Da An Gene Co, Ltd of Sun Yat-sen University

Komponen Utama (48 tes/kit)

Komponen Spesifikasi Jumlah
Spin column 48/ bag 1
Collection Tube 96/ bag 2
Larutan lisis 11 ml/ botol 1
Inhibitor remover 16,5 ml/ botol 1
Deionized solution 11 ml/ botol 1
Eluen 6 ml/ botol 1
Proteinase K 2,7 ml/ botol 1
Carrier RNA (dry powder) 155 ug/ tube 2

Preparasi sebelum pemeriksaan sampel

48 tes/kit
1. Tambahkan 10 ml etil alkohol absolut pada inhibitor remover. Simpan
pada suhu ruang.
2. Tambahkan 44 ml etil alkohol absolut pada masing2 botol larutan
deionized. Simpan pada suhu ruang.
3. Tambahkan 110 uL eluen atau larutan standar internal (komposisi pada
PCR kit) pada Carrier RNA (dry powder), dicampur, dilarutkan. Simpan
pada suhu -20C.

Larutan Lisis dan mixing RNA

1 tes 20 tes 24 tes 48 tes
Larutan lisis 200 uL 4 mL 4,8 mL 9,6 mL
Carrier RNA 4 uL 80 uL 96 uL 192 uL
Ekstraksi Asam nukleat
1. Tambahkan 50 uL proteinase K ke dalam tube steril 1,5 ml
2. Ambil 200 uL specimen dan tambahkan ke tube.
3. Tambahkan 200 uL larutan lisis (yg sdh terdpt Carrier RNA), tutup tube,
masukkan vortex 15 detik untuk mencampur larutan tadi, lalu lakukan
high speed centrifugation 10 detik (mencegah terbentuk gelembung),
lalu preheat eluen selama 10 menit pada suhu 72C.
4. Tambahkan 250 uL etanol, tutup tube, vortex 15 detik
5. Ambil seluruh campuran tadi ke dalam spin column, sentrifugasi 12.000
g selama 1 menit pada suhu ruang, paskan spin column pada tube baru
6. Tambahkan 500 uL inhibitor remover ke spin column, sentrifugasi 12.000
g selama 1 menit pada suhu ruang, paskan spin column pada tube baru
7. Tambahkan 500 uL deionized solution ke spin column, sentrifugasi
12.000 g selama 1 menit pada suhu ruang, paskan spin column pada
tube baru
8. Tambahkan 500 uL deionized solution sekali lagi ke spin column,
sentrifugasi 12.000 g selama 1 menit pada suhu ruang, paskan spin
column pada tube baru
9. Tempatkan spin column dan tube collection pada suhu ruang, lakukan
sentrifugasi 14.000 g selama 3 menit untuk menghilangkan residu etanol
10.Keluarkan spin column, paskan dengan tube 1,5 ml. Buka penutup spin
column, sisihkan selama 2 menit pada suhu 72C (gunakan dry
thermostat, jangan water bath)
11.Tambahkan dengan hati-hati 50 uL eluen preheated pada 72C di atas
membrane spin column, pasang penutup, setelah 1 menit pada suhu
ruang, lakukan sentrifugasi 14.000 g. Kemudian larutan pada tube
merupakan larutan asam nukleat. Sebaiknya segera digunakan, atau
disimpan pada suhu -20C.