BAB II

RINGKASAN BUKU

"Pemrosesan jaringan"

A. Pengantar

Penanganan spesimen jaringan yang tepat sangat penting untuk memastikan bahwa diagnosis yang
akurat diperoleh dari sampel jaringan pasien. Sementara kemajuan teknologi telah menyederhanakan
pemrosesan, langkah-langkah prinsipnya tetap sama: fiksasi, dehidrasi, pembersihan, dan infiltrasi. Bab
ini akan berfungsi sebagai panduan pasien ke ahli patologi untuk menyiapkan sampel jaringan yang
memastikan diagnosis yang akurat.

B. Pelacakan Spesimen

Untuk memastikan pelacakan spesimen yang akurat semua jaringan yang diterima di laboratorium harus
diberi pengenal unik. Biasanya, kode alfanumerik diberikan untuk setiap sampel. Kode ini mengikuti
perjalanan spesimen dari saat diterima di laboratorium hingga laporan patologi akhir. Sementara pena,
pensil, slide, dan label tahan bahan kimia telah menjadi standar, teknologi baru yang memanfaatkan
barcode, kode respons cepat (QR) dan pengenalan karakter sudah tersedia di sebagian besar
laboratorium. Sistem pra-pelabelan otomatis yang secara permanen mengetsa atau mengembos kaset
jaringan membantu mengurangi kesalahan manusia. Banyak dari sistem ini dapat melacak proses
tertentu yang memproses blok, menawarkan informasi yang lebih besar untuk tujuan audit. Jenis
akuisisi data ini juga membantu dalam mempertahankan proses LEAN.

C. Faktor Yang Mempengaruhi Pemrosesan

Ketika jaringan direndam dalam cairan, terjadi pertukaran antara cairan internal jaringan dan larutan di
sekitarnya. Tingkat pertukaran cairan, atau difusi, tergantung pada ukuran dan kepadatan jaringan serta
sifat fisik dan konsentrasi reagen pemrosesan. Beberapa faktor mempengaruhi tingkat difusi yaitu:

 Viskositas

Sebuah solusi dengan viskositas rendah memiliki molekul berukuran lebih kecil dan tingkat penetrasi
yang lebih cepat. Sebaliknya, larutan dengan molekul yang lebih besar memiliki viskositas tinggi dan nilai
tukar lebih lambat.

 Agitasi

Meningkatkan aliran larutan di sekitar jaringan. Mekanisme agitasi dalam prosesor otomatis
menggabungkan osilasi vertikal atau putar atau pemindahan bertekanan dan penggantian cairan pada
interval waktu.

 Panas
Peningkatan suhu meningkatkan pertukaran cairan dan laju penetrasi, tetapi ini harus digunakan dengan
hemat untuk mengurangi kemungkinan menghasilkan artefak panas morfologis. Paparan panas yang
berlebihan dapat menyebabkan penyusutan dan pengerasan jaringan yang berdampak negatif pada
pewarnaan dan imunohistokimia.

 Vakum & tekanan

Keduanya meningkatkan mobilitas fluida, sehingga meningkatkan laju infiltrasi dan mengurangi waktu
yang diperlukan untuk menyelesaikan setiap langkah pemrosesan. Vakum membantu menghilangkan
kantong udara di jaringan berpori, misalnya paru-paru.

 Memproses kontaminasi pelarut

Jumlah blok pada setiap proses, jenis jaringan, ukuran, frekuensi proses, penggunaan spons dan
kontaminasi silang pelarut prosesor akan mempengaruhi seberapa sering solusi harus diputar antar
stasiun atau diubah untuk menjaga kualitas pemrosesan.

D. Tahapan Pemrosesan Jaringan

 Fiksasi – mencegah autolisis dan menstabilkan jaringan untuk mempertahankan struktur
seluler.
 Dehidrasi – menghilangkan air dan fiksatif yang tidak terikat dari jaringan.
 Clearing – menggantikan larutan dehidrasi, membuat komponen jaringan dapat menerima
media infiltrasi.
 Infiltrasi – menembus jaringan dengan media pendukung.
 Embedding – orientasi sampel jaringan dalam media pendukung untuk membuat "blok"
jaringan yang cocok untuk dipotong.
1. Fiksasi

Langkah pertama dan paling kritis dalam penanganan spesimen adalah pengawetan atau fiksasi
sampel jaringan. Fiksasi mendenaturasi protein yang membuat sel dan komponennya resisten terhadap
autolisis lebih lanjut. Fiksasi lengkap juga memungkinkan jaringan untuk menahan efek negatif dari
reagen pemrosesan selanjutnya. Jaringan yang tidak difiksasi secara memadai dapat menunjukkan
fiksasi zonal karena solusi dehidrasi menyelesaikan proses fiksasi menuju bagian dalam jaringan. Hal ini
dapat mengakibatkan perubahan morfologi dan mempengaruhi karakteristik pewarnaan jaringan.
Ukuran dan jenis spesimen dalam kaset jaringan menentukan waktu yang dibutuhkan untuk fiksasi dan
pemrosesan lengkap terjadi. Jaringan harus dibedah dengan ketebalan 2-4 mm dan dipangkas menjadi
ukuran yang memungkinkan aliran reagen lengkap di sekitar jaringan dalam kaset. Idealnya jaringan
harus dipisahkan menurut ukuran dan/atau jenisnya, dan diproses menggunakan jadwal yang berbeda.
Reagen yang paling umum digunakan untuk fiksasi spesimen histologis adalah 10% neutral buffered
formalin (NBF).

o Perawatan pasca-fiksasi
Spesimen yang difiksasi dalam fiksatif alkohol harus diikuti dengan alkohol untuk mencegah masuknya
kembali air ke spesimen jaringan. Pembilasan jaringan dalam alkohol 50-70% selama 4-6 jam (Luna,
1968) akan menghilangkan fiksatif berlebih. Penghapusan lengkap warna kuning sangat penting untuk
mencegah warna mengganggu pewarnaan. Hal ini juga dapat dilakukan dengan merawat bagian jaringan
yang dipotong pada kaca objek dengan larutan karbonat encer. Beberapa tetes eosin 1% dapat
ditambahkan ke wadah spesimen 30 menit sebelum pemrosesan untuk membantu dalam
memvisualisasikan fragmen jaringan kecil selama penyisipan.

2. Dehidras

Dehidrasi menggantikan fiksatif sisa serta air seluler. Air ditemukan dalam jaringan dalam dua bentuk,
bebas dan terikat. Molekul air terikat merupakan bagian integral dari makromolekul sel. Alkohol
bergradasi digunakan dalam dehidrasi untuk menghilangkan air bebas dan menjaga air terikat pada
tempatnya. Ketika jaringan terkena panas atau waktu yang berlebihan dalam alkohol tingkat tinggi (95%
atau 100%), air terikat dihilangkan. Untuk alasan ini, spesimen paling baik diproses melalui alkohol
bergradasi dengan konsentrasi yang meningkat. Dehidrasi yang tidak sempurna akan mengganggu
penetrasi reagen pembersih ke dalam jaringan, sehingga spesimen menjadi lunak dan tidak dapat
menerima infiltrasi lilin parafin

3. Clearing

Bahan Pembersih harus dapat bercampur dengan alkohol/dehidran anhidrat sebelumnya untuk
menghilangkannya secara efektif, dan dengan lilin parafin berikutnya untuk memungkinkan infiltrasi
lengkap. Clearing yang baik akan melarutkan lipid yang dapat menghambat penetrasi lilin. Banyak
pelarut yang tidak cocok untuk pemrosesan histologi karena sifatnya yang sangat berbahaya dan/atau
keras terhadap jaringan, misalnya karbon tetraklorida dan kloroform. Kloroform tidak mengeraskan
jaringan tetapi tidak disetujui untuk digunakan pada prosesor jaringan tertutup sebelumnya karena
dapat melarutkan komponen plastik. Xilena adalah bahan pembersih yang paling banyak digunakan
dalam pemrosesan jaringan. Xilena adalah pelarut lipid yang sangat baik tetapi memiliki karakteristik
negatif dari pengeringan spesimen jaringan. Xylene "hampir tidak larut" dalam air dan karena itu mampu
menghilangkan air dari jaringan, terutama pada waktu pembersihan yang lebih lama yang dibutuhkan
untuk jaringan lemak.

4. Infiltrasi
a. Lilin Parafin

Setelah dibersihkan, bagian jaringan diinfiltrasi (diresapi) dengan lilin parafin untuk menopang jaringan,
memungkinkan bagian yang tipis untuk dipotong. Infiltrasi harus cukup untuk menggantikan pembersih
dari jaringan, jika tidak lilin tidak akan mengeras dengan baik dan mengganggu mikrotomi. Jaringan yang
tidak diinfiltrasi cukup lama akan menjadi lunak dan rapuh sehingga sulit untuk dipotong. Suhu lilin
parafin yang disematkan harus 2-4° di atas titik lelehnya. Pemanasan lilin yang berlebihan dapat
menyebabkan pengerasan dan distorsi jaringan dan bahkan kerusakan aditif parafin (misalnya polimer
resin) yang mengakibatkan kinerja yang buruk. Lilin dengan kandungan polimer yang lebih tinggi
menghasilkan matriks yang lebih keras yang akan meniru jaringan padat lebih dekat. Setelah infiltrasi
selesai, jaringan dimasukkan ke dalam blok lilin parafin untuk memungkinkan pemotongan pada
mikrotom.

Media infiltrasi alternatif

Saat lilin parafin tidak cocok digunakan pada jaringan:

 Reagen pemroses menghilangkan atau menghancurkan komponen jaringan yang menjadi objek
penelitian, misalnya lipid.
 Penggunaan panas mungkin memiliki efek buruk pada komponen jaringan, misalnya enzim.
 Bagian harus lebih tipis, misalnya mikroskop elektron.

Media infiltrasi tidak cukup keras untuk menopang jaringan, misalnya tulang yang tidak terkalsifikasi.

b. Resin

Ini digunakan secara eksklusif sebagai media embedding untuk mikroskop elektron, irisan ultra-tipis
untuk resolusi tinggi dan tulang yang tidak terkalsifikasi.

c. Agar

Gel agar saja tidak memberikan dukungan yang cukup untuk memotong jaringan. Penggunaan utamanya
adalah sebagai agen kohesif untuk potongan kecil jaringan yang rapuh setelah fiksasi, sebuah proses
yang dikenal sebagai penanaman ganda, ketika fragmen jaringan ditanamkan dalam agar yang
dilelehkan, dibiarkan mengeras dan dipangkas untuk pemrosesan rutin.

d. Gelatin

Digunakan dalam produksi potongan seluruh organ menggunakan modifikasi teknik Gough-Wentworth
(Whimster, 1969), dalam kombinasi dengan agar sebagai media pra-embedded dan dalam pemotongan
beku.

e. Celloidin

Digunakan saat memproses jaringan padat dan/atau keras. Penggunaan seloidin atau nitroselulosa
viskositas rendah (LVN) memerlukan peralatan khusus dan teknik mikrotomi non-konvensional dan tidak
cocok untuk laboratorium histologi klinis.

5. Embedding (Memblokir)

Ini adalah proses pembuatan blok jaringan dengan menggunakan media pendukung eksternal untuk
memungkinkan mikrotomi. Media penyisipan harus benar-benar kompatibel

6. Orientasi Jaringan

Kemampuan untuk melihat morfologi jaringan yang diinginkan di bagian tergantung pada penempatan
atau orientasi yang benar dari sampel di blok. Orientasi yang salah dapat merusak elemen jaringan
diagnostik selama mikrotomi atau mengaburkannya dari pandangan mikroskopis, mencegah diagnosis
yang benar. Tersedia produk yang membantu orientasi yang tepat, misalnya sistem penandaan,
pewarna tato, kantong biopsi, spons, dan kertas. Orientasi jaringan harus memberikan ketahanan
jaringan yang paling kecil terhadap pisau selama pemotongan, mis

Jaringan yang memerlukan orientasi khusus meliputi:

 Struktur tubulus, misalnya arteri, vena, tuba fallopi, dan vas deferens: penampang dinding dan
lumen harus terlihat.dengan media infiltrasi untuk mencegah pemisahan bagian jaringan dan
untuk memfasilitasi pemotongan.
 Biopsi kulit: tempelkan biopsi cukur pada tepi dan tusuk biopsi pada sisinya sehingga semua
epidermis, dermis, dan hipodermis terlihat.
 Kuku: menempel di tepi.
 Usus, kandung empedu dan jaringan epitel lainnya: arahkan sehingga permukaan epitel
dipotong terakhir, meminimalkan kompresi dan distorsi lapisan ini.
 Beberapa potongan jaringan: tempatkan berdampingan dengan permukaan epitel menghadap
ke arah yang sama.
7. Pemroses Jaringan

Pemroses jaringan terbuka adalah otomasi pertama yang menggantikan pemrosesan tangan di
laboratorium histologi. Model awal menggunakan disk jam berlekuk untuk mengontrol waktu secara
elektronik, dan agitasi terjadi dengan menaikkan dan menurunkan keranjang di dalam setiap wadah
reagen secara mekanis.

Prosesor jaringan tertutup memiliki opsi untuk menambahkan panas ke ruang untuk menghangatkan
pelarut dari stasiun mana pun, ini mempercepat difusi ke dalam jaringan pada tingkat yang lebih cepat
daripada pada suhu kamar.

Pemroses tisu microwave tidak setara dengan model dapur standar dengan siklus hidup-mati yang
panjangnya bervariasi tergantung pada waktu memasak dan pengaturan daya. Jika pemrosesan
gelombang mikro manual sedang dilakukan, perhatian besar harus diberikan untuk mencegah paparan
uap panas. Gelombang mikro memiliki batas penetrasi sehingga spesimen tidak boleh lebih tebal dari 3
mm, karena spesimen yang lebih tebal akan membutuhkan waktu yang sama dengan pemrosesan
konvensional.

Kemajuan teknologi telah mengarah pada pengembangan 'prosesor jaringan cepat input berkelanjutan'.
Prosesor tertutup ini menggunakan teknologi gelombang mikro, infiltrasi vakum, dan reagen berpemilik
yang digambarkan sebagai 'ramah molekul'. Lengan robot menggerakkan kaset jaringan melalui stasiun
yang mengandung aseton, isopropanol, polietilen glikol, minyak mineral, dan lilin parafin. Gelombang
mikro dan agitasi digunakan untuk mempercepat difusi pelarut ke dalam jaringan.

Keuntungan dari teknologi baru dalam pemrosesan

  Program khusus khusus untuk jaringan yang sedang diproses, penambahan vakum/tekanan,
agitasi atau panas pada tahap apa pun.
 Jadwal cepat.
 Penampungan cairan dan asap.
 Waktu tunda untuk memulai jadwal pemrosesan.
 Manajemen reagen dan pengurangan volume.
 Perawatan prosesor

Setiap laboratorium harus memiliki kebijakan yang menguraikan rotasi dan perubahan solusi pada
prosesor jaringan. Jumlah, ukuran dan jenis jaringan yang diproses, serta reagen yang digunakan akan
berperan dalam penentuan kebijakan ini. Solusi harus dipantau dengan cermat untuk memastikan
kualitas.

 Tips perawatan penting

 Setiap tumpahan atau luapan harus segera dibersihkan.
 Akumulasi lilin pada permukaan apapun harus dihilangkan.
 Suhu mandi lilin parafin harus dipantau setiap hari.
 Pembilasan dengan udara hangat (atau larutan yang direkomendasikan pabrik) harus dilakukan
secara teratur untuk menjaga saluran bebas dari garam, protein, dan kotoran.
8. Jadwal Pemrosesan

Tidak ada jadwal pemrosesan "standar" meskipun produsen memiliki program mereka sendiri yang
dirancang untuk berjalan secara khusus pada prosesor mereka. Perbedaan dalam jenis dan ukuran
jaringan, jumlah kaset, waktu penyelesaian yang dibutuhkan, model prosesor dan pilihan reagen
semuanya memainkan peran utama dalam menentukan jadwal pemrosesan yang optimal

Rasio waktu dalam jadwal rutin adalah 40% dehidrasi, 30% pemeliharaan, dan 30% infiltrasi. Untuk
pengolahan bebas xilena, rasionya adalah 35% dehidrasi (alkohol, campuran alkohol), 30% clearing
(isopropanol), dan 35% infiltrasi (lilin) (Rolls, 2014).

9. Pertimbangan Khusus
 Penanda prognostik dan prediktif

Munculnya pengujian molekuler dapat mengevaluasi hasil keseluruhan pasien (prognosis) atau
mengidentifikasi apakah pasien memenuhi syarat untuk terapi tertentu (prediktif), sehingga sangat
penting untuk menghasilkan jaringan dengan kualitas terbaik. Standarisasi fiksasi dan pemrosesan
jaringan telah menjadi fokus karena meningkatnya penggunaan diagnostik pendamping.

 Pemulihan jaringan kering dalam pemrosesan

Meskipun tindakan pencegahan telah diambil selama pemrosesan, malfungsi teknis atau mekanis dan
kesalahan manusia dapat terjadi, mengakibatkan jaringan mengering sebelum impregnasi lilin parafin.
Restorasi jaringan dapat dilakukan dengan menempatkan jaringan dalam larutan formol-gliserol selama
5-10 jam (Ellis, 2016). Sementara jaringan mungkin tidak ideal, ini dapat memberikan slide dengan
kualitas diagnostik yang memadai. Pemrosesan dimulai dengan larutan dehidrasi dan berlanjut hingga
selesai. Jaringan mungkin sulit untuk dipotong dan slide yang dilapisi atau berperekat harus digunakan.

 Pemrosesan ulang spesimen yang disusupi lilin parafin yang diproses dengan buruk

Lelehkan kelebihan lilin dan proses ulang secara normal, dimulai dengan fiksatif. Jaringan yang diproses
dengan benar akan dilindungi dari pemrosesan berlebih oleh sisa lilin sementara area yang kurang
diproses tetap terbuka dan akan memiliki kesempatan kedua untuk mengalami dehidrasi

E. Kontrol Kualitas

Suhu semua dispenser lilin parafin, penangas air flotasi, dan pemroses otomatis dipantau, dipelihara,
dan didokumentasikan dengan cermat. Hidrometer dapat digunakan untuk mengukur berat jenis
(kerapatan relatif) alkohol. Pembacaan ini berguna dalam menentukan jadwal rotasi.

F. Ringkasan

Kemajuan teknologi telah dibuat dalam instrumentasi prosesor jaringan, sebagian karena peningkatan
beban kerja, permintaan untuk waktu penyelesaian yang lebih cepat untuk sampel diagnostik dan
pengurangan tenaga kerja. Penambahan mikroprosesor, gelombang mikro, dan bahan kimia ramah
lingkungan hanyalah beberapa perbaikan yang terus memajukan pemrosesan