Anda di halaman 1dari 83

PERBANDINGAN KADAR BILIRUBIN DIREK PADA SERUM LIPEMIK

SEBELUM DAN SESUDAH SENTRIFUGASI


DENGAN KECEPATAN TINGGI

Diajukan untuk melengkapi tugas dan memenuhi syarat


Ujian Akhir Semester IV Pendidikan Diploma III
Analis Kesehatan

Oleh :
LELI DIANA VERONIKA
NIM.P3.73.34.1.12.106

POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKES JAKARTA III


JURUSAN ANALIS KESEHATAN
TAHUN 2014
ABSTRAK

Pelayanan laboratorium klinik merupakan bagian integral dari


pelayanan kesehatan. Ada beberapa faktor yang dapat mempengaruhi
hasil laboratorium diantaranya sampel dengan kondisi lipemik. Dalam
kimia klinik sampel lipemik berpengaruh pada pemeriksaan dengan
metode fotometrik. Untuk mengatasinya, digunakan proses sentrifugasi
dengan kecepatan tinggi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui
perbedaan kadar bilirubin direk pada serum lipemik, sebelum dan sesudah
disentrifugasi dengan kecepatan tinggi.
Karya tulis ini disusun berdasarkan studi pustaka dan eksperimental di
laboratorium RSJPD Harapan Kita, teknik sampling dilakukan dengan cara
insidental sampling, dimana sampel yang memenuhi kriteria penelitian
(serum lipemik dan ikterik) dijadikan sampel penelitian. Besar sampel
dihitung menggunakan rumus dengan jumlah populasi yang tidak
diketahui dan diperoleh 30 sampel.
Dari penelitian ini, didapatkan hasil : dari 30 sampel yang diperiksa,
diperoleh hasil kadar bilirubin direk lebih tinggi pada serum sesudah
disentrifugasi dengan kecepatan tinggi dibandingkan sebelumnya. Hasil uji
statistik Wilcoxon pada alfa 10% diperoleh nilai p sebesar 0,000, nilai p
lebih kecil dari alfa (0,000 < 0,1).
Kesimpulan yang diperoleh : pada tingkat kepercayaan 90% terdapat
perbedaan yang bermakna dari kadar bilirubin direk pada serum lipemik
sebelum dan sesudah disentrifugasi dengan kecepatan tinggi. Sehingga
dapat disimpulkan, diperlukan proses sentrifugasi dengan kecepatan
tinggi dalam melakukan pemeriksaan bilirubin direk pada serum lipemik.

Kepustakaan : 30
Tahun : 1994-2014
KATA PENGANTAR

Puji dan syukur ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa karena berkat

rahmat dan hidayah-Nya karya tulis ini dapat diselesaikan. Karya tulis ini

merupakan laporan penelitian sebagai salah satu syarat dalam

menyelesaikan pendidikan Diploma III Analis Kesehatan pada Politeknik

Kesehatan Kementerian Kesehatan Jakarta III.

Karya tulis yang berjudul “Perbandingan Kadar Bilirubin Direk Pada

Serum Lipemik Sebelum dan Sesudah Sentrifugasi Dengan Kecepatan

Tinggi” ini diharapkan bermanfaat terutama untuk pengelola laboratorium

dalam menangani serum lipemik untuk pemeriksaan bilirubin direk.

Penulis menyadari bahwa dalam penyusunan karya tulis ini telah

banyak mendapat dukungan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis

menyampaikan ucapan terima kasih kepada :

1. Dra. Siti Rismini, MSc., selaku pembimbing materi.

2. dr. Adrian Gunawan, SpPK., selaku pembimbing teknis.

3. Bagya Mujianto, S.Pd.,M.Kes., selaku ketua jurusan Analis Kesehatan

POLTEKKES KEMENKES Jakarta III.

4. Dewi Inderiati, S.Si., M.Biomed., selaku Kaprodi jurusan Analis

Kesehatan POLTEKKES KEMENKES Jakarta III.

5. Eka Dwi Zola, selaku Kepala Sekretariat Instalasi Patologi Klinik &

Bank Darah.

i
6. Seluruh rekan kerja di Laboratorium RS Jantung dan Pembuluh Darah

Harapan Kita yang telah membantu dalam penelitian dan penyusunan

karya tulis ini.

7. Seluruh teman RPL XII yang telah membantu dalam pengumpulan

serum lipemik.

8. Keluarga dan saudara untuk doa, semangat, dan dukungannya.

Akhirnya penulis berharap semoga karya tulis sederhana ini dapat

bermanfaat bagi pembaca.

Jakarta, November 2014

Penulis

ii
DAFTAR ISI

Halaman

KATA PENGANTAR ........................................................................ i

DAFTAR ISI ..................................................................................... iii

DAFTAR TABEL .............................................................................. v

DAFTAR GAMBAR .......................................................................... vi

DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................... vii

BAB I PENDAHULUAN

A. Latar belakang masalah .................................................. 1


B. Identifikasi masalah......................................................... 7
C. Pembatasan masalah ..................................................... 8
D. Perumusan masalah ....................................................... 8
E. Tujuan penelitian ............................................................. 8
F. Manfaat penelitian ........................................................... 8

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

A. Tinjauan teori .................................................................. 10


1. Darah ........................................................................ 10
2. Serum ....................................................................... 10
3. Trigliserida ................................................................ 11
4. Bilirubin ..................................................................... 13
5. Instrumen .................................................................. 17
a. Sentrifus ............................................................. 17
b. Architect c4000................................................... 20
B. Kerangka berpikir ............................................................ 25
C. Hipotesa .......................................................................... 26

BAB III METODOLOGI PENELITIAN

A. Definisi operasional variabel penelitian ........................... 27


B. Tempat dan waktu penelitian .......................................... 27
C. Populasi dan sampel ....................................................... 28
D. Teknik pengumpulan data ............................................... 28
E. Instrumen penelitian ........................................................ 30
F. Teknik analisis data......................................................... 41

iii
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil ................................................................................ 42
B. Pembahasan ................................................................... 44

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan ..................................................................... 47
B. Saran .............................................................................. 47

DAFTAR PUSTAKA ......................................................................... 49

LAMPIRAN-LAMPIRAN ................................................................... 52

iv
DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

Naskah

1. Penyebab Hiperbilirubinemia ..................................................... 15

2. Substansi Pengganggu Pada Pemeriksaan Bilirubin Direk ....... 17

3. Spesifikasi Architect c4000 ........................................................ 21

4. Sebaran Data Kadar Bilirubin Direk Pada Serum Lipemik


Sebelum & Sesudah Sentrifugasi Dengan Kecepatan Tinggi .... 42

Lampiran

1. Hasil Pemeriksaan Kadar Bilirubin Direk Pada Serum Lipemik


Sebelum & Sesudah Sentrifugasi Dengan Kecepatan Tinggi .... 53

v
DAFTAR GAMBAR

GAMBAR Halaman

Naskah

1. Struktur Trigliserida.................................................................... 11

2. Komposisi Lipoprotein ............................................................... 12

3. Metabolisme Bilirubin................................................................. 14

4. Architect c4000 .......................................................................... 21

5. Processing Center c4000 .......................................................... 22

6. Sistem Optikal c4000 ................................................................. 23

7. Grafik Perbandingan Kadar Bilirubin Direk Pada Serum Lipemik


Sebelum & Sesudah Sentrifugasi Dengan Kecepatan Tinggi .... 43

Lampiran

1. Centrifuge eppendorf 5804 ........................................................ 56

2. Centrifuge eependorf 5430 ........................................................ 56

3. Tip Biru ...................................................................................... 56

4. Tip Kuning ................................................................................. 57

5. Cup eppendorf ........................................................................... 57

6. Mikropipet .................................................................................. 57

7. Architect c4000 dan Rak Sampel .............................................. 58

8. Serum Lipemik dan Serum Hasil Sentrifugasi Dengan


Kecepatan Tinggi ....................................................................... 59

vi
DAFTAR LAMPIRAN

LAMPIRAN Halaman

1. Surat Keterangan Pengambilan Data ........................................ 52

2. Hasil Pemeriksaan Kadar Bilirubin Direk Pada Serum Lipemik


Sebelum dan Sesudah Ultrasentrifugasi.................................... 53

3. Uji Statistik Wilcoxon ................................................................. 54

4. Gambar Centrifuge eppendorf 5804 .......................................... 56

5. Gambar Centrifuge eppendorf 5340 .......................................... 56

6. Gambar Tip Biru ........................................................................ 56

7. Gambar Tip Kuning.................................................................... 57

8. Cup eppendorf ........................................................................... 57

9. Mikropipet .................................................................................. 57

10. Architect c4000 dan Rak Sampel .............................................. 58

11. Gambar Serum Lipemik dan Serum Hasil Sentrifugasi


Dengan Kecepatan Tinggi ......................................................... 59

12. Surat Penugasan Dosen Pembimbing ....................................... 60

13. Agenda Bimbingan Penyusunan Karya Tulis Ilmiah .................. 61

14. Kit Insert Bilirubin Direk ............................................................. 63

15. Kit Insert Trigliserida .................................................................. 70

16. Biodata ...................................................................................... 72

vii
BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar belakang masalah

Pelayanan laboratorium klinik merupakan bagian integral dari

pelayanan kesehatan yang diperlukan untuk menegakkan diagnosis,

dengan menetapkan penyebab penyakit, menunjang sistem

kewaspadaan dini, monitoring pengobatan, pemeliharaan kesehatan,

dan pencegahan timbulnya penyakit. Pelayanan laboratorium klinik

perlu diselenggarakan secara bermutu untuk mendukung upaya

peningkatan kualitas kesehatan masyarakat (Pendahuluan

PERMENKES RI NO.43, 2013).

Agar diperoleh hasil yang berkualitas maka setiap laboratorium

klinik harus memperhatikan proses pengendalian mutu. Dalam proses

pengendalian mutu laboratorium dikenal tiga tahapan penting, yaitu

tahap pra analitik, analitik, dan pasca analitik. Pada umumnya yang

sering diawasi dalam pengendalian mutu hanya tahap analitik dan

pasca analitik, sedangkan proses pra analitik kurang mendapat

perhatian. Kesalahan pada proses pra analitik dapat memberikan

kontribusi sekitar 62% dari total kesalahan laboratorium, sementara

kesalahan analitik mencapai 15%, dan pasca analitik 23% (Hawkins,

R., 2012).

1
2

Dalam laboratorium klinik, pemeriksaan kimia klinik merupakan

salah satu pemeriksaan yang sering dilakukan dan serum telah

menjadi sampel yang hampir secara universal digunakan untuk

pemeriksaan kimiawi (Sacher,R.A.; McDherson,R.A., 2002:287).

Istilah serum mengacu pada komponen cair dari darah yang telah

membeku. Setelah darah keluar dari pembuluh darah dan perlahan-

lahan membeku, cairan jernih diperas dari bekuan darah. Serum tidak

mengandung fibrinogen dan faktor pembekuan darah lainnya

(Taieb,A., 2009:28). Serum diperoleh dari darah yang telah beku

tanpa penambahan antikoagulan (Blood..., 2010:124) dan juga

dengan cara sentrifugasi setelah proses pembekuan selesai

(Guder,W.G.,et al., 2009:34).

Dari proses pemisahan antara sel-sel darah dengan serum,

terkadang diperoleh serum yang keruh, hemolis, dan ikterik. Zat

pengganggu adalah sumber kesalahan umum analitis yang terdapat

dalam sampel. Hemolisis, lipemia, dan peningkatan bilirubin serum

dapat berpotensi mempengaruhi hasil pemeriksaan biokimia

(Thrall,M.A.,et al., 2012:47).

Dalam hampir semua kasus, kekeruhan pada serum disebabkan

oleh peningkatan konsentrasi trigliserida dan keberadaan

makromolekul lipoprotein. Oleh karena itu sampel keruh disebut

lipemik (Guder,W.G.,et al., 2003:76). Serum hemolis disebabkan

pecahnya membran eritrosit sehingga hemoglobin dan komponen


3

intraseluler lainnya masuk ke dalam serum sedangkan serum ikterik

disebabkan karena peningkatan kadar bilirubin di dalam serum

(Dasgupta, A.; Sepulveda, J.L., 2013:54).

Serum lipemik harus dianggap sebagai faktor pengganggu yang

sedapat mungkin dihindari karena telah diketahui menyebabkan hasil

laboratorium menjadi tinggi atau rendah palsu melalui mekanisme

inhomogenitas. Serum yang mengandung trigliserida dengan

konsentrasi tinggi dapat menyebabkan trigliserida tersebut

mengapung pada permukaan serum selama proses sentrifugasi atau

penyimpanan. Ketika dilakukan pemeriksaan, trigliserida dan

konstituen lainnya tidak terdistribusi secara merata di dalam serum,

hal ini dapat menyebabkan konsentrasi yang sangat tinggi dari lipid di

lapisan atas dan menyebabkan gangguan pada pemeriksaan lain. Di

sisi lain lipid yang terdapat pada lapisan atas serum dapat

menyebabkan konsentrasi komponen-komponen yang larut dalam air

seperti elektrolit dan metabolit lainnya menjadi lebih rendah dari yang

seharusnya. Oleh sebab itu serum harus dihomogenkan dengan baik

sebelum dilakukan pemeriksaan (Guder,W.G.,et al., 2003:76).

Metode analisis yang sering digunakan untuk mengukur kadar zat

kimia adalah fotometri, yaitu dengan mengukur perubahan serapan

cahaya sebelum dan setelah terjadi reaksi. Perubahan serapan

tersebut sebanding dengan kadar zat kimia yang diukur (West,K.B.;

Hunt,S.; Applegate,E., 2014:802; Medical..., 2013:238).


4

Pemeriksaan laboratorium dengan menggunakan metode

fotometrik, sensitif terhadap kekeruhan di hampir semua panjang

gelombang. Penanganan terhadap sampel lipemik, harus

didokumentasikan dalam buku pedoman pemantapan mutu masing-

masing laboratorium. Produsen alat / reagen harus menunjukkan

bahwa interfensi serum lipemik telah diuji untuk masing-masing

pemeriksaan dan dicantumkan dalam brosur produk (Guder,W.G.,et

al., 2003:77).

Pemeriksaan yang telah dilaporkan dipengaruhi oleh lipemia

mencakup berbagai analit, termasuk diantaranya kolesterol,

hemoglobin, protein total, albumin, laktat dehidrogenase, amilase,

elektrolit metode indirek, dan bilirubin (Kroll,M.H.; McCudden,C.R.,

2012:35).

Bilirubin merupakan hasil pemecahan hemoglobin yang terpecah

menjadi dua fraksi : heme dan globin. Bagian globin digunakan

kembali oleh tubuh dan bagian heme diubah menjadi bilirubin tidak

terkonjugasi yang terikat pada albumin. Di hati, bilirubin tidak

terkonjugasi diubah menjadi bilirubin terkonjugasi. Di usus, bakteri

mereduksi bilirubin terkonjugasi menjadi urobilinogen, sebagian besar

disekresikan ke feses dan sebagian kecil dieliminasi ke urin

(Wong,D.L.,et al., 2001:322).

Serum orang sehat hampir tidak mengandung bilirubin

terkonjugasi. Peningkatan kadar bilirubin terkonjugasi dalam serum,


5

meskipun kadar bilirubin totalnya normal, merupakan indikator yang

sensitif terhadap penyakit hati (Speicher,C.E.; Smith,J.W., 1994:233).

Berbagai metode telah diusulkan untuk menghilangkan lipid dari

serum atau plasma. Sentrifugasi dengan kecepatan tinggi sering

dilakukan untuk menghasilkan infranatan yang jernih (Dasgupta,A.;

Sepulveda,J.L., 2013:59).

Ultrasentrifugasi (gold standard), sentrifugasi dengan kecepatan

tinggi, dan lipid clearing solution dapat menghilangkan faktor

pengganggu lipid. Berdasarkan penelitian pada pemeriksaan natrium,

kreatinin, urate, protein total, laktat dehidrogenase, magnesium,

kolesterol, dan trigliserida dalam serum lipemik, proses penjernihan

serum melalui sentrifugasi dengan kecepatan tinggi pada 23000 x g

selama 2 x 15 menit memberikan hasil yang sebanding dengan

ultrasentrifugasi (Dimeski, G.; Jones, B.W., 2011 : 21 (1). 86-94).

Laboratorium klinik yang belum memiliki peralatan atau reagen

yang dapat menjernihkan serum / plasma lipemik, pada umumnya

melakukan pemeriksaan menggunakan serum lipemik tersebut namun

disertai catatan tentang kondisi sampel pada hasil laboratorium.

Baru-baru ini laboratorium RS Jantung dan Pembuluh Darah

Harapan Kita (RSJPD Harapan Kita) memiliki sentrifus (‘centrifuge’)

dengan daya sentrifugasi yang relatif tinggi (high-speed centrifuge),

dimana kekuatan sentrifugasi dapat mencapai 30130 x g, sehingga


6

diharapkan dapat digunakan untuk mengatasi sampel lipemik (brosur

Centrifuge 5430 dan Centrifuge 5430 R).

Namun muncul permasalahan baru, proses pengerjaan sampel

menjadi lebih lama dikarenakan sampel lipemik harus disentrifugasi 2

x 15 menit dengan kecepatan 23000 x g, hal ini menyebabkan

pengeluaran hasil laboratorium menjadi lebih lama dan menjadi

masalah terutama untuk sampel yang berasal dari pasien-pasien

dalam keadaan darurat.

Di samping itu, laboratorium RSJPD Harapan Kita belum pernah

mengadakan penelitian mengenai perbandingan hasil kimia darah

(termasuk bilirubin direk) pada serum lipemik sebelum dan sesudah

disentrifugasi dengan kecepatan tinggi, oleh karena itu penulis berniat

menelitinya.

Penulis memilih pemeriksaan bilirubin direk sebagai parameter

penelitian dengan mengacu pada kit insert reagen yang digunakan di

laboratorium RSJPD Harapan Kita, yaitu terdapat perbedaan hasil

yang cukup signifikan pada pemeriksaan bilirubin direk bila

menggunakan serum lipemik dengan kadar trigliserida > 1000 mg/dL.

Selain itu, penulis memilih untuk melakukan penelitian terhadap serum

dengan kadar bilirubin direk abnormal / di atas nilai rujukan karena

pada kit insert reagen hanya tercantum pengaruh serum lipemik pada

sampel yang memiliki kadar bilirubin direk normal / dalam batas nilai

rujukan (lihat tabel 2).


7

B. Identifikasi masalah

Berdasarkan latar belakang di atas maka dapat diidentifikasikan

beberapa masalah, yaitu sebagai berikut :

1. Pada umumnya yang sering diawasi dalam pengendalian mutu

hanya tahap analitik dan pasca analitik, sedangkan proses pra

analitik kurang mendapat perhatian.

2. Kesalahan pada proses pra analitik dapat memberikan kontribusi

sekitar 62% dari total kesalahan laboratorium.

3. Penggunaan serum lipemik, hemolis, dan ikterik dapat

mengganggu pada sebagian besar pemeriksaan kimia darah. Hal

ini tidak memenuhi persyaratan pra analitik untuk pemeriksaan

kimia darah.

4. Permasalahan serum lipemik dapat diatasi melalui proses

sentrifugasi dengan kecepatan tinggi, namun proses ini

membutuhkan waktu yang lebih lama. Hal ini menjadi masalah

terutama untuk sampel yang berasal dari pasien-pasien dalam

kondisi darurat.

5. Pada kit insert reagen yang digunakan di laboratorium RSJPD

Harapan Kita, tidak tercantum pengaruh serum lipemik terhadap

sampel yang memiliki kadar bilirubin direk abnormal / di atas nilai

rujukan.
8

C. Pembatasan masalah

Penelitian ini dibatasi pada perbandingan kadar bilirubin direk

pada serum lipemik, sebelum dan sesudah sentrifugasi dengan

kecepatan tinggi.

D. Perumusan masalah

Apakah terdapat perbedaan yang signifikan terhadap kadar

bilirubin direk pada serum lipemik sebelum dan sesudah sentrifugasi

dengan kecepatan tinggi ?

E. Tujuan Penelitian

Tujuan dilakukannya penelitian ini adalah untuk mengetahui ada

tidaknya perbedaan kadar bilirubin direk pada serum lipemik, sebelum

dan sesudah sentrifugasi dengan kecepatan tinggi.

F. Manfaat Penelitian

Hasil penelitian ini diharapkan bermanfaat untuk :

1. Dapat dijadikan acuan bagi pengelola laboratorium dalam

menangani serum lipemik terutama untuk pemeriksaan bilirubin

direk.

2. Dapat memberikan informasi kepada teknisi laboratorium

mengenai gambaran hasil pemeriksaan kadar bilirubin direk pada

serum lipemik, sebelum dan sesudah sentrifugasi dengan

kecepatan tinggi.
9

3. Dapat dijadikan perlakuan yang lebih efektif bila diperoleh serum

dengan kondisi lipemik.

4. Dapat dijadikan referensi bagi penelitian lain yang sejenis.


BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

A. Tinjauan teori

1. Darah

Darah merupakan suatu jaringan yang terdiri atas eritrosit (sel

darah merah), leukosit (sel darah putih), dan trombosit yang terendam

dalam plasma darah cair (Bloom; Fawcet, 2002:97).

Fungsi utama darah adalah untuk transportasi, sel darah merah

tetap dalam sistem sirkulasi mengandung pigmen pengangkut oksigen

yaitu hemoglobin. Sel darah putih bertanggung jawab terhadap

pertahanan tubuh dan diangkut oleh darah ke berbagai jaringan

tempat sel-sel tersebut melakukan fungsi fisiologiknya. Trombosit

berperan mencegah tubuh kehilangan darah akibat perdarahan dan

melakukan fungsi utamanya di dinding pembuluh darah (Sacher,R.A.;

Mc Pherson,R.A., 2004:21).

2. Serum

Serum adalah cairan bening yang dipisahkan dari sel-sel darah.

Serum tidak memiliki faktor pembekuan karena diperoleh dari darah

yang telah dibiarkan menggumpal. Dalam keadaan normal, serum

seharusnya terlihat jernih namun terkadang dijumpai serum yang

terlihat keruh bahkan tampak seperti susu. Hal ini dapat disebabkan

akibat pengambilan darah 1 sampai 2 jam setelah pasien

10
11

mengkonsumsi makanan berlemak atau pasien dengan

hiperlipoproteinemia (Sood,R., 2006:623).

Serum hemolis berarti bahwa eritrosit di dalam spesimen telah

rusak dan pecah. Hal ini mungkin disebabkan oleh trauma pungsi

vena dimana sel-sel rusak ketika memasuki jarum atau mungkin pula

disebabkan oleh kesalahan penanganan pada tabung setelah

pengambilan darah. Hemolisis terlihat jelas pada spesimen setelah

proses sentrifugasi, dimana serum terlihat berwarna merah muda

sampai merah (Lieseke,C.L.; Zeibig,E.A., 2012:183).

Serum ikterik disebabkan oleh peningkatan kadar bilirubin

sehingga mengakibatkan adanya pigmentasi kekuningan dalam serum

(Arneson,W.L.; Brickell,J.M., 2007:234).

3. Trigliserida

Trigliserida terbentuk dari kombinasi satu molekul gliserol dengan

tiga asam lemak (Higgins,C., 2012:136).

Gambar 1. Struktur Trigliserida


(Sumber : Higgins,C., 2012:136)

Trigliserida diangkut oleh Very Low Density Lipoproteins (VLDLs)

dan Low Density Lipoproteins (LDLs). Trigliserida bertindak sebagai


12

sumber penyimpanan energi. Ketika kadar trigliserida dalam darah

berlebihan, maka akan disimpan ke dalam jaringan lemak. Trigliserida

adalah bagian dari profil lipid yang juga mengevaluasi kolesterol dan

lipoprotein. Pemeriksaan profil lipid dilakukan untuk menilai resiko

penyakit pembuluh darah dan koroner (Pagana,K.D.; Pagana,T.J.,

2013:926).

Gambar 2. Komposisi Lipoprotein


(Sumber : Higgins,C., 2012:137)

Metode yang digunakan untuk pemeriksaan trigliserida adalah

metode enzimatik. Syarat utama pemeriksaan trigliserida, pasien

harus dalam kondisi puasa pada saat pengambilan darah.

Pada kebanyakan pemeriksaan, pasien diminta untuk berpuasa

selama 8 sampai 12 jam. Apabila pasien tidak puasa, hal ini harus

dilaporkan dan diberi catatan pada formulir pemeriksaan

(Strasinger,S.K.; DiLorenzo,M.S., 2011:221).


13

4. Bilirubin

Bilirubin merupakan salah satu hasil pemecahan hemoglobin yang

disebabkan oleh kerusakan sel darah merah. Ketika sel darah merah

dihancurkan, hasil pemecahannya terlepas ke sirkulasi. Hemoglobin

terpecah menjadi dua fraksi : heme dan globin. Bagian globin (protein)

digunakan kembali oleh tubuh dan bagian heme diubah menjadi

bilirubin tidak terkonjugasi, suatu zat tidak larut yang terikat pada

albumin. Di hati bilirubin dilepas dari molekul albumin dan dengan

adanya enzim glukuronil transferase, dikonjugasikan dengan asam

glukuronat menghasilkan suatu zat dengan kelarutan tinggi. Bilirubin

glukuronat terkonjugasi kemudian disekresi ke dalam empedu. Di

usus, kerja bakteri mereduksi bilirubin terkonjugasi menjadi

urobilinogen, pigmen yang memberi warna khas pada tinja. Sebagian

besar bilirubin tereduksi disekresikan ke feses, sebagian kecil

dieliminasi ke urin (Wong,D.L.,et al., 2001:322).

Kurang lebih 80% bilirubin yang beredar dalam sirkulasi darah

berasal dari sel darah merah yang sudah tua. Setelah eritrosit dalam

sirkulasi darah mencapai akhir rentangan usianya yang normal yaitu

kurang lebih 120 hari, eritrosit tersebut akan dihancurkan oleh sel-sel

retikuloendotelial. Kurang lebih 15 hingga 20% bilirubin yang beredar

berasal dari sumber-sumber lain, bukan dari eritrosit yang sudah tua.

Sumber bilirubin yang kedua adalah proses eritropoesis inefektif yang

terjadi akibat penghancuran sel-sel eritroid yang sedang dalam proses


14

pematangan di dalam sumsum tulang. Bagian yang lebih kecil dari

bilirubin yang beredar berasal dari metabolisme protein yang

mengandung heme lain, terutama sitokrom hepatik, mioglobin otot dan

enzim yang mengandung heme dengan distribusi luas (Isselbacher,et

al.,1995:263).

Gambar 3. Metabolisme bilirubin


(Sumber: www.medical-dictionary.thefreedictionary.com)

Penumpukan bilirubin dalam aliran darah menyebabkan

pigmentasi kuning pada plasma darah yang menimbulkan perubahan

warna pada jaringan yang memperoleh banyak aliran darah tersebut.

Secara klinis, hiperbilirubinemia terlihat sebagai gejala kuning atau

ikterus, yaitu pigmentasi kuning pada kulit dan sklera (Isselbacher, et

al., 1999:263).
15

Pemeriksaan bilirubin, merupakan langkah penting untuk

mengetahui adanya gangguan fungsi hati dan empedu. Penyebab

hiperbilirubinemia diantaranya dapat dilihat pada tabel 1.

Tabel 1

Penyebab Hiperbilirubinemia

Peningkatan Bilirubin Indirek Peningkatan Bilirubin Direk


Hemolisis : Gangguan Intrahepatik :
- Hemoglobinopati - Hepatitis virus
- Sferositosis - Hepatitis alkoholik
- Defisiensi G6PD - Konsumsi klorpromazin
- Autoimunitas - Sirosis
- Reaksi transfusi hemolitik Penyakit Saluran Empedu :
Penguraian Sel Darah Merah : - Sirosis Billiar
- Perdarahan ke dalam - Kolangitis (idiopatik, infeksiosa)
jaringan lunak / rongga - Atresia biliaris
tubuh Obstruksi duktus empedu
- Eritropoesis yang tidak ekstrahepatik :
efisien - Batu empedu
- Anemia Pernisiosa - Karsinoma kantung empedu
Gangguan konjugasi / - Duktus billiaris / Kaput pankreas
penyerapan hepatoseluler : - Akibat peradangan / kesalahan
- Hepatitis virus pembedahan
- Defisiensi enzim herediter
(Sindrom Gilbert / Crigler-
Najjar)
- Imunitas hati
- Pada bayi baru lahir
(Sumber : Tinjauan Klinis Hasil Pemeriksaan Laboratorium, 2000)
16

Metode yang direkomendasikan untuk melakukan pemeriksaan

bilirubin direk adalah metode yang dikembangkan oleh Jendransik dan

Grof, karena memiliki presisi yang lebih besar, lebih cepat, sensitif,

dan spesifik dibandingkan metode lain, seperti Malloy dan Evelyn,

Lathe dan Ruthven serta Watson dan Powell (Cheesbrough,M.,

2005:350).

Menurut Fischbach, F.T.; Dunning, M.B., (2009:365) faktor–faktor

yang dapat mempengaruhi pemeriksaan bilirubin, antara lain :

- Pemaparan sinar matahari atau cahaya dengan intensitas tinggi

pada suhu kamar selama satu jam akan menurunkan kadar

bilirubin.

- Media kontras yang diberikan selama 24 jam sebelum

pengukuran, makanan tinggi lemak juga menyebabkan penurunan

kadar bilirubin dengan mengganggu proses reaksi kimia.

- Gelembung udara dan guncangan terhadap spesimen dapat

menyebabkan penurunan kadar bilirubin.

- Makanan tertentu (seperti wortel, umbi–umbian), dan beberapa

obat dapat meningkatkan warna kuning pada serum dan dapat

menyebabkan peningkatan palsu dari kadar bilirubin ketika

pemeriksaan dilakukan menggunakan metode tertentu, misal

spektrofotometri.

- Puasa terlalu lama meningkatkan kadar bilirubin, seperti halnya

anoreksia.
17

- Asam nikotinat dapat menyebabkan peningkatan kadar bilirubin

indirek.

Gangguan potensial yang dapat mempengaruhi hasil pemeriksaan

bilirubin direk menggunakan reagen dan instrumen ABBOTT

Laboratories dapat dilihat pada tabel 2.

Tabel 2

Substansi Pengganggu Pada Pemeriksaan Bilirubin Direk

Substansi Konsentrasi N Target Perbedaan dari


Pengganggu (mg/dL) Target
(mg/dL)
31 mg/dL (0,31 g/L) 5 0,4 -0,1
62 mg/dL (0,62 g/L) 5 0,4 -0,1
Hemoglobin 125 mg/dL (1,25 g/L) 5 0,4 -0,2
250 mg/dL (2,50 g/L) 5 0,4 -0,2
500 mg/dL (5,00 g/L) 5 0,4 -0,2
Trigliserida 519 mg/dL (5,86 mmol/L) 5 0,4 -0,1
Manusia 1034 mg/dL (11,68 mmol/L) 5 0,4 +0,3
125 mg/dL (1,25 g/L) 5 0,4 -0,1
Intralipid 250 mg/dL (2,50 g/L) 5 0,4 +0,1
500 mg/dL (5,00 g/L) 5 0,4 +0,4
(Sumber : Kit Insert Bilirubin Direk Architect / Aeroset Abbott
Laboratories, 2009)

5. Instrumen

a. Sentrifus

Sentrifus adalah suatu perangkat yang dapat mempercepat

proses pemisahan zat yang berbeda secara signifikan

berdasarkan berat jenis zat tersebut (Burtis,C.A.;


18

Ashwood,E.R.,1999:16). Di laboratorium klinik proses sentrifugasi

digunakan untuk :

- Memisahkan antara partikel dengan larutan yang tersuspensi.

- Memisahkan dua fase cairan yang memiliki berat jenis

berbeda.

a) Jenis-jenis sentrifus :

1. Horizontal-head atau Swimming-bucket centrifuges

Tabung ditempatkan dalam cup pada rotor dengan

asumsi pada saat rotor bergerak cup berada pada bidang

horisontal dan berada pada posisi vertikal ketika rotor

tidak bergerak. Selama sentrifugasi partikel menuju sudut

tabung, dengan demikian sedimen akan terdistribusi pada

dasar tabung.

2. Fixed-angle atau Angle-head

Tabung berada dalam posisi tetap pada sudut 25-40

derajat terhadap sumbu vertikal. Seperti horizontal-head

partikel didorong ke sisi luar horizontal. Pada saat rotor

melambat kemudian berhenti, gravitasi menyebabkan

sedimen meluncur ke bagian bawah tabung.

Bentuk aerodinamis dari rotor fixed-angle

memungkinkan sedimentasi partikel kecil lebih cepat

dibanding rotor horizontal-head.


19

3. Axial

Konsep sentrifugasi yang memungkinkan tabung

darah yang akan disentrifugasi berada dalam orientasi

vertikal, hal ini bertentangan dengan orientasi horisontal

yang digunakan dalam sentrifugasi tradisional.

Dalam pengoperasiannya, pertama darah diambil

secara konvensional menggunakan holder dan

dimasukkan ke dalam tabung khusus yang berisi disk

plastik transparan yang dapat bergerak. Setelah tabung

ditempatkan ke dalam modul sentrifugasi axial, kemudian

disentrifugasi secara otomatis disepanjang sumbu vertikal

dan probe secara otomatis dimasukkan ke dalam tabung

melalui septum karet yang terdapat pada tutup tabung.

Hal ini memungkinkan pelepasan udara yang terdapat

pada bagian tengah tabung.

Setelah serum atau plasma ditransfer ke ruang atas

melalui disk plastik, sensor dioda diaktifkan, sentrifus

berhenti, dan probe ditarik. Hal ini mencegah sel-sel darah

memasuki ruang atas tempat serum atau plasma. Seluruh

proses ini selesai dalam waktu kurang dari 70 detik.

Dalam sebuah penelitian, didapatkan bahwa tidak ada

perbedaan yang signifikan dari konsentrasi analit yang

diperoleh secara konvensional dengan sentrifugasi axial.


20

4. Ultracentrifuge

Sentrifus berkecepatan tinggi biasanya menggunakan

rotor fixed-head. Penggunaan ultrasentrifus yang paling

umum di laboratorium klinik adalah untuk pemisahan

lipoprotein. Sentrifus ini menghasilkan panas yang cukup

besar sebagai akibat dari gesekan pada kecepatan tinggi

sehingga membutuhkan pendingin.

Tabletop airfuge ultracentrifuge mampu mencapai

gaya sentrifugasi hingga 165000 kali gravitasi. Hal ini

digunakan di laboratorium klinik untuk membersihkan

serum dari kilomikron sehingga analisis yang akurat dapat

dilakukan pada infranatan tersebut.

b) Prinsip sentrifugasi

Di dalam cairan, partikel yang memiliki berat jenis lebih

besar akan mengendap sebagai sedimen dan partikel yang

lebih ringan akan mengapung di bagian atas cairan. Semakin

besar perbedaan berat jenisnya maka semakin cepat terjadi

pemisahan, jika tidak terdapat perbedaan berat jenis maka

partikel-partikel tersebut akan melayang (Koolman,J.;

Roehm,K.H., 2005:200).

b. Architect c4000

Architect c4000 adalah alat pemeriksaan kimia klinik yang

dapat melakukan pemeriksaan hingga 800 tes per jam. Dapat


21

menampung beban hingga 100 sampel dengan 35 posisi prioritas.

Architect c4000 memiliki karosel (‘carousel’) reagen dengan

pendingin berkapasitas : karosel bagian luar memiliki 40-60 posisi

dan karosel bagian dalam memiliki 25-30 posisi. Architect c4000

juga memiliki Integrated Chip Technology (ICT) untuk melakukan

pemeriksaan Na+, K+, dan Cl- (lihat gambar 4). Untuk spesifikasi

alat, dapat dilihat pada tabel 3.

Gambar 4. Architect c4000


(Sumber: www.architect.abbottdiagnostics.com)

Tabel 3

Spesifikasi Architect c4000

Specification Architect c4000


Detection Method Photometric
Potentiometric
Sample Types Serum, Plasma, Urine, CSF
Sample-to-sample Carryover ≤ 0,1 ppm
Sample Clott & Bubble Detection Yes
Sample Interference Measurement Hemolysis, Icterus, & Lipemia
(Sumber : www.kriticos.eu)
22

a) Pusat pemrosesan

Pusat pemrosesan adalah area utama dari aktivitas modul

pemrosesan. Sampel dan reagen didistribusikan dan dicampur

ke dalam karosel reaksi dimana proses pengujian dilakukan.

Gambar 5. Processing Center c4000


(Sumber : Architect system operations manual)

1. Komponen perangkat keras sampel

Melakukan aspirasi dan mengeluarkan sampel.

2. Komponen perangkat keras reagen

Melakukan aspirasi, mengeluarkan, dan identifikasi

reagen.

3. Komponen perangkat keras karosel reaksi

Tempat kuvet untuk pencampuran sampel dan reagen,

analisis fotometrik dan potensiometrik serta pencucian

kuvet.

b) Sistem optik

Sistem optik pada modul pemrosesan adalah sistem

fotometri langsung yang mengarahkan cahaya dari sumber


23

lampu, melewati water bath dan kuvet kemudian menuju unit

optik. Sistem ini berfokus pada cahaya yang berasal dari

sumber lampu sekaligus mengukur 16 panjang gelombang

yang berbeda.

Gambar 6. Sistem optikal c4000


(Sumber : Architect system operations manual)

1. Lampu 8. Kaca / cermin

2. Heat glass 9. Celah

3. Lensa konveks 10. Diffraction grating

4. Lensa water bath 11. Susunan linear fotodioda

5. Kuvet 12. Preamp board

6. Shutter 13. Data acquisition (DAQ) board

7. Lensa konveks 14. Central processing unit (CPU) board

Sistem pengukuran yang terjadi sebagai berikut :

1. Lensa konveks memfokuskan cahaya dari lampu tungsten

halogen dan melewatkan cahaya melewati kuvet untuk

memungkinkan pengukuran perubahan absorbans saat

reaksi berlangsung.
24

2. Lensa konveks kedua memfokuskan cahaya ke cermin,

dimana cahaya akan direfleksikan melalui celah ke kisi

difraksi.

3. Kisi tersebut memecah fokus cahaya menjadi 16

komponen panjang gelombang (340-804 nm) dan

merefleksikan spektrum cahaya ke fotodioda.

4. Fotodioda mengukur intensitas cahaya pada panjang

gelombang yang berbeda.

5. Preamp board, DAQ board, dan CPU board

mengkonversikan dan memperkuat sinyal dari fotodioda,

kemudian mengkomunikasikan nilai-nilai transmisi ke

system control center (SCC) dimana reduksi data dan

perhitungan hasil terjadi.


25

B. Kerangka berpikir

Faktor yang mempengaruhi


pemeriksaan laboratorium

Faktor Metode Reagen SDM Kondisi Persiapan


instrumen pemeriksaan sampel pasien

Ikterik Lipemik Hemolis

Trigliserida tinggi Keberadaan


makromolekul protein

Hematologi Hemostase Immunoserologi Kimia klinik

Kolesterol Protein total Albumin Bilirubin direk Elektrolit metode


indirek dll

Sampel diperiksa Sampel disentrifugasi


dengan diberi catatan dengan kecepatan tinggi

Hasil laboratorium Hasil laboratorium

Pemeriksaan laboratorium merupakan pelayanan kesehatan yang

diperlukan untuk menegakkan diagnosis, dengan menetapkan

penyebab penyakit, menunjang sistem kewaspadaan dini, monitoring

pengobatan, pemeliharaan kesehatan, dan pencegahan timbulnya


26

penyakit. Oleh sebab itu, pelayanan laboratorium klinik perlu

diselenggarakan secara bermutu dengan memperhatikan berbagai

faktor yang dapat mempengaruhi hasil pemeriksaan.

Sampel dengan kondisi lipemik merupakan salah satu faktor yang

dapat mempengaruhi hasil pemeriksaan laboratorium klinik, hal ini

disebabkan oleh keberadaan trigliserida yang tinggi dan makromolekul

protein.

Dalam pemeriksaan kimia klinik, sampel / serum lipemik dapat

mempengaruhi hasil pemeriksaan dengan menggunakan metode

fotometrik, seperti : kolesterol, protein total, bilirubin direk, elektrolit

metode indirek, dll. Untuk mengatasi hal ini, perlu dilakukan

sentrifugasi dengan kecepatan tinggi, namun untuk laboratorium yang

tidak memiliki sentrifus dengan kecepatan tinggi, pemeriksaan

menggunakan serum lipemik dilakukan dengan disertai catatan

kondisi sampel yang dicantumkan pada hasil pemeriksaan

laboratorium.

C. Hipotesa

Ada perbedaan rata-rata kadar bilirubin direk pada serum lipemik

sebelum dan sesudah sentrifugasi dengan kecepatan tinggi.


BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

A. Definisi operasional variabel penelitian

Dalam penelitian ini yang dimaksud dengan :

1. Kadar bilirubin direk adalah konsentrasi bilirubin direk yang

abnormal / lebih besar dari nilai rujukan dalam serum yang diukur

dengan alat Architect c4000 menggunakan metode reaksi diazo

dan dinyatakan dengan satuan mg/dL.

2. Serum adalah serum yang diperoleh dengan cara sentrifugasi.

3. Serum lipemik adalah serum dengan kadar trigliserida > 1000

mg/dL.

4. Sentrifugasi dengan kecepatan tinggi adalah proses pemisahan

serum dari lapisan serum yang lipemik dengan menggunakan

sentrifus berkecepatan 23000 x g selama 2 x 15 menit

(sentrifugasi dilakukan dua tahap untuk mendapatkan serum yang

benar-benar terpisah dari lapisan yang lipemik).

B. Tempat dan waktu penelitian

Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Klinik RSJPD Harapan

Kita dari bulan September sampai dengan November 2014.

27
28

C. Populasi dan sampel

1. Populasi yang digunakan pada penelitian ini adalah data hasil

pemeriksaan bilirubin direk dari serum yang terlihat ikterik pada

pasien rawat inap dan rawat jalan.

2. Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah 30 data hasil

pemeriksaan bilirubin direk dari serum yang terlihat ikterik yang

melakukan pemeriksaan darah di laboratorium klinik RSJPD

Harapan Kita. Pada populasi yang tidak diketahui maka jumlah

sampel diperhitungkan dengan rumus :

n= ( Z – a/2 )2 . P ( 1 – P )

d2

n= ( 1,64 )2 . 0,5 ( 1 – 0,5 )

0,152

n = 30 sampel

Keterangan : n = jumlah sampel

(Z – a/2) = derajat kemaknaan, (CI 90% = 1,64)

P = Proporsi (tidak diketahui = 0,5)

d = presisi/derajat akurasi (15% = 0,15)

D. Teknik pengumpulan data

Data yang digunakan dalam penyusunan karya tulis ilmiah ini

adalah data primer. Langkah-langkah pengumpulan data primer

sebagai berikut :
29

1. Melakukan observasi terhadap serum-serum pasien yang

melakukan pemeriksaan kimia darah di laboratorium RSJPD

Harapan Kita.

2. Mengumpulkan serum–serum yang terlihat ikterik. Kadar bilirubin

direk harus ≥ 3,5 mg/dL.

3. Serum–serum tersebut disimpan dalam freezer, sampai jumlahnya

memenuhi target penelitian.

4. Membuat pool serum dari serum–serum lipemik. Kadar trigliserida

dari pool serum tersebut harus ≥ 1200 mg/dL (agar kadar

trigliserida dari campuran 500 µl serum lipemik dengan 100 µl

serum yang akan diperiksa kadar bilirubin direknya menjadi >

1000 mg/dL).

5. Mengambil 500 µl pool serum lipemik untuk dicampur dengan 100

µl serum yang akan diperiksa kadar bilirubin direknya (sehingga

serum yang akan diperiksa terlihat lipemik). Campuran serum

tersebut di tempatkan dalam tabung eppendorf. Kemudian periksa

kembali kadar trigliseridanya (harus > 1000 mg/dL).

6. Melakukan pemeriksaan kadar bilirubin direk dari serum no 5.

7. Serum yang telah diperiksa kadar bilirubin direknya, kemudian

disentrifugasi dengan kecepatan tinggi.

8. Melakukan pemeriksaan kadar bilirubin direk dari serum yang

telah disentrifugasi dengan kecepatan tinggi.


30

9. Melakukan rekapitulasi data yang didapat dengan uji statistik t

dependent jika distribusi data normal atau uji Wilcoxon jika

distribusi data tidak normal.

E. Instrumen penelitian
1. Alat
 Tabung eppendorf

 Tip biru & kuning

 Mikropipet

 Architect c4000

 Centrifuge eppendorf 5804

 Centrifuge eppendorf 5430

 Rak sampel

2. Reagen

 Acid Wash

 Alkaline Wash

 Detergent A

 Acid Wash 5%

 Detergent B 10%

 Akuades

 Salin

 TG-N ① : Glycerol kinase (0,90 U/mL)

Glycerol-3-phosphate oxidase (3,8 U/mL)


31

Adenosine triphosphate (ATP)

N-ethyl-N-sulphobutyl-m-toluidine disodium

salt (ESBmT1,7 mmol/L)

Good’s buffer solution (100 mmol/L, pH 7,0)

 TG-N ② : 4-aminoantipyrine (1,5 mmol/L)

Lipoprotein lipase

Peroxidase

Good’s buffer solution (200 mmol/L, pH 6,5)

 Bil direk R1 : Sulfamic Acid 9.7 g/L

 Bil direk R2 : 2,4-dichloroaniline < 0.1 g/L

Sodium Nitrite < 0.1 g/L

HCl 33.54 g/L

3. Kalibrator

Bilirubin Calibrator untuk kalibrasi bilirubin direk.

Cholest test N Calibrator untuk kalibrasi trigliserida

4. Kontrol

Biorad level 1 dan level 2 untuk kontrol bilirubin direk.

Apolipoprotein untuk kontrol trigliserida.

5. Bahan pemeriksaan

Serum ikterik yang telah dicampur pool serum lipemik (sebelum

dan sesudah sentrifugasi dengan kecepatan tinggi).


32

6. Cara kerja

a. Persiapan pool serum lipemik

 Spesimen berupa darah vena dalam tabung tanpa

antikoagulan (tabung berwarna kuning atau merah).

 Biarkan darah membeku sampai terlihat ada sedikit serum

yang keluar dari bekuan darah.

 Tabung yang berisi darah yang telah membeku di

sentrifugasi dengan sentrifus eppendorf 5804 dengan

kecepatan 2000 x g selama 10 menit.

 Setelah proses sentrifugasi selesai perhatikan serum yang

terbentuk. Kumpulkan serum yang terlihat lipemik untuk

dijadikan pool serum.

 Lakukan pemeriksaan kadar trigliserida dari pool serum

lipemik, kadarnya harus ≥ 1200 mg/dL untuk dapat

digunakan dalam penelitian ini (agar kadar trigliserida dari

campuran 500 µl serum lipemik dengan 100 µl serum yang

akan diperiksa kadar bilirubin direknya menjadi > 1000

mg/dL).

b. Persiapan sampel (serum ikterik)

 Spesimen berupa darah vena dalam tabung tanpa

antikoagulan (tabung berwarna kuning atau merah).

 Biarkan darah membeku sampai terlihat ada sedikit serum

yang keluar dari bekuan darah.


33

 Tabung yang berisi darah yang telah membeku di

sentrifugasi dengan sentrifus eppendorf 5804 dengan

kecepatan 2000 x g selama 10 menit.

 Setelah proses sentrifugasi selesai perhatikan serum yang

terbentuk. Kumpulkan serum yang terlihat ikterik untuk

dijadikan sampel penelitian.

 Periksa kadar bilirubin direk dari serum ikterik, kadarnya

harus ≥ 3,5 mg/dL (agar kadar bilirubin direk dari campuran

500 µl serum lipemik dengan 100 µl serum ikterik yang akan

diperiksa kadar bilirubin direknya menjadi > 0,5 mg/dL).

c. Persiapan sampel penelitian

 Pipet 100 µl serum ikterik yang akan diperiksa kadar bilirubin

direknya, masukkan ke dalam tabung eppendorf yang berisi

500 µl serum lipemik. Seluruh serum yang telah dicampur

dengan serum lipemik dilakukan pemeriksaan ulang

terhadap kadar trigliserida (kadar trigliserida harus > 1000

mg/dL).

 Jika campuran serum lipemik dengan serum yang akan

dijadikan sampel penelitian memenuhi syarat (kadar

trigliserida > 1000 mg/dL), lanjutkan dengan pemeriksaan

kadar bilirubin direk (kadar bilirubin direk harus > 0,5 mg/dL).
34

 Serum lipemik yang telah diperiksa kadar bilirubin direknya

kemudian disentrifugasi menggunakan sentrifus eppendorf

5430 selama 15 menit dengan kecepatan 23000 x g.

 Setelah proses sentrifugasi selesai maka serum akan terlihat

sangat keruh pada lapisan atas dan agak jernih pada lapisan

bawah.

 Pipet lapisan bawah serum kemudian pindahkan ke dalam

tabung eppendorf lain.

 Serum yang agak jernih kembali disentrifugasi selama 15

menit dengan kecepatan 23000 x g.

 Setelah proses sentrifugasi selesai maka serum akan terlihat

keruh pada lapisan atas dan jernih pada lapisan bawah

(lebih jernih dari proses sentrifugasi pertama).

 Pipet lapisan serum yang jernih dan pindahkan ke dalam

tabung eppendorf lain.

 Serum hasil sentrifugasi siap untuk dillakukan pemeriksaan

bilirubin direk yang kedua.

d. Persiapan alat

 Nyalakan tombol Power On ke System Comunicating Center

(SCC), tombol terletak pada Central Processor Unit (CPU).

Biarkan sistem software untuk memulai proses. Tunggu

sampai Snapshot screen muncul.


35

 Nyalakan Power on ke Processing Modul (PM), tombol

terletak di bagian belakang alat. Sampler Handler (SH) dan

PM akan berada pada status offline sekitar 5 menit sebelum

berubah ke status Stopped.

 Pilih SH dan PM kemudian pilih menu Start up. Tunggu

beberapa saat sampai SH dan PM berubah ke status Ready.

Langkah-langkah dalam menyalakan alat harus berurutan

sesuai prosedur, jika tidak maka sistem komunikasi antar

komponen-komponen alat tidak akan berjalan dengan benar.

 Dipersiapkan juga peralatan lain yang dibutuhkan.

e. Persiapan reagen

 Periksa sistem supply reagen.

 Periksa kecukupan Acid wash, Alkaline wash, Detergent A,

Detergent B, Salin. Tambahkan reagen apabila volume

reagen kurang dan lakukan update supplies, dengan cara

pilih menu Supplies kemudian pilih reagen yang volumenya

ditambahkan, pilih menu Done.

 Periksa kecukupan reagen trigliserida dan bilirubin direk.

Tambahkan reagen apabila volume reagen kurang, dengan

cara masukkan reagen ke dalam carousel reagen kemudian

pilih menu Scan Reagent untuk bilirubin direk dan menu

Reset Volume untuk trigliserida.


36

f. Persiapan kalibrator

Bilirubin Calibrator tersedia dalam bentuk cair dan siap

digunakan.

Cholest test N Calibrator

 Disiapkan kalibrator dan biarkan pada suhu ruang.

 Rekonstitusi kalibrator dengan 2,0 mL akuades.

 Biarkan selama 20 menit pada suhu ruang hingga semua

lyophilize larut.

 Dibolak-balik secara perlahan-lahan sebanyak 20 kali.

g. Persiapan kontrol

» Biorad

 Disiapkan kontrol dan biarkan pada suhu ruang.

 Rekonstitusi dengan 5,0 mL akuades.

 Biarkan selama 20 menit pada suhu ruang hingga semua

lyophilize larut.

» Apolipoprotein

 Disiapkan kontrol dan biarkan pada suhu ruang.

 Rekonstitusi dengan 1,0 mL akuades.

 Biarkan selama 20 menit pada suhu ruang hingga semua

lyophilize larut.
37

h. Kalibrasi

» Bilirubin direk

 Homogenkan kalibrator sebelum digunakan.

 Pipet 100 µl Bilirubin Calibrator 1 dan Bilirubin Calibrator 2

masing-masing masukkan ke dalam cup sampel.

 Letakkan Bilirubin Calibrator 1 di posisi 1 dan Bilirubin

Calibrator 2 di posisi 2 pada rak sampel (pada prinsipnya

posisi Bilirubin Calibrator 1 harus di depan Bilirubin

Calibrator 2).

 Pilih menu Order Calibration, masukkan nomor rak sampel

yang digunakan, masukkan posisi kalibrator pada rak sampel

kemudian pilih pemeriksaan bilirubin direk.

 Pilih menu Add Order,kemudian letakkan rak sampel pada

Robotic Sampler Handler (RSH).

» Trigliserida

 Homogenkan kalibrator sebelum digunakan.

 Pipet 100 µl Cholest test N Calibrator masukkan ke dalam

cup sampel.

 Letakkan cup sampel pada rak sampel.

 Pilih menu Order Calibration, masukkan nomor rak sampel

yang digunakan, masukkan posisi kalibrator pada rak sampel

kemudian pilih pemeriksaan trigliserida.


38

 Pilih menu Add Order,kemudian letakkan rak sampel pada

RSH.

i. Kontrol

» Bilirubin direk

 Homogenkan kontrol sebelum digunakan.

 Pipet 100 µl Biorad masukkan ke dalam cup sampel.

 Letakkan cup sampel pada rak sampel.

 Pilih menu Order Control, pilih lypocheck pada menu kontrol,

masukkan nomor rak sampel yang digunakan, masukkan

posisi kontrol pada rak sampel kemudian pilih pemeriksaan

bilirubin direk.

 Pilih menu Add Order,kemudian letakkan rak sampel pada

RSH.

» Trigliserida

 Homogenkan kontrol sebelum digunakan.

 Pipet 100 µl Apolipoprotein masukkan ke dalam cup sampel.

 Letakkan cup sampel pada rak sampel.

 Pilih menu Order Control, pilih Apo pada menu kontrol,

masukkan nomor rak sampel yang digunakan, masukkan

posisi kontrol pada rak sampel kemudian pilih pemeriksaan

trigliserida.
39

 Pilih menu Add Order,kemudian letakkan rak sampel pada

RSH.

j. Metode dan prinsip pemeriksaan

» Trigliserida

Metode : Glycerol Phosphatase Oxidase

Prinsip :

Reaksi 1 :

Gliserol kinase
Gliserol + ATP gliserol-3-fosfat + ADP

Gliserol-3-fosfat oksidase
Gliserol-3-fosfat H2O2 + Dihidroksi
aseton fosfat
katalase
H2O2 H2O + O2

Reaksi 2 :

Lipoprotein lipase
Trigliserida gliserol + asam lemak
Gliserol kinase
Gliserol + ATP gliserol-3-fosfat + ADP

Gliserol-3-fosfat oksidase
Gliserol-3-fosfat H2O2 + Dihidroksi
aseton Fosfat
peroksidase
H2O2 + ESBmT + 4-aminoantipyrin seny.ungu
kemerahan

» Bilirubin direk

Metode : Reaksi diazo

Prinsip : Pemeriksaan kadar bilirubin, umumnya

berdasarkan pada reaksi antara bilirubin dengan


40

asam sulfanilat yang diazotasi (Erlich). Dalam

metode ini, bilirubin direk (fraksi terkonjugasi)

bereaksi dengan garam diazonium dengan adanya

asam sulfamat membentuk senyawa yang

berwarna (azobilirubin) dan diukur pada panjang

gelombang 548 nm. Peningkatan absorbansi

azobilirubin sebanding dengan kadar bilirubin direk.

k. Pemeriksaan Sampel

 Letakkan cup sampel yang berisi serum lipemik pada rak

sampel.

 Pilih menu Order Sample, masukkan nomor rak sampel yang

digunakan, masukkan posisi sampel pada rak sampel

kemudian pilih pemeriksaan trigliserida dan bilirubin direk.

 Pilih menu Add Order, kemudian lakukan hal yang sama

untuk sampel selanjutnya. Letakkan rak sampel pada RSH.

 Lakukan hal yang sama pada serum yang telah

disentrifugasi dengan kecepatan tinggi (pemeriksaan yang

dikerjakan hanya bilirubin direk).

 Lihat hasil pada menu Review Result. Hasil dapat di print.

l. Nilai Rujukan

Trigliserida 34 – 143 mg/dL

Bilirubin direk 0,0 – 0,5 mg/dL


41

F. Teknik Analisis Data

Untuk mengetahui apakah ada perbedaan hasil pemeriksaan

bilirubin direk pada serum lipemik sebelum dan sesudah disentrifugasi

dengan kecepatan tinggi, maka dilakukan uji statistik dengan program

SPSS versi 20. Uji yang digunakan adalah uji t dependent jika

distribusi data normal, jika distribusi data tidak normal maka

digunakan uji alternatif yaitu uji Wilcoxon.


BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil

Hasil pemeriksaan kadar bilirubin direk terhadap 30 sampel serum

ikterik dengan kondisi lipemik (kadar trigliserida > 1000 mg/dL) di

Laboratorium RSJPD Harapan Kita, diperoleh hasil dengan sebaran

data yang dapat dilihat pada tabel 4.

Tabel 4

Sebaran Data Kadar Bilirubin Direk Pada Serum Lipemik


Sebelum dan Sesudah Sentrifugasi
Dengan Kecepatan Tinggi

Rerata Minimum Maksimum SB


(mg/dL) (mg/dL) (mg/dL)
Kadar bilirubin 1,57 0,67 3,91 0,82
direk sebelum
sentrifugasi
dengan
kecepatan tinggi
Kadar bilirubin 1,68 0,80 3,99 0,81
direk sesudah
sentrifugasi
dengan
kecepatan tinggi

Pada tabel 4 dapat dilihat, bahwa nilai terendah dari kadar bilirubin

direk pada serum lipemik sebelum disentrifugasi dengan kecepatan

42
43

tinggi 0,67 mg/dL dan kadar tertinggi 3,91 mg/dL dengan rerata 1,57

mg/dL dan simpangan baku sebesar 0,82, sedangkan nilai terendah

dari kadar bilirubin direk sesudah disentrifugasi dengan kecepatan

tinggi 0,80 mg/dL dan kadar tertinggi 3,99 mg/dL dengan rerata 1,68

mg/dL dan simpangan baku sebesar 0,81.

3
Kadar Bilirubin Direk (mg/dL)

Kadar Bilirubin Direk


2 (mg/dL) Sebelum
Sentrifugasi Dengan
Kecepatan Tinggi

Kadar Bilirubin Direk


1 (mg/dL) Sesudah
Sentrifugasi Dengan
Kecepatan Tinggi

0
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29
Nomor Sampel

Gambar 7. Perbandingan kadar bilirubin direk pada serum lipemik


sebelum dan sesudah sentrifugasi dengan kecepatan
tinggi

Dari penelitian yang dilakukan, didapat data sebagai berikut : dari

30 sampel yang diperiksa, diperoleh hasil kadar bilirubin direk pada

serum lipemik (sebelum sentrifugasi dengan kecepatan tinggi) lebih


44

rendah dibandingkan kadar bilirubin direk pada serum sesudah

sentrifugasi dengan kecepatan tinggi.

Untuk mengetahui apakah terdapat perbedaan yang signifikan dari

pemeriksaan kadar bilirubin direk pada serum lipemik sebelum dan

sesudah sentrifugasi dengan kecepatan tinggi, maka dilakukan uji

statistik t dependent, namun karena distribusi data tidak normal maka

dilakukan uji Wilcoxon.

Hasil uji statistik pada alfa 10% diperoleh nilai p sebesar 0,000,

nilai p lebih kecil dari alfa (0,000 < 0,1). Dengan demikian dapat

disimpulkan bahwa pada tingkat kepercayaan 90%, ada perbedaan

rata-rata kadar bilirubin direk pada serum lipemik sebelum dan

sesudah disentrifugasi dengan kecepatan tinggi (lihat lampiran 2).

B. Pembahasan

Dari penelitian yang dilakukan, didapat hasil sebagai berikut : rata-

rata kadar bilirubin direk pada serum lipemik lebih rendah

dibandingkan kadar bilirubin direk dari serum yang telah melalui

proses sentrifugasi dengan kecepatan tinggi. Hal ini sesuai dengan

kepustakaan yang menyatakan bahwa :

1. Serum lipemik menyebabkan hasil laboratorium menjadi tinggi

atau rendah palsu melalui mekanisme inhomogenitas. Serum

yang mengandung trigliserida dengan konsentrasi tinggi dapat

menyebabkan trigliserida tersebut mengapung pada permukaan

serum selama proses sentrifugasi atau penyimpanan. Ketika


45

dilakukan pemeriksaan, trigliserida dan konstituen lainnya tidak

terdistribusi secara merata di dalam serum, hal ini dapat

menyebabkan konsentrasi yang sangat tinggi dari lipid di lapisan

atas dan menyebabkan gangguan pada pemeriksaan lain. Di sisi

lain lipid yang terdapat pada lapisan atas serum dapat

menyebabkan konsentrasi komponen-komponen yang larut dalam

air seperti elektrolit dan metabolit lainnya menjadi lebih rendah

dari yang seharusnya. Oleh sebab itu serum harus dihomogenkan

dengan baik sebelum dilakukan pemeriksaan (Guder,W.G.,et al.,

2003:76).

2. Serum lipemik menyebabkan kekeruhan, sehingga menganggu

pembacaan hasil pada pemeriksaan dengan metode fotometri

(Guder, W.G., et al, 2003:77).

3. Alat yang digunakan dalam penelitian ini memiliki mekanisme

aspirasi sampel sebagai berikut : Probe sampel akan turun 3 mm

dari permukaan sampel, sehingga bila melihat point nomor 1 maka

sampel yang terbawa oleh probe akan tercampur dengan lipid

yang terdapat pada lapisan atas sehingga kadar bilirubin direk

akan lebih rendah dari yang seharusnya. Untuk mengatasi hal

tersebut dalam pengerjaan serum sebelum proses sentrifugasi

dengan kecepatan tinggi, peneliti melakukan pemeriksaan 5

sampai 10 sampel dalam satu kali running.


46

Hasil penelitian ini tidak sejalan dengan kit insert reagen bilirubin

direk yang digunakan (lihat tabel 2), namun dalam kit insert tersebut

menggunakan 5 sampel dan penelitian dilakukan pada serum dengan

kadar bilirubin direk 0,4 mg/dL (dalam batas nilai rujukan).


BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

Dari penelitian yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan :

Terdapat perbedaan yang bermakna dari hasil pemeriksaan kadar

bilirubin direk pada serum lipemik sebelum dan sesudah sentrifugasi

dengan kecepatan tinggi.

B. Saran

Dari hasil dan proses penelitian yang telah dilakukan, maka

disarankan :

1. Memperbanyak sebaran populasi sampel, sehingga penelitian

dapat mencakup populasi yang lebih luas.

2. Melakukan sentrifugasi dengan kecepatan tinggi terlebih dahulu,

pada serum lipemik yang akan dilakukan pemeriksaan bilirubin

direk (mengacu pada simpangan baku hasil penelitian).

3. Melakukan penelitian mengenai waktu dan kecepatan sentrifugasi

yang optimal, misal dengan menaikkan kekuatan gravitasi dan

mengurangi waktu sentrifugasi (berdasarkan latar belakang

masalah dan penelitian yang dilakukan dimana proses sentrifugasi

sampel lipemik membutuhkan waktu 2 x 15 menit).

47
48

4. Penelitian serupa dapat dilakukan terhadap parameter kimia klinik

lain yang hasil pemeriksaannya dipengaruhi oleh sampel dengan

kondisi lipemik.
DAFTAR PUSTAKA

Arneson, W., Brickell, J., Clinical Chemistry : A Laboratory Perspective,


Davis, Philadelphia, 2007.

Bishop, M.L., Fody, E.P., Schoeff, L.E., Clinical Chemistry, Seventh


Edition, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 2013.

Burtis, C.A., Ashwood,E.R., Tietz Textbook of Clinical Chemistry, Third


Edition, Saunders, Philadelphia-Pennsylvania, 1999.

Chessbrough, M., District Laboratory Practice in Tropical Countries,


Second Edition, Cambridge University Press, Cambridge, 2005.

Dasgupta, A., Sepulveda, J.L., Accurate Result In The Clinical Chemistry,


Elsevier, London-Waltham-San Diego, 2013.

Dimeski, G., Jones, B.W., Lipaemic Samples : Effective Process for Lipid
Reduction Using High Speed Centrifugation Compared With
Ultracentrifugation, 2011;21(1):86-94.

Fischbach, F.T., Dunning, M.B., A Manual of Laboratory and Diagnostic


Test, 8th Edition, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 2009.

Guder, W.G., et al., Diagnostic Samples : From The Patient To The


Laboratory, 4thUpdate Edition, Wiley-Blackwell, Munich, 2009.

., Samples : From The Patient To The Laboratory, 3rd


Revised Edition, Willey-VCH, Munich, 2003.

Hawkins, R., Managing the Pre and Post-analytical Phases of the Total
Testing Process, US National Library of Medicine National Institutes of
Health, 2012. (www.annlabmed.org, 10/11/2014)

Higgins, C., Understanding Investigations : A Guide for Nurses, Midwives,


and Health Professionals, Third Edition, Wiley-Blackwell, West
Sussex, 2013.

Isselbacher, et al, Prinsip-prinsip Ilmu Penyakit Dalam, Asdie, A.H.(Ed),


EGC, Jakarta, 1995.

Kee, J.L., Pemeriksaan Laboratorium & Diagnostik, Edisi 2, Ester, M.(Ed),


EGC, Jakarta, 1997.

49
50

Kit Insert Direct Bilirubin Architect/Aeroset ABBOTT Laboratories.

Kit Insert Trigliserida Sekisui.

Lee, M., Basic Skills in Interpreting Laboratory Data, Fourth Edition,


American Society of Health-System Pharmacists Inc, Wisconsin Avenue,
2009.

Lieseke, C.L., Zeibig, E.A., Essentials Of Medical Laboratory Practice,


Davis Plus, Philadelphia, 2012.

Martin, D.L., Medical Assistant Exam Review, Fourth Edition, Kaplan


Publishing, New York, 2013.

Pagana, K.D., Pagana, T.J., Mosby’s Diagnostic & Laboratory Test


Reference, 11th Edition, Elsevier, Missouri, 2013.

Republik Indonesia, Peraturan Menteri Kesehatan No.43 Tahun 2013


tentang Penyelenggaraan Laboratorium Klinik, Jakarta, 2013.

Riswanto, Pemantapan Mutu Pra-analitik Pemeriksaan Laboratorium,


2010. (www.labkesehatan.blogspot.com, 16/05/2014)

Rogers, K., Blood Physiology and Circulation, Britanica Educational


Publishing, New York, 2011.

Sacher, R.A., McPherson, R.A., Tinjauan Klinis Hasil Pemeriksaan


Laboratorium, Hartanto, H. (Ed), EGC, Jakarta, 2002.

Sloane, E., Anatomi dan Fisiologi Untuk Pemula, Widyastuti, P.(Ed), EGC,
Jakarta, 1995.

Sood, R., Textbook of Medical Laboratory Technology, Jaypee Brothers


Medical, Publisher (P) Ltd, New Delhi, 2006.

., Medical Laboratory Technology Methods and Interpretations, 5th


Edition, Jaypee Brothers Medical Publisher (P) Ltd, New Delhi, 1999.

Speicher, C.E., Smith, J.W., Pemilihan Uji Laboratorium yang Efektif,


Kresno, S.B.(Ed), EGC, Jakarta, 1994.

Taieb, A., Understanding and Interpreting Hematological Investigations,


Aberdeen University Press Service, United States of America, 2009.
51

Tristyanto, N., Pola Hubungan Antara Kadar Bilirubin Serum dengan


Bilirubinuria, Jurnal Healthy Science Akademi Analis Kesehatan
Malang, Vol.3, No.1. (www.aakmalang.blogspot.com, 02/11/2014)

West, K.B., Hunt, S., Applegate, E., Today’s Medical Assistant Clinical &
Administrative Procedures, 2nd Edition, Elsevier, Missouri, 2013.

Wong, D.L., et al, Buku Ajar Keperawatan Pediatrik, Edisi 6, Yudha, E.K.,
dkk.(Eds), EGC, Jakarta, 2002.
Tabel 5

Hasil Pemeriksaan Kadar Bilirubin Direk Pada Serum Lipemik


Sebelum dan Sesudah Sentrifugasi
Dengan Kecepatan Tinggi

Kadar Bilirubin Direk (mg/dL)


No Sampel Konsentrasi
Sebelum Sesudah
Trigliserida (mg/dL)
Sentrifugasi Sentrifugasi
Kecepatan Kecepatan
Tinggi Tinggi
1 Sampel 1 1120 1,39 1,49
2 Sampel 2 1138 3,91 3,99
3 Sampel 3 1129 0,96 1,02
4 Sampel 4 1116 0,95 1,01
5 Sampel 5 1145 1,72 1,77
6 Sampel 6 1127 1,08 1,15
7 Sampel 7 1111 1,65 1,80
8 Sampel 8 1115 1,42 1,55
9 Sampel 9 1131 1,97 2,10
10 Sampel 10 1135 1,31 1,43
11 Sampel 11 1090 2,13 2,20
12 Sampel 12 1092 1,84 1,92
13 Sampel 13 1071 2,69 2,85
14 Sampel 14 1086 1,03 1,12
15 Sampel 15 1102 2,15 2,27
16 Sampel 16 1104 2,08 2,16
17 Sampel 17 1092 1,39 1,49
18 Sampel 18 1091 0,67 0,80
19 Sampel 19 1081 2,05 2,16
20 Sampel 20 1108 0,96 1,06
21 Sampel 21 1102 0,78 0,89
22 Sampel 22 1105 0,87 0,99
23 Sampel 23 1094 0,85 0,95
24 Sampel 24 1133 3,31 3,40
25 Sampel 25 1136 0,82 0,98
26 Sampel 26 1138 0,76 0,95
27 Sampel 27 1178 0,84 0,98
28 Sampel 28 1137 1,07 1,23
29 Sampel 29 1164 1,43 1,57
30 Sampel 30 1162 2,93 3,01
UJI STATISTIK WILCOXON

Tujuan dilakukan uji ini, untuk mengetahui apakah terdapat perbedaan

kadar bilirubin direk pada serum lipemik sebelum dan sesudah

sentrifugasi dengan kecepatan tinggi.

Langkah-langkah uji statistik :

1. Membuat hipotesa

Ho : Tidak ada perbedaan rata-rata kadar bilirubin direk

pada serum lipemik sebelum dan sesudah sentrifugasi

dengan kecepatan tinggi.

Ha : Ada perbedaan rata-rata kadar bilirubin direk pada

serum lipemik sebelum dan sesudah sentrifugasi

dengan kecepatan tinggi.

2. Menentukan tingkat kepercayaan 90% dan alfa 10%.

3. Melakukan uji kernomalan data.

Tests of Normality
a
Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Kadar Bilirubin Direk
Sebelum Sentrifugasi
,167 30 ,033 ,873 30 ,002
Dengan Kecepatan
Tinggi
Kadar Bilirubin Direk
Sesudah Sentrifugasi
,152 30 ,073 ,866 30 ,001
Dengan Kecepatan
Tinggi
Jumlah sampel sebanyak 30, maka digunakan tabel Shapiro-Wilk.

p_kritis alfa 10% = 0,1

p_value = 0,001 dan 0,002

p_value < p_kritis  distribusi data tidak normal

Distribusi tidak normal  Uji Wilcoxon

4. Uji Wilcoxon

5. Keputusan

p_kritis alfa 10% = 0,1

p_value = 0,000

p_value < p_kritis  Ho ditolak

6. Kesimpulan

Pada tingkat kepercayaan 90%, ada perbedaan rata-rata kadar

bilirubin direk pada serum lipemik sebelum dan sesudah sentrifugasi

dengan kecepatan tinggi.


Gambar 8. Centrifuge eppendorf 5804

Gambar 9. Centrifuge eppendorf 5430

Gambar 10. Tip biru


Gambar 11. Tip kuning

Gambar 12. Tabung eppendorf

Gambar 13. Mikropipet


Gambar 14. Architect c4000 dan rak sampel
SERUM LIPEMIK DAN SERUM HASIL SENTRIFUGASI DENGAN
KECEPATAN TINGGI

Gambar 15. a. Serum lipemik


b. Serum setelah sentrifugasi dengan kecepatan 23000 x g
selama 15 menit tahap pertama
c. Serum setelah sentrifugasi dengan kecepatan 23000 x g
selama 15 menit tahap kedua
BIODATA

IDENTITAS PRIBADI
Nama : Leli Diana Veronika
NIM : P3.73.34.1.12.106
Tempat / Tanggal Lahir : Sumatra Utara / 27 Maret 1985
Jenis Kelamin : Perempuan
Agama : Kristen Katholik
Alamat : Jl. Sawo Rt 007 / Rw 002 No.5
Kel. Baru
Kec. Pasar rebo, Jakarta Timur

RIWAYAT PENDIDIKAN
SD : SDN KALISARI 01 PAGI
SLTP : SLTPN 179 JAKARTA
SMAK : SMAK LABIOMED DITKESAD

Anda mungkin juga menyukai