Karena patogenesis diabetes terkait erat dengan hormon peptida pankreas termasuk insulin, analisis

kuantitatif kandungan intra dan interselulernya penting dalam konteks diagnosis, terapi, dan penelitian
diabetes 1 . Insulin (51 aa, 5807,6 Da) terdiri dari rantai A (21 aa, 2383,7 Da) dan rantai B (30 aa, 3429,9
Da) dan merupakan satu-satunya hormon yang memiliki aksi hipoglikemik langsung. Proses pematangan
insulin telah ditandai dengan baik 1 , 2. Insulin ditranskripsi sebagai preproinsulin, polipeptida tunggal
prekursor, dari gen INS dan diangkut ke retikulum endoplasma melalui aksi urutan sinyal terminal-
N. Preproinsulin diubah menjadi proinsulin (86 aa, 9394,7 Da) dengan pembelahan urutan sinyal selama
proses pengangkutan. Proinsulin terlokalisasi retikulum endoplasma terlipat dengan benar oleh
pembentukan ikatan disulfida: dua jembatan disulfida antar rantai (antara rantai A dan rantai B) di
residu sistein, dan satu disulfida intra-rantai (dalam rantai A) menjembatani residu sistein. Akhirnya, C-
peptida dipisahkan dari proinsulin oleh beberapa konverter prohormon (PC1 / 3, PC2, dan CPE) di dalam
badan Golgi, dan kemudian pematangan insulin selesai.

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) digunakan hampir secara eksklusif dalam penghitungan
insulin dan merupakan metode yang sangat baik untuk penghitungan protein target.  Dalam kasus di
mana targetnya adalah hormon peptida, reaksi silang imunologis antara prohormon dan hormon
matang juga merupakan masalah penting. Dalam bidang penelitian diabetes, tidak hanya insulin tetapi
juga glukagon merupakan salah satu molekul yang sulit diukur dengan ELISA 3.. Western blotting (WB)
adalah teknik semi-kuantitatif yang banyak digunakan dalam analisis protein. Namun, kami
mempertanyakan apakah WB insulin dapat diterapkan karena hanya ada sedikit makalah ilmiah tentang
penggunaan WB untuk mendeteksi insulin. Ketika kami benar-benar mengkonfirmasi kegunaan WB
dalam deteksi insulin, kami menemukan bahwa ada beberapa masalah dalam analisis kuantitatif insulin
oleh WB, termasuk distorsi pita sinyal insulin dan sensitivitas insulin yang lebih rendah tetapi bukan
proinsulin. Dalam penelitian ini, kami mengklarifikasi alasan mengapa deteksi insulin dan proinsulin oleh
WB tidak digunakan secara luas dan kemudian berhasil menyelesaikan masalah ini dengan mengubah
protokol umum WB. Selain itu, kami menunjukkan kegunaan WB yang ditingkatkan untuk mendeteksi
hormon peptida terkait diabetes lainnya dalam berbagai sampel biologis.

Insulin adalah hormon peptida yang disekresikan yang menimbulkan efek metabolik seperti peningkatan
pengambilan glukosa dan sintesis glikogen yang menyebabkan penurunan konsentrasi glukosa darah.
Insulin pertama kali dibentuk sebagai molekul prekursor, preproinsulin, yang kemudian dibelah menjadi
proinsulin dan akhirnya menjadi hormon insulin yang matang. Insulin dewasa terdiri dari 51 asam
amino, yang terkandung dalam rantai A dan rantai B yang dihubungkan oleh dua jembatan disulfida. Ini
meningkatkan permeabilitas sel terhadap monosakarida, asam amino dan asam lemak. Insulin
disekresikan oleh pankreas pada tingkat basal tanpa adanya rangsangan eksogen, dengan sekresi
meningkat sebagai respons terhadap glukosa. Tindakan insulin dipengaruhi oleh pengikatan insulin ke
reseptor permukaan sel pada membran sel target.