik-Ncontaining

senyawa.

2.6. Penentuan spektrofluorimetri pengangkatan

Hfl dalam empedu dan urin diperkirakan fluorimetri

dengan metode yang dimodifikasi dari Cohen (1963a)

untuk d-tubocurarine. Kompleks fluorescent-Hfl adalah

dibentuk dengan Rose-Bengal pada pH basa *. Kompleks

diekstraksi menjadi fase kloroform yang mengandung

fenol untuk mencegah interfase dan presipitasi

etanol untuk mengurangi kehilangan kompleks pada peralatan gelas.

Setelah pemisahan dari fase kloroform berair

diencerkan dengan aseton yang meningkatkan fluoresensi dan menstabilkan

kompleks fluoresensi. Ekstraksi

dari urin dan empedu (Cohen, 1963b) sebelumnya

pembentukan kompleks pewarna-Hfl tidak

diperlukan untuk estimasi Hfl dalam tubuh ini

cairan Spektrum fluoresensi diperoleh dengan

Aminco-Bowman spektrofoto-fluorometer. Maks

eksitasi terjadi pada 564 nm dan maksimum

emisi pada 577 nm. Dalam praktiknya itu mudah

gunakan panjang gelombang menarik 546 nm. Untuk rutin

Analisis fluoresensi diukur pada Eppendorf

filter fluorimeter, menggunakan filter primer yang mengisolasi

Hg-line 546 nm dan filter sekunder yang

Ini mentransmisikan pancaran 560 nm dan lebih tinggi tetapi tajam

Memotong radiasi di bawah 560 nm.

2.7. Reagen

Solusi Rose-Bengal. Solusi dari Rose-Bengal

(Eastman Organic Chemicals B.F. CzoH2OslaC14Na2)

disiapkan dengan menambahkan 3,0 mg zat yang dimurnikan

(Cohen, 1963a) hingga 100 ml 0,45 M KH2POa.

Buffer fosfat. Buffer fosfat dibuat

naik dari 2ml 0.2M KH2PO4 dan 22.6ml 0.2N

NaOH yang diencerkan sampai 100 ml dengan suling

air (pH = 7,8).

Solusi kloroform. 2,5 fenol hal.a. telah ditambahkan ke

95 ml kloroform hal.a. dan 5 ml etanol hal.a. Selama

penentuan pengenceran disimpan dalam nitrogen

untuk mencegah dekomposisi

2.8. Prosedur

Sampel empedu tikus diencerkan 1:20 dengan Krebsbicarbonate

solusi dan empedu manusia 1:10. Dua ml

empedu encer atau 2 ml urin murni dicampur dengan

1 ml buffer fosfat, larutan Rose-Bengal 0,5 ml

dan ditambahkan ke tabung centrifuge kaca-stopper. Setelah

menambahkan 7 ml larutan kloroform-fenol tersebut

isi dicampur pada mixer vortex selama 2 menit

dengan gangguan terus menerus. Lapisan dipisahkan

oleh sentrifugasi di Homef centrifuge di

kecepatan maksmlal selama 10 menit. Fase berair adalah

mengisap 0,5 ml lapisan kloroform adalah

dipipet ke dalam tabung reaksi yang mengandung 3,5 ml aseton.

Setelah mencampur vortex mixer, solusinya adalah

ditransfer ke kuvet kuarsa dan baca di

fluorimeter yang disesuaikan dengan fluoresensi

standar sebelum membaca masing-masing. Semua penentuan itu

dilakukan dalam rangkap dua. Konsentrasi dalam empedu dan urin

sampel dihitung dari kurva standar terkait

konsentrasi obat untuk fluoresensi. Kurva ini

Mereka disiapkan dengan menambahkan jumlah Hfl yang diketahui

empedu (25 100 # g / ml) dan ke urin (0,5 lO / Jg / ml)

masing-masing Bacaan kosong dari sampel urin

berbeda individu dan dari sampel empedu tikus

menghasilkan nilai fluoresensi sesuai dengan

0,05-O.15 # g / ml Hfl dalam urin dan 1,5--2,5 ~ g / ml dalam

empedu Standar deviasi poin pada kalibrasi

kurva sebesar - + 6 persen untuk empedu tikus (n =

10), - + 5 persen untuk urin (n = 8) dan + - 9% untuk manusia

empedu (dalam = 12).

3. HASIL

3. I. Identifikasi senyawa yang diekskresikan

Ketika sampel urin dan empedu dari relawan berada

diekstraksi dengan etilen diklorida semua zat

Mampu membentuk kompleks dengan Rose-Bengal bisa

dihilangkan dari fase berair. Kromatografi lapis tipis

ekstrak urin dan empedu hanya terungkap

satu tempat tambahan dibandingkan dengan kontrol urin dan

empedu dari subjek yang sama. Nilai Rf-nya identik

dengan yang Hfl otentik, menunjukkan bahwa obat itu

diekskresikan tidak berubah. Hasil serupa ditemukan dengan

sampel empedu dari tikus.

3.2. Ekskresi ginjal pada manusia

Fig. 2 menunjukkan ekskresi urin kumulatif

Hfl (5 rag / 70 kg) pada sukarelawan. Penghapusan ginjal adalah

% cepat, terutama pada jam-jam pertama setelah injeksi

(Gambar 2 dan 3). Namun, setelah 17 jam hanya 5-20% dari

dosis yang disuntikkan diambil dari urin, konsentrasi

Menjadi sangat rendah atau nol saat ini. Setelah

dosis yang lebih tinggi (10 dan 15 mg / 70 kg) jumlah

Hfl diekskresikan selama 17 jam dalam urin berada di

rentang yang sama (tabel 1). Dapat diasumsikan bahwa kemih

ekskresi mencerminkan kadar plasma obat:

tingkat ekskresi ginjal harus terkait langsung dengan

konsentrasi dalam plasma. Plot semilogaritmik

tingkat ekskresi (tzg / 30 hujan) terhadap waktu (lihat gambar 3)

Tampaknya menunjukkan dua fungsi eksponensial, menunjukkan hilangnya cepat

dari plasma di yang pertama

jam (t, / 2 = 10-20 hujan) diikuti oleh proses yang lebih lambat

eliminasi (t½ = 2-4 jam). Pola ini ditemukan

dalam semua individu yang dipelajari.

3.3. Ekskresi hati pada manusia

Hfl konsentrasi tinggi ditemukan dalam empedu.

Konsentrasi maksimal (20-80ttg / ml empedu) adalah

mencapai 1-2 jam setelah i.v. injeksi Bilier kumulatif

data ekskresi (Gambar 4) diperoleh setelah injeksi

5 lap / 70 kg hingga 6 sukarelawan menunjukkan bahwa 27-45% dari total

Dosis yang disuntikkan dihilangkan dalam empedu dalam waktu 18 jam.

Tingkat ekskresi serupa pada pria dan wanita.

Dalam periode 18-30 jam setelah injeksi hanya kecil

Jumlah tambahan muncul dalam empedu (4 pasien).

Pada beberapa pasien empedu-fistula ekskresi urin adalah

dipelajari secara bersamaan. Dalam 18 jam setelah administrasi

5-10% dari Hfl yang disuntikkan ditemukan di

urin.

3.4. Ekskresi rill pada tikus

Setelah i.v. suntikan Hfl ke tikus (1 mg / kg) besar

jumlah obat ditemukan dalam empedu (tabel 2),

konsentrasi menjadi yang tertinggi dalam 20 hujan pertama.

Setelah 1 jam sekitar 34% terdeteksi dalam empedu sementara saja

4% diekskresikan dalam urin pada periode yang sama. Di tikus

juga, oleh karena itu, ekskresi empedu memberikan kontribusi besar

untuk menghilangkan senyawa secara total.

4. DISKUSI

Eliminasi agen seperti curare seperti alcuronium

(Luthi et al., 1966) dimethyltubocurarine (Dal Santo, 1964) gallamine (Feldman et
al., 1969; Mushin et al., 1949) dan d-tubocurarine (Cohen et al., 1967; Cohen et
al., 1965; Marsh, 1952) telah dipelajari pada berbagai hewan dan studi ekskresi
pada manusia telah dilakukan untuk gallamine (Mushin et al., 1949) dan d-
tubocurarine (Cohen, 1959). Ekskresi obat curare ginjal pada umumnya terbukti
sebagai jalur ekskresi terbesar, tetapi dalam kasus d-tubocurarine

perjalanan ke empedu (tikus dan anjing) adalah rute alternatif eliminasi. Bahwa
hal yang sama mungkin terjadi pada manusia disarankan oleh temuan (Cohen,
1959) bahwa hanya 20% dari d-tubocurarine yang disuntikkan dapat diambil dari
urin sukarelawan. Dalam hal ini Hfl akan menyerupai tubocurarine karena kami
telah menemukan jumlah yang relatif kecil dalam urin, sedangkan ekskresi bilier
pada manusia sangat besar. Tidak ada kesimpulan pasti pada biotransformasi
senyawa pada manusia dapat diperoleh dari percobaan ini. Zat yang kompleks
dengan Rose-Bengal dapat diekstraksi secara kuantitatif dari urin. Kromatografi
ekstrak yang dihasilkan menunjukkan bahwa zat ini tidak mengalami perubahan
Hfl. Namun, ada kemungkinan bahwa sebagian dari obat dimetabolisme secara
drastis sehingga tidak ada pembentukan kompleks yang dapat terjadi, atau
ekstraksi pada E.D.C. bisa sangat berkurang. Namun, percobaan awal dengan hati
tikus perfusi yang terisolasi menunjukkan bahwa lebih dari 90% Hfl dapat
dipulihkan, menunjukkan bahwa biotransformasi oleh hati tikus tidak begitu
penting. Ini lebih lanjut didukung oleh temuan kami bahwa pada tikus setelah
satu

jam sekitar 34% dari dosis yang disuntikkan terdeteksi

tidak berubah dalam empedu. Di sisi lain hanya tentang

50% dari dosis yang disuntikkan diambil dari urin

dan empedu setelah 30 jam. Saat ini, ini adalah pertanyaan terbuka

apakah ini karena penghancuran kompleks,

Penghapusan sangat lambat melalui empedu dan urin setelah

periode ini atau penghapusan melalui jalur lain.

Hfl sangat larut dalam lemak untuk kuartener

senyawa nitrogen (Me ± jet dan Weitering, 1970).

Ini memungkinkan membran sel mungkin

mudah dilewati Reabsorpsi dalam tubulus bisa demikian

menyebabkan eliminasi ginjal yang relatif lambat

majemuk Selanjutnya, reabsorpsi dari usus setelah ekskresi empedu harus

dipertimbangkan. Masuk

Yang satu itu akan berharap itu meskipun tinggi

ekskresi empedu sebagian besar obat akan dihilangkan

dalam urin. Namun, jumlah Hfl diekskresikan

dalam urin pasien empedu-fistula secara kasar setuju

Yang ditemukan dalam urin para relawan, sehingga

Sirkulasi enterohepatik obat ini sedikit

Pentingnya, yang mungkin disebabkan oleh pengompleksan

lendir usus (Levine et al., 1955) atau diserap kembali

Hfl sangat efisien dibersihkan dari darah portal

oleh hati. Ketika ekskresi HFL urin diplot

semi-logaritmik diperoleh kurva non-linear. Jika

tingkat ekskresi terkait dengan konsentrasi plasma gratis,

bagian pertama dari kurva mungkin berhubungan dengan yang cepat

menghilangnya plasma (ty ~ = 15 mnt). Ini bisa

disebabkan oleh keseimbangan dengan total ekstraseluler

volume, mengikat reseptor dan jaringan akseptor

depot Bagian kedua (tv2 = 4 jam) dapat mewakili

jumlah ekskresi hati dan ginjal.