IMMUTREP‚ TPHA Ref OD221/OD071/OD081

Tes hemaglutinasi treponema pallidum untuk Serodiagnosis Sifilis.

Simpan di 2 C sampai 8 C. JANGAN BEKU. Hanya untuk penggunaan diagnostik in-vitro.

PENDAHULUAN DAN PENGGUNAAN

Sifilis adalah penyakit kompleks yang biasanya ditularkan secara seksual. Organisme penyebab,
Treponema pallidum tidak dapat ditanam pada media kultur laboratorium konvensional atau pada
kultur jaringan. Infeksi biasanya didiagnosis dengan mendeteksi antibodi yang spesifik untuk T. pallidum
dalam serum atau CSF pasien. Antibodi dapat terdeteksi sekitar 3-4 minggu setelah terpapar, dan
mungkin tetap pada tingkat yang dapat dideteksi untuk waktu yang lama setelah perawatan. Dua
kelompok antibodi terbentuk: satu bereaksi dengan antigen non-treponemal yang digunakan dalam uji
VDRL / Carbon Antigen dan RPR, dan yang lainnya bereaksi dengan antigen spesifik dari T. palidum.
Antibodi terhadap non-treponemal antigen ditemukan (biasanya) pada penyakit aktif dan kadarnya
mereda setelah pengobatan berhasil. Spesifik antibodi bertahan lama setelah infeksi berhasil diobati.
Kedua kelompok antibodi perlu diuji karena antibodi non-treponemal dapat timbul karena alasan selain
infeksi sifilis. IMMUTREP TPHA adalah tes hemaglutinasi pasif yang spesifik dan sensitif untuk
mendeteksi antibodi terhadap Treponema pallidum dalam serum atau CSF.

PRINSIP PENGUJIAN
IMMUTREP TPHA terdiri dari eritrosit unggas kecokelatan formal peka T. pallidum; eritrosit unggas
kecokelatan formal yang tidak sensitif, pengencer dan serum kontrol. Ketika sampel positif yang
diencerkan dicampur dengan eritrosit yang peka, antibodi terhadap antigen yang peka menyebabkan
aglutinasi sel. Sel-sel tersebut membentuk pola karakteristik sel di dasar pelat mikrotitrasi dengan baik.
Dengan tidak adanya antibodi, mereka membentuk tombol kompak di dalam sumur.

Tes ini telah dikalibrasi ke Serum Referensi WHO untuk tes Serodiagnostik untuk Infeksi Treponemal- Ref
3-1980 +/- satu pengenceran ganda untuk memastikan sensitivitas yang benar.

BAHAN YANG DIPERLUKAN NAMUN TIDAK DISEDIAKAN

Dynex M24A U-baik mikrotitrasi piring adalah direkomendasikan. Penetes mikrotitrasi untuk
mengirimkan 25 m l atau Mikropipet untuk mengirimkan 10, 25, 75, 100 m l dan 190 m l volume.
Catatan: 75 m l pipet tidak pas dan tidak disertakan untuk botol dalam Kit Tes 850.

TINDAKAN PENCEGAHAN

IMMUTREP TPHA reagen mengandung bahan yang berasal dari manusia dan telah diuji dan dikonfirmasi
negatif untuk HCV, antibodi HIV I dan HIV II, dan HBsAg dengan prosedur yang disetujui pada tingkat
donor tunggal. Karena tidak ada pengujian yang dapat memberikan jaminan lengkap bahwa produk yang
berasal dari sumber manusia tidak akan menularkan agen penular, direkomendasikan agar reagen dalam
kit ini ditangani dengan hati-hati dan penuh perhatian selama penggunaan dan pembuangan. Namun,
semua reagen harus diperlakukan sebagai bahaya hayati potensial yang digunakan dan dibuang. Jangan
menelan

IMMUTREP TPHA reagen tidak mengandung zat berbahaya seperti yang didefinisikan oleh peraturan
Bahan Kimia Inggris (Informasi Berbahaya dan Kemasan untuk Pasokan) saat ini. Namun, semua reagen
harus diperlakukan sebagai bahaya hayati potensial dalam penggunaan dan pembuangan. Pembuangan
akhir harus sesuai dengan peraturan setempat.

MMUTREP TPHA reagen mengandung 0,095% natrium azida sebagai pengawet yang mungkin beracun
jika tertelan. Natrium azida dapat bereaksi dengan timbal dan pipa tembaga untuk membentuk garam
yang sangat mudah meledak. Saat dibuang, siram dengan air dalam jumlah banyak

PENYIMPANAN

Reagen harus disimpan tegak pada suhu antara 2 C sampai 8 C.

Kit akan bekerja sesuai spesifikasi hingga tanggal kedaluwarsa yang ditentukan seperti yang ditentukan
sejak tanggal pembuatan produk dan dinyatakan pada kit dan komponen. Tanggal kadaluwarsa adalah
hari terakhir bulan pada botol dan label kit. Jangan gunakan reagen setelah tanggal kadaluwarsa.

Reagen yang terkena suhu berlebihan harus dihindari. Jangan sampai terkena sinar matahari langsung.
JANGAN MEMBEKU REAGEN APA PUN karena akan menyebabkan kerusakan permanen.

PERSIAPAN REAGEN

Semua reagen harus dibawa ke suhu kamar (20 C sampai 25 C) dan ditangguhkan sepenuhnya sebelum
digunakan. Jangan menyebabkan berbusa. Cell Droppers disediakan untuk digunakan dengan suspensi
Test dan Control Cell. Dropper ini membagikan 75 m l tetes dan penetes integral ini harus ditempatkan
pada suspensi yang sesuai sebagai berikut:

Penetes Merah - Sel Uji

Penetes Putih - Sel Kontrol

BATASAN PENGGUNAAN

Penggunaan sampel selain serum atau CSF belum divalidasi dalam tes ini. Tidak ada tes hemaglutinasi
serologis yang dapat membedakan antara antibodi karena T. palidum infeksi dan antibodi akibat infeksi
treponema patogen lain, yaitu T.pertenue dan T. carateum. Tidak ada faktor pengganggu lain yang telah
diidentifikasi secara spesifik, namun hasil positif harus dikonfirmasi, misalnya. oleh FTA-Abs, dan
dilengkapi dengan temuan klinis. Hasil yang rendah atau diduga positif harus dinilai ulang. Diagnosis
tidak boleh dibuat hanya berdasarkan temuan dari satu uji klinis. Saat membuat interpretasi tes, sangat
disarankan untuk mempertimbangkan semua data klinis. Tes ini mungkin juga negatif pada Sifilis aktif
awal atau pada Sifilis laten lanjut. Untuk melengkapi profil hasil untuk membantu dokter, juga
disarankan untuk dilakukan tes VDRL / Carbon Antigen atau RPR pada sampel pasien karena tes ini akan
mendeteksi kasus aktif Sifilis. VDRL IMMUTREP OMEGA, IMMUTREP CARBON ANTIGEN dan IMMUTREP
RPR tersedia untuk tujuan ini.
PROSEDUR KUALITATIF (PENYARINGAN)

Setiap pengujian membutuhkan 4 lubang dari satu piring microtiter

1. Keluarkan Pengencer ke dalam pelat mikrotitrasi sebagai berikut: 25 m l di baris 1, 3 & 4 dan 100
m l di baris 2.
2. Pengeluaran 25 m l dari setiap sampel ke dalam sumur di baris 1.
Aduk rata dan pindahkan 25 m l dari baris 1 ke baris 2. Aduk
rata dan pindahkan 25 m l dari baris 2 ke baris 3. Aduk rata dan
buang 25 m l dari baris 3. Transfer 25 m l dari baris 2 ke baris 4.
Aduk rata dan buang 25 m l dari baris 4
3. Tambahkan 75 m l Sel Kontrol yang tercampur dengan baik ke baris 3
4. Tambahkan 75 m l Sel Uji yang tercampur rata ke baris 4. Ketuk pelat dengan lembut untuk
mencampur. Pengenceran terakhir pada baris 3 dan 4 adalah 1/80.
5. Tutup dan diamkan pada suhu kamar selama 45 sampai 60 menit (sebagai alternatif piring bisa
dibiarkan semalaman).
6. Periksa pola aglutinasi.

Catatan: Kontrol kit sudah ditentukan sebelumnya dan harus ditambahkan langsung ke masing-
masing sumur di baris 3 dan 4 (tidak diperlukan pengencer).

ALTERNATIF ONE WELL DILUTION PROTOCOL UNTUK PENYARINGAN.

1. Dispense 190 m l pengencer ke baris 1

2. Pengeluaran 10 m l sampel ke baris 1 dan campur
3. Buang 150 m l dari baris 1
4. Tambahkan 25 m l dari baris 1 ke baris 2
5. Tambahkan 75 m l Sel Uji yang dicampur dengan baik ke baris 1 Tambahkan 75 m l Sel
Kontrol yang tercampur dengan baik ke baris 2 Ketuk piring dengan lembut untuk
mencampur. Pengenceran terakhir dalam sumur di baris 1 dan 2 adalah 1/80.
6. Tutup dan diamkan pada suhu kamar selama 45 sampai 60 menit (sebagai alternatif piring
bisa dibiarkan semalaman).
7. Periksa pola aglutinasi.

PROSEDUR KUANTITATIF

Jika dimaksudkan untuk menghitung hasil positif secara rutin, prosedur penyaringan dapat
dimodifikasi dengan menghilangkan Sel Kontrol dan hanya menyiapkan satu pengenceran akhir.
Sebagian besar sampel akan negatif atau benar-benar positif, dan Sel Kontrol dapat digunakan
dalam prosedur kuantitatif di bawah ini.

1. Siapkan pengenceran dalam pelat mikrotitrasi sebagai berikut: Untuk setiap sampel,
keluarkan 25 m l pengencer ke setiap sumur dalam satu kolom pelat. Untuk titrasi
 kontrol, pengeluaran harus dimulai dari baris 3. Transfer 25 m l dari baris 2 pelat
penyaringan asli ke baris 1 pelat kuantitatif.
Campur dan buang 25 m l. Transfer 25 m l dari baris 2 pelat penyaringan asli ke baris 2
pelat kuantitatif. Siapkan 25 m l pengenceran ganda dari baris 2 ke baris 8 (untuk
kontrol, pengenceran ganda harus dimulai dari baris 3)

2. Tambahkan 75 m l Sel Kontrol yang tercampur rata ke baris 1. Tambahkan 75 m

3. l Sel Uji yang tercampur rata ke baris 2 hingga 8
4. Campur dengan mengetuk lembut. Pengenceran terakhir pada baris 1 dan baris 2 adalah
1/80.
5. Tutup dan diamkan selama 45 hingga 60 menit pada suhu kamar (atau semalaman).

HASIL DAN INTERPRETASI

Kontrol kit atau sampel nilai level yang diketahui harus diuji dengan setiap uji coba.
Kontrol negatif kit akan memberikan hasil negatif setelah 45 menit. Kontrol positif kit
akan memberikan hasil positif setelah 45 menit. Jika tingkat kontrol atau sampel yang
diketahui pengguna tidak memberikan hasil yang diharapkan, hasil pengujian harus
dianggap tidak valid.

Prosedur Penapisan
Sel-sel yang teraglutinasi membentuk lapisan rata di atas dasar sumur. Sel yang tidak
diaglutinasi membentuk tombol padat di tengah sumur. Sel yang diaglutinasi secara
lemah membentuk pola cincin yang khas. Aglutinasi Sel Uji tetapi tidak Sel Kontrol
menunjukkan adanya antibodi spesifik terhadap T. palidum. Tidak adanya aglutinasi
menunjukkan bahwa antibodi berada di bawah batas deteksi sistem. Jangan gunakan
pola Sel Kontrol sebagai indikasi hasil negatif karena pola tersebut memberikan tombol
sel yang lebih ringkas.
Aglutinasi Sel Kontrol serta Sel Tes menunjukkan adanya antibodi anti sel. Dalam hal ini
tes tidak valid dan harus diulang.
Jika tes tidak valid, tes harus diulang setelah terlebih dahulu melakukan absorpsi serum
uji. Untuk mencapai hal ini, encerkan serum uji 1/4 dengan Sel Kontrol dan diamkan
pada suhu kamar selama 45-60 menit. Setelah sampel disentrifugasi (1000rpm / 5
menit) encerkan 1/5 supernatan dalam Pengencer. Uji pengenceran ini secara langsung,
tanpa pengenceran lebih lanjut, menggunakan suspensi Test dan Control Cell. Tes FTA
ABS konfirmasi juga direkomendasikan.

Prosedur Kuantitatif
Sebagai prosedur penyaringan . Titer adalah pengenceran tertinggi yang menunjukkan
aglutinasi. Serum Kontrol Reaktif harus menghasilkan titer dalam satu kali pengenceran
1/2560. Pengenceran awal untuk prosedur kuantitatif adalah 1/80. Titres 1/164000
telah terdeteksi dengan IMMUTREP TPHA tanpa efek prozon (Hook).

PENYELESAIAN MASALAH
Tes hemaglutinasi sensitif terhadap efek panas, sinar matahari langsung, dan getaran.
Jauhkan dari sumber tersebut selama periode inkubasi pengujian. Jangan biarkan air liur
mencemari sampel atau reagen karena akan menyebabkan hasil yang salah. Gunakan
ujung sekali pakai yang terpisah untuk setiap sampel untuk mencegah kontaminasi
silang. Ganti tutup semua reagen segera setelah digunakan. Jangan biarkan reagen
mengalir di sisi sumur. Sebelum pengujian dimulai, bawa semua reagen ke suhu kamar
(20 Hai C sampai 25 Hai C). Campurkan semua reagen dengan lembut dengan inversi
lembut atau berputar-putar. Untuk digunakan oleh operator dengan minimal pelatihan
laboratorium dasar. Jangan gunakan komponen kit yang rusak atau terkontaminasi.
Komponen kit cocok dan tidak boleh dipertukarkan.

DATA EVALUASI
Sampel diuji di pusat referensi Eropa. Sampel ini berasal dari Klinik Antenatal, Genito -
Laboratorium Klinik Medik Kemih dan Laboratorium Kesehatan Masyarakat.