RESUME JURNAL

METODE ANALISIS UNTUK PERHITUNGAN KOLESTEROL

KIMIA KLINIK I

OLEH :

SUJALMARO ANGGUSTI (1914313453039)

Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Maharani Malang

D3 Teknologi Laboratorium Medis
2020/2021
 1. Metode Pengukuran Kolesterol
Berbagai metode telah dikembangkan untuk penentuan kadar kolesterol. Metode
tersebut dapat dibagi menjadi tiga kategori utama: metode kimia klasik berdasarkan protokol
Abell-Kendall, uji enzimatik fluorometri dan kolorimetri yang umumnya digunakan untuk kit
pengujian dan pembaca pelat otomatis, dan pendekatan instrumental analitik seperti
kromatografi gas dan cair atau spektrometri massa. Masing-masing metode tersebut memiliki
keunggulannya masing-masing. Metode kimia klasik relatif sederhana dan murah untuk
dilakukan tetapi prosedur multi-langkah diperlukan. Pengujian enzimatis melibatkan
penggunaan enzim yang mahal, meskipun batas deteksi (LOD) biasanya rendah. Metode
kromatografi dan spektrometri massa adalah yang paling akurat dan sensitif, namun metode
tersebut membutuhkan peralatan yang mahal dan pretreatment sampel yang ekstensif.
2. Modifikasi metode Abell-Kendall
Metode Abell-Kendall yang dimodifikasi adalah metode referensi standar untuk
penentuan kolesterol total untuk penggunaan klinis yang disetujui oleh NIST. Ini adalah metode
kimia klasik multi-langkah yang melibatkan reaksi LIEBERMANN-BURCHARD (L-B) untuk
pengembangan warna . Ini termasuk saponifikasi ester kolesterol dengan kalium hidroksida
alkoholik, ekstraksi kolesterol terhidrolisis dengan heksana (bukan petroleum eter seperti dalam
metode Abell-KeNDALL asli) diikuti dengan penguapan pelarut, dan akhirnya pengembangan
warna dengan anhidrida asetat dan asam sulfat pekat
3. Tes enzimatis
Jenis tes tersebut didasarkan pada reaksi yang digabungkan dengan enzim untuk
menentukan kadar kolesterol total. Hidrogen peroksida diproduksi dalam reaksi ini sebagai
produk samping dan dapat dengan mudah dideteksi menggunakan probe kolorimetri atau
fluorometri sensitif tinggi. Beberapa probe fluorometri telah dikembangkan dan oleh karena itu
pengujian enzimatis telah menjadi strategi umum.
4. Kromatografi gas dan cair
Metode tersebut diterima secara luas sebagai metode yang lebih andal, sensitif, dan akurat
dibandingkan metode lainnya. Selektivitas tambahan dicapai karena fakta bahwa kolesterol
dipisahkan dari spesies yang mengganggu (seperti sterol) pada kolom kromatografi. Selain itu,
volume sampel yang rendah (puluhan mL) diperlukan untuk analisis. Sedangkan seperti yang
telah disebutkan sebelumnya, performansi teknik kromatografi lebih banyak bergantung pada
preparasi sampel, seperti saponifikasi dan ekstraksi analit.
5. Spektrometri massa tandem ionisasi elektrospray
Prosedur seperti ini digunakan untuk secara bersamaan menganalisis kolesterol bebas
dan ester kolesterol dalam sampel plasma dan homogenitas sel oleh ESI-MS / MS [37]. Dalam
laporan ini, kolesterol bebas diubah menjadi kolesteril asetat. Setelah tumbukan diinduksi
disosiasi, kolesterol turunan serta ester kolesterol (ion [MþNH4] þ), membentuk ion fragmen
yang sama pada m / z 369 dan dengan demikian digunakan untuk kuantifikasi lebih lanjut.
 6. Spektrometri massa ionisasi elektrospray desorpsi
Tetesan mikro yang bermuatan menghilangkan molekul dari permukaan, di mana ion
fase gas dihasilkan dan kemudian ditransfer ke spektrometer massa. Meskipun DESI MS dapat
digunakan untuk analisis senyawa non-polar, namun efisiensi ionisasi belum memuaskan. Oleh
karena itu, derivatisasi biasanya diperlukan untuk pengukuran kolesterol.
7. Analisis langsung dalam spektrometri massa waktu nyata
DART adalah sumber ion berbasis plasma yang dikembangkan pada tahun 2005 oleh
Cody et al. Spesies meta stabil yang dihasilkan oleh aliran gas helium atau argon yang
tereksitasi bereaksi dengan analit mengubahnya menjadi ion gas. DART terutama digunakan
untuk ionisasi senyawa yang relatif non-polar dengan berat molekul lebih rendah dari 1500 Da.
Karena fakta bahwa sumber ion DART tersedia secara komersial, ini telah menjadi teknik AIMS
yang paling umum diadopsi di dunia.
8. Analisis spektrometri massa kolesterol serum secara langsung
Metode yang dioptimalkan memungkinkan deteksi kolesterol pada level sekitar 20 mg /
mL dalam serum. konsentrasi kolesterol dalam sampel serum yang dikumpulkan diperkirakan
250 mg / mL dan sangat dekat dengan hasil yang diperoleh dengan LC-MS dan uji fluorometri-
enzimatik. Dengan menggunakan teknologi ini, konsentrasi kolesterol dalam setiap sampel
serum dapat dinilai hanya dalam waktu 1 menit. Oleh karena itu, sejumlah besar sampel dapat
dianalisis dalam waktu singkat. Metodologi yang disajikan diterapkan untuk menguji sampel
darah yang dikumpulkan dari 21 pelari rekreasi yang berpartisipasi dalam perlombaan
ultramaraton. Hasilnya, pDART-MS menunjukkan alat pelengkap yang potensial untuk tes
kolesterol di laboratorium klinis dan mungkin dapat diterjemahkan ke penggunaan untuk POCT.
9. Pencitraan spektrometri massa kolesterol dalam jaringan biologis
Metode tradisional ini sulit untuk menilai distribusi spasial senyawa lain seperti lipid.
Namun, generasi kedua pencitraan molekuler, khususnya pencitraan spektrometri massa (MSI),
bertujuan untuk menentukan lokalisasi spasial in situ dari berbagai macam molekul termasuk
metabolit, lipid, dan polipeptida. MALDI-MSI secara resmi diperkenalkan pada tahun 1997 oleh
kelompok Caprioli dan segera menjadi teknik yang efektif dan dapat diandalkan [60]. MALDI-
MSI menggunakan matriks organik untuk menutupi bagian jaringan untuk memfasilitasi ablasi
dan ionisasi biomolekul. Namun, matriks menyebabkan gangguan dalam rentang massa rendah
dan oleh karena itu pencitraan spesies dengan berat molekul rendah merepotkan dan oleh
karena itu MALDI-MSI sebagian besar digunakan untuk melokalisasi peptida dan protein [60].
MALDI-MSI juga digunakan untuk menentukan lokalisasi kolesterol sulfat endogen, yang
dibentuk dari kolesterol oleh steroid sulfotransferase, di epidermis karena memainkan peran
penting dalam regulasi pembentukan penghalang.