4.

3 Penyimpanan Reagen

1) Kit harus disimpan pada suhu +2 - + 8 ° C. Jangan dibekukan.

2) Potongan pelat harus digunakan dalam waktu satu bulan setelah kantong aluminium foil asli dibuka.

3) Kembalikan reagen ke suhu +2 hingga + 8 ° C segera setelah digunakan.

4) Larutan Pencucian D sebanyak 20X Konsentrat dapat disimpan pada suhu ruangan untuk menghindari
kristalisasi, karena kit disimpan dan dikirim pada suhu +2 hingga + 8 ° C.

5) Jika kristal telah diendapkan sebelum digunakan, hangatkan larutan dalam penangas air 37 ° C sampai
kristal larut.

4.4 Prosedur Pencucian Piring

1) Persiapan larutan pencuci:

Encerkan Washing Solution D (20X) Konsentrasikan dengan air suling atau de-ionisasi hingga
pengenceran 1:20.

2) Pencucian piring:

a. Untuk mesin cuci piring dengan fungsi aspirasi luapan: 6 siklus dengan setidaknya buffer pencuci
0,5ml per sumur per siklus.
b. Untuk mesin cuci piring tanpa fungsi aspirasi luapan: 8 siklus dengan setidaknya 0,35 ml buffer
pencucian per sumur per siklus

3) Keringkan dengan membalik pelat dan mengetuk dengan kuat ke kertas penyerap. Terlalu banyak sisa
penyangga pencucian akan menyebabkan hasil yang salah.

4.5 Prosedur

1) Bawa semua reagen dan spesimen ke suhu kamar (+20 hingga 30 ° C) sebelum pengujian. Sesuaikan
penangas air atau inkubator ke 37 ± 1 ° C.

2) Persiapan pengencer konjugat

1. Gunakan hanya wadah bersih untuk menghindari kontaminasi.

2. Siapkan konjugat encer dengan membuat pengenceran 1:20 Conc. HCV Ag • HRPO konjugasi dengan
pengencer konjugasi, atau setelahnya

3. Larutan konjugat encer yang berlebihan harus dibuang setelah digunakan.

3) Simpan satu lubang untuk dikosongkan. Tidak untuk mengisis specimen yang baru

4) Menyiapkan jumlah sumur yang dibutuhkan, antara lain 1 sumur untuk Blank, 3 sumur untuk Kontrol
Negatif, 2 sumur untuk Kontrol Positif, dan 1 baik untuk setiap Spesimen.

5) Contoh masukan:

 Tambahkan 100μl Kontrol Positif, Kontrol Negatif, dan spesimen ke setiap sumur Lempeng
Antigen NKT.
  Aduk rata dengan mengetuk pelat secara perlahan.

CATATAN: Gunakan ujung pipet baru setelah setiap pengambilan sampel untuk menghindari
kontaminasi silang.

6) Segel Plat dengan Slip Perekat.

7) Inkubasi pelat dalam penangas air 37 + 1 ° C atau inkubator sirkulasi selama 60 menit.

CATATAN: Jangan menumpuk pelat.

8) Di akhir masa inkubasi, lepaskan slip perekat dengan hati-hati dan buang.

9) lakukan Prosedur Pencucian Piring.

10) Tambahkan 100μl Konjugat Diencerkan di setiap sumur, kecuali yang kosong.

11) Segel pelat dengan Slip Perekat.

12) Inkubasi Plate dalam penangas air 37 ±1 ° C atau inkubator sirkulasi selama 30 menit.

13) Ulangi Langkah 8 dan 9

14) Pilih salah satu metode berikut untuk pengembangan warna:

 Campurkan konsentrat TMB Kromogenik dan Penyangga Substrat dengan volume yang sama
dalam wadah bersih segera sebelum digunakan. Menambahkan 100μl larutan campuran untuk
setiap sumur termasuk kosong.
 Tambahkan 50μl konsentrat TMB kromogenik terlebih dahulu, kemudian tambahkan 50μl
Penyangga Substrat ke dalam setiap sumur termasuk blanko. Aduk rata dengan hati-hati.

15) Segel pelat dengan Slip Perekat dan inkubasi pada suhu 37 ± 1 ° C selama 15 menit.

16) Hentikan reaksi dengan menambahkan 100μl Stop Solution ke setiap sumur termasuk blanko.

17) Tentukan absorbansi Kontrol dan spesimen uji dalam waktu 15 menit, diukur pada 450nm dengan
referensi yang dipilih panjang gelombang dalam 620 hingga 690nm.

CATATAN: Warna bidang harus tidak berwarna hingga kekuningan muda; jika tidak, hasil tes tidak valid.
Substrat; kosong menandakan nilai absorbansi harus kurang dari 0,100 OD.

4.6 Perhitungan Data yang Diuji

1) Perhitungan NCx (Rata-rata Absorbansi Kontrol Negatif).

Jumalah Nilai Absorbansi

NCx=
Banyak Sampel
2) Perhitungan PCx (Rata-rata Absorbansi Kontrol Positif)

Jumalah Nilai Absorbansi

PCx=
Banyak Sampel
3) Perhitungan Nilai P-N
P-N = PCx - NCx

Nilai P - N harus ≥ 0,400, jika tidak tes tidak valid.

4) Perhitungan Nilai Cutoff

Nilai Cutoff = NCx + 0.100

5) Hitung indeks batas spesimen

Indeks Batas= sampel Nilai OD / Nilai Cutoff

6) Zona Abu-abu: Indeks batas = 1.000 ~ 1.500

4.7) Kontrol Kualitas dari Uji Coba

1) NCx harus ≤ 0,100, jika tidak tes tidak valid.

2) PCx harus ≥ 0.600, jika tidak, pengujian tidak valid.

3) Nilai P-N harus ≥ 0,500, jika tidak tes tidak valid.

CATATAN: Kontrol Negatif: nilai absorbansi harus kurang dari atau sama dengan 0,200 setelah dikurangi
blanko.