BAB II

METODOLOGI

A. Waktu dan Tempat

Jumat, 13 Maret 2020 pada pukul 13.00 – selesai. Dilaksanakan di Laboratorium
Mikrobiologi lt. 2 Fakultas Kedokteran Universitas Tanjungpura.

B. Alat dan Bahan

Alat:

No Nama Alat Gambar

1 Object glass

2 Bunsen

3 Jarum oase
4 Bak penampung warna

5 Isolate bakteri

6 Washing bottle

7 Stopwatch
 8 Mikroskop

9 Slide drying

Bahan:

No Nama Bahan Gambar

1 Bakteri

2 Spirtus
3 Formalin

4 Gentian Violet

5 Lugol

6 Alkohol 96%
7 Pewarna Safranin

8 Aquades

9 Tisu

10 Korek Api
C. Langkah Kerja
1. Hidupkan api pada sumbu bunsen yang sudah diisi spirtus menggunakan korek api,
sterilkan object glass di atas Bunsen sebanyak 4-8 kali hingga uap pada object glass
menghilang.
2. Teteskan sedikit formalin di atas object glass.
3. Sterilkan oase diatas bunsen hingga berpijar warna merah, dinginkan beberapa saat.
4. Ambil isolate bakteri dengan posisi tangan dan isolate berada dibelakang bunsen
yang sedang menyala, buka sedikit tutup isolate kemudian panaskan sebentar tutup
isolate yang dibuka tersebut.
5. Ambil bakteri di dalam isolate secara perlahan menggunakan ose dengan
mempertahankan posisi tangan tetap dibelakang bunsen.
6. Ratakan bakteri pada formalin di astas object glass dengan cara memutar oase.
7. Sterilkan kembali oase diatas bunsen hingga berpijar warna merah.
8. Fiksasi bakteri yang telah bercampur rata dengan formalin diatas bunsen hingga
bakteri berwarna putih keruh.
9. Teteskan gentian violet (pewarna utama) pada oject glass yang telah difiksasi,
diamkan selama 1 menit.
10. Bilas dengan aquades atau air hangat yang mengalir diatas bak penampung warna,
jangan sampai aquades mengenai bakteri secara langsung.
11. Teteskan larutan lugol, diamkan selama 1 menit.
12. Bilas dengan aquades atau air hangat yang mengalir diatas bak penampung warna.
13. Teteskan Alkohol 96%, diamkan selama 30 detik.
14. Bilas dengan aquades atau air hangat yang mengalir diatas bak penampung warna.
15. Teteskan pewarna safranin (pewarna tandingan), diamkan selama 1 menit.
16. Bilas dengan aquades atau air hangat yang mengalir diatas bak penampung warna.
17. Keringkan bagian bawah object glass dengan tisu.
18. Letakkan object glass pada slide drying, tunggu hingga bakteri yang telah diwarnai
mengering.
19. Ambil object glass yang telah dikeringkan.
20. Amati bakeri yang ada pada object glass di bawah mikroskop.