III.

METODE PRAKTIKUM

A. Waktu dan Tempat

Praktikum uji sitrat dilaksanakan pada hari Rabu, tanggal 30

November 2020 pukul 9.00-12.00 WITA, bertempat di Laboratorium Biologi

Unit Mikrobiologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,

Universitas Halu Oleo, Kendari.

B. Bahan Praktikum

Bahan yang digunakan pada praktikum ini tercantum pada Tabel 1.

Tabel 1. Bahan dan Kegunaan

No. Nama Bahan Satuan Kegunaan
1 2 3 4
1. Isolat Bacillus subtilis, - Sebagai objek pengamatan
Pseudomonas
aeruginosa dan
Escherichia coli
2. Media SCA (Simmon 0,9 g Sebagai media uji sitrat
Citrat Agar)
3. Alkohol 70% - Sebagai larutan desinfektan
4. Aquades 40 mL Sebagai larutan pengencer
5. Kapas - Sebagai penutup mulut tabung
reaksi
6. Tissue - Sebagai pembersih alat
7. Kertas - Sebagai pembungkus

C. Alat Praktikum

Alat yang digunakan pada praktikum ini tercantum pada Tabel 2.

Tabel 2. Alat dan Kegunaan

No. Nama Alat Jumlah Kegunaan
1 2 3 4
1. Tabung reaksi 6 Untuk menyimpan isolat bakteri
2. Gelas ukur 1 Untuk mengukur larutan
 Tabel 2. Lanjutan
1 2 3 4
3. Ose bulat 1 Untuk mengambil dan
memindahkan bakteri
4. Laminar Air Flow 1 Untuk bekerja secara aseptik
(LAF)
5. Gelas ukur 1 Untuk mengukur larutan
6. Hot plate 1 Untuk memanaskan media
7. Autoclave 1 Untuk sterilisasi
8. Lampu spiritus 1 Untuk mensterilkan ose lurus dan
ose bulat
9. Rak tabung 1 Untuk meletakkan tabung reaksi
10. Kamera 1 Untuk mendokumentasikan hasil
pengamatan
11. Alat tulis - Untuk mencatat hasil pengamatan

D. Prosedur Kerja

Prosedur kerja pada praktikum uji sitrat adalah sebagai berikut:

1. Pembuatan Media

Menimbang SCA (Simmon Citrat Agar) sebanyak 0,9 g, kemudian

melarutkan bahan ke dalam 40 mL aquades. Memanaskan bahan yang telah

dilarutkan dengan aquades pada hot plate sampai homogen dengan

meletakkan magnetic stirrer ke dalam wadah. Setelah homogen,

membungkus media dengan kertas lalu mensterilisasi menggunakan

autoclave selama 15 menit dengan suhu 121ºC dan tekanan 1 atm.

2. Uji Sitrat

a. Mengambil isolat bakteri menggunakan ose bulat dan menggoreskan ke

dalam media miring SCA (Simmon Citrat Agar).

b. Menginkubasi pada suhu ruang selama 48 jam.

c. Mengamati adanya perubahan warna pada masing-masing isolat.

d. Mencatat dan mendokumentasi hasil pengamatan.