LEMBAR KERJA PRODUKSI DAN ISOLASI PROTEIN

1. Hitunglah bahan bahan yang diperlukan untuk produksi dan isolasi protein
a. Ampisilin stok 100 mg/ mL , berapakah ml ampsilin yang ditambahkan ke dalam media
LB 50 mL jika kadar ampisilin akhir adalah 100 ug/mL
b. Buatlah stok IPTG 1 M (hitung penimbangan dan caranya), dan hitunglah IPTG yang
diperlukan apabila kalian ingin melakukan induksi ekspresi dengan IPTG 0,5 mM dari
stok IPTG yang ada
c. Bagaimanakan cara membuat lizozim yang akan digunakan untuk melisiskan sel bakteri
jika kadar lizozim akhir adalah 1 mg/mL.
d. Bagaimanakah cara membuat PMSF yang akan ditambahkana pada suspensi sel yang
akan dilisis, jika PMSF akhir adalah 100 mM.
Jawab:
a. C1 =100 mg/mL
C2 = 100 ug/mL = 0,1 mg/mL
V2 = 50 mL
C1 × V1 = C2 × V2
100 mg/mL × V1 =0,1 mg/mL × 50 mL
V1 = 5 mg / 100 mg/mL
V1 = 0,005 mL = 5 uL
Jadi, ampisilin ditambahkan ke media LB 50 mL sebanyak 5 uL.
c. Pembuatan lisozim (10 mg/mL)
1. Sel bakteri dilisiskan untuk mengekstraksi protein dengan menggunakan 1/10 volume
lisozim (10 mg/ mL) yaitu dengan menimbang 10 mg serbuk lisozim dalam 1 mL larutan.
2. Ditambahkan 10 mM buffer Tris Cl pH 8.0 sebanyak 1 mL
3. Diinkubasi selama 90 menit pada suhu 37⁰C
4. Disimpan dalam lemari pendingin.
Untuk volume akhir lizozim 1 mg/mL:
10 mg/mL × 1 = 1 mg/mL x V2
V2 = 10 mg/mL / 1 mg/mL
V2 = 10 kali
Jadi, lisozim dibuat 1 mg/mL dilakukan alikuot sebanyak 10 kali pada larutan lisozim 10
mg/mL