9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

Halaman 1

AYAM YANG BERKILA

DNA Rekombinan dalam Pekerjaan
tember 2020

, Sep

D. Listyorini, Ph.D Ph.D

orini

Listy

1. Divisi Bioteknologi,
Laboratorium Sentral Bahan Mineral dan Maju
2. Jurusan Biologi
3. Jurusan Bioteknologi
Universitas Negeri Malang

Halaman 2

https://translate.googleusercontent.com/translate_f 1/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

Cahaya dalam gelap

CHICKS: Burung disuntik
protein bercahaya berpendar
di bawah sinar ultraviolet -
tember 2020
dan mereka bisa membantu mengekang
penyebaran flu burung , Sep

Ph.D

orini
https://www.dailymail.co.uk/sciencetech
/ article-3225344 / The-glow-dark-
Listy
CHICKS-Burung-disuntik-bercahaya-
protein-fluoresce-ultraviolet-light-
help-curb-spread-bird-flu.html

Halaman 3

Membuat Glowing Chicken dengan cara

Teknik DNA rekombinan

https://translate.googleusercontent.com/translate_f 2/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

tember 2020
• Glowing chicken adalah: ayam kecil yang sedang
bersinar dalam gelap atau saat sinar UV , Sep

Ph.D

orini

Listy

Halaman 4

Membuat Glowing Chicken dengan cara

Teknik DNA rekombinan

tember 2020
• DNA rekombinan adalah nama umum untuk
mengambil sepotong DNA, dan menggabungkannya , Sep

dengan untaian DNA lain. Ph.D

orini

https://translate.googleusercontent.com/translate_f 3/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

Listy
• Proses rekombinan yang paling umum terjadi
menggabungkan DNA dari dua organisme berbeda.

Halaman 5

Bagaimana cara kerja rDNA?

• DNA rekombinan bekerja saat sel inang berekspresi
protein dari gen rekombinan.
tember 2020
• Faktor ekspresi dibutuhkan untuk mendapatkan hasil yang lebih tinggi.
, Sep
• Biasanya membutuhkan sinyal termasuk promotor, ribosom
situs pengikatan, dan terminator. Ph.D

• Produksi protein rekombinan dalam sistem eukariotik orini

umumnya terjadi pada ragi dan jamur berserabut.
Listy
• Namun, beberapa protein terlalu kompleks untuk diproduksi
bakteri, jadi sel eukariotik harus digunakan

https://translate.googleusercontent.com/translate_f 4/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

Halaman 6

Beberapa aplikasi rDNA

Tanaman Lebih Baik (tahan kekeringan & panas)

tember 2020
Vaksin Rekombinan (mis. Hepatitis B)
Pencegahan dan penyembuhan anemia sel sabit , Sep
Pencegahan dan penyembuhan fibrosis kistik
Ph.D
Produksi faktor pembekuan
orini
Produksi insulin
Produksi obat-obatan rekombinan Listy

Tanaman yang menghasilkan insektisida sendiri

Garis kuman dan terapi gen somatik

Halaman 7

Bagaimana kita membuatnya?

Mempersiapkan bakteri pembawa GFP
https://translate.googleusercontent.com/translate_f 5/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

Amplifikasi gen GFP konstruksi plasmid dan / ATAU virus :

tember 2020
-5 '- 3' Modifikasi (opsional)
, Sep

Amplifikasi PCR untuk pemeriksaan berurutan Ph.D

Mengurutkan konfirmasi orini

Listy

Penyisipan ke dalam plasmid bakteri atau virus

Halaman 8

tember 2020

, Sep

Ph.D
https://translate.googleusercontent.com/translate_f 6/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

Potong target dengan orini

enzim restriksi
Listy

Ilustrasi urutan gen,

Listyorini, 2003

Halaman 9

Mempersiapkan plasmid bakteri pembawa GFP

dan / ATAU konstruksi virus :
GFP
SpeI Bukan saya

Cla I
tember 2020

pBluescript
pRCAS-L14 , Sep

Ph.D

orini

GFP Listy
Spe1 Not1

-5 '-3' Gen GFP yang dimodifikasi

https://translate.googleusercontent.com/translate_f 7/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

Listyorini, 2003

pBlueskrip II SK (+)
Halaman 10

1
10
peta plasmid
geId = 41
Sebuah

ge.do?im
tember 2020
Ima

, Sep
menunjukkan

Ph.D
mon /

orini

se.org/com Listy

.xenba
w
w

: // w

http

Halaman 11

Transformasi bakteri dari ekspresi GFP

https://translate.googleusercontent.com/translate_f 8/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

plasmid

tember 2020
Pure GFP -bearing
plasmid
, Sep

Ph.D
37 0 C
Gen GFP Media LB Kompeten Bermalam di LB- Mini / maxiprep
persediaan (Luria-Bertani stok sel media + Ampisilin orini
panen plasmid
media bakteri)
Listy

Listyorini, 2003

Halaman 12

Pengambilan partikel virus yang mengekspres GFP dan

pemurnian:

tember 2020

https://translate.googleusercontent.com/translate_f 9/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

, Sep

Ph.D
Pure GFP -bearing Budaya virus di
plasmid Sel DF-1 orini

Listy

Kaya virus Ultrasentrifugasi: Virus Mikrofiltrasi 0,22 μm

Media kultur sel 125.000rpm 4 0 C pelet penyimpanan dalam alikuot 5 μl

Listyorini, 2003

Halaman 13

Transformasi / infeksi menjadi embrio

Larutan virus yang mengandung GFP + hijau-cepat
dengan jarum kaca halus

tember 2020

, Sep

Ph.D
Pembukaan & pementasan cangkang telur Solusi fastgreen E2.5 sampai E3.0
orini

Listy

https://translate.googleusercontent.com/translate_f 10/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

Embrio ayam saring C / O

> rentan terhadap semua subkelompok dari avian retrovirus. Listyorini, 2003

Halaman 14

GFP -mengekspresikan Proventrikulus Embrio Ayam

tember 2020

, Sep

Ph.D

orini

Listy

PV embrio ayam yang mengekspresikan GFP PV embrio ayam yang mengekspresikan GFP

(Tampilan punggung) (Tampilan lateral)

https://translate.googleusercontent.com/translate_f 11/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan
Halaman 15

Transgenic Glowing
(Mengekspresikan GFP)
Ayam
dalam cahaya Normal

Program Hasssei tember 2020

Fakultas Sains dan
Teknologi , Sep

Sekolah Pascasarjana Ph.D

Ilmu

Tokyo Metropolitan orini

Universitas
Listy
1-1 Minami Ohsawa,
Hachiouji-shi, Tokyo

Halaman 16

Sumber teknis:

https://translate.googleusercontent.com/translate_f 12/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

tember 2020

, Sep

Ph.D

orini

Listy

Hapyo / Disertasi Bertahan Diterbitkan sebagian di:

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/
02 Desember 2005 10.1111 / j.1440-169X.2006.00861.x

Halaman 17

Garis Sel HeLa (Serviks

sel kanker) mengekspresikan
GFP in-vitro
tember 2020

, Sep

Widyaningsih A., Lyrawati D., Ph.D

Listyorini D. (Set Data, 2012)

https://translate.googleusercontent.com/translate_f 13/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

orini
Listy

Halaman 18

Kloning Molekuler
Gambar 17.1C.117.1C.1:
Kloning Molekuler : Diagram ini
menunjukkan langkah-langkah yang terlibat di
kloning molekuler, dimana daerah
atau fragmen genom
direproduksi untuk memungkinkan penelitian atau tember 2020
manipulasi gen dan mereka
produk protein. , Sep

Ph.D

orini

Listy

https://translate.googleusercontent.com/translate_f 14/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

https://bio.libretexts.org/Bookshelves/Introductory_and_General_Biology/Book%3A_General_Biology_(Boundless)/17%3A_Biotechnology_and_Genomics/17.
1% 3A_Biotechnology / 17.1C% 3A_Molecular_and_Cellular_Cloning

Halaman 19

tml Sistem RCAS

Vektor RCAS adalah keluarga vektor retroviral yang diturunkan dari strain SR-A
verview.h
Rous sarcoma virus (RSV), anggota dari avian sarcoma-leukosis virus (ASLV)
keluarga. Di alam, retrovirus dapat memperoleh onkogen dari inangnya. Dalam setiap kasus
AS / o
tetapi satu, akuisisi onkogen virus telah mengakibatkan hilangnya satu atau lebih virus
gen. Kebanyakan retrovirus yang mendapatkan onkogen seluler rusak replikasi; tember 2020
rp / RC RSV adalah pengecualian. RSV berisi lengkap gen virus dan
, Sep
ivd src onkogen . Kami telah memanfaatkan pengecualian ini untuk membuat keluarga dari
v/h vektor retroviral yang kompeten replikasi (lihat Tabel 1 dan Tabel 2 ). Meski sebenarnya Ph.D

konstruksi lebih kompleks, ide dasarnya adalah bahwa vektor RCAS memungkinkan
orini
untuk menggantikan gen / urutan lain untuk src . Nama RCAS adalah singkatan dari Replikasi-
Ulangi terminal panjang ASLV (LTR) yang kompeten dengan akseptor Sambungan. Vektor RCAS Listy
pertahankan situs sambungan src dan ekspresikan gen yang disisipkan melalui pesan yang disambung. Ini
me.ncifcrf.go
Hai vektor akan berkembang biak dalam sel unggas yang dipilih dengan tepat (biasanya ayam atau puyuh,
meskipun yang lain bisa digunakan). Dalam beberapa kasus, vektor RCAS yang dipilih dengan tepat akan
SH
menginfeksi, tetapi tidak akan mereplikasi, dalam sel mamalia yang dipilih dengan tepat (lihat Tabel 3 ).
http

Halaman 20

Tentang RCAS plasmid / virus

https://translate.googleusercontent.com/translate_f 15/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

https://www.researchgate.net/publication/50212487_A
nimal_models_of_melanoma_A_somatic_cell_gene_delivery_
mouse_model_allows_rapid_evaluation_of_genes_implicated
_in_human_melanoma https://www.addgene.org/15182/

tember 2020

, Sep

Ph.D

orini

Listy

Halaman 21

Tokyo Metropolitan
Universitas, Musim Semi 2005

tember 2020

, Sep

https://translate.googleusercontent.com/translate_f 16/17
9/24/2020 AYAM YANG BERKILA DNA Rekombinan dalam Pekerjaan

Ph.D

orini

Listy

https://translate.googleusercontent.com/translate_f 17/17