ekspresi dan pola margin berkepanjangan
Khususnya, daun tetap simetris,
( Gambar S5 G, S5I, dan S6 Q). Penurunan
pertumbuhan BLS :: STM daun semakin terbatas
pada daerah proksimal primordium ( Angka 4 S,
S6 M, dan S6O) dan paling terlihat berdekatan
dengan tonjolan yang muncul, di mana
diferensiasinya sangat berlarut-larut
(bandingkan Gambar 1 G dan S2 tonjolan yang
muncul dalam deret selang waktu kami dengan
menggunakan segitiga C dengan Angka 4 T dan
S2 L). Namun demikian, peningkatan
pertumbuhan di ujung tonjolan sebanding
dengan WT tetapi dipertahankan lebih lama
( Gambar 4 S, S2 J, dan S2K). Jadi,
mengekspresikan STM di A. thaliana daun
meningkatkan kontribusi sel di daerah distal
dan lateral ke primordium awal ( Angka 4 G dan
4I), menggeser pola pertumbuhan seluler ke
arah C. hirsuta ( membandingkan Angka 1 C –
1H, 4 S – 4T, S1 A, S1B,
S6 I dan S6M). Pengamatan kami menunjukkan
itu STM memperlambat pertumbuhan awal
sambil menunda pematangan jaringan,
sehingga memperpanjang durasi pertumbuhan
dan pola. Khususnya, redistribusi pertumbuhan
daun yang bergantung pada STM ini mungkin
menjelaskan baik untuk pembentukan daun
lateral dan daun terminal luas yang
membedakannya.
Hasil ini menunjukkan bahwa penghambatan
pertumbuhan di dasar tonjolan yang muncul,
dikombinasikan dengan peningkatan
pertumbuhannya, dapat mengubah gerigi
menjadi daun. Untuk menguji gagasan ini, kami
mengukur keseluruhan bentuk untuk
memperkirakan bentuk tonjolan ( Gambar 6 S,
Metode S1 ). Analisis kami menunjukkan bahwa
selama pengembangan gerigi, dasar tonjolan
dengan cepat bertambah lebar dan secara
bertahap bertambah panjang. Sebaliknya, di
beberapa bagian kecil, dasar tonjolan tetap
sempit sedangkan tonjolan memanjang secara
substansial.
sedangkan gerigi mengadopsi bentuk
asimetris selama pengembangan ( Gambar 6 S).
Pengukuran daun dewasa konsisten ( Gambar 6
T) dan, dengan demikian, menunjukkan bahwa
file-file dihasilkan dari efek gabungan BLS :: STM
dan RCOg dalam bentuk. Secara kualitatif,
perubahan bentuk gerigi dan daun ( Angka 6 S
dan 6T) konsisten dengan perubahan
pertumbuhan yang diprediksi oleh model
geometris untuk meningkatkan ketajaman dan
simetri tonjolan ( Gambar 4 B), khususnya: efek
lokal dari RCO menghambat pertumbuhan di
dasar tonjolan, dan efek global STM dalam
memperlambat laju pertumbuhan dan
diferensiasi, sekaligus memperpanjang durasi
pertumbuhan. Namun, simulasi
C. hirsuta dari A. thaliana, konsisten dengan
hilangnya kedua fitur ini di C. hirsuta stm mutan
ditunjukkan pada Gambar 4 B ternyata tidak
mereproduksi tangkai sempit yang ( Angka 4 G,
4I, 4J, dan 4L). Kami mengamati itu STM
meningkatkan kompleksitas daun dengan
menunda diferensiasi. Namun, diferensiasi yang
dipercepat juga dapat meningkatkan
kompleksitas daun, seperti yang terlihat pada A.
thaliana tanaman berekspresi berlebihan
PROTEIN2 TERKAIT KIP (KRP2) di bawah 35S
promotor ( Angka 5 A dan 5B; De Veylder et al.,
2001 ). Jadi, diferensiasi yang tertunda dan yang
dipercepat dapat meningkatkan kompleksitas
daun. Kami menyelidiki kontradiksi ini dengan
merekam gambar selang waktu p35S :: KRP2
Daun-daun ( Gambar 5 C-5J), yang menegaskan
permulaan awal diferensiasi, relatif terhadap
tipe liar (3 DAI versus 5 DAI dalam tipe liar;
bandingkan Angka 5 C – 5J dengan Angka 1 C,
1G, S1 A, dan S1C). p35S :: KRP2 daun memulai
gerigi simetris yang tumbuh lambat dan sinus
diamati di daun A. thaliana RCOg-V; BLS :: STM (
Gambar 6 I dan 6N) dan C. hirsuta ( Gambar 6 J
dan 6O).
Untuk membuat konsep efek gabungan dari
RCO dan STM pada bentuk daun, kita kembali
ke model geometris A. thaliana margin.
Terinspirasi oleh data biologis kami ( Gambar 6
I, 6N, dan 6Q), kami mengeksplorasi efek dari
memanipulasi jumlah dan domain represi
pertumbuhan pada tajam yang dipertahankan
dari waktu ke waktu, tidak seperti pada daun
tipe liar ( Gambar basis penonjolan ( Gambar 6
U dan Video S6 ). Peningkatan hambatan
pertumbuhan pada 5 C). Jadi, fitur umum dari
BLS :: STM, RCOg dan p35S :: KRP2basis tonjolan
mengubah lobus menjadi bentuk leaflet tetapi
tidak menghasilkan basis bertangkai.
Memperluas zona hambat di dasar tonjolan
agar sesuai RCO ekspresi ( Angka 6 Q dan 6R)
menghasilkan daun yang ditopang oleh tangkai
yang sempit. Secara keseluruhan, data kami
mengklarifikasi bagaimana aksi gabungan RCO
dan STM selama pengembangan daun cukup
untuk menjelaskan aspek-aspek kunci dari
pengembangan daun yang sederhana versus
yang dibedah meskipun terdapat banyak
interaksi multi-skala yang memengaruhi bentuk
daun. Kedua gen berkontribusi untuk
memperlambat pertumbuhan pada basis
penonjolan, yang memungkinkan anisotropi
pertumbuhan lateral tonjolan untuk
menghasilkan berkas-berkas terpisah ( Angka 1
C – 1F dan 4 ). Namun, STM juga berkontribusi
pada perpanjangan longitudinal berkelanjutan
yang memungkinkan daun terpisah. Dengan
demikian, penghambatan pertumbuhan
keduanya membentuk hasil yang didorong oleh
pertumbuhan lateral anisotropik (2-6 DAI) dan
memungkinkan ekstensi anisotropik dari
tangkai daun tengah (disebut rachis) untuk
memisahkan daun (7-8 DAI) ( Angka 1 D dan 1F).
Fenotipe yang relatif ringan yang membedakan
A. thaliana RCOg-V; BLS :: dan redistribusi
pertumbuhan global yang dihasilkan dari
diferensiasi yang tertunda ( Angka STM
tanaman dari 1 , 2 , dan 3 ). Sendiri, tidak satu
pun dari fitur ini menghasilkan daun yang
dibedah ( Angka 4 dan 5 ), mengarahkan kita
untuk berhipotesis bahwa mereka bertindak
bersama untuk menghasilkan brosur. Sesuai
dengan hipotesis ini, ekspresi gabungan dari
RCO dan C. hirsuta mungkin mencerminkan
perbedaan lain dalam ekspresi gen antara
primordia daun dari dua spesies, termasuk
ekspresi diferensial dari beberapa faktor
transkripsi meristem ( Gan dkk., 2016 ).
Daun mengalami penurunan pertumbuhan di
daerah sekitarnya memulai tonjolan.
Pengamatan ini menunjukkan bahwa konteks
pertumbuhan yang lambat memungkinkan
pemeliharaan tonjolan yang lebih menonjol,
terlepas dari status diferensiasi jaringan di
sekitarnya, seperti yang juga disarankan oleh
model geometris kami ( Gambar 4 B).
Memodulasi Pertumbuhan Lokal dan Global
Menghasilkan Daun yang Dibelah
Pengamatan kami menunjukkan bahwa
perbedaan A. thaliana dan C. hirsuta
perkembangan daun termasuk modifikasi lokal
pertumbuhan selama pola STM di A. thaliana
tanaman transgenik ganda mereproduksi aspek
kunci dari C. hirsuta bentuk daun yang dibedah (
Angka 6 A – 6J), termasuk halaman terminal
yang luas. Di A. thaliana tanaman
mengekspresikan RCOg-VENUS (RCOg-V) dan
BLS :: STM transgen, tonjolan benar-benar
terpisah satu sama lain dan didukung oleh basis
sempit ( Gambar 6 SAYA).
RCO ekspresi terlokalisasi pada petiolulus dari
kedua daun terminal dan lateral ( Angka Kami
menyelidiki bagaimana pengatur utama
organogenesis memengaruhi kecepatan dan 6 Q
dan 6R), dan arsitektur vaskular RCOg-V; BLS ::
STM daunnya mirip dengan C. hirsuta daripada
A. thaliana Daun-daun ( Angka 6 K – 6P).
DISKUSI
orientasi pertumbuhan, proliferasi sel, dan
waktu diferensiasi seluler untuk menghasilkan
bentuk daun yang berbeda. Untuk
melakukannya, kami memperoleh data
pertumbuhan tingkat seluler waktu nyata.