METIL GALAT DARI EKSTRAK METANOL

DAUN SURIAN (Toona sureni) DAN AKTIVITAS

ANTIKANKER PAYUDARA (MCF-7)

SKRIPSI

ERNI SULISTIANI

PROGRAM STUDI KIMIA

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
2020 M/1441 H
 METIL GALAT DARI EKSTRAK METANOL
DAUN SURIAN (Toona sureni) DAN AKTIVITAS
ANTIKANKER PAYUDARA (MCF-7)

Skripsi

Sebagai Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Sains

Program Studi Kimia
Fakultas Sains dan Teknologi
Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta

Oleh:

ERNI SULISTIANI
NIM. 11150960000042

PROGRAM STUDI KIMIA

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
2020 M/1441 H
 i4r'TiL ‹‘iaLa”i nam r:cia aax sir: i›tx‹ii.
**^*'> St'liI.‹N tTi›•»•i• si!rr»i) ii›tx .‹K l’ix'i"i’as .sx1’ixa«mtit
P t1 tJI3ARA (8IC’F-7)

Skripsi

Sc'l›ayai Salah Satti Syarat Mcnzpcrolch Ciclal” S8FjQ)1:I S@i/s

Univcrsitas Island Negeri Syarif I lidayatullah Jakalia

Oleh:

ERNI SULISTIANI
NIM. 11150960000042

Mcnyctujui,

Pcmbimbing I Pembimbing II

Dr. S ti Nurbavti M.Si NIP. 197 0721 200212 2 002 Tarso Rudiana,
M.Si NIDN.
042502b704

Mengetahui,

a Program Studi Kimla

de Sumarlin. M.Si IP. 19750918 200801 1 007

 PENGt:SAI IA,W L JI th SKltI l'SI

?kripsi yang bvrliitlul 8lclil Giilal d;iri Ekstrak Inlet.iiiol II:run .'itiri.in

1oi»iii siir‹’iii) i1Tt kti›’itns Antik»nkcr i’‹iyii‹l.ma (I\ICF-7) icl.ih ‹li iji ‹I.in

tlinyil(ilk'lll LULUS pada Sidang MtlnaqaS0£ FakullilS SalllS k.ln Tekno10@i

Ui11¥’CfSllils Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jfiaftil pada $ lasa, 21 Januari

2920. Skripsi ini telah diterima untuk iiiemenulii salah satu syarat untuk

memperoleh

Gel0r Sarjana Sains Program Studi Kwa.

Penguji I Pengiiji II

DKSndaHemoMSi
NIP.197508102 03011 005 Ah ad Fathoni, M.Si
NIP. 19911113.201801.1.002

Pembimbing I
Pembimbing II

Dr.!SitiurbaYti /vt.Si
Tavo udan .Si
NIP. 19740721.200212.2.002 NIDN.0425028704

Mengetahui,

Dckan.Eakultas Sains dao Teknologi hia Program Studi Kimla

Prof. Df. EiSuraa Eka Pulri M.Env.Stud.Dré Sumarlin. M.Si

IP.19690404200501 2005.197509182008011 007
 PERhPt’ tT‹tAN

I3ENGA INI $AN”A MENYA I’AK›tN BAHH‘A SK RIPS1 fN1 ADALzt H HAS

It. KAR¥’A SENDIR 1 DAN BELUM PERNAH DIAJUKAN SEBAGAI

SKR1PS1 A1“AtJ KAR1”A !LMIAH PADA PERGURUAN 1INGGI ATAU

LEfvIBAGA MANAPUN.
 ABSTRAK

ERNI SULISTIANI. Metil Galat dari Ekstrak Metanol Daun Surian (Toona
sureni) dan Aktivitas Antikanker Payudara (MCF-7). Dibimbing oleh SITI
NURBAYTI dan TARSO RUDIANA.

Surian (Toona sureni) termasuk ke dalam famili Meliaceae yang

mengandung senyawa golongan terpenoid, tanin, alkaloid, flavonoid, polifenol,
dan fenolik sehingga memiliki potensi sebagai antikanker. Penelitian ini bertujuan
untuk mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa fenolik dari ekstrak metanol
daun
T. sureni dan uji aktivitas antikanker payudara (MCF-7). Isolasi senyawa fenolik
dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut metanol dan fraksinasi
dengan kromatografi vakum cair dan kromatografi kolom gravitasi. Isolat yang
diperoleh berupa padatan putih sebanyak 328,5 mg. Isolat yang dihasilkan
dikarakterisasi menggunakan NMR dan FTIR. Spektrum FTIR menunjukkan
adanya serapan pada 3363,91 (OH); 2997,69 (C-H alifatik); 1692,96 (C=O);
1618,30-1536,33 (C=C aromatik); 1251,47-1002,04 (C-O ester); dan 867,02-
764,79 (=C-H aromatik). Hasil analisis dengan 1H NMR menunjukkan adanya 3
sinyal proton pada δH 3,78 (3H, s, -OCH3); 7,10 (2H, s, H-2 dan H-6); dan 8,22
ppm (H, s, OH). Analisis dengan 13C NMR menunjukkan adanya 6 sinyal karbon
diantaranya pada δC 51,90 (-OCH3); 109,79 (=CH Aromatik); 121,75 (-C=C-
Aromatik); 138,73 (=C-OH Aromatik); 146,06 (=C-OH Aromatik); dan 167,23 (-
COO-) ppm. Berdasarkan hasil analisis tersebut isolat memiliki kesesuaian yang
tinggi dengan metil galat, sehingga dapat diketahui isolat yang dihasilkan
merupakan senyawa metil galat. Metil galat diuji aktivitas antikanker payudara
MCF-7 dengan metode presto blue (kolorimetrik). Hasil uji aktivitas antikanker
payudara menunjukkan bahwa metil galat memiliki aktivitas yang lemah dalam
menghambat pertumbuhan sel dengan nilai IC50 sebesar 199,76 μg/mL.

Kata kunci : Antikanker, fenolik, metil galat, surian (Toona sureni).

 ABSTRACT

ERNI SULISTIANI. Methyl Gallate from Surian Leaf (Toona sureni) Methanol
Extract and Anti-breast Cancer Activity (MCF-7). Supervised by SITI
NURBAYTI dan TARSO RUDIANA.
Surian (Toona sureni) belongs to the Meliaceae family which contains
terpenoid, tannin, alkaloid, flavonoid, polyphenol, and phenolic compounds has
the potential as an anticancer. This study aims to isolate and identify phenolic
compounds from T. sureni leaves methanol extract and anti-breast cancer activity
test (MCF-7). Isolation of phenolic compounds was carried out by the maceration
method using methanol as a solvent and fractionation by liquid vacuum
chromatography and gravity column chromatography. Isolate obtained were in the
form of white solid as much as 328.5 mg. The resulting isolates were
characterized using NMR and FTIR. FTIR spectrum showed the vibration on
3363.91(O-H); 2997.69 (C-H alifatic); 1692.96 (C=O); 1618.30-1536.33
(C=C aromatic);
1251.47-1002.04 (C-O ester); and 867.02-764.79 (=C-H aromatic). The results of
the analysis with 1H NMR showed the presence of 3 proton signals at δ H 3.78
(3H, s, -OCH3); 7.10 (2H, s, H-2 and H-6) and 8.22 ppm (H, s, OH). Analysis
with 13C NMR showed 6 carbon signals at δ C 51.90 (-OCH3); 109.79 (=CH
aromatic);
121.75 (-C=C- aromatic); 138.73 (=C-OH aromatic); 146.06 (=C-OH aromatic);
and 167.23 (-COO-) ppm. Based on the analysis results, the isolate has a high
compatibility with methyl gallate, the resulting isolate is a methyl gallate
compound. Methyl gallate was tested for anti-breast cancer activity MCF-7 by the
presto blue (colorimetric) method. Anti-cancer activity test results showed that
methyl gallate has a weak activity in inhibiting cell growth with an IC50 value of
199.76 μg / mL.
Keywords: Anticancer, methyl gallate, phenolic, surian (Toona sureni).
 KATA PENGANTAR

Bismillahirrahmanirrahim

Assalamu’alaikum Wr.Wb

Syukur Alhamdulillah penulis haturkan kehadirat Allah SWT yang telah

memberikan rahmat dan karunia-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan

skripsi ini. Skripsi ini berjudul “Metil Galat dari Ekstrak Metanol Daun

Surian (Toona sureni) dan Aktivitas Antikanker Payudara (MCF-7)” Skripsi

ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat kelulusan dalam menempuh

pendidikan Strata 1 (S1).

Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini tak lepas dari bantuan dan

peranan banyak pihak. Pada kesempatan ini, penulis mengucapkan terima kasih

kepada:

1. Dr. Siti Nurbayti, M.Si selaku pembimbing I yang telah memberikan

pengarahan serta bimbingannya baik dalam teknis di lapangan maupun dalam

menyelesaikan skripsi ini;

2. Tarso Rudiana, M.Si selaku pembimbing II yang telah memberikan saran,

motivasi, dan dukungan penuh kepada penulis;

3. Prof. Dr. Lily Surayya Eka Putri, M.Env.Stud selaku Dekan Fakultas Sains

dan Teknologi Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta yang telah

memberikan izin penulis untuk melaksanakan penelitian;

4. Dr. La Ode Sumarlin, M.Si selaku Ketua Program Studi Kimia Fakultas Sains

dan Teknologi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta;

5. Kedua orang tua yang senantiasa memberikan doa serta dorongan moril

maupun materil kepada penulis;

viii
6. Ka Riski, Ka Ibnu, Edi Prayogo, Novia Suryani, Widyani Meisa, Mu’izzah

Irsyadi, Istianah, Ade Rahmawati, Nurhalila dan Mahasiswa/i kimia 2015

lainnya yang selalu memberikan semangat, dukungan, dan motivasi kepada

penulis selama proses penelitian dan penyusunan skripsi.

Semoga skripsi ini bermanfaat bagi pembaca serta dapat dijadikan sebagai

sumbangan pikiran untuk perkembangan pendidikan.

Jakarta, Januari 2020

Penulis

ix
 DAFTAR ISI

Halaman
ABSTRAK...........................................................................................................viii
ABSTRACT...........................................................................................................ix
KATA PENGANTAR........................................................................................viii
DAFTAR ISI...........................................................................................................x
DAFTAR GAMBAR............................................................................................xii
DAFTAR TABEL...............................................................................................xiii
BAB I PENDAHULUAN.......................................................................................1
1.1 Latar Belakang...............................................................................................1

1.2 Rumusan Masalah..........................................................................................3

1.3 Hipotesis.........................................................................................................3

1.4 Tujuan Penelitian............................................................................................4

1.5 Manfaat Penelitian..........................................................................................4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA............................................................................5

2.1 Tinjauan Umum Tumbuhan Surian (Toona sureni).......................................5

2.1.1 Fitokimia Tumbuhan Genus Toona.......................................................6

2.1.2 Aktivitas Biologis Metabolit Sekunder dari Genus Toona..................10

2.2 Kanker Payudara..........................................................................................11

2.2.1 Uji Antikanker Payudara.....................................................................12

2.3 Metode Isolasi Senyawa Fenolik..................................................................17

2.3.1 Ekstraksi..............................................................................................17

2.3.2 Fraksinasi.............................................................................................18

2.4 Karakterisasi Struktur dengan Metode Spektroskopi...................................19

2.4.1 Spektroskopi FTIR..............................................................................19

2.4.2 Spektroskopi NMR..............................................................................20

BAB III METODE PENELITIAN.....................................................................22

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian......................................................................22
 3.2 Alat dan Bahan.............................................................................................22

3.2.1 Alat......................................................................................................22

3.2.2 Bahan...................................................................................................22

3.4 Cara Kerja.....................................................................................................24

3.4.1 Ekstraksi..............................................................................................24

3.4.2 Isolasi Senyawa dari Ekstrak Metanol Daun T. sureni........................24

3.4.3 Uji Kemurnian Tiga Pelarut................................................................26

3.4.4 Uji Kemurnian dengan KLT 2 Dimensi..............................................26

3.4.5 Karakterisasi Struktur Senyawa...........................................................27

3.4.6 Uji Aktivitas Antikanker Payudara (MCF-7)......................................27

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN.............................................................31

4.1 Ekstraksi Daun T. sureni..............................................................................31

4.2 Uji Kualitatif Senyawa Fenolik Ekstrak Metanol Daun T. sureni...............32

4.3 Hasil Fraksinasi Ekstrak Metanol Daun T. sureni........................................33

4.4.1 Analisis Data FTIR..............................................................................39

4.4.1 Analisis Data 13C NMR.......................................................................41

4.4.2 Analisis data 1H NMR.........................................................................42

4.4.3 Aktivitas Antikanker Payudara (MCF-7)............................................45

BAB V PENUTUP................................................................................................49
5.1 Simpulan.......................................................................................................49

5.2 Saran.............................................................................................................49

DAFTAR PUSTAKA...........................................................................................50
LAMPIRAN..........................................................................................................57
 DAFTAR GAMBAR

Halaman
Gambar 1. Tumbuhan surian..................................................................................5
Gambar 2. Senyawa yang terdapat dalam akar T. sinensis.....................................7
Gambar 3. Senyawa yang terdapat dalam daun T. sinensis....................................8
Gambar 4. Senyawa yang terdapat dalam daun T. sureni......................................9
Gambar 5. Mekanisme resazurin..........................................................................13
Gambar 6. Mekanisme kerja cisplatin..................................................................15
Gambar 7. Mekanisme apoptosis.........................................................................17
Gambar 8. Diagram alir penelitian.......................................................................23
Gambar 9. Ekstrak pekat daun T. sureni..............................................................31
Gambar 10. Kromatogram hasil KLT dengan λ 254 dan FeCl3 1%.....................32
Gambar 11. Reaksi uji fenolik dengan FeCl3...................................................................................33
Gambar 12. Hasil KLT menggunakan eluen n-heksana : EtOAc (7:3)................34
Gambar 13. Hasil KLT menggunakan eluen kloroform : aseton (8:2).................35
Gambar 14. Hasil KLT menggunakan kloroform:aseton (8:2)............................37
Gambar 15. Uji kemurnian tiga pelarut berbeda..................................................38
Gambar 16. Hasil KLT dua dimensi.....................................................................38
Gambar 17. Spektrum FTIR dari isolat................................................................39
Gambar 18. Spektrum 13C NMR dari isolat ((CD3)2CO, 125 MHz)...................41
Gambar 19. Spektrum 1H NMR dari isolat ((CD3)2CO), 500 MHz)...................43
Gambar 20. Struktur metil galat...........................................................................44
Gambar 21. Hubungan persen inhibisi dan konsentrasi sampel...........................46
 DAFTAR TABEL

Halaman
Tabel 1. Serapan khas beberapa gugus fungsi pada spektroskopi inframerah......20
Tabel 2. Pergeseran kimia 1H NMR dan 13C NMR...............................................21
Tabel 3. Berat fraksi hasil kolom kromatografi vakum cair..................................34
Tabel 4. Berat fraksi dari hasil kromatografi kolom gravitasi..............................36
Tabel 5. Berat dan Rf 7 fraksi hasil kromatografi kolom gravitasi.......................37
Tabel 6. Hasil analisis gugus fungsi isolat A........................................................40
Tabel 7. Geseran kimia dan jenis karbon dari data spektrum 13C NMR...............42
Tabel 8. Data perbandingan proton dan karbon senyawa isolat dengan senyawa
.pembanding.............................................................................................44
Tabel 9. Besaran nilai IC50 dalam menghambat pertumbuhan sel.........................46
 DAFTAR LAMPIRAN

Halaman
Lampiran 1. Perhitungan nilai IC50 metil galat....................................................57
Lampiran 2. Well plate hasil uji metil galat.........................................................58
Lampiran 3. Perhitungan nilai IC50 cisplatin........................................................58
Lampiran 4. Well plate hasil uji cisplatin.............................................................59
Lampiran 5. Peralatan yang digunakan dalam uji antikanker..............................59
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Kanker merupakan suatu penyakit yang disebabkan oleh pertumbuhan

jaringan yang tidak normal akibat hilangnya mekanisme kontrol sel, sehingga

suatu sel normal dapat mengalami transformasi menjadi sel kanker. Sel kanker

yang terbentuk dapat membelah diri dan selanjutnya membentuk sel kanker yang

lain (Hanahan dan Weinberg, 2000). Kanker payudara di Amerika Serikat

menduduki peringkat pertama (32%) dengan kematian mencapai 18 %, sedangkan

di Indonesia menduduki peringkat kedua setelah kanker serviks dan kasusnya

mencapai 17.77

% (Tjindarbumi dan Mangunkusumo 2002; King, 2000).

Salah satu upaya untuk menekan angka kematian akibat kasus kanker

payudara yaitu dengan mengembangkan obat yang berasal dari tumbuhan yang

memiliki kandungan senyawa antikanker. Keanekaragaman hayati yang dimiliki

Indonesia berpotensi untuk dimanfaatkan dan dikembangkan oleh masyarakat

sebagai bahan baku obat. Hal tersebut merupakan rahmat yang diberikan Allah

SWT terhadap manusia sebagaimana dijelaskan dalam al-Qur‘an surat Thahaa

ayat

53 sebagai berikut :

‫ۦ ْز َ جا من ن ش َ ىّت‬ ‫خ‬ ‫فهيَا ُ َو أن أ ل َم ما‬ ‫َل ُ ْك و‬ ْ ‫ام‬

‫َبات‬ ‫ب َز م َن ا ِّء ء َفأ َر‬ ‫َس‬ ‫ه‬
‫و‬ ً
َ
‫ْج َنا ّه‬ ‫س‬ ‫ً ل َل‬ ‫َل‬ ‫ًد‬
‫أ‬
‫ب‬ ‫س‬
1
 ‫َض ل‬ َ ‫ج ع‬ ‫أ‬ َِّّ ‫لى‬
‫َل ُ ُك أ ْ َْل ْر‬

Artinya : “Yang telah menjadikan bagimu bumi sebagai hamparan dan yang telah
menjadikan bagimu di bumi itu jalan-jalan, dan menurunkan dari langit air hujan.
Maka Kami tumbuhkan dengan air hujan itu berjenis-jenis dari tumbuh-tumbuhan
yang bermacam-macam” (QS. Thahaa/20:53).

Shihab (2006) menafsirkan maksud dari ayat tersebut adalah Dia, yakni

Allah SWT telah menjadikan sebagian besar bumi sebagai hamparan dan

menjadikan

1
sebagian kecil lainnya gunung-gunung untuk menjadi kestabilan bumi dan Allah

SWT telah menjadikan bagi kamu di bumi itu jalan-jalan yang mudah untuk

ditempuh dan menurunkan dari langit air (hujan) sehingga tercipta sungai-sungai

dan danau, dengan perantaraan hujan itu tumbuh berjenis-jenis tumbuh tumbuhan

yang memiliki bermacam-macam jenis, bentuk, rasa, warna, dan manfaatnya.

Indonesia sebagai negara dengan biodiversitas tinggi memiliki banyak

tumbuhan yang berpotensi digunakan sebagai obat-obatan, salah satunya berasal

dari genus Toona. Genus Toona termasuk famili Meliaceae yang terdistribusi

secara luas di India, Nepal, China, Burma, Asia, dan Afrika (Wang et al., 2006).

Spesies dari genus Toona memiliki beberapa senyawa metabolit sekunder seperti

flavonoid, fenolik, lignan, tanin, alkaloid, terpenoid, dan minyak atsiri yang

mempunyai aktivitas sebagai insektisida, antiplasmodial, antiangiogenik,

antidiabetes, antiinflamasi, antibiotik, antimikroba, antioksidan, dan antikanker

(Harneti et al., 2015; Negi et al., 2011; Zhang et al., 2014).

Asam galat yang teridentifikasi dari ekstrak air daun T. sinensis memiliki

sitotoksitas terhadap beberapa macam kanker yaitu kanker ovarium (SKOV3),

kanker hati (HepJ5), kanker serviks (Hela), kanker prostat (DUI45) dan kanker

endometrik (RL95-2) dengan masing-masing nilai IC50 sebesar 28; 30; >100; 17,5;

dan >100 μg/mL (Chen et al., 2009). Beberapa penelitian lain juga melaporkan

aktivitas ekstrak daun T. sinensis terhadap kanker paru-paru yaitu karsinoma paru-

paru sel kecil (SCLC) dan karsinoma paru non-sel kecil (NSCLC). Aktivitas

penghambatan kanker paru-paru SCLC memiliki IC50 sebesar 0,29 μg/mL dan

pada sel NSCLC sebesar 0,12 μg/mL sehingga memiliki aktivitas sitotoksitas

yang tinggi terhadap sel NSCLC (Wang et al., 2010).

2
 Ekstrak etil asetat kayu T. sureni memiliki senyawa katekol, linalool dan β–

sitosterol yang berperan terhadap tingginya aktivitas antiproliferasi sel kanker

limfoma (Raji) dengan nilai IC50 sebesar 31 μg/mL dan sel kanker serviks (HeLa)

IC50 65 μg/mL (Sari et al., 2012). Selain itu, ekstrak etil asetat daun T. sinensis

juga mengandung senyawa kaempferol-3-O-α-L-ramnopiranosida (KLR) yang

memiliki aktivitas antikanker yang kuat terhadap kanker hepatoma manusia

(HepG2) dan sel kanker payudara (MCF-7) (Zhang et al., 2014).

Hasil penelusuran dari literatur di atas menunjukkan bahwa penelitian

terhadap kandungan senyawa fenolik dan aktivitasnya sebagai antikanker

payudara dalam tumbuhan T. sureni masih sedikit dilakukan. Senyawa fenolik

dapat memicu apoptosis sel kanker dengan menghambat sintesis DNA sel kanker

serta fragmentasi DNA (Middleton et al., 2000). Berdasarkan hal tersebut perlu

dilakukan penelitian tentang isolasi dan elusidasi senyawa fenolik pada ekstrak

metanol daun T. sureni dan uji aktivitas antikanker payudara (MCF-7).

1.2 Rumusan Masalah

1. Bagaimanakah struktur kimia senyawa hasil isolasi dari ekstrak metanol daun

T. sureni?

2. Bagaimana aktivitas antikanker payudara terhadap sel MCF-7 secara in vitro

dari isolat ekstrak metanol daun T. sureni?

1.3 Hipotesis

1. Isolat murni dari hasil isolasi ekstrak metanol daun T. sureni merupakan

senyawa fenolik.

2. Isolat dari ekstrak metanol daun T. sureni memiliki aktivitas antikanker

payudara terhadap sel MCF-7 secara in vitro.

1.4 Tujuan Penelitian

1. Mengisolasi dan mengelusidasi struktur senyawa fenolik yang terkandung

dalam ekstrak metanol daun T. sureni.

2. Menentukan aktivitas antikanker payudara dari ekstrak metanol daun T. sureni

secara in vitro.

1.5 Manfaat Penelitian

Manfaat dari penelitian ini adalah untuk memberikan informasi terkait

potensi Toona sureni sebagai antikanker payudara serta sebagai pengembangan

dari tumbuhan Toona sureni.

 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tinjauan Umum Tumbuhan Surian (Toona sureni)

Surian (Toona sureni) merupakan tumbuhan dari famili Meliaceae.

Tumbuhan ini secara internasional banyak dikenal dengan nama “Mahoni China”.

Tumbuhan surian memiliki berbagai macam jenis seperti T. sureni, T. sinensis,

T. febribuga, T. ciliata, T. australis, dan T. calanthas. Genus Toona ini

terdistribusi secara luas di India, Nepal, China, Burma, Asia, dan Afrika (Negi et

al., 2011). Klasifikasi tumbuhan surian menurut Departemen Kehutanan (2002)

adalah sebagai berikut:

Super divisi Divisi : Spermatophyta

: Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Sub kelas : Rosidae
Ordo : Sapindales
Famili : Meliaceae
Genus : Toona
Spesies : Toona
sureni

Gambar 1. Tumbuhan surian (Darmawanti, 2002).

5
 Ciri-ciri tumbuhan surian menurut Djam’an (2002) yaitu memiliki tinggi

mencapai 35-40 m dengan diameter 100 cm. Kulit batang kasar berwarna cokelat,

letak dari daunnya menyirip tunggal dengan 8-30 pasang daun. Buah dari

tumbuhan surian terletak pada batangnya yang berbentuk oval dengan warna

cokelat tua. Tumbuhan surian memiliki banyak manfaat diantaranya adalah

pemanfaatan kayunya sebagai konstruksi bangunan dan pembuatan kapal. Daun

serta buahnya juga dapat digunakan untuk produksi minyak esensial dan bahan

baku obat (Putri dan Jayusman, 2012).

2.1.1 Fitokimia Tumbuhan Toona

ak etanol dari akar T. sinensis mengandung tiga belas senyawa (Gambar 2) dan tiga diantaranya adalah senyawa baru. Seny

matairesinol (7), 4-hidroksi-3-metoksibenzenetanol (8), asam siringat (9),

isoskopoletin (10), lioniresinol (11), aloeemodin (12), dan β-sitosterol (13) (Dong

et al., 2013).

6
 Gambar 2. Senyawa yang terdapat dalam akar T. sinensis (Zhang et al.,
2014; Dong et al., 2013).
Ekstrak aseton daun T. sinensis mengandung dua belas komponen senyawa

fenolik (Gambar 3) yaitu asam galat (14), metil galat (15), asam trigalik (16), 6-O-
 galloil-D-glukosa (17), 1,2,3-tri-O-galloil-β-D-glukopiranosa (18), 1,2,3,6-tetra-O-

galloil-β-D-glukopiranosa (19), 1,2,3,4,6-penta-O-galloil-β-D glukopiranosa (20),

kuersetin-3-O-D-glukopiranosida (21), kuersetin-3-O-α-L-ramnopiranosida (22),

tin (23), kaempferol-3-O-β-D-glukopiranosida (astragalin) (24) dan kaempferol- 3-O-α-L-arabinopiranosida (25) (Wang et al

Gambar 3. Senyawa yang terdapat dalam daun T. sinensis (Wang et al., 2006).
 Hasil penapisan fitokimia pada ekstrak n-heksana daun T. sureni

menunjukkan adanya senyawa diterpen yaitu fitol (3,7,11,15-tetrametil-2-

heksadeken-1-ol) (26), dan metil 3,4,5-trihidroksibenzoat (metil galat) dalam

ekstrak metanol (15) (Harneti et al., 2011; Ekaprasada et al., 2009). Menurut Hafid et al. (2018) da

Gambar 4. Senyawa yang terdapat dalam daun T. sureni (Harneti et al., 2011;
Ekaprasada et al., 2009; Hafid et al., 2018; Cuong et al., 2007).
2.1.2 Aktivitas Biologis Metabolit Sekunder dari Genus Toona

Genus Toona umumnya memiliki berbagai aktivitas biologis seperti

antibakteri, antihepatitis, antioksidan, dan antikanker. Daun T. sinensis ekstrak etil

asetat menunjukkan penghambatan tertinggi terhadap P. acne (49,93%),

S. epidermidis (57,14%), S. aureus (18,93%), dan E. coli (82,03%). Ekstrak

metanol daun T. sinensis juga menunjukkan aktivitas antibakteri terhadap P. acne

(28,27%), S. epidermidis (7,38%), dan S. aureus (10,38%) (Febriyani et al., 2018).

Senyawa cedrelon, pidcidinol A, niloticin, boujotinolon A, dan episapelin A

yang ditemukan dari ekstrak etanol daun T. sureni mampu menghambat

pertumbuhan Plasmodium falciparum dengan nilai IC50 masing-masing sebesar

0,81; 3,69; 2,18; 2,06; dan 3,66 μg/mL (Cuong et al., 2007). Selain itu, dalam

ekstrak metanol daun T. sureni juga memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai

IC50 1,02 μg/mL dan diketahui merupakan senyawa metil galat. Metil galat

memiliki kemampuan untuk mendonasikan proton dan dapat berfungsi sebagai

inhibitor radikal bebas serta bertindak sebagai antioksidan primer (Ekaprasada et

al., 2009).

Asam galat dari ekstrak air daun T. sinensis memiliki sitotoksitas terhadap

beberapa macam kanker yaitu kanker ovarium (SKOV3), kanker hati (HepJ5),

kanker serviks (Hela), kanker prostat (DUI45) dan kanker endometrik (RL95-2)

dengan masing-masing nilai IC50 sebesar 28; 30; >100; 17,5; dan >100 μg/mL

(Chen et al., 2009). Selain itu, aktivitas ekstrak daun T. sinensis telah diuji

terhadap kanker paru-paru yaitu karsinoma paru-paru sel kecil (SCLC) dan

karsinoma paru non-sel kecil (NSCLC). Aktivitas penghambatan kanker paru-paru

SCLC memiliki nilai IC50 sebesar 0,29 μg/mL dan pada sel NSCLC sebesar 0,12

μg/mL sehingga
mampu menginduksi sitotoksisitas tinggi terhadap sel NSCLC. (Wang et al.,

2010; Yang et al., 2010). Ekstrak etil asetat kayu T. sureni yang didominasi oleh

senyawa katekol, linalool, dan β–sitosterol juga berperan terhadap tingginya

aktivitas antiproliferasi sel kanker limfoma (Raji) dengan nilai IC50 31 μg/mL dan

sel kanker serviks (HeLa) IC50 65 μg/mL (Sari et al., 2012).

2.2 Kanker Payudara

Kanker merupakan suatu sel yang tumbuh secara abnormal melalui proses

pembelahan yang terjadi sangat cepat dan tidak terkendali (King, 2000). Secara

garis besar, kanker dibagi menjadi 4 jenis yaitu karsinoma, sarkoma, leukemia,

dan limfoma. Karsinoma adalah kanker yang tumbuh dan berkembang di sel

epitel. Sarkoma adalah kanker yang tumbuh dan berkembang di jaringan

penunjang, seperti jaringan penunjang payudara. Leukimia adalah kanker yang

menyerang jaringan yang menghasilkan darah, sedangkan limfoma adalah kanker

yang menyerang jaringan limfa (Mangan, 2003).

Kanker payudara adalah tumor ganas yang menyerang jaringan payudara

yang berasal dari kelenjar, saluran kelenjar dan jaringan penunjang payudara

(Mardiana, 2004). Kasus kematian akibat kanker payudara di dunia menunjukkan

508.000 kasus pada tahun 2011 (WHO, 2013). Menurut American Cancer Society

(2015) terdapat 231.840 kasus kanker payudara (29%) dengan angka kematian

40.290 (15%). Kasus kanker payudara di negara berkembang telah mencapai lebih

dari 580.000 kasus setiap tahun dan kurang lebih 372.000 pasien atau 64% dari

jumlah kasus tersebut meninggal karena kanker payudara (Suryaningsih dan

Sukosa, 2009).
 Faktor yang berhubungan dengan tingkat resiko terjadinya kanker payudara

yaitu adanya faktor genetik (pembawa mutasi gen BRCA1, BRCA2, ATM atau

TP53 (p53)), riwayat penyakit payudara sebelumnya (DCIS pada payudara yang

sama, LCIS, densitas tinggi pada mamografi), faktor hormon, konsumsi alkohol,

dan faktor lingkungan (Price dan Lorraine, 2006).

Metode pengobatan kanker yang lazim digunakan adalah kemoterapi,

radiasi, dan operasi. Pengobatan tersebut bertujuan untuk menghancurkan sel

kanker, akan tetapi metode tersebut belum maksimal bahkan memberikan efek

samping. Operasi tidak sepenuhnya efektif untuk menghilangkan sel kanker yang

telah tersebar (metastasis), radiasi dapat membunuh sel normal lainnya, dan

kemoterapi juga dapat menimbulkan resistensi sel kanker sehingga senyawa

antikanker tersebut tidak sensitif (Lockshin dan Zakeri, 2007)

2.2.1 Uji Antikanker Payudara

Uji antikanker menggunakan parameter nilai IC50, dimana IC50 merupakan

nilai konsentrasi yang menghambat proliferasi sel sampai 50%. Semakin besar

nilai IC50 maka senyawa tersebut semakin tidak toksik (Jabit et al., 2007). Sel

MCF-7 (Michigan Cancer Foundation-7) merupakan salah satu model sel kanker

payudara yang banyak digunakan dalam penelitian. Sel MCF-7 diperoleh dari

jaringan epitel payudara dengan titik metastasis pleural effusion breast

adenocarcinoma seorang wanita berusia 69 tahun (CCRC, 2008). Sel dapat

melekat dan ditumbuhkan dalam media penumbuh DMEM (Dulbecco's modified

eagle medium) atau RPMI (roswell park memorial institute) yang mengandung

FBS (fetal bovine serum) 10% dan antibiotik Penicilin 1% (Aouali et al., 2003;

Butt et al., 2000).

 Pengujian antikanker payudara ini menggunakan metode kolorimetrik atau

perubahan warna dengan menggunakan resazurin. Resazurin merupakan senyawa

aktif yang digunakan sebagai indikator reaksi reduksi oksidasi (redoks). Resazurin

memiliki warna biru yang tidak berflourescent dan dapat tereduksi menjadi warna

pink yang berfluorescent dalam bentuk resorufin (Gambar 5).

Gambar 5. Mekanisme resazurin (Rampersad, 2012)

Perubahan warna dari biru (resazurin) menjadi warna pink (resorufin)

merupakan indikator terjadinya reduksi oleh sel. Perubahan warna pada resazurin

dilakukan oleh enzim - enzim dalam sel pada bagian mitokondria dan sitoplasma.

Enzim tersebut adalah dihydrolipoamine dehydrogenase, NADPH: quinone

oxidoreductase dan flavin reductase. Resazurin banyak digunakan dalam uji

aktivitas dan metabolisme sel karena bersifat tidak radioaktif, mudah digunakan,

murah, tidak diperlukan keahlian khusus, tidak beracun, mudah masuk kedalam

membran sel dan berguna untuk menentukan kecepatan tumbuh suatu sel

(Rampersad, 2012).

Pengujian ini menggunakan larutan dimetil sulfoksida (DMSO) sebagai

kontrol negatif. Konsentrasi DMSO tidak boleh melebihi 10% karena dapat

menyebabkan terjadinya sitotoksik pada sel (Machana et al., 2011). Kontrol

Positif yang digunakan dalam uji antikanker ini adalah cisplatin.

 Cisplatin atau cis- diamindikloroplatinum (II) adalah obat kemoterapi

kanker yang berbasis logam platinum. Platinum merupakan suatu alkylating agent

yang paling penting pada kelompok antikanker karena mempunyai aktivitas

merusak sel kanker. Cisplatin bekerja sebagai antikanker dengan cara

menempelkan diri pada DNA (deoxyribonucleic acid) sel kanker dan mencegah

pertumbuhannya. Pada dasarnya cisplatin secara umum bukanlah senyawa yang

mudah bereaksi secara langsung, tetapi bila senyawa ini terlarut dalam air, ligan

kloro pada cisplatin akan diganti satu persatu oleh ligan air melalui reaksi

hidrolisis (Thomson, 2007).

Senyawa kompleks yang terbentuk akan jauh lebih reaktif dan mudah

bereaksi dengan nitrogen pada basa DNA. Cisplatin dapat menempel pada semua

DNA tetapi memiliki kecenderungan menempel pada posisi N-7 adenin dan

guanin karena tingginya nukleofilitas sisi N-7 rantai purin. Di dalam sel kanker

diduga dua ligan Cl– pada cisplatin disubsitusikan oleh dua molekul air

membentuk senyawa kompleks cis-[Pt(NH3)2(H2O)2]2+ (cis-diaminadiaquaplatina

(II)) (Rebecca et al., 2006).

Senyawa kompleks cis-[Pt(NH3)2(H2O)2]2+ menyerang DNA di dalam sel

kanker dengan membentuk tautan silang (cross link) dalam DNA (Gambar 6).

Terbentuknya tautan silang ini dapat mengubah struktur DNA dan menganggu

replikasi DNA sel, sehingga dapat menghalangi pertumbuhan sel kanker atau

membunuh sel kanker tersebut (Ramesh dan Reeves, 2010).

 Gambar 6. Mekanisme kerja cisplatin (Ramesh dan Reeves, 2010).
Mekanisme kerja lain dari cisplatin adalah merusak mitokondria,

menurunkan ATP dan mengganggu kerja transport yang terjadi dalam sel.

Cisplatin membuat siklus sel berhenti pada tahap G2 yang mana menyebabkan

apoptosis pada sel kanker (Ramesh dan Reeves, 2010).

Apoptosis adalah kematian sel yang terprogram. Mekanisme apoptosis

sangat kompleks dan rumit. Secara garis besar tahapan apoptosis yaitu adanya

signal kematian (penginduksi apoptosis). Sinyal apoptosis dapat terjadi secara

intraseluler dan ekstraseluler. Jalur ekstrinsik (ekstraseluler) diinisiasi melalui

stimulasi dari reseptor kematian (death receptor) sedangkan jalur intrinsik

diinisiasi melalui pelepasan faktor signal dari mitokondria dalam sel (CCRC,

2012).

Apoptosis jalur ekstrinsik dimulai dari adanya pelepasan molekul signal

yang disebut ligan oleh sel lain tetapi bukan berasal dari sel yang akan mengalami

apoptosis. Ligan tersebut berikatan dengan death receptor yang terletak pada

transmembran sel target yang menginduksi apoptosis. Death receptor yang

terletak di permukaan sel adalah famili reseptor TNF (Tumor Necrosis Factor),

yang
meliputi TNF-R1, CD 95 (Fas), dan TNF-Related Apoptosis Inducing Ligan

(TRAIL)-R1 dan R2 (CCRC, 2012).

Stress mitokondria yang menginduksi apoptosis jalur intrinsik disebabkan

oleh senyawa kimia atau kehilangan faktor pertumbuhan, sehingga menyebabkan

gangguan pada mitokondria dan terjadi pelepasan sitokrom c dari intermembran

mitokondria. Protein capcase-8 akan memotong anggota famili Bcl-2 yaitu Bid,

kemudian Bid yang terpotong pada bagian ujungnya akan menginduksi insersi

Bax dalam membran mitokondria dan melepaskan molekul proapoptotik, dengan

adanya dATP akan terbentuk kompleks antara sitokrom c, APAF1 dan caspase 9

yang disebut apoptosom. Selanjutnya, capcase 9 akan mengaktifkan downstream

procaspase-3 (CCRC, 2012).

Selama proses apoptosis mitokondria mengalami perubahan yang

disebabkan oleh gangguan oksidasi-fosforilasi dan transport elektron karena

radiasi dan adanya second messenger tertentu seperti ceramide, perubahan dalam

potensial redoks sel dan turunan Reactive Oxygen Species (ROS), kerusakan DNA

memacu ekspresi protein yang dikenal sebagai p53. Protein ini menyebabkan

penghambatan pembelahan sel, dimana keduanya akan menjaga sel menjadi sel

tumor. Oleh karena itu gen p53 adalah gen tumor suppressor, selanjutnya organel

sel akan mengalami degradasi yang diaktifasi oleh kaspase proteolitik. Sel yang

mengalami apoptosis secara mikroskopis akan mengalami perubahan yaitu sel

terlihat mengerut dan lebih membulat, kromatin mengalami degradasi dan

fragmentasi pada membran inti sehingga DNA yang ada didalamnya pecah

menjadi fragmen (karyorheksis). Degradasi DNA ini mengakibatkan inti sel

terpecah. Sel terpecah menjadi beberapa

fragmen yang disebut apoptotic bodies dan akan difagosit oleh sel yang ada

disekitarnya (Gambar 7) (CCRC, 2012).

Gambar 7. Mekanisme apoptosis (CCRC, 2012)

Apoptosis memiliki peranan penting dalam fenomena biologis, proses

apoptosis yang tidak sempurna dapat menyebabkan timbulnya penyakit. Semakin

banyak sel yang mengalami apoptosis akan menyebabkan sel mengalami

kekacauan, sebagaimana terlalu sedikit apoptosis juga menyebabkan proliferasi

sel yang tidak terkontrol (kanker) (CCRC, 2012).

2.3 Metode Isolasi Senyawa Fenolik

Isolasi merupakan pemisahan senyawa yang masih bercampur sehingga

dapat menghasilkan senyawa yang lebih sederhana bahkan murni atau tunggal.

Proses isolasi meliputi ekstraksi dan fraksinasi.

2.3.1 Ekstraksi

Ekstraksi merupakan metode pemisahan berdasarkan kelarutan suatu zat

yang tidak saling bercampur. Ekstraksi bahan alam paling umum menggunakan

teknik maserasi. Maserasi merupakan proses perendaman sampel menggunakan

pelarut organik pada suhu ruangan. Pada proses perendaman sampel terjadi

pemecahan dinding dan membran sel akibat perbedaan tekanan didalam dan diluar

sel sehingga metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma akan terlarut dalam
pelarut organik.
 Efisiensi ekstraksi tergantung dari kondisi proses yang mempengaruhi

konsentrasi komponen yang diinginkan dalam ekstrak seperti suhu, laju aliran dan

ukuran partikel (Hayouni et al., 2007). Berdasarkan metode ini, ekstraksi senyawa

fenolik menggunakan pelarut metanol dinyatakan paling efisien (Kapasakalidis et

al., 2006).

2.3.2 Fraksinasi

Fraksinasi senyawa dapat dilakukan menggunakan kromatografi.

Kromatografi merupakan teknik pemisahan campuran berdasarkan perbedaan

kecepatan perambatan komponen dalam medium tertentu. Komponen dari suatu

campuran akan dipisahkan antara dua fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase

diam akan menahan komponen campuran sedangkan fase gerak akan melarutkan

zat komponen campuran. Komponen yang mudah tertahan pada fase diam akan

tertinggal, sedangkan komponen yang mudah larut dalam fase gerak akan

bergerak lebih cepat (Hermanto, 2008). Beberapa jenis kromatografi antara lain

kromatografi lapis tipis (KLT), kromatografi vakum cair (KVC), dan kromatografi

kolom gravitasi (KKG) (Atun, 2014).

Kromatografi kolom merupakan metode kromatografi yang digunakan

untuk memisahkan senyawa dalam jumlah yang besar. Metode ini dilakukan

dengan menggunakan kolom kromatografi dengan fase diam yang digunakan

adalah silika gel yang diletakkan di dalam kolom kromatografi. Eluen yang

digunakan terdiri atas campuran pelarut organik dengan kepolaran yang berbeda

(Atun, 2014). Kromatografi vakum cair (KVC) merupakan modifikasi dari

kromatografi kolom gravitasi. Penggunaan vakum atau tekanan bertujuan agar

laju aliran eluen

meningkat sehingga meminimalkan terjadinya proses difusi karena ukuran silika

gel yang halus (Gibbons, 2012).

Kromatografi lapis tipis (KLT) digunakan untuk memisahkan komponen-

komponen berdasarkan perbedaan adsorpsi atau partisi oleh fase diam dan fase

geraknya. Umumnya teknik kromatografi ini menggunakan plat silika sebagai fase

diam dan pelarut sebagai fase geraknya. KLT secara umum digunakan untuk

memantau jalannya suatu reaksi, identifikasi suatu senyawa, menentukan

efektivitas pemurnian suatu senyawa, serta untuk memantau kromatografi kolom

(Ganjar dan Rohman, 2007).

2.4 Karakterisasi Struktur dengan Metode Spektroskopi

Teknik-teknik spektroskopi dapat digunakan untuk menentukan struktur

senyawa yang tak diketahui dan untuk mempelajari karakteristik ikatan dari

senyawa yang diketahui (Fessenden dan Fessenden, 1981). Metode spektroskopi

yang digunakan untuk identifikasi senyawa fenolik antara lain spektrofotometer

inframerah (IR), dan resonansi magnetik inti (NMR).

2.4.1 Spektroskopi FTIR

Spektroskopi inframerah (IR) merupakan metode spektroskopi yang

digunakan untuk identifikasi gugus fungsional dalam suatu senyawa. Spektroskopi

IR termasuk ke dalam teknik spektroskopi vibrasi, dimana dalam IR melibatkan

interaksi radiasi elektromagnet dengan molekul yang mengalami vibrasi (Larkin,

2011).

Adanya serapan antara 4000 cm-1 hingga 1400 cm-1 merupakan daerah yang

berguna untuk identifikasi gugus-gugus fungsional. Daerah ini menunjukkan

absorpsi yang disebabkan oleh vibrasi uluran. Vibrasi uluran (stretching) khas

bagi
gugus-gugus fungsi yang penting seperti OH, NH dan C=O. Pada daerah antara

1400 cm-1 hingga 900 cm-1 menunjukkan pita spektrum uang disebabkan oleh

getaran seluruh molekul dan dikenal sebagai daerah sidik jari (finger print)

(Carey, 2002). Serapan khas beberapa gugus fungsi ditunjukkan pada Tabel 1.

Tabel 1. Serapan khas beberapa gugus fungsi pada spektroskopi inframerah

Gugus Jenis Senyawa Daerah Serapan (cm-1)
OH Alkohol 3,700 – 3,100
C-H Alkana 3,000 – 2,850
1470 – 1340
C=CH Alkena 3010 – 3095
995 – 675
C=O Aldehid, Keton 1760 – 1690
C=C Cincin aromatik 1600 – 1500
C-O Eter, ester 1300 – 1050
C-H Cincin aromatik 900 – 690
Sumber : Silverstein et al. (2005)

2.4.2 Spektroskopi NMR

NMR merupakan teknik spektroskopi yang mengandalkan sifat magnetik

dari inti atom. Informasi yang didapatkan dari NMR yaitu informasi secara

magnetis tentang sejumlah atom yang dimiliki suatu senyawa (Pavia et al., 2009).

Spektroskopi 1H NMR memberikan informasi mengenai atom-atom hidrogen

dalam molekul organik. Beberapa hal yang perlu diperhatikan dalam

mengintepretasikan spektrum 1H NMR adalah luas puncak (peak area) yang

menunjukkan jumlah inti 1H pada puncak tersebut, pemecahan puncak (splitting)

yang menjelaskan lingkungan dari sebuah proton dengan proton tetangganya,

serta geseran kimia (chemical shift) yang menunjukkan jenis proton tersebut (Hart

et al., 2003).
13
Spektroskopi C NMR memberikan informasi tentang kerangka karbon.

Spektrum 13C NMR berbeda dari spektrum 1H NMR dalam beberapa hal, antara
lain pergeseran kimia 13C NMR terjadi pada kisaran yang lebih lebar dibandingkan

kisaran pergeseran kimia inti 1H NMR. Keduanya diukur terhadap senyawa

standar yang sama yaitu tetrametil silana (TMS) dimana semua karbon metilnya

ekuivalen dan memberikan sinyal yang tajam. Kisaran pergeseran kimia yang

lebar ini (0-200 ppm) cenderung menyederhanakan spektrum 13C NMR terhadap

spektrum 1H NMR (Hart et al., 2003). Nilai pergeseran kimia 1H NMR dan 13C

NMR ditampilkan pada Tabel 2.

Tabel 2. Pergeseran kimia 1H NMR dan 13C NMR

Pergeseran Kimia, δ
Struktur
1H 13C
CH2, CH3 0,5 -1,5 5,0 – 20
CH-O 2,5 – 3,5 30 – 60
O-CH3 3,5 – 4,0 50 – 60
CH-OH 2,5 – 3,0 65 – 70
C=CH 4,5 – 7,0 90 – 130
Aromatik 6,5 – 8,0 120 – 150
Ester 11,0 – 11,5 160 – 170
Aldehid 9,5 – 10,0 170 – 180
Keton - 180 – 220
Sumber: Silverstein (2005)
 BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan dari bulan Februari sampai Juli 2019 di Pusat

Laboratorium Terpadu UIN Jakarta. Analisis 1H dan 13

C NMR dilakukan di

Laboratorium Kimia Organik ITB, analisis FTIR di Pusat Aplikasi Isotop dan

Radiasi (BATAN) serta uji antikanker payudara (MCF-7) di Laboratorium Sentral

Universitas Padjajaran.

3.2 Alat dan Bahan

3.2.1 Alat

Alat yang digunakan berupa alat-alat gelas, botol vial, kromatografi kolom

gravitasi, vacuum rotary evaporator Heidolph2, lampu ultraviolet (UV) dengan λ

254 dan 366 nm, pipa kapiler, biosafety cabinet (BSC) JSR, centrifuge thermo

fisher, inkubator CO2, mikroskop (20x) , multimode reader tecan, 96 well plate,

FTIR alpha dan NMR Agilent 500 MHz dengan sistem konsol DD2 yang

beroperasi pada frekuensi 500 MHz (1H) dan 125 MHz (13C).

3.2.2 Bahan

Bahan yang digunakan adalah daun surian (T. sureni) yang berasal dari

Depok, pelarut metanol, etil asetat, n-heksana, kloroform p.a, dan aseton yang

berkualitas teknis terdestilasi, besi (III) klorida, sel MCF-7 (Michigan Cancer

Foundation-7) ATCC HTB-22, cisplatin Europan Pharmacopeia Reference

Standard (c2210000), antibiotik penicillin 1%, dimetil sulfoksida, PrestoBlue™

cell viability reagent.

22
3.3 Diagram Alir Penelitian

Gambar 8. Diagram alir penelitian

23
3.4 Cara Kerja

Metode yang dilakukan dalam penelitian ini meliputi ekstraksi dengan cara

maserasi, pemisahan dan pemurnian menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT),

kromatografi vakum cair (KVC), dan kromatografi kolom gravitasi (KKG) secara

gradien. Uji kemurnian dilakukan dengan KLT 2D dan uji tiga pelarut. Uji

aktivitas antikanker payudara (MCF-7) secara in vitro dan elusidasi struktur

menggunakan instrument FTIR dan NMR.

3.4.1 Ekstraksi

Daun T. sureni yang sudah dihaluskan ditimbang sebanyak 3,6 kg

kemudian dimaserasi menggunakan pelarut metanol 3 x 24 jam. Hasil maserasi

disaring dengan menggunakan kertas saring lalu filtrat diuapkan dengan vacuum

rotary evaporator pada suhu 40oC sehingga diperoleh ekstrak pekat dan dihitung

rendemennya.

3.4.2 Isolasi Senyawa dari Ekstrak Metanol Daun T. sureni

Isolasi suatu senyawa merupakan tahapan pemisahan senyawa dari suatu

campuran hingga diperoleh senyawa murni. Isolasi senyawa dilakukan dengan

menggunakan metode kromatografi. Metode kromatografi yang digunakan adalah

kromatografi lapis tipis (KLT), kromatografi cair vakum (KCV), dan kromatografi

kolom gravitasi (KKG).

3.4.2.1 Kromatografi Lapis Tipis (Braithwaite et al., 1996).

Kromatografi lapis tipis (KLT) digunakan untuk mengetahui profil senyawa,

menentukan eluen terbaik yang akan digunakan pada kromatografi kolom dan

memantau jalannya pemisahan senyawa. Plat KLT dibuat batas atas dan bawah

dengan lebar masing-masing 0,5 cm kemudian ditotolkan sampel tepat pada garis
bagian batas bawah kemudian dielusi dengan berbagai perbandingan eluen yang

sudah dijenuhkan. Eluen yang digunakan bisa berupa pelarut tunggal atau

campuran dua pelarut. Setelah eluen naik sampai batas atas plat KLT dikeluarkan

dari chamber kemudian dikeringkan. Selanjutnya dideteksi dengan menggunakan

lampu UV dengan λ 254 nm. Setelah dipendar pada lampu UV, plat KLT

disemprot dengan FeCl3 1%.

3.4.2.2 Kromatografi Vakum Cair (Santoni et al., 2010)

Kromatografi kolom pertama yang digunakan adalah kromatografi vakum

cair (KVC). Sampel ekstrak pekat ditimbang dalam cawan penguap, kemudian

ditambahkan silika gel Kieselgel 60. Tahap ini disebut dengan impregnasi,

impregnasi menggunakan silika gel bertujuan untuk mengikat sampel, selanjutnya

sampel dan silika gel diaduk hingga homogen.

Setelah preparasi sampel, tahap selanjutnya adalah preparasi kolom. Silika

gel halus 60 GF254 dimasukkan ke dalam kolom. Silika gel yang sangat halus

digunakan sebagai fase diam karena untuk mempercepat proses pemisahan. Silika

gel dipastikan rapat dan padat agar silika gel tidak pecah pada saat proses

pemisahan berlangsung. Sampel yang sudah diimpregnasi dimasukkan kedalam

kolom dan ditutup dengan kertas saring. Metode elusi yang digunakan adalah

metode elusi gradien. Eluen atau fase gerak yang digunakan ditingkatkan

kepolarannya dari n-heksana, n-heksana:etil asetat yang ditingkatkan

kepolarannya, etil asetat 100% sampai aseton 100%. Hasil kolom ditampung

dalam botol 50 mL kemudian dievaporasi menggunakan vacuum rotary

evaporator dan dipantau menggunakan KLT. Fraksi yang menunjukkan bercak

noda yang sama disatukan

dalam satu fraksi kemudian setelah pelarutnya menguap hingga kering dan

ditimbang.

3.4.2.3 Metode Kromatografi Kolom Gravitasi (Rauf et al., 2012)

Mula-mula dilakukan preparasi kolom pada kromatografi kolom gravitasi

yaitu dengan memasukkan kapas pada bagian bawah kolom. Silika gel 60

dilarutkan dengan menggunakan pelarut n-heksana dan dimasukkan ke dalam

kolom dimana diameter kolom dan tinggi silika disesuaikan berdasarkan jumlah

massa sampel. Kemudian dilakukan preparasi sampel, sampel dilarutkan dalam

aseton dan diimpregnasi dengan perbandingan 1:1 (sampel:silika). Hasil kolom

ditampung dalam botol vial 50 sampai dengan 5 mL lalu diuapkan dan dipantau

menggunakan KLT.

3.4.3 Uji Kemurnian Tiga Pelarut (Widorini dan Ersam, 2014)

Uji tiga pelarut ini menggunakan eluen (1) kloroform : etil asetat (9,5:0,5),

(2) kloroform:aseton (8:2) dan (3) aseton 100%. Hal ini guna mendapatkan isolat

murni yaitu satu spot dengan Rf di bawah, tengah dan atas pada plat KLT.

3.4.4 Uji Kemurnian dengan KLT 2 Dimensi (Gandjar dan Rohman, 2007)

Kromatografi lapis tipis 2 dimensi dilakukan dengan cara sampel

ditotolkan pada batas bawah plat KLT dengan ukuran 5 cm x 5 cm lalu dielusi

dengan eluen pertama yaitu kloroform:aseton (8:2). Plat KLT diangkat dan dilihat

noda di bawah lampu UV 254 nm. Setelah noda terlihat satu spot maka dilakukan

elusi kedua dengan memutar plat 90° dan diletakkan dalam chamber yang berisi

eluen kedua yaitu kloroform:etil asetat (4:6). Setelah elusi kedua selesai, noda

dilihat di bawah lampu UV 254 nm. Apabila memperlihatkan satu noda, diduga

isolat telah murni. Isolat kemudian dianalisis menggunakan FTIR dan NMR.
3.4.5 Karakterisasi Struktur Senyawa

Isolat yang dihasilkan dianalisis menggunakan spektroskopi FTIR dan NMR

guna mengetahui struktur dari isolat tersebut.

3.4.5.1 Analisis dengan Spektroskopi FTIR (Ashokkumar dan Ramaswamy,

2014)

Isolat murni diambil 1 mg, kemudian dicampurkan dengan KBr dan digerus

sampai homogen. Campuran dimasukkan ke dalam alat pembuat pellet, sehingga

didapatkan pellet dengan ketebalan ± 1 mm. Plat diletakkan pada wadah plat

kemudian diukur serapannya dengan alat FTIR alpha dengan tampilan spektrum

menunjukkan puncak-puncak yang menunjukkan gugus-gugus tertentu.

3.4.5.2 Analisis dengan Spektroskopi NMR (Wibowo, 2013)

Isolat murni yang diperoleh diambil sebanyak 5 mg dan dilarutkan dalam

0,5 mL pelarut bebas proton (CD3)2CO yang dapat melarutkan dengan sempurna.

Larutan sampel dimasukkan dalam tabung injeksi kemudian diletakkan dalam alat

NMR untuk mengukur 1H NMR pada 500 MHz dan 13C NMR pada 125 MHz.

3.4.6 Uji Aktivitas Antikanker Payudara (MCF-7) (Sirait et al., 2019)

Uji aktivitas antikanker payudara dilakukan secara in vitro terhadap sel

MCF-7 menggunakan metode presto blue. Uji ini dilakukan terhadap senyawa

murni hasil isolasi.

3.4.6.1 Preparasi media/kontrol positif/sampel

Media kultur cair Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) yang

mengandung Fetal Bovine Serum (FBS) 10% dan 50 μL/50 mL antibiotik

disiapkan. Kontrol positif yang digunakan dalam uji ini adalah cisplatin. Sampel

dilarutkan dengan konsentrasi tertentu sebagai stock dan pelarut yang digunakan
tidak bersifat toksik terhadap sel lalu disiapkan larutan kerja antipoliferasi assay

yaitu Presto Blue™ Cell Viability Reagent.

3.4.6.2 Preparasi sel MCF-7

Media pada dish dibuang, lalu sel dibilas sebanyak 2 kali dengan 1 mL

PBS (sel yang digunakan telah konfluen minimal 70%). Kemudian ditambahkan 1

mL larutan tripsin EDTA dan diinkubasi selama 5 menit agar lapisan sel

terdispersi (di bawah mikroskop inverted sel akan tampak melayang). Sel

dipindahkan ke dalam tube yang berisi media dan sel disentrifuge dengan

kecepatan 3000 rpm selama 5 menit. Supernatan yang dihasilkan dibuang, lalu

pelet dilarutkan ke dalam tube berisi media.

3.4.6.3 Seeding sel ke dalam 96 well plate

Jumlah dan viabilitas sel (dengan trypan blue exclusion) ditentukan dan

resuspend sel dengan kepadatan sel akhir 170.000 sel/mL dalam media (17.000

sel/well). Suspensi sel sebanyak 10 μL ditambahkan kedalam mikcrotube steril

yang berisi larutan tripan blue dan dihomogenkan. Hemacytometer dan tutup slip

dibersihkan menggunakan etanol 70% kemudian dikeringkan. Perlahan-lahan

dimasukkan 10 μL larutan sel tripan blue ke salah satu sisi chamber menggunakan

pipet dan dihitung jumlah sel yang sehat. Sel dikultur ke dalam 96 well plate,

kemudian diinkubasi selama 24 jam (sampai sel konfluen minimal 70%) pada

suhu 37°C dan 5% gas CO2.

3.4.6.4 Perlakuan sel dengan sampel/kontrol positif/kontrol negatif

Microtube 1,5 mL diberi label konsentrasi pengenceran yang sesuai

kemudian sampel diencerkan menjadi delapan varian konsentrasi menggunakan

pelarut media. 96 well plate yang telah berisi sel dikeluarkan dari inkubator dan
diberi label pada plate sepanjang margin kiri untuk baris mana yang akan diberi

perlakuan oleh standar dan baris mana yang akan diberi sampel lalu dibuang

media dari setiap well. Sampel dan kontrol positif cisplatin sebanyak 100 μL

dipindahkan dari microtube ke dalam masing-masing well yang sesuai pada 96

well plate yang telah berisi sel menggunakan mikropipet, kemudian diinkubasi

kembali selama 48 jam.

3.4.6.5 Pemberian pereaksi presto blue dan pengukuran absorbansi

Media pada tube ditambahkan 1 mL “Presto Blue™ Cell Viability

Reagent” (10 μL pereaksi untuk 90 μL media), lalu dimasukkan 100 μL campuran

larutan tersebut ke dalam tiap well microplate dan diinkubasi selama 1-2 jam

sampai terlihat perubahan warna (saat memasuki sel hidup, reagen Presto Blue™

akan direduksi dari senyawa biru resazurin tanpa nilai fluorescent intrinsik,

menjadi senyawa resorufin yang berwarna merah dan sangat berpendar. Konversi

nilai sebanding dengan jumlah sel yang aktif secara metabolik dan oleh karena itu

dapat diukur secara kuantitatif. Untuk mengukur absorbansi digunakan spektrum

absorbansi untuk resazurin dan resorufin). Selanjutnya diukur absorbansinya pada

panjang gelombang 570 nm menggunakan multimode reader.

Setelah diperoleh nilai absorbansi, kemudian dilakukan perhitungan

berdasarkan persamaan 1 dan 2 untuk menentukan persen sel hidup (viabilitas) sel

kanker payudara (MCF-7), dengan persamaan sebagai berikut:

Absorbansi sampel - Absorbansi kontrol media

% Sel hidup = x 100
Absorbansi kontrol sel - Absorbansi kontrol media

(Doyle dan Griffiths, 2000)

 Setelah didapatkan nilai persen sel hidup dari sel kanker payudara (MCF-

7), maka dapat dilakukan perhitungan persen inhibisi dengan persamaan sebagai

berikut:

% Inhibisi = 100 - % Sel hidup

(Zare et al., 2012)

atau dengan persamaan sebagai berikut:

Absorbansi kontrol media - Absorbansi sampel
% Inhibisi x 100
Absorbansi kontrol media
=
(Sirait et al., 2019)

Nilai IC50 ditentukan menggunakan persamaan regresi linier y = ax + b,

dimana y adalah % inhibisi yang bernilai 50, a (slope) dan b (intercept) didapat

dari persamaan kurva regresi dimana % inhibisi sebagai sumbu y dan konsentrasi

sampel sebagai sumbu x. Serta x adalah konsentrasi sampel yang akan ditentukan

nilai IC50 nya (Kiso et al., 2001).

 BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Ekstraksi Daun T. sureni

Daun T. sureni yang sudah dihaluskan sebanyak 3,6 kg dilakukan proses

maserasi dengan menggunakan pelarut metanol selama 3x24 jam. Maserasi

merupakan metode yang mudah digunakan untuk menarik komponen-komponen

yang terkandung dalam sampel. Proses perendaman pada sampel akan

menyebabkan pemecahan dinding dan membran sel akibat perbedaan tekanan

antara di dalam maupun luar sel sehingga metabolit sekunder yang berada di

dalam sitoplasma dapat larut dalam pelarut organik (Darwis, 2000).

Metanol mampu menembus semua jaringan tumbuhan untuk menarik

senyawa aktif, selain itu menguap dengan titik didih 64,7 ◦C sehingga mudah untuk

dipisahkan dari ekstrak (Waji dan Sugrani, 2009). Maserat yang diperoleh

kemudian diuapkan dengan menggunakan vacuum rotary evaporator pada suhu

40◦C sehingga menghasilkan ekstrak pekat berwarna hijau tua (Gambar 9).

Gambar 9. Ekstrak pekat daun T. sureni (Dokumen Penelitian, 2019).

31
 Ekstrak pekat berwarna hijau tua dihasilkan sebanyak 400,07 g dengan bau

menyengat khas daun. Menurut Wijaya et al. (2018), rendemen merupakan

perbandingan antara ekstrak yang diperoleh dengan simplisia awal. Semakin

tinggi nilai rendemen yang dihasilkan menandakan nilai ekstrak yang dihasilkan

semakin banyak. Rendemen yang dihasilkan dalam penelitian ini sebesar 11,11%.

Rendemen suatu ekstrak dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor salah satunya

adalah metode ekstraksi yang digunakan.

4.2 Uji Kualitatif Senyawa Fenolik Ekstrak Metanol Daun T. sureni

Ekstrak pekat (crude extract) daun T. sureni yang diperoleh selanjutnya

dilakukan uji kualitatif. Uji kualitatif senyawa fenolik dilakukan untuk

mengetahui keberadaan senyawa fenolik pada ekstrak metanol daun T. sureni

menggunakan KLT. Pereaksi penampak noda yang digunakan adalah FeCl3 1%.

Hasil uji KLT dengan eluen n-heksana:etil asetat (5:5) ditunjukkan pada Gambar

10.

Gambar 10. Kromatogram hasil KLT dengan λ 254 dan FeCl3 1%

Hasil penyemprotan dengan FeCl3 1% dalam ekstrak pekat metanol daun

T. sureni menghasilkan noda berwarna hitam keunguan yang menandakan

terdapat senyawa fenolik. Menurut Sangi et al. (2008) FeCl3 bereaksi dengan

32
salah satu

33
gugus hidroksil (OH-) dan membentuk senyawa kompleks biru kehitaman (Gambar

11).

Gambar 11. Reaksi uji fenolik dengan FeCl3 (Sangi et al., 2008)

4.3 Hasil Fraksinasi Ekstrak Metanol Daun T. sureni

Fraksinasi merupakan tahapan yang dilakukan untuk memisahkan senyawa-

senyawa yang terdapat dalam ekstrak pekat sehingga diperoleh senyawa yang

lebih sederhana. Ekstrak pekat sebanyak 400,07 g dilakukan fraksinasi dengan

menggunakan KVC untuk menggolongkan senyawa-senyawa berdasarkan tingkat

kepolaran. Prinsip dasar KVC meliputi pemisahan secara adsorpsi dan partisi yang

dipercepat dengan bantuan pompa vakum (Hostettman et al., 1995). Fraksinasi

dilakukan dengan menggunakan silika gel 60 GF254 sebagai fase diam dan fase

gerak yang digunakan adalah perbandingan eluen dengan kepolaran yang

bertingkat (n-heksana, n-heksana:EtOAc, EtOAc 100%, aseton 100%). Hal

tersebut dilakukan agar senyawa-senyawa dalam sampel dapat terpisah sesuai

dengan kepolaran eluennya. Fraksi-fraksi yang diperoleh dikumpulkan dalam

botol vial dan didapatkan 13 fraksi. Berat masing-masing fraksi yang dihasilkan

dapat dilihat pada Tabel 3:

Tabel 3. Berat fraksi hasil kolom kromatografi vakum cair
Fraksi Berat (g)
F1 0,0115
F2 0,0291
F3 0,3433
F4 0,3906
F5 0,3009
F6 0,1446
F7 0,1049
F8 0,0666
F9 0,1255
F10 0,2678
F11 0,2848
F12 0,3738
F13 0,3895

Masing-masing fraksi tersebut diidentifikasi dengan KLT menggunakan fase

gerak yaitu n-heksana:EtOAc (7:3). Hal ini dilakukan untuk melihat pola

pemisahan yang baik sesuai dengan kepolaran eluennya. Pemisahan yang baik

ditandai dengan nilai Rf KLT berkisar antara 0,2 - 0,8. Jika Rf terlalu tinggi maka

kepolaran eluen diturunkan (Gandjar and Rohman, 2007). Hasil KLT 13 fraksi

dari KVC dapat dilihat pada Gambar 12.

Gambar 12. Hasil KLT menggunakan eluen n-heksana : EtOAc (7:3)

Berdasarkan hasil KLT pada panjang gelombang 254 nm tersebut dapat

dilihat bahwa noda yang terbentuk pada F1-F7 merupakan senyawa nonpolar
karena dapat terelusi dengan baik menggunakan eluen n-heksana:EtOAc (7:3),

sedangkan pada F10-F13 kemungkinan mengandung senyawa polar karena saat

dielusi dengan n-heksana:EtOAc (7:3) spot masih tertahan di bawah. Fraksi F11-

F13 memiliki pola noda yang sama dan pola pemisahan yang lebih sederhana dari

fraksi lainnya sehingga digabungkan dan dilakukan pemisahan kembali untuk

menghasilkan fraksi yang lebih sederhana.

Pemisahan fraksi F11 - F13 (G) sebanyak 1,0481 g difraksinasi dengan

KKG menggunakan kolom berdiameter 3 cm dengan silika gel 60 GF254 sebanyak

65 g. Fase gerak yang digunakan berupa campuran eluen kloroform:EtOAc yang

ditingkatkan kepolarannya. Kromatografi kolom gravitasi ini merupakan cara

pemisahan yang sederhana dimana sampel akan ditempatkan di atas permukaan

fase diam yang berupa silika gel yang kemudian dielusi dengan menggunakan fase

gerak berupa eluen dengan perbandingan kepolaran tertentu. Pemisahan tejadi

karena adanya perbedaan interaksi antara sampel dengan fase gerak dan fase

diamnya serta dengan adanya gaya gravitasi (Hermanto, 2008). Hasil fraksinasi

ditampung pada botol vial 50 mL dan masing-masing fraksi tersebut digabungkan

berdasarkan kesamaan noda pada plat KLT sehingga menghasilkan 10 fraksi (G1-

G10) seperti pada Gambar 13.

S G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7 G8 G9 G10 S G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7 G8 G9 G10

Gambar 13. Hasil KLT menggunakan eluen kloroform : aseton (8:2)

 Berdasarkan hasil KLT dengan eluen kloroform:aseton (8:2) dari 10 fraksi

tersebut didapatkan spot yang lebih mudah untuk dilakukan pemisahan yaitu pada

fraksi G1-G3. Berat fraksi G1-G3 (H) memiliki massa yang cukup sehingga

dilakukan proses KKG berikutnya. Berat masing-masing fraksi dapat dilihat pada

Tabel 4.

Tabel 4. Berat fraksi dari hasil kromatografi kolom gravitasi

Fraksi Berat (mg)
G1 254,8
G2 179,9
G3 88,8
G4 68,7
G5 65,2
G6 49,3
G7 39,8
G8 26,5
G9 24,9
G10 20,5

Fraksi G1-G3 (H) digabungkan dan dianalisis lebih lanjut dengan KLT

menggunakan eluen kloroform:n-heksana (7:3). Hal ini dilakukan untuk

mengetahui noda lainnya yang masih tersisa pada fraksi H serta eluen terbaik

yang dapat memisahkan noda target dengan noda lainnya. Fraksi H sebanyak

523,5 mg selanjutnya dilakukan KKG menggunakan kolom berdiameter 2 cm

dengan silika gel 60 sebanyak 20 g. Hasil fraksinasi ditampung dalam botol vial 5

mL dan menghasilkan 38 tampungan, masing-masing tampungan digabungkan

berdasarkan kesamaan noda pada plat KLT sehingga dihasilkan 7 fraksi (H1-H7)

seperti pada Gambar 14.

 H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7

Gambar 14. Hasil KLT menggunakan kloroform:aseton (8:2)

Hasil analisis KLT menggunakan kloroform:aseton (8:2) menghasilkan

noda tunggal dengan berat dan Rf seperti pada Tabel 5. Menurut Sastrohamidjojo

(1991) terdapat faktor-faktor yang mempengaruhi harga Rf pada KLT yang

meliputi struktur kimia dari senyawa yang dipisahkan, sifat dari penyerap dan

derajat aktivitasnya, tebal dan kerataan lapisan penyerap, derajat kemurnian fase

gerak, dan jumlah cuplikan. Proses yang dilakukan berikutnya adalah dengan

menguji kemurnian pada fraksi dengan menggunakan uji tiga pelarut dan

kromatografi lapis tipis 2D.

Tabel 5. Berat dan Rf 7 fraksi hasil kromatografi kolom gravitasi

Fraksi Berat (mg) Rf
H1 328,5 0,47
H2 18,2 0,55
H3 12,7 0,50
H4 58,1 0,46
H5 36,9 0,48
H6 16,3 0,45
H7 12,8 0,45

Fraksi yang diperoleh (H1) diuji kemurniannya dengan metode tiga pelarut

berbeda, hasilnya menunjukkan satu noda tunggal pada plat KLT dengan nilai Rf

yang berbeda-beda sesuai dengan tingkat kepolaran eluen yang digunakan. Tiga
jenis eluen yang digunakan adalah (1) kloroform:EtOAc (9,5:0,5), (2)

kloroform:aseton (8:2), dan (3) aseton 100% seperti pada Gambar 15 dan

menghasilkan noda tunggal dengan masing-masing Rf 0,25, 0,52, dan 0,97.

(1)(2)(3)(1)(2)(3)

Gambar 15. Uji kemurnian tiga pelarut berbeda

Uji kemurnian berikutnya menggunakan kromatografi lapis tipis 2 dimensi

dengan eluen pertama yaitu (1) kloroform:aseton (8:2) dan eluen kedua

menggunakan (2) klorofororm:EtOAc (4:6). Hasil KLT 2 dimensi dapat dilihat

pada Gambar 16.

Pengelusian Kedua
Pengelusian Pertama

Gambar 16. Hasil KLT dua dimensi

Berdasarkan hasil KLT 2 dimensi menggunakan eluen kloroform:aseton

(8:2) menghasilkan satu noda tunggal dengan nilai Rf 0,35 dan terlihat tidak ada

noda
lain di atas noda target. Selanjutnya plat diputar 90◦ dan dielusi dengan eluen

kedua yaitu kloroform:EtOAc (4:6) dengan kepolaran yang lebih tinggi

menghasilkan satu noda tunggal dengan nilai Rf 0,67. Menurut Gandjar dan

Rohman (2007) penggunaan dua sistem eluen yang berbeda bertujuan untuk

mengetahui apakah masih terdapat noda lain yang memiliki tingkat kepolaran

yang berbeda.

Hasil uji dengan tiga eluen berbeda dan KLT 2 dimensi menunjukkan

bahwa fraksi H1 memiliki spot noda tunggal dan merupakan isolat murni (A)

yang berbentuk padatan berwarna putih dengan berat 328,5 mg. Isolat murni yang

dihasilkan selanjutnya ditentukan strukturnya menggunakan 1H NMR,13C NMR

dan FTIR.

4.4 Penentuan Struktur Isolat

4.4.1 Analisis Data FTIR

Analisis FTIR dilakukan untuk menentukan gugus fungsi yang terdapat

pada Isolat A. Hasil analisis spektroskopi FTIR tersebut menunjukkan adanya

serapan dari beberapa gugus fungsi. Spektrum FTIR dapat dilihat pada Gambar

17.
Gambar 17. Spektrum FTIR dari isolat
 Berdasarkan data spektrum FTIR, isolat A menunjukkan adanya beberapa

puncak pada bilangan gelombang tertentu. Hasil interpretasi gugus fungsi isolat A

dibandingkan dengan referensi dilihat pada Tabel 6.

Tabel 6. Hasil analisis gugus fungsi isolat A

Bilangan gelombang (cm-1)
Perkiraan gugus fungsi
Isolat A Utami et al., 2018
3363,91 3230-3550 O-H
2997,69 2853-2962 C-H alifatik
1692,96 1693,50 C=O
1618,30 – 1536,33 1675-1500 C=C aromatik
1251,47 – 1002,04 1251,80 - 1002,98 C-O ester/ eter
867,02 - 764,79 869,90 - 767,67 = C-H aromatik

Spektrum IR yang dihasilkan menunjukkan adanya serapan lebar pada

bilangan gelombang 3363,91 cm-1 dimana serapan pita ini berada pada daerah

diantara 3300 – 3500 cm-1 yang menandakan adanya gugus fungsi OH. Pada

bilangan gelombang 2997,69 cm-1 menunjukkan adanya gugus fungsi C-H alifatik.

Pada bilangan gelombang 1692,96 cm-1 memiliki serapan tajam yang

menunjukkan adanya gugus karbonil C=O. Serapan pada daerah gelombang

1618,30 – 1536,33 cm-1 merupakan serapan yang disebabkan oleh adanya vibrasi

ikatan C=C aromatik. Hal ini juga diperkuat oleh adanya serapan pada bilangan

gelombang 867,02 - 764,79 cm -1 yang mengindikasikan adanya gugus C-H

aromatik, selain itu terdapat serapan pada bilangan gelombang 1251,47 – 1002,04

cm-1 yang merupakan gugus fungsi C-O ester ataupun eter. Berdasarkan hasil

analisis spektrum FTIR menunjukkan bahwa isolat A mengandung gugus

aromatik, gugus OH, eter/ester, serta gugus karbonil (C=O).

4.4.1 Analisis Data 13C NMR
13
Spektroskopi C NMR digunakan untuk memberikan informasi yang

berkaitan dengan jumlah dan jenis-jenis karbon yang terdapat dalam molekul

suatu senyawa. Kelebihan spektrum karbon dari spektrum proton adalah

kesederhanaan penampakan pada spektrum karbon sehingga lebih mudah untuk

dianalisis. Rentang sinyal karbon sebesar 0-220 ppm jauh lebih panjang dari

rentang geseran kimia proton (0-15 ppm), dengan menjadikan sinyal karbon

singlet maka geseran ini cukup besar sehingga tidak terjadinya tumpang tindih
13
antar sinyal (Syah, 2016). Berdasarkan hasil analisis spektrum C NMR isolat

murni menggunakan pelarut (CD3)2CO menunjukkan adanya 6 sinyal karbon dan

1 sinyal pelarut yang ditunjukkan pada Gambar 18.

205 (C=O)

Gambar 18. Spektrum 13C NMR dari isolat ((CD3)2CO, 125 MHz)

Berdasarkan hasil data spektrum 13C NMR maka dapat ditentukan jumlah

dan jenis karbon dari setiap geseran kimia karbon. Geseran kimia dan jenis karbon

ditunjukkan pada Tabel 7.

Tabel 7. Geseran kimia dan jenis karbon dari data spektrum 13C NMR
Pergeseran Kimia δc (ppm) Prediksi Jenis Karbon
51,90 -OCH3 C-sp3
109,79 =C-H aromatik C-sp2
121,75 -C=C- aromatik C-sp2
138,73 =C-OH aromatik C-sp2
146,06 =C-OH aromatik C-sp2
C-sp2
167,23

Hasil spektrum 13C NMR menunjukkan adanya sinyal pada daerah δ C 51,90

ppm dan termasuk ke dalam jenis atom karbon C-sp3 karena sinyal yang muncul

berada pada δC kurang dari 90 ppm, spektrum karbon dengan sinyal-sinyal C-sp3

dapat diperkirakan merupakan golongan senyawa turunan alkil. Selain itu daerah

δC 50-60 ppm merupakan daerah gugus alkil yang terikat dengan oksigen seperti

gugus -OCH3 tertentu.

Adanya sinyal-sinyal di sekitar δC 90-220 ppm merupakan tempat sinyal-

sinyal C-sp2, gugus fungsi yang termasuk dalam sinyal C-sp2 adalah gugus alkena,

aromatik, berbagai turunan gugus karbonil (aldehida, keton, asam karboksilat dan

ester) dan imina. Daerah δC antara 90-160 ppm merupakan sinyal-sinyal karbon

dari alkena dan aromatik seperti pada δC 109,79; 121,75; 138,73; dan 146,06 ppm

yang dihasilkan merupakan gugus =CH, -C=C-, =C-OH yang terikat pada gugus

aromatik. Hasil spektrum pada δC 206,5 ppm merupakan sinyal dari karbon pelarut

aseton dimana sinyal karbon pelarut dianggap sebagai bagian sinyal karbon

senyawa yang ingin ditentukan.

4.4.2 Analisis data 1H NMR

Menurut Sastrohamidjojo (2013), analisis data 1H NMR dilakukan untuk

menentukan tipe dan jumlah proton serta lingkungan kimianya dalam suatu

molekul. Tipe proton yang berbeda memiliki lingkungan kimia yang berbeda
sehingga dapat menentukan serapan sebuah proton dalam spektrum. Berdasarkan

data spektrum 1H NMR isolat A menggunakan pelarut (CD 3)2CO atau aseton

yang terdeuterasi. Tujuan penggunaan pelarut terdeuterasi yaitu dengan

menggantikan semua 1H oleh D (2H) sehingga keberadaan hidrogen pada pelarut

tidak mengganggu saat proses pengukuran. Apabila menggunakan pelarut biasa,

maka sinyal 1H pelarut akan “menutupi” sinyal-sinyal 1H dari sampel. Selain itu

adanya sinyal deuterium dimanfatkan dalam proses penghomogenan lebih lanjut

medan magnet disekitar sampel (Syah, 2016). Hasil analisis menunjukkan adanya

3 sinyal proton yang ditunjukkan pada Gambar 18.

Gambar 19. Spektrum 1H NMR dari isolat ((CD3)2CO), 500 MHz)

Berdasarkan spektrum tersebut, terdapat sinyal khas dari proton aromatik

pada pergeseran kimia 7,10 ppm (2H, s, H-2 dan H-6) yang memiliki bidang

simetri dan terdapat proton metoksi pada pergeseran kimia 3,78 ppm (3H, s,

-OCH3). Pelarut yang digunakan muncul pada pergeseran kimia 2,05. Selain itu

muncul sinyal pada pergeseran kimia 8,22 ppm yang kemungkinan menunjukkan

proton hidroksi (H, s, OH). Menurut Syah (2016) gugus hidroksi muncul sebagai

sinyal melebar atau tajam dan memiliki geseran kimia yang besar. Posisi sinyal

OH sangat
bervariasi, tergantung pada kondisi seperti pelarut yang digunakan, konsentrasi

dari ikatan hidrogen dan kemurnian alkohol serta ada tidaknya air dalam pelarut

atau sampel sehingga menjadi penentu posisi sinyal dan efek pelebaran sinyal.

Hasil interpretasi berdasarkan data spektrum 1H NMR dan 13C NMR isolat A

dibandingkan dengan senyawa pembanding hasil isolasi dari ekstrak metanol

tumbuhan Jiringa (Archidendron jiringa). Hasil korelasi proton dan karbon

berdasarkan data 1H NMR dan 13C NMR dan senyawa pembanding ditunjukkan

pada Tabel 8.

Tabel 8. Data perbandingan proton dan karbon senyawa isolat dengan senyawa
pembanding
Isolat Senyawa Metil Galat (Lubis et al., 2018)
Posisi δC
δH (ppm)* δH (ppm)*** δC (ppm)***
karbon (ppm)**
8 - 51,9 - 51,1
2,6 7,1 109,7 7,04 108,8
1 - 121,7 - 120,2
4 - 138,7 - 138,6
3,5 8,2 146,0 - 145,3
7 3,7 167,2 3,4 167,8
Keterangan : (*) 500 MHz dalam (CD3)2CO
(**) 125 MHz dalam
(CD3)2CO (***) 400 MHz
dalam CD3OD (***) 100 MHz
dalam CD3OD

Berdasarkan pada Tabel 8 bahwa isolat A mempunyai kesesuaian yang

tinggi dengan metil galat dari ekstrak metanol tumbuhan Jiringa (Archidendron

jiringa) (Lubis et al.,2018), sehingga isolat A disarankan merupakan senyawa

metil galat (metil 3,4,5 -trihidroksibenzoat) dengan struktur ditunjukkan oleh

Gambar 20.
Gambar 20. Struktur metil galat
4.4.3 Aktivitas Antikanker Payudara MCF-7

Uji antikanker terhadap sel kanker payudara (MCF-7) ini didasarkan pada

uji in vitro menggunakan kultur sel untuk mengetahui tingkat ketoksikan suatu

senyawa (Winarno et al., 2010). Metil galat yang diperoleh dari hasil isolasi

dibuat menjadi delapan varian konsentrasi untuk melihat hubungan pola

konsentrasi dengan aktivitas sel. Metil galat dilarutkan menggunakan pelarut

DMSO (Dimetil Sulfoksida) karena DMSO merupakan pelarut yang dapat

berpenetrasi secara baik ke dalam sel sehingga dapat meningkatkan kelarutan

sampel. Selain itu, DMSO juga bertindak sebagai kontrol negatif.

Sampel dan kontrol positif cisplatin ditanam pada 96 well plate yang berisi

sel MCF-7 dan dinkubasi selama 48 jam. Proses inkubasi tersebut agar sel

mencapai fase log yaitu fase dimana sel berada pada pertumbuhan yang optimum.

Fase log ditandai dengan keadaan sel yang konfluen 80% menutupi permukaan

wadah medium. Inkubasi juga berfungsi agar sel pulih kembali setelah panen,

karena perlakuan sampel harus dilakukan setelah sel dalam keadaan normal

(CCRC, 2008). Selanjutnya dilakukan penambahan PrestoBlue™ Cell Viability

Reagent (resazurin) dan diukur absorbansinya pada panjang gelombang 570 nm

menggunakan multimode reader. Kurva hasil uji berdasarkan hubungan nilai

persen inhibisi dengan konsentrasi dapat dilihat pada Gambar 21.

 Metil Galat y = 0,2924x - 8,4103 R² = 0,985
70,00
60,00
50,00
Persen Inhibisi (%) 40,00
30,00
20,00
10,00
0,00

-10,0 0,00 50,00 100,00150,00200,00250,00300,00

0
Konsentrasi Sampel (μg/mL)

Gambar 21. Hubungan persen inhibisi dan konsentrasi sampel

Aktivitas sitotoksik dinyatakan dengan nilai IC50, nilai IC50 menunjukkan kadar

sampel uji yang dapat menghambat 50% pertumbuhan sel kanker (Fitria et al.,

2011). Nilai IC50 metil galat diperoleh dari persamaan regresi linier y = 0,2924x +

(-8,4103) sebesar 199,76 μg/mL yang termasuk ke dalam aktivitas lemah dalam

menghambat pertumbuhan sel (Tabel 9). Sementara itu, metil galat yang diperoleh

dari buah Bambangan (Mangifera pajang) memiliki nilai IC50 54,7 μg/mL. Metil

galat meningkatkan populasi sel dalam fase sub-G1 yang menunjukkan apoptosis

dan penghentian siklus sel pada G0/G1. Selain itu, pewarnaan dengan Annexin V-

FITC dan propidium iodide mengungkapkan bahwa sel-sel apoptosis meningkat

setelah inkubasi (Rachim et al.,2018), sedangkan IC50 cisplatin sebagai

pembanding diperoleh sebesar 52,91 μg/mL.

Tabel 9. Besaran nilai IC50 dalam menghambat pertumbuhan sel

Nilai IC50 Tingkat Aktivitas

IC50 <10 μg/mL Sangat kuat
IC50 10-100 μg/mL Kuat
IC50 100-500 μg/mL Lemah
IC50 >500 μg/mL Tidak Aktif
(Machana et al., 2011; Weerapreeyakul et al., 2012)
 Menurut Khurana et al. (2014), metil galat memiliki potensi melindungi

membran mitokondria, meningkatkan glutathione endogen, pencegahan DNA

fragmentasi, akumulasi caspase-9 yang terpotong, dan menghambat jalur

apoptosis intrinsik sehingga mampu mengurangi kematian sel.

Beberapa gugus fungsi seperti hidroksil dan ikatan rangkap dalam senyawa

metil galat dapat berkontribusi terhadap kapasitas penghambatan proliferasi sel

kanker (Petronelli et al., 2009). Senyawa dugaan yang kemungkinan memiliki

peran utama dalam menghambat pertumbuhan sel kanker payudara adalah

senyawa yang memiliki gugus hidroksil pada posisi karbon 3,4, dan 5. Selain itu,

jumlah dan posisi gugus hidroksil dalam suatu senyawa akan mempengaruhi

aktivitas antikankernya (Qi et al., 2010). Perbedaan penampakan morfologi antara

sel yang diberi metil galat dalam konsentrasi 1000 μg/mL sampai dengan 7,81

μg/mL terlihat pada Gambar 21.

Gambar 21. Dokumentasi sel MCF-7 dengan penambahan metil galat

Semakin kecil konsentrasi metil galat yang digunakan maka terdapat

kenaikan jumlah sel yang mengalami mitosis dan menandakan sel masih

melakukan aktivitas metabolik. Hal ini sesuai dengan hasil pewarnaan pada well

plate (Lampiran 2) dimana semakin kecil konsentrasi metil galat terjadi perubahan

warna
biru menjadi merah muda yang berarti adanya reaksi reduksi senyawa resazurin

menjadi resorufin. Selain itu, perbedaan morfologi antara sel kanker MCF-7

dengan cisplatin sebagai kontrol positif dapat dilihat pada Gambar 22.

Gambar 22. Dokumentasi sel MCF-7 dan cisplastin

Sel kanker MCF-7 memiliki morfologi berbentuk epitel memanjang

(lonjong) dan berkelompok, sedangkan sel yang diberi cisplatin berbentuk bulat

dan tidak berkelompok hal ini menujukkan adanya pengurangan jumlah sel yang

merupakan indikasi terjadinya apoptosis. Menurut CCRC (2008) sel yang

mengalami apoptosis dapat diamati dengan menggunakan mikroskop elektron

melalui ciri-ciri morfologis yang ditampakkan. Ciri-ciri tersebut antara lain sel

menjadi bulat karena struktur protein yang menyusun sitoskeleton dicerna oleh

enzim peptidase spesifik yang telah diaktifkan di dalam sel. Apoptosis

menunjukkan kematian sel yang diawali dengan terbentuknya lekukan-lekukan

pada membran sel dan DNA terfragmentasi (Goodlet et al., 2005).

 BAB V

PENUTUP

5.1 Simpulan

Berdasarkan penelitian yang dilakukan terhadap ekstrak metanol daun T. sureni

maka dapat disimpulkan bahwa:

1. Struktur dari isolat murni adalah senyawa metil galat yang termasuk ke

dalam golongan senyawa fenolik.

2. Senyawa metil galat dari hasil isolasi memiliki aktivitas antikanker

dengan nilai IC50 sebesar 199,76 μg/mL.

5.2 Saran

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang isolasi dan elusidasi

senyawa dari tumbuhan T. sureni dimana jenis tumbuhan ini tumbuh dan tersebar

di Indonesia dan belum banyak dikembangkan sebagai tumbuhan yang memiliki

aktivitas sebagai obat antikanker.

49
 DAFTAR PUSTAKA

American Cancer Society. 2015. Cancer Facts & Figures 2015. Atlanta: American
Cancer Society.

Amic D, David A, Beslo T. 2003. Structure-Radical Scavenging Activity

Relationship of Flavonoids. Croatia Chemica Acta. 76(1): 55-61.

Aouali N, Morjani H, Trussardi A, Soma E, Giroux B, Manfait M. 2003.

Enhanced Cytotoxicity and Nuclear Accumulation of Doxorubicin-loaded
Nanospheres in Human Breast Cancer MCF-7 Cells Expressing MRP1.
International Journal of Oncology. 23:1195-1201.

Ashokkumar R, Ramaswamy M. 2014. Phytochemical screening by FTIR

spectroscopic analysis of leaf extracts of selected Indian Medicinal plants.
International Journal of Current Microbiology and Applied Sciences. 3(1):
395– 406.

Atun S. 2014. Metode isolasi dan identifikasi struktur senyawa organik bahan alam.
Jurnal Konservasi Cagar Budaya Borobudur. 8(2): 53-61.

Braithwaite A, Smith F, Stock R. 1996. Chromatographic Methods. Kluwer

Academic Publisher: London.

Bruneton J. 1999. Pharmacology Phytochemistry Medicinal Plants. 2nd ed.

France: Lavoisier Publishing. 567-568.

Butt AJ, Firth SM, King MA, Baxter RC. 2000. Insulin-Like Growth Factor-
Binding Protein-3 Modulates Expression of Bax and Bcl-2 and Potentiates
P53- Independent Radiation-Induced Apoptosis In Human Breast Cancer Cells.
J Biol Chem. 275(50): 39174-39181.

Cancer Chemoprevention Research Center. 2012. Mekanisme dan Regulasi

Apoptosis. Fakultas Farmasi UGM. Yogyakarta. 1-17.

Cancer Chemoprevention Research Center. 2008. Protokol in vitro CCRC.

Fakultas Farmasi UGM. Yogyakarta. 1-12.

Carey FA. 2002. Organic Chemistry, 4th Edition, McGraw Hill. Amerika.

Chen HM, Yang CW, Yi CC, Fang RC, Hseng KH, Ya CH, Chih CC, Shyng SY.
2009. Gallic Acid a Major Component of Toona sinensis Leaf Extracts,
Contains a ROS-mediated Anticancer Activity in Human Prostate Cancer
Cells. Cancer Letters. 286: 161–171.
Cuong, Pham V, Nguyen TM, Nguyen VH. 2007. Triterpenes from Toona Sureni
Moora (Meliacea). Journal of Chemistry. 45: 214–19.

Darmawati FD. 2002. Informasi Singkat Benih. Balai Penelitian dan

Pengembangan Tegnologi Pembenihan. Bogor.

Darwis D. 2000. Teknik Dasar Laboratorium dalam Penelitian Senyawa Bahan

Alam Hayati. FMIPA Universitas Andalas. Padang.

Departemen Kehutanan. 2002. Pedoman Pembuatan dan Pengukuran Petak Ukur

Permanen (PUP) untuk Pemantauan Pertumbuhana dan Riap Hutan Alam
Tanah Kering Bekas Tebangan. Badan Penelitian dan Pengembangan
Kehutanan. Jakarta.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2009. Pencegahan Kanker Leher

Rahim Dan Kanker Payudara. Depkes RI. Jakarta.

Djam’an DF. 2002. Balai Penelitian dan Pengembangan Teknologi Perbenihan.

Peter Ochsner, IFSP. Bogor.

Dong XJ, Zhu YF, Bao GH, Hu FL, Qin GW. 2013. New Limonoids and a
Dihydrobenzofuran Norlignan from the Roots of Toona sinensis. Molecules
18(3): 40–50.

Doyle A, Griffiths JB. 2000. Cell and Tissue Culture: Laboratory Prosedure in
Biotechnology. John Wiley and Sons. Singapore: 62-64.

Ekaprasada MT, Nurdin H, Ibrahim S, Dachriyanus. 2009. Antioxidant Activity of

Methyl Gallate Isolated from the Leaves of Toona sureni. Indonesian Journal
of Chemistry. 9(3): 457–460.

Febriyani E, Syamsul F, Dimas A, Tien Lastini. 2018. Identification of Active

Compounds and Anti-Acne Activity from Extracts and Fractions of Surian
(Toona sinensis) Leaves Planted in Sumedang West Java Indonesia.
Biodiversitas. 19(4): 1406–12.

Fessenden JR, Fessenden SJ. 1981. Kimia Organik. Erlangga. Jakarta.

Fitria M, Armandari I, Septhea D, Ikawati A, Meiyanto E. 2011. Ekstrak Etanolik

Herba Ciplukan (Physalis angulata L.) Berefek Sitotoksik Dan Menginduksi
Apoptosis Pada Sel Kanker Payudara MCF-7. Jurnal Ilmu-Ilmu Hayatik dan
Fisik. 13(2): 101–107.

Gandjar IG, Rohman A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar.

Yogyakarta. 419-425.

Gibbons S. 2012. An Introduction to Planar Chromatography and Its Application

to Natural Products Isolation. Humana Press. New York.

51
Goodlett C, Kristin H, Feng CZ. 2005. Alcohol Terarogenesis: Mechanism of
Damage and Strategies for Intervention. Experimental Biology and Medicine.
230(6): 394-406.

Hafid AF, Wahyuni TS, Tumewu L, Apryani E, Permanasari AA, Adianti. 2018.
Antihepatitis C Virus Activity of Indonesian Mahogany (Toona sureni). Asian
Journal of Pharmaceutical and Clinical Research. 11(2).

Hanahan D, Weinberg RA. 2000. The hallmarks of cancer. Cell. 100 (1): 57-70.

Ekaprasada D, Putri H, Atu PD, Unang S. 2011. Diterpenoid Compounds from

Leaf of Suren (Toona sureni) and Toxicity Againts Brine Shrimp. Proceedings
of the 2nd International Seminar on Chemistry. 329-331.

Hart H, Craine LE, Hart DJ. 2003. Kimia Organik. Achmadi, S.S., penerjemah;
Safitri, A., editor. Jakarta (ID): Penerbit Erlangga. Terjemahan dari: Organic
Chemistry. A Short Course. Ed ke-11.

Hayouni EA, Abedrabba M, Bouix M, Hamdi M. 2007. The effects of solvents

and extraction method on the phenolic contents and biological activities in vitro
of Tunisian Quercus coccifera L. and Juniperus phoenicea L. fruit extracts.
Food Chemistry. 105(3): 1126-1134.

Hermanto S. 2008. Mengenal Lebih Jauh Teknik Analisa Kromatografi dan

Spektrofotometri. Pusat Laboratorium Terpadu UIN Syarif Hidayatullah.
Jakarta.

Hostettmann K, Hostettmann M, Marston A. 1995. Cara Kromatografi Preparatif.

Diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata. Bandung : ITB. 33: 9-11.

Jabit ML, Khalid R, Abas F, Shaari K, Hui LS, Stanslas J, Lajis NH. 2007.
Cytotoxic Xanthones from Garcinia penangiana Pierre. Journal of
Biosciences. 62(11): 786–792.

Kapasakalidis PG, Rastall RA, Gordon MH. 2006. Extraction of polyphenols from
processed black currant (Ribes nigrum L.) residues. Journal of agricultural
and food chemistry. 54(11): 4016-4021.

Kementrian Kesehatan Republik Indonesia. 2013. Riset kesehatan dasar:

Riskesdas. Kementrian Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta.

Khurana S, Amanda H, Matthew P, Khrisnan V, Aseem K. 2014. Antiapoptotic

Actions of Methyl Gallate on Neonatal Rat Cardiac Myocytes Exposed to
H2O2. Hindawi Publishing Corporation. 2014: 1-9

Khopkar. 2002. Konsep Dasar Kimia Analitik. UI Press. Jakarta.

King RJB. 2000. Cancer Biology. Second Edition Person Education Limited.
London.

Kiso T, Usuki Y, Ping X, Fujita K, Taniguchi M, Cathepsin B. 2001. L-2.5-

Dihydrophenylalanine, an Inducer of Cathepsin-dependent Apoptosis in
Human Promyelocytic Leukemia Cells (HL-60). Journal of Antibiotics. 54(10):
810– 817.

Larkin PJ. 2011. IR and Raman Spectroscopy: Principles and Spectral

Interpretation. USA: Elsevier.

Lockshin RA, Zakeri Z. 2007. Cell Death in Health and Disease. J. Cell Mol Med.
11(6): 1214-1224.

Lubis MY, Rikson S, Marpaung L, Simajuntak P, Muhammad PN. 2018. Methyl

Gallate From Jiringa (Archidendron jiringa) and Antioxidant Activity. Asian J
Pharm Clin Res. 11(1): 346-350.

Machana, Sasipawan W, Natthida, Sahapat B, Apiyada N, Bungurn S. 2011.

Cytotoxic and Apoptotic Effects of Six Herbal Plants Againts the Human
Hepatocarcinoma (HepG2) Cell Line. Biomed Central. 6:39.

Mangan Y. 2003. Cara Bijak Menaklukan Kanker. AgroMedia Pustaka. Jakarta.

Mardiana L. 2004. Kanker Pada Wanita, Pencegahan dan Pengobatan Dengan

Tanaman Obat. Kawan Pustaka. Jakarta.

Middleton EJ, Kandaswami C, Theoharides TC. 2000. The Effects Of Plant

Flavonoids on Mammalian Cells: Implications for Inflammation, Heart
Disease, and Cancer. Journal Pharmacol. 52(4):673-751.

National Cancer Institute. Breast cancer. diambil dari:

http://www.cancer.gov/cancer topics/types/breast. diakses 15 September 2019.

Negi JS, Bisht VK, Arvind K, Bhandari MK, Bharti, Sundriyal RC. 2011.
Chemical and Pharmacological Aspects of Toona (Meliaceae). Research
Journal of Phytochemistry. 5(1): 14–21.

Pavia DL, Lampman GM, Kriz GS, Vyvyan JR. 2009. Introduction to
Spectroscopy; Fourth Edition. Belmont. USA.

Petronelli A, Pannitteri G, Testa U. 2009. Triterpenoids As New Promising

Anticancer Drugs. Anti-Cancer Drugs. 20(10): 880–892.

Pokorny J. 2007. Are the Natural Antioxidants Better and Safer Thansynthetic
Antioxidants. Journal of Lipid Science and Technology. 109: 629 – 642.
Price AS, Lorraine Cwi. 2006. Patofisiologi : Konsep Klinis Proses-proses
Penyakit Edisi 6 (terjemahan). Peter Anugrah EGC. Jakarta.

Putri IA, Jayusman. 2012. Inisiasi Tunas Aksiler Serta Kalus Toona sinensis dan
Toona sureni dengan Sumber Bahan Stek Cabang. Pemuliaan Tanaman Hutan.
6(3):167-180.

Rahim AC, Kartine H, Mohd FAD, Johnson S. 2018. Anti-cancer potential of

methyl gallate isolated from Bambangan (Mangifera pajang) in MCF-7 cell
line. Pharmacology. 63.149

Ramesh G, Reeves WB. 2010. Mechanisms of Cisplatin Nephrotoxicity. Journal

Toxins. 2: 2490-518.

Rampersad SN. 2012. Multiple Applications of Alamar Blue as an Indicator of

Metabolic Function and Celluar Health in Cell Viability Bioassays. Journal
Sensors. 12347-12360.

Rauf R, Santoso U, Suparmo. 2012. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Gambir yang

Dipurifikasi menggunakan Kromatografi Kolom Sephadex LH-20. Jurnal
Agritech. 32(2): 167–172.

Rebecca A, Matthew DH, Trevor WH. 2006. The Discovery and Development of
Cisplatin. Journal Chemical. 83: 728–724.

Ren w, Zhenhua Q, Hongwei W, Lei Z. 2003. Flavonoids: Promising Anticancer

Agents. Medical Research. 23(4): 519-534.

Riss TL, Moravec RA, Niles AL. 2011. Cytotoxicity Testing: Measuring Viable
Cells, Dead Cells, and Detecting Mechanism of Cell Death. In Mammalian
Cell Viability: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology.
Humana Press. New York.

Sangi M, Runtuwene, Skimbala, Makang. 2008. Analisis Fitokimia Tumbuhan

Obat di Kabupaten Minahasa. Chem. 1(1): 47-53.

Santoni A, Nurdin H, Manjang Y, Achmad SA. 2010. Isolasi dan Elusidasi

Struktur Triterpenoid Kulit Batang Surian (Toona sinensis) dan Uji Terhadap
Hama Crosidolomia pavonana. J. Ris. Kim. 3(2): 103-111.

Sari RK, Wasrin S, Suminar SA, Muhammad H, Yanotama TL. 2012. Anticancer
Activity and Chemical Compounds of Suren Heartwood Extract (Toona
sureni)).
J. Ilmu dan Teknologi Kayu Tropis . 10 (1).

Sastrohamidjojo H. 1991. Kromatografi. Liberty. Yogyakarta.

Segneanu AE, Gozescu I, Dabici A, Sfirloaga P, Szabadai Z. 2012. Organic
Compounds FT-IR Spectroscopy. Macro to Nano Spectroscopy. Croatia:
InTech.

Shihab MQ. 2006. Membumikan Al-Qur’an : Manfaat tumbuhan sebagai obat.

Mizan. Bandung

Silverstein RM, Webster FX, Kiemle DJ. 2005. Spectrometric Identification of

Organic Compounds. 7th Edition. John Wiley & Sons. New York. 72-108.

Sirait PS, Setyaningsih I, Tarman K. 2019. Aktivitas antikanker ekstrak Spirulina

yang dikultur pada media Walne dan media organik. Jurnal Pengolahan Hasil
Perikanan Indonesia. 22(1): 50-59.

Stahl E. 1985. Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi. Diterjemahkan

oleh Kokasih Padmawinata. ITB. Bandung.

Suryaningsih E, Sukosa B. 2009. Kupas Tuntas Kanker Payudara. Paradigma

Indonesia. Yogyakarta.

Syah MN. 2016. Dasar-dasar Penentuan Struktur Molekul Berdasarkan Data

Spektrum 1H & 13C NMR. Laboratorium Spektroskopi Massa dan NMR FMIPA
ITB. Bandung.

Thomson AJ. 2007. The Discovery, Use and Impact of Platinum as Chemotherapy
Agent for Cancer. Wellcome Trust Witnesses to Twentieth Century. Journal
Medicine. 30: 6–15.

Tjindarbumi D, Mangunkusumo R. 2002. Cancer in Indonesia, Present and Future.

Japanese Journal of Clinical Oncology. 32: S17-S21.

Utami WN, Sovia L, Lamek M. 2018. Isolation of Phenolic Compounds of

Patikan Kebo Leaves (Euphorbia Hirta. L). International Journal of Science
Technology & Engineering. 4:9.

Waji RA, Sugrani. 2009. Flavonoid (quercetin). Universitas Hasanudin. Makassar.

Wang CY, Lin KH, Yang CJ, Tsai JR, Hung JY, Wang PH. 2010. Toona sinensis
extracts Induced Cell Cycle Arrest and Apoptosis in the human lung large cell
carcinoma. J Med Sci. 26(2): 68-75.

Wang, Kai Jin, Chong RY, Ying JZ. 2006. Phenolic Antioxidants from Chinese
Toon (Fresh Young Leaves and Shoots of Toona sinensis). Food Chemistry
101(1): 365–71.

Weerapreeyakul N, Nonpunya A, Barustux S, Thitimetharoch T, Sripanidkulchai

B. 2012. Evaluation of the anticancer potential of six herbs against a hepatoma
cell line. Chinese Medical Journal. 7(15): 1-7
Wheate NJ. 2010. The Status of Platinum Anti Cancer Drugs in the Clinic and in
Clinical Trials. Journal Research. 39 (35): 8113–27.

WHO (World Health Organization). 2013. Breast Cancer: Prevention and Control.
Tersedia dari http://www.who.int. Diakses pada tanggal 15 Juli 2019.

Widorini O, Ersam T. 2014. Isolasi dan Identifikasi Senyawa 1-hidroksi-6,7-

dimetoksi-(3’,3’:2,3)-dimetilpiranosanton dari Ekstrak Metanol Kulit Batang
Garcinia cylindrocarpa. Sains Dan Seni Pomits. 1(1):1–6.

Wijaya H, Novitasari, Siti J. 2018. Perbandingan Metode Ekstraksi Terhadap

Rendemen Ekstrak Daun Rambai Laut (Sonneratia caseolaris L. Engl). Jurnal
Ilmiah Manuntung. 4(1): 79-83.

Winarno KE, Mazda R, Hindra, Winarno H. 2010. Pengaruh Iradiasi Gamma

Pada Aktivitas Sitotoksik daging Buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa).
Jurnal Sains Dan Teknologi Nuklir Indonesia. 2(2): 72.

Yang HL, Chen SC, Lin KY, Wang MT, Huang HC, Cho HJ, Wang Lai, Kumar
SKJ, Hseu YC. 2011. Antioxidant Activities of Aqueous Leaf Extracts of
Toona sinensis on Free Radical-Induced Endothelial Cell Damage. Journal of
Ethnopharmacolog. 137: 669– 680.

Zanzibar, Herdiana N. 2006. Ketepatan Beberapa Metoda Uji Cepat Dalam

Menduga Viabilitas Benih Mangium. Jurnal Penelitian Hutan Tanaman.
Departemen Kehutanan.

Zare A, Shahramyar Z, Morovvati H. 2012. Induction of Apoptosis in Human

Leukemia Cell Line (HL60) by Animal’s Venom derived Peptides (ICD-85).
Iranian Journal of Pharmaceutical Research. 11(3): 931–938.

Zhang W, Chao L, Li JY, Xiong F, Yong SC, Yu QL. 2014. Structural

Identification of Compounds from Toona Sinensis Leaves with Antioxidant
and Anticancer Activities. Journal of Functional Foods. 10: 427–35.
 LAMPIRAN

Lampiran 1. Perhitungan nilai IC50 metil galat

Kontrol Konsentrasi Absorbansi % Viabilitas

% Inhibisi
Sel Sampel Sampel sel
7,81 0,7747 103,3198 -3,95
15,63 0,7682 102,5871 -3,08
31,25 0,7228 97,4806 3,00
62,50 0,7195 97,1029 3,45
0,7452
125,00 0,6712 91,6582 9,93
250,00 0,2543 44,6567 65,88
500,00 0,1134 28,7735 84,79
1000,00 0,0328 19,6877 95,61

Metil Galat y = 0,2924x - 8,4103

R² = 0,985
70,00
60,00
50,00
40,00
Persen Inhibisi (%)

30,00
20,00
10,00
0,00
0,00
-10,00

50,00 100,00 150,00 200,00 250,00 300,00

Konsentrasi Sampel (μg/mL)

Perhitungan IC50:

y = ax + b

50 = 0,2924 x + (-8,4103)
50 + 8,4103
x=
0,2924

x = 199,76 μg/mL

57
Lampiran 2. Well plate hasil uji metil galat

Lampiran 3. Perhitungan nilai IC50 cisplatin

Kontrol Konsentrasi Absorbansi % Viabilitas

% Inhibisi
Sel Sampel Sampel sel
0,98 0,6239 99,9679 0,0374
1,95 0,6131 98,46 1,7679
3,91 0,6046 97,3137 3,1245
7,81 0,5971 96,2759 4,3316
0,6241
15,63 0,5838 94,4483 6,4573
31,25 0,4391 74,5098 29,6480
62,5 0,2548 49,1252 59,1732
125 0,2235 44,8087 64,1938
250 0,2378 46,7879 61,8918
500 0,1444 33,9119 76,8680
1000 0,1190 30,422 80,9272

Cisplastin y = 0,9657x - 1,0998 R² = 0,9979

70,0000
60,0000
50,0000
Persen Inhibisi (%)

40,0000
30,0000
20,0000
10,0000
0,0000
-10,0000 0

10 20 30 40 50 60 70
Konsentrasi Sampel (μg/mL)

58
Perhitungan IC50:

y = ax + b

50 = 0,9657 x + (-1,0998)

50 + 1,0998
x=
0,9657

x = 52,9147 μg/mL

Lampiran 4. Well plate hasil uji cisplastin

Lampiran 5. Peralatan yang digunakan dalam uji antikanker

A B C

D E

Keterangan :
(A) Microscope
(B) Centrifuge
(C) BSC
(D) Multimode Reader
(E) CO2 Incubator
 BIODATA MAHASISWA

IDENTITAS PRIBADI
Nama Lengkap : Erni Sulistiani
Tempat Tanggal Lahir : Jakarta, 07 Mei 1997
NIM 11150960000042
Anak ke : 2 dari 2
Alamat Rumah : Jl Kav Keuangan II RT 006/01 no 90 Kedaung,
....Pamulang, Tangerang, Banten.
Telp/HP : 0822-1301-3820
Email : ernislstn18@gmail.com

PENDIDIKAN FORMAL
Sekolah Dasar : SDN Kp Bulak II

Lulus Tahun 2009

Sekolah Menengah Pertama : MTsN 1 Kota Tangerang Selatan

Lulus Tahun 2012

Sekolah Menengah Atas : SMAN 1 Kota Tangerang Selatan

Lulus Tahun 2015

Perguruan Tinggi : UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

Masuk Tahun 2015

PENGALAMAN ORGANISASI
1. Dewan Eksekutif Mahasiswa
Jabatan Anggota Kemahasiswaan (2016-2017)
2. Dewan Eksekutif Mahasiwa
Jabatan Divisi Advokasi Mahasiswa (2017-2018)
 3. Himpunan Mahasiswa Kimia
Jabatan Staff Ahli Dept. Pengembangan Sumber Daya Mahasiswa (2017-
2018)
4. Dewan Eksekutif Mahasiswa
Jabatan Bendahara Umum (2018-2019)
5. Himpunan Mahasiswa Kimia
Jabatan Kepala Dept. Advokasi Mahasiswa (2018-2019)
6. Himpunan Mahasiswa Kota Tangsel
Jabatan Sekretaris Umum (2019- sekarang)

PENGALAMAN KERJA
1. Praktik Kerja Lapangan
Badan Tenaga Nuklir Nasional (BATAN)
Pusat Limbah Teknologi dan Radioaktif Tahun 2018
Judul Pengamatan Spektrofotometri Terhadap Reduksi Larutan Kromat untuk
Penentuan Kebutuhan Oksigen Kimiawi
2. Bimbel Mozaik
Pengajar Kimia (2017)
3. Freelance Of ASP Lawfirm
Data Entry (2018)
4. Relawan Demokrasi KPU Kota Tangsel
Basis Perempuan (2018 -2019)
5. Freelance Of PT. Siprama Komunindo
(2019)