Halaman 9

dan Video 54). Dalam model, penurunan pertumbuhan longitudinal menghasilkan hasil yang
lebih terfokus. Sebaliknya, peningkatan pertumbuhan longitudinal menghambat pembentukan
tonjolan terfokus dengan menghaluskan pertumbuhan. Peningkatan durasi pola marjinal
menyebabkan inisiasi tonjolan kabisat tetapi tidak mempengaruhi bentuk tonjolan. Memperluas
domain pertumbuhan meningkatkan ukuran tonjolan tanpa mempengaruhi bentuknya. Ukuran
tonjolan lebih lanjut ditingkatkan dengan memperlambat pertumbuhan lonjong dan dengan
memperluas domain pertumbuhan. Efek ini bertepatan dengan peran yang disarankan dari gen
KNOX STM dalam menghambat pertumbuhan dan diferensiasi pada daun menurut C. hirsuta
(Hay et al., 2006). Namun, tonjolan masih kekurangan dasar sempit yang ditemukan di pucuk.
Dengan memasukkan wilayah pada basis tonjolan yang menahan ekstensi longitudinal, model
menghasilkan dengan dasar yang sempit (Gambar 4Band Video S4), sehingga menghilangkan
karakteristik bentuk asimetris gerigi di A. thaliana. Hambatan pertumbuhan lokal di wilayah ini
konsisten dengan yang diusulkan dari gen RCO di dasar pucuk di C. hirsuta (Mad et al, 2014)
Singkatnya, model kami memprediksi tiga parameter, yang secara bersamaan berkontribusi pada
morfologi daun yang kontras dari C. hirsuta dan A thaliana: (1) Penurunan secara menyeluruh
dalam pertumbuhan longitudinal (2) Durasi pertumbuhan yang diperpanjang, dan (3)
Penghambatan pertumbuhan di pada daerah pucuk. Kami berhipotesis bahwa parameter ini dapat
dipetakan ke tindakan STM dan RCO, dengan STM bertindak secara menyeluruh mengurangi
pertumbuhan dan menunda diferensiasi (1 dan 2) dan RCO bertindak untuk menghambat
pertumbuhan secara lokal di dasar tonjolan yang muncul (3).

RCO Bertindak Secara Lokal, dan STM Bertindak secara Luas, untuk Meningkatkan
Kompleksita Daun
Untuk menguji prediksi dari model geometris kami dalam konteks jaringan yang
terhubung secara mesin, kami menganalisis peran gen RCO dan STM dalam pengembangan
daun. Gen ini aktif pada primordia (gen yang lebih dulu hadir) daun C. hirsuta, tetapi tidak aktif
pada A. thaliana. STM diekspresikan dalam meristem apikal pucuk yang berpotensi majemuk
dari kedua spesies dan dikeluarkan dari daun A. thaliana, sedangkan RCO tidak ada dari genom
A. thaliana (Long et al., 1996; Vad et al., 2014). Untuk menilai bagaimana gen ini
mempengaruhi perbedaan menyeluruh dalam pertumbuhan primordial, kami membandingkan
peta tipe sel daun liar di 3 DAI dengan tanaman dengan ekspresi STM dan RCO yang
dimodifikasi (Gambar 4C-4L). Daun C. hirsuta dapat dibedakan dengan A. thaliana dengan
peningkatan kontribusi sel distal pada helai daun (Gambar 4G dan 4J). Fitur ini tidak
diperhitungkan oleh RCO, karena mengekspresikan RCO di A. thaliana meninggalkannya urutan
pengaturan sendiri atau menghilangkannya dalam C. hirsuta RCO mutan tidak mengubah pola
kontribusi sel distal ini (Gambar 4H dan 4K). Namun, fitur ini penting dalam daun sederhana
pada C. hirsuta hilangnya fungsi dari mutan STM. (Gambar 4L) dan muncul pada A. thaliana
ketika ekspresi STM didorong dari promotor tepi daun yang aktif dari 2 DAI ke luar (Gambar 41
dan 4W-4X; BLS, Gambar S6W: Shari et al., 2009). Hasil ini menunjukkan bahwa ekspresi
RCO dan STM selama perkembangan daun meningkatkan kompleksitas daun (Gambar 4C-4F)
(Mad et al, 2014; Shani et al 2009) tetapi mereka berbeda dalam pengaruhnya terhadap
kontribusi sel ke primordium sel. Karena RCO tidak mempengaruhi kontribusi sel distal ke
primordium.
Kami beralasan bahwa hal itu mungkin mempengaruhi perkembangan daun secara lokal,
sesuai dengan usulan RCO sebagai penghambat pertumbuhan lokal (Vlad et al., 2014).
Hilangnya aktivitas RCO pada C. hirsuta dan introduksi aktivitas RCO pada A. thaliana tidak
mempengaruhi distribusi pertumbuhan global (Gambar 4M, 4O, dan S6A-S6D dan Video S5)
dan diferensiasi (Gambar 4N, 4P, S6E-S6H, S6S, dan S6T; untuk tipe liar lihat: Gambar 1C dan
1G, A. thaliana; dan S5J ke S5H dan S5K; Figur 1C ke Gambar 40; dan Gambar 1D Gambar
4M), Sebaliknya, ketika diekspresikan dalam salah satu spesies, RCO dihambat oleh
pertumbuhan lokal (Gambar 4M, 4O, dan S2G dibandingkan dengan (Figur 1C dan 1D, S2A)
dalam wilayah ekspresi terbatas di Kami kemudian memeriksa bagaimana aksi masing-masing
gen diubah menjadi (Gambar 1D dan 1H) C. hursuta, atau pola tepi (PIN1 ekspresi dan urutan
inisiasi tonjolan, bandingkan Gambar S5G dasar tonjolan yang muncul (Gambar 4U dan 4V).
Jadi, RCO diperlukan untuk represi pertumbuhan lokal di dasar tonjolan tetapi tidak memiliki
efek global yang jelas pada perkembangan daun.
Peta nasib kami menunjukkan bahwa STM meningkatkan kontribusi relatif sel distal ke
primordium (Gambar 4G – 4L). Kami demikian beralasan bahwa hal itu mungkin
mempengaruhi perkembangan daun secara luas. Adanya selang waktu mutan C. hirsuta STM
dan A. thaliana BLS :: Daun STM menegaskan bahwa STM secara luas mempengaruhi pola
pertumbuhan, proliferasi, dan diferensiasi. Pertumbuhan, proliferasi, dan diferensiasi dipercepat
dengan kuat pada C. hirsuta STM daun mutan (Gambar 4Q, 4R, S6J, S6N, S6P, S6R, dan
S6V;Video S5), bersamaan dengan penurunan awal ekspresi PIN1 (Gambar S5J dan S5L) dan
penurunan pertumbuhan lateral dari pucuk yang muncul (Gambar 4Q). Sebaliknya,
dibandingkan A. thaliana primordia daun tipe liar (Gambar 1C dan S1A), BLS :: STM primordia
menunjukkan pertumbuhan yang berkurang secara signifikan dan proliferasi (Gambar 4S, S6I,
dan S6U dan Video S5), tertunda diferensiasi (Gambar 4T dan 1G), domain PIN yang lebih luas.

Gambar 4. RCO dan STM Bersama-sama Membentuk Pertumbuhan Daun

(A dan B) Model geometris perkembangan tonjolan. (A) Prinsip simulasi. Sisipan merah
menunjukkan area margin yang disimulasikan. Pola perpanjangan. Interval CUC2 (biru) yang
melebihi panjang ambang batas dipecah oleh titik konvergensi (merah). Bagian distal dari
margin membedakan warna hitam garis putus-putus. Pertumbuhan memiliki gradien basipetal
(skala merah-hijau, dengan warna merah menunjukkan daerah pertumbuhan tertinggi). (B)
Pengaruh berbagai parameter simulasi pada bentuk tonjolan, dengan simulasi WT yang bertindak
sebagai referensi. Kehilangan kompetensi untuk menghasilkan tonjolan (batang biru, mata
panah), awal dan akhir pertumbuhan yang menurun zona (batang abu-abu, mata panah), dan
hambatan pertumbuhan di dasar tonjolan (panah merah) ditunjukkan. (C – F) Siluet daun garis
transgenik A. thaliana RCOg (C) dan BLS :: STM (E); C. hirsuta rco (D), dan stm (F) mutan.
(G – L) Panel kiri, penelusuran garis keturunan kuartil distal (biru) primordia awal (3–7 DAI, G
– K; atau 2 DAI hingga akhir selang waktu, L), untuk A. thaliana WT (G ), RCOg (H), BLS ::
STM (I), dan C. hirsuta WT (J, OX), rco (K), dan stm (L). Panel kanan, grafik perataan
pertumbuhan dari perkiraan kontribusi seluler pada titik waktu akhir (%, sumbu x) sel sepanjang
sumbu PD pada 3 DAI (sumbu y, 10 bins, masing-masing berisi 10% sel pada 3 DAI). (M – T)
Heat-map perluasan area (M, O, Q, dan S) dan lobeyness sel (N, P, R, dan T) untuk C. hirsuta
rco (M dan N), dan stm (Q dan R) daun mutan dan A. thaliana Daun RCOg (O dan P) dan
BLS :: STM (S dan T). (U – X) Lokalisasi RCO: VENUS (kuning) di C. hirsuta (U) dan A.
thaliana (V), pChSTM :: STM: VENUS di C. hirsuta (W) dan BLS >> STM: VENUS pada A.
thaliana (X) Daun-daun; garis putus-putus menandai tepi daun. Batang skala, 1 cm (C – F), dan
100 mm (G – X). Lihat juga Gambar S2, S5, dan S6 serta Video S4 dan S5.