Jurnal Farmasi dan Analisis Biomedis 191 (2020) 113582

Isi daftar tersedia di ScienceDirect

jurnal Farmasi dan Analisis

Biomedis jou rn al h omepage: www.elsevier.com/locate/jpba

pendek komunikasi

HS-SPME-GC-MS sebagai metode alternatif untuk analisis NDMA

dalam produk ranitidin
*
Yahya M. Alshehri, Thamer S. Alghamdi, Fahad S. Aldawsari
Drug Reference Laboratory, Saudi Food & Drug Authority (SFDA), 12843-7116, Riyadh, Arab Saudi

articleinfo

article history:
Diterima 9 Mei 2020
Diterima dalam bentuk revisi 17 Agustus 2020 Diterima 18 Agustus 2020
Tersedia online 21 Agustus 2020

Kata kunci:
NDMA
Cancer
FDA
TGA
Ranitidine © 2020 Elsevier BV Hak cipta dilindungi undang-undang.
SPME

Spektrometri Massa (LC-HRMS) [2]. Juga, Gas Chromatography

Mass Spectrometry (GC-MS) tampaknya digunakan oleh pihak ketiga
1. Pendahuluan Ranitidine adalah obat terkenal yang digunakan untuk
abstrak mengendalikan gangguan seperti tukak lambung, penyakit refluks
gastroesofageal (GERD), dan sindrom Zollinger-Ellison. Pada bulan
N-nitrosodimethylamine (NDMA) adalah kontaminan karsinogenik yang secara September 2019, Health Sciences Authority (HSA) di Singapura [1]
tidak sengaja ditemukan dalam obat-obatan, seperti valsartan dan ranitidine, dan
dan Badan Pengawas Obat dan Makanan Amerika Serikat (US FDA)
baru-baru ini dalam metformin. Kromatografi cair spektrometri massa tan dem
[2] menginformasikan kepada masyarakat bahwa obat ranitidine
(LC-MS/MS) adalah metode yang biasanya digunakan untuk analisis NDMA
terkontaminasi dengan pengotor N-nitrosodimethylamine (NDMA)
dalam ranitidin. Tampaknya menggunakan kromatografi gas (GC) untuk analisis
NDMA bermasalah karena ranitidine sensitif terhadap suhu tinggi. Dalam
karsinogenik. Tak lama setelah itu, banyak otoritas kesehatan
penelitian ini, kami menilai kegunaan mikroekstraksi fase padat (SPME) sebagai menanggapi kekhawatiran ini dengan menunda dan/atau menarik
metode ekstraksi dan pengenalan ke dalam GC. Saat menggunakan headspace beberapa merek dari pasar untuk analisis laboratorium. Ranitidine
(HS) dan mode injeksi cair di GC untuk analisis NDMA di ranitidine, tingkat NDMA adalah obat kedua yang dikaitkan dengan pengotor NDMA. Yang
yang lebih tinggi terdeteksi dibandingkan dengan menggunakan LC-MS/MS. pertama adalah kelompok terapi yang dikenal dengan Angiotensin II
Menariknya, menggunakan HS-SPME-GC-MS menguntungkan karena kita dapat Receptor Blockers (ARBs), yang pada 2018 dinyatakan terkontaminasi
menghindari suhu tinggi yang digunakan dalam mode injeksi cair dan HS. Selain NDMA dan nitrosamin lainnya. Tingkat NDMA yang dipublikasikan
itu, hasil yang diperoleh dengan menggunakan HS-SPME-GC-MS memberikan yang terdeteksi dalam ranitidine rata-rata lebih rendah daripada ARB,
kecocokan yang baik dengan yang dicapai dengan menggunakan LC-MS/MS. dan deteksi memerlukan penggunaan metode yang sangat akurat dan
Kelayakan penggunaan HS-SPME-GC-MS untuk berhasil menganalisis NDMA sensitif.
dalam ranitidine membuka peluang baru untuk analisis kontaminan ini dalam
Tersedia metode analisis yang diterbitkan untuk analisis NDMA di
obat-obatan, khususnya yang labil terhadap panas.
ranitidin adalah Liquid Chromatography Mass Spectrom Etry
(LC-MS)[1]dan Liquid Chromatography Resolusi Tinggi

*
Sesuai penulis di: 2501 Kabupaten Alsinaiyah, Unit Nomor 1, Riyadh, 12.843-7.116,
Saudi Arab.
Alamat email: fahad386@gmail.com (FS Aldawsari).

https://doi.org/10.1016/j.jpba.2020.113582
0731-7085/© 2020 Elsevier BV Hak cipta dilindungi undang-undang.
 laboratorium [3] untuk mendeteksi konsentrasi NDMA dalam sampel
ranitidine. Namun, FDA AS mengkritik metode ini karena menghasilkan
perkiraan tingkat NDMA yang terlalu tinggi [4]. Tampaknya suhu tinggi
yang diterapkan di GC-MS melepaskan NDMA dari ranitidine itu
sendiri, yang mungkin mengarah pada pengukuran yang tidak akurat
dari konsentrasi asli NDMA dalam sampel.
Instrumen LC-MS dan GC-MS memiliki kelebihan dan kekurangan
masing-masing. GC-MS menawarkan beberapa keunggulan penting
dibandingkan dengan LC-MS, termasuk biaya operasional yang
rendah, minimalisasi interferensi matriks, dan kegunaan dari
perpustakaan built-in [5,6]. Yang penting, GC-MS adalah pendekatan
yang lebih sering digunakan untuk pengujian volatil dan pengotor
2 YM Alshehri, TS Alghamdi dan FS Aldawsari / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 191 (2020) 113582
dalam kondisi tertentu sebelum mengelusi molekul yang diinginkan
dari serat melalui desorpsi termal atau cair [8]. Teknik SPME telah
sering digunakan untuk analisis nitrosamin dalam makanan [9],
kosmetik [10], dan lingkungan [11]. Tampaknya aplikasi SPME dalam
analisis farmasi tidak seluas aplikasi lain, seperti dalam makanan dan
lingkungan. Namun demikian, beberapa pengotor dalam obat-obatan
telah dieksplorasi menggunakan SPME, seperti sulfonat [12], pelarut
sisa [6], dan paraben [13]. Teknik SPME memiliki banyak keunggulan,
seperti penggunaan pelarut hijau (air), waktu ekstraksi sampel yang
minimal, dan potensi otomatisasi untuk teknik ini.
Karena berbagai keuntungan SPME, kami didorong untuk menguji
apakah teknik ini mungkin menawarkan strategi alternatif untuk analisis
NDMA dalam sampel ranitidin, karena SPME menggunakan suhu yang
lebih rendah dibandingkan dengan GC-MS injeksi cair biasa. Dalam
makalah ini, kami melaporkan analisis sampel ranitidin menggunakan
HS-SPME-GC-MS sebagai metode tambahan untuk teknik LC yang
ada. Kami mendemonstrasikan, untuk pertama kalinya, bukti konsep
kelayakan dan sensitivitas SPME untuk analisis nitrosamin dalam
obat-obatan. Selanjutnya, kami membandingkan hasil yang diperoleh
dari LC-MS dengan HS-SPME-GC-MS, yang menunjukkan
komparabilitas tinggi antara teknik-teknik tersebut untuk analisis NDMA
dalam obat ranitidin.
2. Bahan dan Metode
2.1. Reagen
standar NDMA (99,9%) disediakan dari bahan kimia Alinda
(Moskow, Rusia), sedangkan natrium klorida (NaCl), asam format, dan
dimetilsulfoksida (DMSO) (99,7%) dibeli dari Merck (Darmstadt,
Jerman), dan air (HPLC grade), metanol (HPLC Grade, 99,9%) dan
diklorometana dipasok oleh VWR (Fontenay-sous-Bois, Prancis). Botol
headspace (20 mL) dan tutup SPME magnet dibeli dari Restek
(Bellefonte PA, USA), filter nilon berasal dari ISOLAB Laborgeräte
GmbH (Eschau, Jerman), jarum suntik dari Great Mountain Medical
Instruments (London, Inggris), dan mekanik shaker berasal dari VWR
(Fontenay-sous Bois, Prancis). Semua sampel ranitidin dikumpulkan
dari pasar lokal Arab Saudi untuk penentuan dan kuantifikasi
nitrosamin.
2.2. Preparasi sampel
NDMA dan ranitidin ditangani dengan hati-hati karena yang
pertama bersifat car cinogenic sedangkan yang kedua sensitif
terhadap cahaya. Untuk analisis NDMA menggunakan LC-MS/MS,
metode yang diusulkan oleh FDA AS diimplementasikan [4]. Secara
singkat, sampel ranitidin setara dengan 30 mg/mL disiapkan dalam
campuran metanol:air (80:20), kemudian dikocok dan ditempatkan ke
dalam centrifuge pada 4000 putaran per menit (rpm). Supernatan
kemudian diambil dan disaring. Lima mikroliter dari supernatan bening
disuntikkan ke dalam instrumen.
Untuk metode injeksi cairan GC, metode yang diusulkan oleh FDA
semi-volatil dalam produk farmasi [7]. Secara praktis, metode umum
untuk ekstraksi sampel dan pengenalan ke dalam instrumen GC-MS
adalah headspace (HS) dan injeksi cair. Faktanya, kedua metode
tersebut digunakan untuk analisis nitrosamin pada ARB yang
menggunakan GC-MS. Memang, teknik ini telah dicoba pertama kali
selama analisis ranitidin. Saat menggunakan GC-MS dalam keadaan
ini, teknik yang diterapkan tidak memberikan hasil yang memuaskan;
karenanya, upaya bergeser ke arah LC-MS.
Solid Phase Microextraction (SPME) adalah teknik yang digunakan
untuk ekstraksi molekul volatil atau semi-volatil pada serat yang
dilekatkan pada jarum. Jarum direndam dalam larutan sampel
AS [14] diadaptasi di mana diklorometana (DCM) digunakan sebagai
pengencer. Secara singkat, sampel ranitidin setara dengan 100 mg/mL
Bahan Farmasi Aktif (API) ditempatkan ke dalam tabung centrifuge
15-mL sekali pakai dengan 5 mL pelarut dan divortex sampai bubuk
terdispersi ke dalam larutan. Kemudian, sampel disentrifugasi pada
4000 rpm selama 2,5 menit, dan sekitar 2 mL lapisan organik
supernatan dipindahkan ke jarum suntik 5 mL yang dilengkapi dengan
filter Nylon 0,45 m. Akhirnya, sekitar 0,5 mL sampel dipindahkan ke
dalam botol HPLC 2 mL, ditutup, dan 2 L disuntikkan ke dalam
instrumen GC-MS. Kurva kalibrasi NDMA dibuat menggunakan
konsentrasi 5, 10, 20, 40, 80, dan 100 g/L.
Untuk metode headspace, metode berbeda yang dijelaskan oleh
FDA AS [15] telah diadaptasi. Secara singkat, sampel ranitidine setara
dengan 100 mg / mL API ditempatkan ke ruang atas sebuah botol
berisi 5 mL DMSO, capped, dan kemudian dikocok selama 30 menit
sebelum ditempatkan ke dalam auto-sampler (diinkubasi pada 120 ◦C
selama 15 menit sebelum analisis GC-MS).
Untuk metode SPME, pengencer (air deionisasi) yang terdiri dari 7
mL NaCl 36% ditambahkan ke dalam vial headspace. Sampel ranitidin
ditambahkan ke dalam vial yang setara dengan 300 mgAPI, kemudian
ditutup dan dikocok pada 500 rpm selama 1 jam. Kemudian, sampel
ditempatkan ke dalam rak auto-sampler untuk dianalisis. Untuk
kalibrasi standar, lima level digunakan (5, 10, 20, 50, dan 100 g/L),
yang disiapkan dalam air yang mengandung 36% NaCl sebagai
pengencer. Solusi kerja untuk kalibrasi dan spiking disiapkan dengan
pengenceran dalam metanol. Sampel kontrol kualitas (QC) disiapkan
dengan spiking NDMA pada dua konsentrasi (5 dan 15 g/L) ke dalam
matriks sampel kosong dan disejajarkan dalam urutan sampel. Standar
NDMA QC lain yang disiapkan dalam pengencer pada konsentrasi 20
g/L juga ditambahkan ke urutan sampel.
2.3. LC–MS/MS
2.3.1. LC
Alat kromatografi cair dari Agilent (Santa Clara, Amerika Serikat),
Q-trap 6500 Mass spectrometer dari AB-Sciex (Framingham, Amerika
Serikat), dan kolom C18 (Phe nomenex, Torrance, Amerika Serikat)
digunakan dengan dimensi 50 mm, 4,6 mm, dan 3 m.
Fase gerak terdiri dari: A, 0,1% asam format dalam air; dan B, 0,1%
asam format dalam metanol. Elusi gradien dilakukan pada laju alir 0,6
mL/menit, sedangkan volume injeksi adalah 5 L. Program gradien
ditetapkan sebagai berikut: 5% B dari nol hingga 1 menit, kemudian
20% B pada 3 menit, diikuti oleh 100 % B pada 7 menit. Setelah itu,
100% B dipertahankan selama 9 menit. Akhirnya, B dikurangi menjadi
5% pada 9,1 menit, dan proses berakhir pada 14 menit.
2.3.2. Parameter massa
Sumber ion adalah Atmospheric Pressure Chemical Ionization
(APCI), dalam mode positif, 75,0 m/z adalah ion prekursor, sedangkan
ion produk adalah 43,0 dan 58,0 m/z pada nilai energi tumbukan (CE)
21 dan 16, masing-masing. Tekanan gas tirai 20 psi, gas tabrakan
adalah nitrogen, nebulizer saat ini (NC) adalah 5,0 mA, ion Sumber
Gas 1 (GS1) itu 40,0 psi, dan suhu ditetapkan pada 400 ◦C.

2.4. HS-SPME GC–MS
NDMA dianalisis oleh Shimadzu GC–MS/MS model TQ8050
(Kyoto, Jepang), dilengkapi dengan PAL AOC 6000 Autosampler untuk
injeksi SPME yang beroperasi dalam ionisasi tumbukan elektron (EI)
(70 eV). Kolom tersebut adalah DB WAX (Santa Clara, Amerika
Serikat) dengan dimensi 0,5 m, 30 m, dan diameter 0,25 mm.
2.4.1. SPME parameter
YM Alshehri, TS Alghamdi dan FS Aldawsari / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 191 (2020) 113582 3
Tabel 1
Daftar sampel ranitidin dan konsentrasi NDMA terukur menggunakan metode
FDALC-MS/MS AS yang dipublikasikan. Konsentrasi NDMA adalah rata-ratarangkap tiga
yang
pengukuran. 1ND: tidak terdeteksi menurut g/g)
batas deteksi 0,3 g/L (setara dengan 9 g/kg).
Ranitidine Merk NDMA conc. oleh
Formulasi Merek Ranitidine NDMA conc. ( LC-MS/MS ( g/g)
I Tablet 0,18 II Tablet 0,24 III Ampul 0,04 IV Tablet Dilapisi Film ND1
V Tablet 0,22 VI Ampul 0,01 VII Ampul ND
VIII Effervescent Butiran ND IX Tablet 0,72X Film-Coated Tablet ND
XI Tablet 0,17 Tablet XII Film-Coated 0,15 XIII Tablet 0,03 XIV Tablet
0,36
ditetapkan pada 220 ◦pascaC. Akhirnya, serat itu -dikondisikan selama
5 menit dalam saluran masuk GC sebelum injeksi berikutnya.
2.4.2. Parameter GC
Kami menggunakan kolom oven suhu 70 ◦C, injeksi marah K
arakteristik dari 220 ◦C, mode split injeksi, dan bertekanan mode
kontrol aliran. Tekanan ditetapkan pada 181,5 kpa, aliran total 21,0
mL/menit, dan aliran kolom 3,0 mL/menit, dan kami menggunakan
kecepatan linier 63,5 cm/s, aliran pembersihan 3,0 mL/menit, dan
pemisahan rasio 5.0. Oven itu diprogram untuk 70 ◦C selama 4 menit,
kemudian 20 ◦C / min sampai dengan 230 ◦C, dan kemudian ditahan
selama 4 menit.
2.4.3. Parameter massa spektrometri
Suhu sumber ion adalah 230 ◦C, antarmuka tempera ture adalah
230 ◦C, waktu cut pelarut 6,5 menit, keuntungan detektor ditetapkan
pada 0,3 kv, modus deteksi Q3 sebagai ion tunggal pemantauan (SIM)
, segmen adalah 6,5-7,5 menit, dan ion dipilih sebagai 74,0 m/z
(pengukur) dan 42,0 m/z (kualifikasi) untuk NDMA.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1. LC-MS/MS
Otoritas pengatur internasional baru-baru ini memperingatkan
masyarakat akan adanya pengotor NDMA dalam produk ranitidine.
Badan-badan seperti FDA AS [2] dan HSA Singapura [1] adalah
pemimpin dalam panggilan ini. HSA merilis metode analisis NDMAin
ranitidine menggunakan LC-MS/MS, yang memiliki batas deteksi
(LOD) 4,5 g/L [1]. Selain itu, FDA AS merilis dua metode [2,4] untuk
analisis ranitidin menggunakan LC-HRMS dan LC-MS/MS dengan
LOD masing-masing 0,32 dan 0,3 g/L. Perlu dicatat bahwa metode
HSA menggunakan standar internal (NDMA-d6), sedangkan metode
FDA AS tidak. Standar internal umumnya ditambahkan selama
prosedur analitis untuk menghindari tantangan seperti kehilangan
analit dan efek matriks [16]. Namun, menggunakan standar internal
memiliki beberapa kelemahan, seperti biaya tinggi (terutama standar
terdeuterasi) dan potensi kerentanan terhadap pertukaran ion [17].
FDA AS telah dianalisis NDMA di ranitidine tanpa menggunakan
Serat yang digunakan adalah 85 m Poly Akrilat (PA) dari PAL
Systems (Zwingen, Swiss) .Initially, thefiber dikondisikan di pelabuhan
injeksi pada suhu 220 ◦C, dan penyejuk waktu 10 menit. Untuk
merangsang ekstraksi NDMA, botol berisi sampel ditempatkan ke
dalam pemanas / agitator ditetapkan sebelumnya pada kecepatan 600
rpm dan suhu inkubasi 45 ◦C. Simul simultan, serat menembus botol
pada kedalaman 22 mm, untuk durasi 45 menit (pada kondisi yang
ditentukan). Setelah ekstraksi NDMA, serat diinjeksikan ke inlet GC
pada kedalaman 54 mm selama 2 menit, sedangkan suhu desorpsi
Tabel 2
hasil analisis NDMAdiperoleh untuk merek ranitidin terpilih dan perbandingan antara
ketiga teknik tersebut. 1NT: tidak diuji. 2ND: tidak terdeteksi.
GC-MS ( g/g)
NDMA conc. dengan injeksi cair GC-MS (
g/g)
NDMA conc. by headspace
NDMA d6;namun, mereka menerapkan kriteria ketat terkait parameter
kesesuaian sistem. Dalam penelitian ini, kami menganalisis empat
belas sampel ranitidin menggunakan metode FDA AS yang diterbitkan
menggunakan instrumen LC-MS/MS. Kurva kalibrasi menggunakan
konsentrasi NDMA 1–100 g/L mengungkapkan bahwa metode ini
mampu mendeteksi dan mengukur NDMA pada LOD 0,3 g/L dan
Batas Kuantitas (LOQ) 1 g/L. Hasil yang diperoleh untuk analisis
NDMA menggunakan LC-MS/MS tercantum pada Tabel 1. Dapat
dicatat bahwa sampel yang terkandung bervariasi
I 0,18 5,77 NT1 II 0,24 4,6 NT1 III 0.04 3.13 34.1 IV ND2 2.99 6.21 IX
0.72 3.58 21.5
Tabel 3
Pemeriksaan sistem HS-SPME-GC dengan menganalisis sampel untuk kontrol kualitas
dan menilai stabilitas instrumen. QC1 dan QC2 adalah sampel ranitidin bebas NDMA
yang dibubuhi NDMA pada konsentrasi masing-masing 5 dan 15 g/L. Pemeriksaan
Standar adalah pengencer blanko dengan NaCl yang dibubuhi NDMA pada 20 g/L untuk
memantau penyimpangan sistem dan untuk memeriksa kalibrasi.
QC1 (5 g/L) QC2 (15 g/L) Pemeriksaan Standar (20 g/L)
1 3,46 14,04 21,6
2 4,72 13,7 20,29
3 5,6 14,38 19,11
4 4,58 14,79 20,99
Rata-rata 4,59 14,23 20,5
SD 0,88 0,47 1,07
RSD 19,13 3,28 5,21
ing jumlah pengotor NDMA, dengan empat merek menunjukkan nilai di
bawah batas deteksi.
3.2. Headspace dan injeksi cair GC-MS
Komentar FDA AS tentang estimasi GC yang tidak akurat dari
NDMA dalam ranitidine memotivasi kami untuk menyelidiki lebih lanjut
masalah ini dan mencoba mengidentifikasi solusi. Kami menguji teknik
injeksi cairan dan headspace untuk analisis ranitidin menggunakan
GC-MS, dan untuk tujuan itu, kami telah memilih lima sampel ranitidin.
Hasil uji coba ini ditunjukkan pada Tabel 2. Menggunakan mode injeksi
cair, dapat diamati bahwa tingkat NDMA meningkat dibandingkan
dengan hasil LC-MS/MS. Selain itu, sampel IV menunjukkan sekitar 3
ppm (yaitu, 3 g/g) NDMA meskipun menunjukkan tingkat yang tidak
terdeteksi menggunakan LC-MS/MS. Di sisi lain, menggunakan mode
headspace, hasilnya bahkan lebih buruk. Bahkan, itu menggeser nilai
NDMA dari g/kg ke g/g (Tabel 2), dan menyebabkan detektor menjadi
jenuh untuk beberapa sampel (data tidak ditampilkan).
Pengamatan bahwa NDMA meningkat pada suhu tinggi mungkin
mendukung teori bahwa NDMA entah bagaimana berasal dari raniti
 makan dan bukan pengotor bawaan, yang merupakan skenario yang
diusulkan untuk ARB. Untuk melengkapi temuan ini, kami menguji
sampel referensi raniti makan otentik yang disediakan oleh United
States Pharmacopeia (USP). Memang, kami mengidentifikasi sinyal
NDMA dalam sampel yang mungkin murni ini (data tidak ditampilkan).
Menariknya, penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa suhu
setinggi 100 ◦C dapat menyebabkan ranitidin untuk mendegradasi oleh
setidaknya 30% dengan produksi ucts byprod tidak
diketahui[18].Pertanyaan apakah NDMA merupakan produk degradasi
ranitidin potensial pada suhu tinggi perlu dieksplorasi. Untuk itu, kami
meninggalkan pendekatan ini dan mulai menyelidiki kemungkinan
4 YM Alshehri, TS Alghamdi dan FS Aldawsari / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 191 (2020) 113582
1. Kromatogram NDMA (0,83 g/g) ditemukan dalam sampel ranitidine IX menggunakan metode SPME.
bagian bahan dan metode dipilih. Mengenai pemilihan serat, banyak
jenis serat yang telah digunakan untuk deteksi NDMA, seperti
polidimetilsiloksan (PDMS) [10], divinilbenzena (DVB) [11], poliakrilat
(PA) [19], dan karboksen (CAR) [10] . Dalam kebanyakan penelitian,
beberapa nitrosamin sedang diselidiki, dan akibatnya, pilihan serat
diatur oleh karakteristik fisikokimia keseluruhan untuk nitrosamin total
menggunakan SPME.
3.3. HS-SPME-GC-MS
3.3.1. Optimalisasi metode
Awalnya, kami telah meninjau penelitian sebelumnya yang
melaporkan deteksi nitrosamin menggunakan teknik SPME untuk
mengatur kondisi analisis ranitidin. Setelah menganalisis laporan
tersebut dan memperkirakan potensi kondisi optimal untuk mendeteksi
NDMA dalam sampel farmasi, kondisi yang dijelaskan dalam
Gambar
dan sensitivitas serat yang dipilih. Untungnya, untuk tujuan kami
menilai nitrosamin tunggal (yaitu, NDMA), serat yang sering digunakan
untuk nitrosamin khusus ini adalah PDMS dan PA. Kami memilih PA
karena dua alasan: pertama, serat ini telah digunakan untuk mengukur
NDMA dalam sampel air dan menunjukkan sensitivitas yang baik [19];
dan kedua, rekomendasi pabrikan menyatakan bahwa serat PA adalah
pilihan yang baik untuk molekul semi-volatil polar dengan berat
molekul sekitar 80–300 g/mol, karakteristik yang diterapkan pada
NDMA. Kondisi
penyerapan yang ditetapkan dalam metode saat ini telah digunakan
oleh banyak penelitian, terutama penelitian yang menggunakan
sampel yang relatif mirip dalam matriks sampel dengan tablet farmasi
[19]. Kami telah menggunakan suhu inkubasi 45 ◦C sebagai suhu ini
sebelumnya digunakan untuk mengekstrak NDMA dalam sampel ous
aque[19]dan, yang lebih penting, untuk mengekspos ranitidine ke suhu
serendah mungkin. Mengenai waktu dan kecepatan pengadukan, kami
YM Alshehri, TS Alghamdi dan FS Aldawsari / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 191 (2020) 113582 5
NDMA terukur pada sampel ranitidine menggunakan LC–MS /MS dan teknik HS-SPME-GC-MS.
penelitian sebelumnya (220 dan 250 ◦C) .Kami dievaluasi baik suhu
dan menemukan bahwa pada 250 ◦C, puncak NDMA memiliki kerugian
sekitar 10% dari intensitas puncak dibandingkan dengan puncak yang
sama pada 220 ◦C. Akibatnya, kita mengatur kami kondisi pada 220 ◦C
sebagai suhu desorpsi.
3.3.2. Penilaian kinerja metode
Kurva kalibrasi menggunakan metode saat ini menggunakan
konsentrasi NDMA 5–100 g/L dan menghasilkan koefisien korelasi (r)
sebesar 0,998. RSD adalah 20% untuk konsentrasi 5 g/L, sedangkan
di bawah 3% untuk konsentrasi yang lebih tinggi. Kami berusaha
mengidentifikasi konsentrasi terendah yang harus dicapai dalam
kondisi eksperimental saat ini. Konsentrasi NDMA terendah yang
terdeteksi adalah 1 g/L pada rasio Signal to Noise (S/N) 3, sedangkan
LOQ adalah 5 g/L pada (S/N) >10. Deteksi tingkat tinggi yang nyata
untuk HS-SPME-GC MS ini menyediakan platform untuk aplikasi
potensial untuk mendeteksi NDMA dalam obat-obatan. Selanjutnya,
kami melakukan pemeriksaan sistem dengan menguji sampel kontrol
kualitas pada 5 dan 15 g/L. Selain itu, kami menganalisis konsentrasi
NDMA 20 g/L (dalam pengencer) untuk menilai pemeriksaan standar
karena kriteria ini disarankan oleh United States Pharma copeia (USP).
Hasil penilaian ini dilaporkan pada Tabel 3. Tabel 3 menunjukkan
bahwa nilai yang diperoleh menjanjikan dan memberikan bukti bahwa
metode SPME mampu mendeteksi NDMA dalam matriks farmasi
secara efisien.
3.3.3. Analisis sampel ranitidin
Gambar 1 menunjukkan kromatogram representatif yang diperoleh
dengan menggunakan metode SPME saat ini untuk analisis ranitidin.
Semua sampel raniti makan yang diuji dengan LC-MS/MS dianalisis
ulang dengan metode HS-SPME-GC-MS yang sedang diselidiki. Hasil
percobaan ini ditunjukkan pada Gambar. 2. Dapat diperhatikan bahwa
ada kesepakatan yang baik secara keseluruhan antara hasil untuk
HS-SPME-GC-MS dan LC-MS/MS. Memang, sampel positif positif
menggunakan kedua teknik, sedangkan sampel negatif (yaitu, di
mengevaluasi 30 menit pada 450 rpm dan 45 menit pada 600 rpm.
Hasil yang diperoleh serupa untuk kedua kasus; namun, kami
memutuskan untuk memilih 45 menit pada 600 rpm karena kondisi ini
kemungkinan akan memastikan disintegrasi sampel yang lengkap.
Mengenai proses desorpsi, parameter utama adalah waktu dan
suhu. Waktu ditetapkan pada 2 menit, karena waktu ini
direkomendasikan dalam penelitian sebelumnya sesingkat mungkin
[11]. Selanjutnya, mengenai suhu, dua suhu digunakan oleh
Gambar 2. Perbandingan kadar
bawah deteksi) negatif bila menggunakan salah satu teknik. Secara
khusus, sampel VI menghasilkan kecocokan yang sangat baik (101%)
antara dua instrumen untuk analisis NDMA. Ini mungkin dikaitkan
dengan sifat sampel (ampul IV), di mana ia langsung disuntikkan ke
dalam LC-MS/MS tanpa proses ekstraksi. Demikian juga, dengan
menggunakan SPME otomatis di GC, kami dapat memperoleh hasil
yang sebanding.
Gambar. 2 menunjukkan bahwa sampel yang menggunakan
HS-SPME-GC-MS sering menunjukkan NDMA yang sedikit lebih tinggi
daripada yang dianalisis dengan LC-MS/MS. Pengamatan terakhir
mungkin mengarah pada kecurigaan bahwa HS-SPME GC-MS
mungkin dapat mengganggu ranitidine itu sendiri dan menghasilkan
NDMA, sehingga akan menyebabkan perkiraan pengotor ini terlalu
tinggi. Namun, poin terakhir dapat dikesampingkan dengan menyadari
bahwa sampel negatif menggunakan LC-MS/MS masih menghasilkan
NDMA negatif dengan menggunakan teknik HS-SPME-GC-MS (yaitu
merek IV, VII, VIII dan X). Faktanya, poin terakhir dapat mendukung
efisiensi dan sensitivitas teknik ini untuk menilai konsentrasi nitrosamin
dengan lebih baik sambil menghindari hasil positif palsu. Sementara
hasil yang diperoleh dengan menggunakan metode saat ini
memerlukan validasi penuh, teknik SPME sebagai ekstraksi sampel
dan mekanisme pengenalan di GC terbukti efektif dalam
menghilangkan suhu tinggi, yang jelas merupakan hambatan dalam
menganalisis obat yang tidak tahan panas seperti ranitidin.
Topik kontaminasi nitrosamin dalam obat-obatan adalah risiko yang
muncul dalam farmasi. Memang, badan pengatur, seperti European
Medicines Agency (EMA), sudah mulai menyaring obat-obatan yang
dicurigai dengan meminta informasi lebih lanjut dari produsen, seperti
laporan penilaian risiko manufaktur. Faktanya, publikasi baru-baru ini
menyebutkan bahwa, selain tiga obat yang dikenal, setidaknya 60 obat
yang digunakan secara klinis mungkin mengandung atau terdegradasi
menjadi nitrosamin [20]. Setelah metode saat ini sepenuhnya
dioptimalkan dan divalidasi, API lain kemungkinan akan menemukan
beberapa aplikasi yang berguna untuk pendekatan ini.
 selain proses preparasi dan ekstraksi yang minimum. Kami percaya
bahwa teknik ini memiliki potensi untuk menganalisis NDMA dan
mungkin pengotor nitrosamin lainnya dalam produk farmasi.
4. Kesimpulan

Analisis NDMA dalam produk ranitidin hanya tersedia melalui

LC-MS/MS. Injeksi cairan tradisional dan GC headspace telah Pernyataan kontribusi kepenulisan CRedit
menyebabkan overestimasi pengotor ini karena ranitidine sensitif
terhadap panas. Di sini kami memberikan bukti konsep penggunaan Yahya M. Alshehri: Metodologi, Konseptualisasi, Penulisan - draf
SPME sebagai strategi unggulan untuk mengatasi masalah suhu asli. Thamer S. Alghamdi: Validasi, Investigasi, Metodologi. Fahad S.
dalam analisis ranitidine karena teknik ini menggunakan suhu rendah, Aldawsari: Penulisan - draft asli, Penulisan - review & editing.
6 YM Alshehri, TS Alghamdi dan FS Aldawsari / Jurnal Analisis Farmasi dan Biomedis 191 (2020) 113582
[15] Uji Pengotor Gabungan N-Nitrosodimethylamine (NDMA) dan
N-Nitrosodiethylamine (NDEA) oleh GC/MS-Headspace, 2020 (Diakses 19
Deklarasi Minat Bersaing November 2019) https://www.fda.gov/drugs/drug-safety-and
-availability/fda-updates
Penulis melaporkan tidak ada pernyataan minat. dan-press-announcements-angiotensin-ii-receptor-blocker-arb-recalls
valsartan-losartan.
[16] M. Alzweiri, M. Khanfar, Y. Al-Hiari, Variasi dalam respon GC-MS antara analit dan
Ucapan Terima Kasih analog deuterated, Chromatographia 78 (2015) 251–258. [17] LJ Owen, BG Keevil,
Pengukuran testosteron dengan kromatografi cair
Kami ingin mengucapkan terima kasih kepada Dr. Ibrahim Alhaider spektrometri massa tandem: pentingnya pilihan standar internal, Ann. klinik
Biokimia. 49 (2012) 600–602.
karena telah merevisi teks dan memberikan umpan balik untuk
[18] S. Ahmed, SR Elshaboury, NA Mohamed, S. Farrag, Pengembangan
meningkatkan keterbacaan artikel. Penelitian ini tidak menerima hibah metode uji yang menunjukkan stabilitas komparatif yang divalidasi untuk
khusus dari lembaga pendanaan di sektor publik, komersial, atau beberapa antagonis reseptor H2, J. Chromatogr. Sci. 55 (2017) 818–831.
nirlaba. [19] JE Grebel, CC Young, IH Suffet, fase padat mikroekstraksi
N-nitrosamin, J. Chromatogr. A 1117 (2006) 11–18.
[20] MK Parr, JF Joseph, pengotor NDMA dalam valsartan dan produk farmasi lainnya:
Referensi metode analisis untuk penentuan N-nitrosamine, J. Pharm. Bioma. dubur. 164
(2019) 536–549.
[1] Penentuan NDMA dalam Produk Ranitidine oleh LCMS/MS, 2020 (Diakses 12
November 2019)
https://www.hsa.gov.sg/announcements/safety-alert/updates-on-impurities-in-raniti
dine- produk.
[2] Metode Kromatografi Cair-High Resolution Mass Spectrometry (LC-HRMS) untuk
Penentuan NDMA Pada Bahan Obat dan Produk Obat Ranitidine, 2020 (Diakses 2
November 2019) https://www.fda.gov/drugs/ drug-
keamanan-dan-ketersediaan/fda-updates-and-press-announcements-ndma
zantac-ranitidine.
[3] FDA Menyebut Tingkat Karsinogen Zantac Generik "tidak dapat diterima", tetapi
Menolak Klaim Lab, 2020 (Diakses 29 November 2019) https://www.
biopharmadive.com/news/fda-valisure-generic-zantac-unacceptable-ndma
carcinogen-levels/564295/.
[4] Metode Kromatografi Cair-Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS) Metode
Penentuan NDMA Pada Bahan Obat Ranitidine dan Produk Obat Dosis Padat,
2020 (Diakses 24 Oktober 2019) https://www.fda.gov/drugs /
obat-keamanan-dan-ketersediaan/laboratorium-tes-ranitidine.
[5] EA McGaw, KW Phinney, MS Lowenthal, Perbandingan platform spektrometri
massa kromatografi cair dan gas ortogonal untuk penentuan konsentrasi asam
amino dalam plasma manusia, J. Chromatogr. A 1217 (2010) 5822–5831.
[6] C. Camarasu, C. Madichie, R. Williams, Kemajuan terbaru dalam penentuan
pengotor yang mudah menguap dalam obat-obatan, TrAC-Trends Anal. Kimia 25
(2006) 768–777.
[7] F. Qiu, DL Norwood, Identifikasi pengotor farmasi, J. Liq. Kromatografi
Relasi. teknologi. 30 (2007) 877–935.
[8] J. Pawliszyn, S. Pedersen-Bjergaard, mikroekstraksi analitis: status saat ini dan tren
masa depan, J. Chromatogr. Sci. 44 (2006) 291–307.
[9] J. Roasa, H. Liu, S. Shao, Metode HS-SPME-GC-MS yang dioptimalkan untuk
mendeteksi nitrosamin yang mudah menguap dalam sampel daging, Food Addit.
Konta. Bagian A Kimia. dubur. Kontrol Ekspo. Penilaian Risiko. 36 (2019)
396–404.
[10] NR Choi, YP Kim, WH Ji, GS Hwang, YG Ahn, Identifikasi dan kuantifikasi tujuh
volatil n-nitrosamine dalam kosmetik menggunakan kromatografi gas / kimia
spektrometri ionisasi massa ditambah dengan kepala microextraction fase-ruang
padat, Talanta 148 ( 2016) 69–74.
[11] A. Llop, F. Borrull, E. Pocurull, Penentuan otomatis N-nitrosamines di perairan
lingkungan dengan microextraction fase padat headspace diikuti oleh
GC-MS-MS, J. Sep. Sci. 33 (2010) 3692–3700.
[12] I. Colon, SM Richoll, Penentuan metil dan etil ester asam metanasulfonat,
benzenasulfonat, dan p-toluenasulfonat dalam bahan aktif farmasi dengan
ekstraksi mikro fase padat (SPME) yang digabungkan dengan GC/SIM-MS, J.
Pharm. Bioma. dubur. 39 (2005) 477–485.
[13] JK Lokhnauth, NH Snow, Penentuan paraben dalam formulasi farmasi dengan
spektrometri mobilitas ion mikroekstraksi fase padat, Anal. Kimia 77 (2005)
5938–5946.
[14] Injeksi Langsung Gabungan N-Nitrosodimethylamine (NDMA),
N-Nitrosodiethylamine (NDEA), N-Nitrosoethylisopropylamine (NEIPA),
N-Nitrosodiisopropylamine (NDIPA), dan N-Nitrosodibutylamine (NDBA) Uji
Pengotor oleh GC-MS/MS, 2020 (Diakses 7 November 2019)
https://www.fda.gov/drugs/drug-safety-and-availability/fda-updates-and-press
notices-angiotensin-ii-receptor-blocker-arb-recalls-valsartan losartan.