METODE RADIOASSAY DALAM KEDOKTERAN

YUMITA DWI MUJAYANTI

PROGRAM STUDI S-1 FARMASI

FAKULTAS ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS KADIRI
2021
 METODE RADIOASSAY DALAM KEDOKTERAN

Radioassay adalah istilah yang mencakup radioimmunoassay, protein

binding assay, dan teknik uji saturasi lainnya, serta teknik bioassay. Fitur umum

dari teknik radioassay adalah bahwa penanda radionuklida digunakan untuk

mengukur proses yang diubah secara reproduktif dan kuantitatif dengan adanya

berbagai jumlah zat yang diukur.

Aplikasi teknik radioassay meningkat pesat, memungkinkan pengukuran

zat yang ada dalam cairan tubuh dalam konsentrasi yang sangat rendah. Volume

kecil ini terdiri dari sembilan bab yang bervariasi dalam format yang

menggambarkan uji radio yang dipilih untuk menggambarkan "berbagai

pendekatan dan kelas senyawa yang dapat diperiksa."

A. RADIOIMUNOASSAY

Radioimmunoassay merupakan metode laboratorium (in vitro method) untuk

mengukur dengan relative tepat jumlah zat yang ada pada tubuh pasien dengan

isotop radioaktif yang bercampur dengan antibody yang disisipkan ke dalam

sampel. Radioimmunoassay merupakan revolusi dalam pemeriksaan medis

B. PROTEIN BINDING ASSAY

Radioligan digunakan untuk mengukur pengikatan ligan ke reseptor

dan idealnya harus memiliki afinitas tinggi, pengikatan non-spesifik rendah,

aktivitas spesifik tinggi untuk mendeteksi kepadatan reseptor rendah, dan

spesifisitas reseptor. Tingkat radioaktivitas untuk radioligand (per mol)

disebut sebagai aktivitas spesifik (SA), yang diukur dalam Ci/mmol.

Konsentrasi sebenarnya dari radioligand ditentukan oleh campuran stok

spesifik dari mana radioligand berasal (dari pabrikan.) Persamaan berikut

menentukan konsentrasi sebenarnya:

Pengikatan saturasi

Analisis saturasi digunakan dalam berbagai jenis jaringan, seperti fraksi

plasma yang dimurnikan sebagian dari homogenat jaringan , sel yang

ditransfeksi dengan reseptor kloning, dan sel yang dikultur atau diisolasi

sebelum analisis. Analisis pengikatan saturasi dapat menentukan afinitas dan

densitas reseptor. Ini mensyaratkan bahwa konsentrasi yang dipilih harus

ditentukan secara empiris untuk ligan baru.

Ada dua strategi umum yang diadopsi untuk jenis percobaan ini:

Meningkatkan jumlah radioligand yang ditambahkan sambil mempertahankan

aktivitas spesifik dan konsentrasi radioligand yang konstan, atau mengurangi

aktivitas spesifik radioligand karena penambahan ligan tidak berlabel.

Plot buangan

Contoh plot Scatchard

Sebuah Scatchard petak (Rosenthal petak) dapat digunakan untuk

menunjukkan afinitas radioligand. Dalam jenis plot ini, rasio radioligan

Terikat/Bebas diplot terhadap radioligan Terikat. The kemiringan garis adalah

sama dengan timbal balik negatif dari konstanta afinitas (K). Perpotongan
garis dengan sumbu X adalah perkiraan Bmax. Plot Scatchard dapat

distandarisasi terhadap referensi yang sesuai sehingga dapat ada perbandingan

langsung kepadatan reseptor dalam studi dan jaringan yang berbeda. Plot

sampel ini menunjukkan bahwa radioligan berikatan dengan afinitas tunggal.

Jika ligan terikat ke beberapa situs yang memiliki afinitas radioligan yang

berbeda, maka plot Scatchard akan menunjukkan garis cekung sebagai

gantinya.

Pemasangan kurva nonlinier

Program pemasangan kurva nonlinier, seperti Analisis Data Pengikatan

Keseimbangan (EBDA) dan LIGAND, digunakan untuk menghitung

perkiraan parameter pengikatan dari eksperimen saturasi dan pengikatan

kompetisi. EBDA melakukan analisis awal, yang mengubah radioaktivitas

terukur menjadi konsentrasi molar dan menciptakan kemiringan Hill dan

transformasi Scatchard dari data. Analisis yang dibuat oleh EBDA kemudian

dapat digunakan oleh LIGAND untuk memperkirakan model tertentu untuk

pengikatan.

Pengikatan kompetisi

Pengikatan kompetisi digunakan untuk menentukan adanya selektivitas ligan

tertentu untuk subtipe reseptor, yang memungkinkan penentuan kepadatan dan

proporsi setiap subtipe dalam jaringan. Kurva kompetisi diperoleh dengan

memplot pengikatan spesifik, yang merupakan persentase pengikatan total,

terhadap konsentrasi log ligan pesaing. Kurva kompetisi yang curam biasanya

menunjukkan pengikatan ke satu populasi reseptor, sedangkan kurva yang

 dangkal, atau kurva dengan titik belok yang jelas, menunjukkan beberapa

populasi situs pengikatan.

C. TEKNIK BIOASSAY

Bioassay merupakan analisis atau pengukuran dari suatu zat untuk

menentukan keberadaan dan dampaknya. Umumnya yang diuji adalah efek

obat dan kadar hormon.

Jenis

 Kualitatif assay untuk mengetahui ada atau tidak keberadaan suatu zat.

 Kuantitatif assay untuk mengukur kadar zat tersebut.

Aplikasi

Berbagai aplikasi bioassay yang telah ada:

 Bioassay senyawa antikanker menggunakan MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-

2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide), sitometrik mengalir untuk sel

yang mengalami apoptosis, penggunaan enzim alkaline fosfatase.

 Bioassay senyawa antiviral menggunakan RT PCR (reaksi polimerase

berantai transkriptasi terbalik).

 Bioasaay senyawa antituberkulosis dengan mengukur DNA polimerase

beta liase.

 Bioassay senyawa antitrombotik.

 Bioassay penyakit Alzheimer dengan mengukur senyawa stress oksidatif

pada korteks otak besar, aktivitas enzim beta sekretase, kromatografi lapis

tipis dan mikroplate untuk inhibitor asetilkolin esterase.

 Bioassay senyawa antiosteoporosis dengan mengukur kepadatan mineral

pada tulang, mengukur inhibitor PPAR-gamma, mengukur interleukin

(IL)-1 beta dan tumor necrosis factor (TNF)-alfa, lalu pengujian

menggunakan Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) pada urin.

 Bioassay senyawa antiinflamasi dengan mengunakan ELISA untuk

mengukur Interferon(IFN)-gamma, mengukur kloramfenikol

asetiltransferase, mengukur derajat immunosupressif.