Peran Bakteri Endofit Penghasil IAA (Indol Acetic Acid) Terhadap Pertumbuhan Tanaman Padi (Oryza

sativa L.)

The Role of IAA (Indol Acetic Acid) Producing Endofit Bacteria on the Growth of Rice Plants (Oryza
sativa L.)

Alya Aghni Rahmawati

Jurusan Agroteknologi Universitas Islam Negeri Sunan Gunung Djati Bandung
Jl.A.H.Nasution No. 105, Cibiru, Bandung, Jawa Barat, Indonesia.
Email: aghnialya@gmail.com

ABSTRAK

Bakteri endofit merupakan bakteri saprofit yang hidup dan berasosiasi dengan jaringan tanaman
sehat tanpa menimbulkan gejala penyakit. Beberapa bakteri endofit dapat menghasilkan hormon
perangsang pertumbuhan tanaman, salah satunya adalah IAA (Indole Acetic Acid) atau dikenal dengan
auksin. Auksin berperan memacu pertumbuhan tanaman dan biasanya ditemukan pada jaringan
meristem Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui bagaimana peran bakteri endofit yang diisolasi
dari akar tanaman padi dalam menghasilkan IAA dalam membantu pertumbuhan tanaman padi. Bakteri
endofit diisolasi dari akar tanaman padi yang telah disterilisasi permukaan, dikarakterisasi secara
morfologi, biokimia dan kemampuan menghasilkan hormon IAA. Dari dua lokasi pengambilan sampel
padi yaitu Medan dan Binjai diperoleh sebanyak 12 isolat bakteri endofit. Secara invitro terseleksi isolat
Md 1, Bj 2 dan Bj 3 yang menunjukkan produksi IAA paling tinggi masing-masing pada hari ke 2, 4 dan 6.
Introduksi bakteri endofit pada kecambah padi steril setelah 2 minggu menunjukkan pertumbuhan
tanaman yang lebih baik dibanding kontrol. Isolat Md 1 menunjukkan kemampuan yang paling baik
dengan tinggi tanaman 25,58 cm; panjang akar 10,48 cm dan berat basah tanaman 0,2 g.

Kata Kunci : Bakteri Endofit, IAA, Akar Padi

ABSTRACT

Endophytic bacteria are saprophytic bacteria that live and associate with healthy plant tissue
without causing disease symptoms. Some endophytic bacteria can produce plant growth stimulating
hormones, one of which is IAA (Indole Acetic Acid) or known as auxins. Auxins play a role in stimulating
plant growth and are usually found in meristem tissue. The aim of this study was to determine the role
of endophytic bacteria isolated from rice roots in producing IAA in helping the growth of rice plants.
Endophytic bacteria were isolated from surface sterilized rice plant roots, characterized by morphology,
biochemistry and the ability to produce IAA hormone. From the two rice sampling locations, namely
Medan and Binjai, 12 endophytic bacterial isolates were obtained. In vitro selected isolates Md 1, Bj 2
and Bj 3 which showed the highest IAA production on days 2, 4 and 6. The introduction of endophytic
bacteria in sterile rice sprouts after 2 weeks showed better plant growth than control. Isolate Md 1
showed the best ability with a plant height of 25.58 cm; root length 10.48 cm and plant wet weight 0.2
g.
Keyword : Endophytic Bacteria, IAA, Rice Root
PENDAHULUAN
Keragaman mikroorganisme di alam
sangat melimpah dan berperan penting bagi
kehidupan manusia, termasuk dalam bidang
pertanian. Mikroorganisme terbagi atas
mikroorganisme non-simbiotik yang ditemukan
bebas di alam dan mikroorganisme simbiotik
yang berinteraksi dengan tanaman, contohnya
adalah mikroorganisme endofit.
Endofit adalah mikroorganisme yang
hidup di dalam jaringan tanaman selama
periode tertentu dari siklus hidupnya,
membentuk koloni dalam jaringan tanaman
tanpa membahayakan inangnya. Dalam satu
jaringan tanaman kemungkinan ditemukan
beberapa jenis mikroba endofit yang
kemungkinan berhubungan simbiosis
mutualisme antara mikroba endofit dan
inangnya (Strobel and Daisy 2003).
Mikroba endofit yang umum ditemukan
adalah berupa bakteri dan jamur. Jenis dan
BAHAN DAN METODE
Bahan Tanaman
Bahan tanaman yang digunakan untuk
isolasi bakteri endofit penghasil IAA adalah akar
tanaman padi yang diperoleh dari persawahan
di daerah Medan dan Binjai. Reagen Salkowski
dipakai untuk analisis IAA secara colorimetri
menggunakan spektrofotometer.
kondisi tanaman menyebabkan jenis dan
keanekaragaman endofit yang terdapat dalam
jaringan tanaman juga bervariasi (Prasetyoputri
& Ines, 2006). Bakteri endofit penghasil hormon
auksin dapat membantu tanaman untuk
tumbuh dan berkembang disamping auksin
endogen yang dimiliki tanaman.
Hormon IAA merupakan hormon yang
berperan dalam pertumbuhan dan
perkembangan tanaman sehingga sintesis oleh
bakteri tertentu merupakan alasan yang
menyebabkan peningkatan pertumbuhan
tanaman . Bakteri endofit penghasil IAA pada
tanaman dengan kondisi dan bagian yang
berbeda maka akan bervariasi baik jenis
ataupun kemampuannya. Bakteri endofit
penghasil IAA pada tanaman padi pada kondisi
lingkungan yang berbeda juga bervariasi baik
dari jenis ataupun kemampuannya.
Media Pertumbuhan
Bakteri endofit diisolasi dari akar
tanaman padi menggunakan media Nutrient
Agar (NA)(Oxoid)) komposisi (g/l) : Beef Extract:
30, Peptone 50, Agar 15, dan ditambah
antibiotik ketokonazol (0,3 gram %). Media
Luria Bertani Tryptofan (LBT) digunakan
produksi IAA. Komposisi LBT (g/l) : ekstrak
khamir 5 g /l, Nacl 5 g/l, Tripton 10 g/l NaCl 0,5
g/l dan 5 mM L-Triptofan, pH medium
disesuaikan pada 7.5 dengan penambahan 1 N
NaOH sebelum di otoklaf.
Isolasi Bakteri Endofit Endofit
Akar tanaman padi dibersihkan dengan
air mengalir selama 20 menit. Sterilisasi
permukaan akar dilakukan dengan cara
merendam potongan akar dalam larutan
alkohol 70% selama 2 menit, larutan hipoklorit 5
% selama 5 menit dan alkohol 70% selama 30
detik kemudian dibilas dengan akuades steril
sebanyak dua kali (Radu & Kqueen, 2002). Akar
yang telah steril dihaluskan dengan lumpang
secara aseptis, kemudian dimasukkan ke dalam
tabung reaksi yang berisi akuades steril dengan
perbandingan 1:10 dan dibuat pengenceran
sampai 103 . Sebanyak 1 ml disebarkan pada
media nutrien agar steril dan diinkubasi selama
24 jam pada suhu ruang. Koloni bakteri yang
tumbuh disubkultur ke media yang sama
sampai diperoleh biakan murni.
Kemampuan Bakteri Endofit Memproduksi IAA
secara Invitro
Kemampuan bakteri endofit
memproduksi IAA secara in vitro, dilakukan
dengan cara menumbuhkan bakteri pada media
yang mengandung triptofan. Suspensi bakteri
sebanyak 3 ml, dengan jumlah sel 108 CFU/ml /
setara Mc Farland (Bresson dan Borges, 2004).
diinokulasikan pada 30 ml media Luria Bertani
Triptofan Cair (LBT) cair. Kultur bakteri
diinkubasi pada suhu ruang dan digoncang pada
kecepatan 150 rpm selama 7 hari. Kadar IAA
yang dihasilkan selama kultivasi diukur setiap
dua hari sekali. Pengukuran kadar IAA secara
kolorimetri dengan spectrofotometer pada
panjang gelombang 530 nm. Cairan kultur
disentrifugasi dengan kecepatan 5000 rpm
selama 25 menit. Filtrat yang diperoleh
kemudian dicampur dengan dengan reagen
Salkowski (150 ml H2SO4 pekat , 250 ml
akuades , 7.5 ml of 0.5 M FeCl3 ·6H2O (Gordon
& Weber, 1951) dengan perbandingan 2: 1.
Campuran diinkubasi pada suhu ruang selama 1
jam sebelum diukur absorbansinya. Kadar IAA
yang dihasilkan bakteri endofit ditentukan dari
hasil plot linear nilai absorbansi IAA standar.
Introduksi Bakteri Endofit Penghasil IAA pada
Kecambah Padi
Introduksi bakteri endofit Bj 2, Bj 3 dan
Md 1 dilakukan pada kecambah tanaman padi
yang steril. Untuk mendapatkan kecambah steril
maka biji padi ditumbuhkan dalam media agar
steril. Sterilisasi permukaan dilakukan dengan
cara merendam biji padi dalam campuran
larutan Agrep (fungisida) dengan dua tetes
larutan tween 80%, dan dishaker selama 30
menit dengan kecepatan 120 rpm. Biji dicuci
kembali dengan akuades steril, kemudian
direndam dengan larutan kloroks 10 % dengan
dishaker selama 15 menit dan dicuci kembali
dengan akuades steril sebanyak tiga kali. Biji
tersebut direndam kembali dengan larutan
kloroks 5 % dengan dishaker selama 15 menit,
kemudian dicuci dengan akuades steril
sebanyak tiga kali. Tahapan terakhir, biji
direndam di dalam alkohol 70 % selama satu
menit dan dibilas dengan akuades steril
(Suryowinoto, 1996). Biji padi yang telah steril
ditanam ke dalam media agar. Biji tersebut
ditumbuhkan selama satu minggu dan
diletakkan pada ruangan yang kurang cahaya,
kemudian kecambah muda dipindahkan ke
dalam wadah steril. Kecambah tersebut
direndam ke dalam suspensi biakan yang telah
disetarakan kekeruhannya dengan larutan Mc
Farland (108 sel/ml) selama dua jam. Kecambah
yang direndam dengan akuades digunakan
sebagai kontrol, masing-masing perlakuan
diulang sebanyak enam kali. Setiap kecambah
yang telah direndam dalam suspensi biakan
ditanam pada media tanah steril di dalam
polibag. Kecambah yang tumbuh diamati
setelah dua minggu. Parameter yang diamati
adalah tinggi tanaman, panjang akar dan berat
basah kecambah.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Endofit dari

Produksi IAA dari Bakteri Endofit Secara In
Akar Tanaman Padi (Oryza sativa L)
Vitro
Dari dua lokasi pengambilan sampel
Kemampuan bakteri endofit dalam
padi, diisolasi sebanyak 12 isolat bakteri endofit
memproduksi IAA bervariasi berdasarkan jenis
yaitu 7 isolat dari Medan dan 5 dari
isolat dan umur kultur. Konsentrasi IAA yang
Binjai. Setiap isolat memiliki morfologi
dihasilkan oleh bakteri isolat Md, memiliki
koloni, bentuk sel, sifat gram, motilitas dan sifat
produksi tertinggi pada umur kultur 2 hari dan
biokimia yang berbeda. Koloni bakteri berwarna
menurun setelah 4 dan 6 hari. Tetapi
putih, krem, kuning dan orange. Bakteri endofit
sebaliknya pada isolat Bj, produksi IAA
yang diperoleh lebih didominanasi oleh
meningkat seiring dengan meningkatnya umur
kelompok gram positif dan hanya dua isolat
kultur dan kadar IAA tertinggi dihasilkan pada
yang gram negatif. Bentuk bakteri umumnya
inkubasi hari ke 6 (Gambar 1). Perbedaan ini
basil dengan tiga isolat berbentuk kokus. Semua
diduga karena adanya variasi jenis berdasarkan
bakteri bersifat motil, katalase bersifat negatif
lokasi pengambilan sampel tanaman dan jenis
dan sebagian dapat menggunakan sitrat sebagai
bakteri. Variasi jenis, strain dalam genus yang
sumber karbon, menghidrolisis gelatin,
sama dapat menghasilkan IAA yang bervariasi
menghidrolisis pati serta memfermentasi gula
karena faktor lingkungan, tingkat pertumbuhan,
(Tabel 1). Hal ini berarti isolat yang diperoleh
dan ketersediaan substrat seperti asam amino
adalah jenis yang berbeda, walaupun untuk
dan sumber N lainnya.
mengetahui jenisnya perlu karakterisasi lebih
lanjut. Sifat motilitas bakteri dapat memberi
keuntungan pada tanaman ketika bakteri
diintroduksi. Penyebaran bakteri di tanaman
akan lebih mudah sehingga seluruh bagian
tanaman mengandung endofit dengan sifat
yang diinginkan. Katalase negatif menunjukkan
bahwa bakteri yang diisolasi semuanya bersifat
aerob.

Fase pertumbuhan bakteri mempengaruhi

produksi IAA. Pada bakteri Azospirillum
brasilense, IAA diproduksi setelah pertumbuhan
mencapai fase stasioner . Diperkirakan isolat
bakteri Md memproduksi IAA dalam waktu yang
relatif singkat dibanding dengan isolat bakteri
Bj. 57,93 µg/ml. 1 ppm. Tidak diketahui apa
yang menyebabkan kemampuan bakteri endofit
menghasilkan IAA lebih kecil dibanding dengan
bakteri tanah. Hal ini karena jenis-jenis bakteri
diazotrof seperti Rhizobium, Azotobacter,
Azospirillum mampu menghasilkan IAA dengan
atau tanpa kehadiran precursor TRP. Pemberian
triptofan dalam konsentrasi yang berbeda
memberi pengaruh terhadap produksi IAA dan
berbanding lurus dengan kadar triptofan yang
ditambahkan.
Introduksi Bakteri endofit pada Kecambah Padi
(Oryza sativa L.)
Hasil introduksi bakteri endofit Bj 2, Bj 3
dan Md 1 menunjukkan adanya perbedaan
pada pertumbuhan tanaman setelah waktu 2
minggu penanaman (Gambar 2). Introduksi
bakteri Md 1 memberikan pertumbuhan yang
lebih baik dibandingkan hasil introduksi dua
isolat lainnya dan kontrol. Pengamatan
terhadap tinggi tanaman; panjang akar dan
berat basah tanaman padi setelah diintroduksi
isolat Md1 berturut-turut : 25, 58 cm; 10, 48 cm
dan 0,2 g (Tabel 2).
Pada produksi IAA secara invitro, isolat Md1
memproduksi IAA pada waktu yang ebih cepat
dibandingkan dengan IAA dari isolat Bj2 atau
Bj3. Hal ini kemungkinan menjadi salah satu
faktor penyebab mengapa tanaman yang
diintroduksi isolat Md 1 memiliki pertumbuhan
yang lebih baik jika dibading dengan pengujian
pada 2 isolat lainnya. Auksin merupakan
hormon pertumbuhan yang diperlukan tanaman
dalam konsentrasi tertentu yang berperan
dalam mendorong terjadinya pembelahan sel.
Setiap fase pertumbuhan dibutuhkan kadar
hormon dengan konsentrasi yang berbeda.
Kadar IAA dengan konsentrasi yang tepat dapat
merangsang pembelahan sel (Krishnamoorthy,
1981). Semakin tinggi kadar IAA yang
digunakan, semakin baik pengaruhnya terhadap
pertumbuhan tanaman (Sumiasri & Ninik,
2001).
Perbedaan kadar IAA yang dihasilkan secara
invitro juga mempengaruhi pertumbuhan
tanaman. Bakteri Azospirillum yang
menghasilkan IAA dengan kadar tertinggi juga
menunjukkan pengaruh terhadap pertumbuhan
kecambah gandum yang lebih baik
dibandingkan bakteri yang menghasilkan kadar
IAA rendah (Akbari et al., 2007). Penambahan
bakteri dan triptofan secara bersamaan ke
dalam jaringan tanaman menghasilkan tinggi
dan berat tanaman semakin meningkat (Khalid,
et al., 1999). IAA yang dihasilkan oleh bakteri
tersebut dimanfaatkan oleh tanaman dan akan
mengalami proses metabolisme di dalam tubuh
tanaman sehingga membantu dalam proses
pertambahan tinggi, panjang akar dan berat
basah tanaman (Spaepen et al., 2007). Lestari et
al (2007), menyatakan bahwa dengan inokulasi
bakteri penghasil IAA dapat berfungis
meningkatkan tinggi dan mendorong
pertumbuhan awal tanaman padi. Panjang akar
padi juga menunjukkan pengaruh lebih baik dari
yang tanpa inokulasi bakteri.
SIMPULAN
1. Kemampuan bakteri endofit dalam
memproduksi IAA bervariasi
berdasarkan jenis isolat dan umur
kultur.
2. Fase pertumbuhan bakteri
mempengaruhi produksi IAA
3. Auksin merupakan hormon
pertumbuhan yang diperlukan tanaman
dalam konsentrasi tertentu yang
berperan dalam mendorong terjadinya
pembelahan sel.
4. Aplikasi bakteri endofit dan IAA untuk
pertumbuhan tanaman padi perlu
dilakukan pada medium lainnya seperti
medium tanah, dengan waktu aplikasi
yang tepat.
DAFTAR PUSTAKA
Krishnamoorthy, N.H, 1981. Plant
Growth Substances. Tata Mc
Graw- hill Publishing Company
Limited. New Delhi. Pp. 1-187.
Suryowinoto, M. 1996. Pemuliaan
Tanaman Secara In Vitro.
Yogyakarta. Kanisius.
Khalid, M., Zahir Z.A., Waseem. A. and
Arshad. M.1999. Azotobacter
and L-Tryptophan Application
for Improving Wheat Yield.
Pakistan Journal of Biological
Sciences. 2 (3): 739-742.
Sumiasri, N. and Ninik. S. 2001. Tanggap
Stek Cabang Bambu Betung
(Dendrocalamus asper) Pada
Penggunaan Berbagai Dosis
Hormon IAA dan IBA. Jurnal
Natur Indonesia. 3 (2): 121-128.
Radu, S. and Kqueen. C.Y. 2002.
Preliminary Screening of
Endophytic Fungi from
Medicinal Plants in Malaysia or
Antimicrobial and Antitumor
Activity. Malaysian Journal of
Medical Science. 9 (2): 23-33.
Strobel, G. A. and Daisy B., 2003.
Bioprospecting for Microbial
Endophytes and Their Natural
Products. Microbiology and
Molecular Biology Review. 491-
502.
Prasetyoputri, A. and Ines. A. 2003.
Mikroba Endofit: Sumber
Molekul Acuan Baru Yang
Berpotensi . BioTrends. 1 (2):
13-15.
Akbari, G. A., Arab S.M., Alikhani H.A.,
Allahdadi. and Arzanesh. M.H.
2007. Isolation and Selection of
Indigenous Azospirillum spp.
and The IAA of Superior Strains
Effects on Wheat Roots. World
Journal of Agricultural Sciences.
3 (4): 523-529.
Spaepen, S., V. Jos. and Roseline. R.
2007. Indole-3-Acetic Acid in
Microbial and Microorganism
Plant Signaling. Departement of
Microbial and Molecular
Systems. Centre of Microbial
and Plant Genetics: Belgium