Vol.43, No. 1 Biol. Pharm. Banteng.

43, 169–174 (2020) 169

Catatan

Passi fl ora edulis Ekstrak Daun: Bukti Efek Antidiabetes dan Antiplatelet pada Tikus

Bruno Cesar Correa Salles, Itu, † Marcelo Aparecido da Silva, Itu Lara Taniguthi, Itu
Juliane Naiara Ferreira, Itu Claudia Quintino da Rocha, B Wagner Vilegas, ç
Pollyana Hammoud Dias, ç Paula Comune Pennacchi, d, ‡ Stella Maris da Silveira Duarte, Itu
Maria Rita Rodrigues, Itu Maísa Ribeiro Pereira Lima Brigagão, dan dan Fernanda Borges
de Araújo Paula *, Itu

Itu Departemen Analisis Klinis dan Toksikologi, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi, Universitas Federal Alfenas; Alfenas-MG 37130–001, Brasil: B Departemen
Kimia, Universitas Federal Maranhão; São Luis-MA 65080–
805, Brasil: ç Institute of Biosciences, Universitas Negeri São Paulo, Kampus Pesisir São Vicente; São Vicente-SP 11380–972, Brasil: d Departemen
Analisis Klinis dan Toksikologi, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi, Universitas São Paulo; São Paulo-SP 05508–000, Brasil: dan dan Institut Ilmu
Biomedis, Universitas Federal Alfenas; Alfenas-MG 37130–001, Brasil.

Diterima 1 Desember 2018; diterima 3 Oktober 2019; publikasi muka dirilis secara online 22 Oktober 2019

Berbeda Passi fl ora spesies telah ditunjuk sebagai obat herbal yang menjanjikan karena sifat antioksidan; namun, efeknya pada
proses oksidatif yang disebabkan oleh diabetes masih kontroversial. Kami bertujuan untuk mengevaluasi efek ekstrak hidroetanol 70% dari P.
edulis daun pada penanda darah biokimia, glikasi kolagen, produksi spesies oksidan dan agregasi trombosit pada tikus diabetes. Analisis
fitokimia ekstrak dilakukan dengan dereplikasi menggunakan LC yang digabungkan dengan Photodiode Array Detector dan Mass
Spectrometer detector. Tikus Wistar jantan dimasukkan ke dalam kelompok kontrol dan kelompok yang diberikan aloksan (150mg / kg)
secara intraperitoneal, ekstrak (200mg / kg / hari, selama 90 hari) dan kombinasi aloksan dan ekstrak. Analisis fitokimia menunjukkan
adanya flavonoid Ç- glikosida dalam ekstrak. Hewan diabetes yang diobati dengan ekstrak menunjukkan peningkatan dalam kontrol
glikemik, kolagen glikasi yang berkurang, kadar kolesterol lipoprotein (non-HDL) kepadatan tinggi, kolesterol total dan kreatinin, produksi
spesies oksidan dan agregasi dalam trombosit dalam kaitannya dengan hewan diabetes non-diabetes. -diobati. Hasil kami menunjukkan itu P.
edulis Ekstrak daun memberikan manfaat kesehatan bagi keadaan diabetes, mencegah munculnya komplikasinya. Efeknya dapat dikaitkan
dengan flavonoid, di antaranya adalah flavonoid Ç- glikosida isoorientin.

Kata kunci Passi fl ora edulis; diabetes mellitus; agregasi trombosit; penanda biokimia; kuanti fi kasi; isoorientin

PENGANTAR pengobatan herbal yang menjanjikan dan studi eksperimental telah

Diabetes melitus dan komplikasinya merupakan masalah kesehatan
masyarakat yang serius karena tingginya angka kejadian, morbiditas dan
mortalitas. 1.2) Hiperaktivasi dan hiperagregasi platelet, yang sering terlihat pada
pasien diabetes, memainkan satu peran penting dalam perkembangan
komplikasi yang menyebabkan disfungsi vaskular yang disebabkan oleh
diabetes mellitus. Diketahui bahwa hiperglikemia menyebabkan pembentukan
produk akhir glikasi lanjutan (AGEs) serta spesies oksidan seperti spesies
oksigen reaktif (ROS) dan spesies nitrogen reaktif (RNS) berkontribusi pada
perubahan atau hilangnya fungsi seluler. 3)
Saat ini, ada beberapa jenis obat penurun glukosa yang memiliki efek
anti-diabetes, tetapi karena mahalnya harga obat komersial, selain observasi
sejumlah besar interaksi obat dan efek samping. 4) Demikian banyak perhatian
telah difokuskan pada studi tanaman obat untuk pengobatan diabetes melitus
dan komplikasinya.
menyarankan bahwa ekstrak daun berbeda Passi fl ora spesies mungkin
memiliki sifat hipoglikemik atau antioksidan. 4.7) Sifat-sifat ini telah dikaitkan
terutama dengan adanya senyawa fenolik, di antaranya adalah flavonoid Ç- glikosida.
Namun, penting untuk dicatat bahwa ada perbedaan efek ekstrak yang
diperoleh dari Passi fl ora edulis pada hewan penderita diabetes dan manusia.
Bagian dari kontroversi ini dapat dikaitkan dengan beberapa faktor seperti,
model eksperimental yang berbeda, penanda yang dianalisis berbeda,
protokol yang berbeda untuk pembuatan ekstrak dan akibatnya komposisi
kimianya yang berbeda. 9–12) Selain itu, sebagian besar studi mengevaluasi
properti Passi fl ora edulis Telah dilakukan ekstrak pada komplikasi diabetes
dengan ekstrak yang diperoleh dari biji atau kulit buah. Ada beberapa
penelitian tentang efek ekstrak Passi fl ora edulis daun pada hewan diabetes.
Oleh karena itu, informasi ilmiah mengenai penggunaan daun markisa dalam
pengobatan diabetes perlu diteliti lebih lanjut.

Dengan cara ini, banyak penelitian mempertimbangkannya Passi fl ora edulis di
† Alamat sekarang: Universitas José do Rosário Vellano; Alfenas-MG 37130–000, Brasil.
‡ Alamat sekarang: Pusat Penelitian Kanker Nasional Spanyol (CNIO); 2802, Spanyol.
Dengan demikian, tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengukur avonoid
utama dari P. edulis ekstrak daun dan mengevaluasi pengaruhnya pada kontrol
glikemik, pembentukan ujung glikasi lanjut (AGEs) dan aktivasi platelet,
terutama agregasi dan produksi spesies oksidan serta penanda fungsi ginjal dan
profil lipid, pada tikus diabetes.

* Kepada siapa korespondensi harus ditujukan. e-mail: fernanda.paula@unifal-mg.edu.br

© 2020 Perhimpunan Farmasi Jepang
170
BAHAN DAN METODE
Bahan Tanaman dan Persiapan Ekstrak Sampel,
diklasifikasikan P. edulis Spesies Sims, dikumpulkan di kota Alfenas, Minas
Gerais, Brazil (21 ° 27 ′ 33 ″ S; 46 ° 01 ′ 59 ″ W; tinggi 789m), dan diidentifikasi
oleh Dr. Douglas Carvalho, Universitas Federal Lavras. Nomor voucher
22356 diperoleh oleh Universitas Federal Lavras, Departemen Biologi,
herbarium ESAL. Ekstrak dari P. edulis Daun Sims disiapkan sesuai dengan
metode yang dilaporkan Rudnicki dkk. 13) Itu
P. edulis Daun Sims dikeringkan pada suhu 40 ° C dalam ruang sirkulasi
udara dimana beratnya diukur dalam shift dari 5 jam sampai diperoleh berat
konstan. Setelah dikeringkan, bahan tanaman melewati divisi kasar diikuti
dengan penyemprotan di pabrik Wiley. Ekstrak kering diperoleh dengan
maserasi 70% etanol dengan proporsi satu bagian bubuk menjadi 10 bagian
larutan etanol dan kemudian diuapkan dengan tekanan tereduksi pada 46,4 ± 1,9
° C; pelarut organik dihilangkan dan ekstrak dikeringkan dalam lyophilizer.
Karakterisasi Kimia Ion LC-electrospray-
Analisis dan ion trap (ESI-IT) -MS analisis dilakukan dalam Thermo Scienti fi
c ® LCQ Fleet mass spektrometer. Kromatografi cair kinerja ultra (UPLC)
-ESI-MS analisis digunakan untuk mengukur isoorientin dalam ekstrak dan
senyawa yang ada dalam ekstrak diidentifikasi dengan HPLC-ESI-IT-MS,
pada ACQUITY ™ Sistem UPLC (Waters Corp., Milford, MA, USA) dengan
auto-sampler yang dikondisikan. Validasi metode dilakukan sesuai dengan
pedoman untuk metode bioanalitik. 14)
Analisis dilakukan oleh LC-ESI-IT-MS online dalam Thermo Scienti fi c ® LCQ b) diperoleh persamaan kurva kalibrasi analitik. Batas kuanti fi kasi (LOQ)
Fleet mass spektrometer. Kolom analitik yang digunakan untuk pemisahan
LC adalah Kinetex ®
C18 (2.1.2) × 100mm, 100Å dan 5 µ m). Analisis dilakukan dengan air yang
mengandung 0,1% asam format (A) dan asetonitril + 0,1% asam format (B)
ditambahkan ke asam format 0,1% dalam gradien eksplorasi dimulai dengan
10% hingga 100% B dalam 32 menit pada aliran tingkat 1.0mL / mnt. Sampel
diinfuskan ke dalam spektrometer massa dari sistem HPLC, di mana sampel
dianalisis secara online oleh ESI-MS dalam mode negatif dan detektor UV
terkait. Data spektra massa diperoleh dalam spektrometer massa LCQ
Armada yang sama dari Thermo Scientif ic ®, dengan penyisipan langsung dari
perangkat sampel melalui analisis injeksi aliran kontinu (FIA). Sampel
diionisasi dengan sumber ESI dan fragmentasi diperoleh dalam beberapa
tahap (MS n) dalam antarmuka tipe IT. Modus negatif dipilih untuk
pembangkitan dan analisis semua spektrum. Kondisi percobaan adalah:
tegangan kapiler - 35V, semprot
tegangan - 5000V, suhu kapiler 350 ° C, gas pembawa N. 2
dan aliran 60 (unit arbitrer). Akuisisi lagu itu m / z
100–2000 dengan dua atau lebih peristiwa sapuan yang dilakukan secara bersamaan dalam
spektrum.
Persiapan Solusi Standar untuk Analisis Kuantifikasi
ysis Isoorientin (kemurnian> 98%) dibeli dari Sigma,
dilarutkan dalam 1mL MeOH / H 2 Larutan 8: 2 (v / v) (1mg / mL) dan disaring
pada 0,22 µ selaput dari filter nilon. Sebuah
alikuot (10 µ L) diencerkan dengan MeOH / H 2 8: 2 (v / v) hingga volume akhir
1mL (100ppm, larutan A). Solusi A adalah
diencerkan untuk mendapatkan konsentrasi larutan 0,5, 1,0, 2,0, 4,0,
8.0, 16.0 dan 32.0ppm.
Analisis dilakukan pada ACQUITY ™ Sistem UPLC (Waters Corp., Milford,
MA, USA) dengan kontra
Biol. Pharm. Banteng. Vol.43, No.1 (2020)
sampler otomatis ditioned. Kolom analitik yang digunakan adalah ACQUITY ™
UPLC XBridge C18 (2.1.2) × 50mm, 2.5 µ m kolom; Waters Corp.). Analisis
dilakukan dengan air yang mengandung 0,1% asam format (A) dan metanol
(B) dengan laju aliran 0,4mL / menit. Untuk perhitungan, program gradien
digunakan sebagai berikut: 0–4 menit, 47–100% B linier; 4-5 menit, 100% B.
Volume injeksi adalah 5 µ L dalam perhitungan. Deteksi spektrometri massa
dilakukan dengan menggunakan Waters ACQUITY ™ Xevo TQD triple
quadrupole tandem mass spectrometer (Waters Corp., Manchester, UK)
dilengkapi dengan sumber ESI dan ZSpray Probe dioperasikan dalam mode
negatif. Kondisi MS adalah sebagai berikut: suhu kapiler 150 ° C; tegangan
kapiler 3.5kV; tegangan kerucut 40kV; suhu larutan 300 ° C; sumber aliran
gas: desolvasi 600L / jam. Modus pemantauan reaksi multipel (MRM)
digunakan untuk kuanti fi kasi dan konfirmasi. Semua data diperoleh dan
diproses menggunakan MassLynx ™ v4.1 perangkat lunak.
Validasi Metode Validasi metode dilakukan sesuai dengan pedoman
untuk metode bioanalitik (US Food and Drug Administration, 2001).
Parameter validasi seperti spesifisitas, sensitivitas, akurasi, presisi,
pemulihan, efek matriks, dan stabilitas diselidiki.
Kurva kalibrasi linier isoorientin setara dengan 0,5, 1, 2, 4, 8, 16 dan 32 µ g
/ mL dalam metanol dengan tiga ulangan untuk uji intraday dan interday.
Kurva kalibrasi untuk flavonoid dibuat dengan memplot rasio luas puncak ( y)
versus konsentrasi ( x) dari standar dengan menggunakan 1 / x- regresi linier
kuadrat terkecil tertimbang. Konsentrasi flavonoid dihitung dengan interpolasi
linier dari kurva kalibrasi. Batas deteksi (LDQ) ditentukan sebagai sinyal yang
setara dengan 3,3 kali nilai rasio koefisien linier ( Itu) dan lereng ( B) ( 3.3 × a /
diberikan 10 kali nilai rasio ini. Efek matriks ditentukan dengan
membandingkan luas puncak analit (isoorientin) dalam sampel ekstrak (A)
dengan larutan standar analit (B). Efek matriks dianggap tidak signifikan bila
rasio (A / B × 100)% analit berada di antara 85 dan 115%. Pemulihan analit
ditentukan dengan membandingkan luas puncak larutan standar analisis
(8ppm) setelah ekstraksi fase padat (SPE) dengan larutan standar analisis
(8ppm) sebelum SPE yang mewakili pemulihan 100%. Rasio setelah SPE /
sebelum SPE × 100 ditentukan. Presisi dan akurasi dinilai selama tiga hari
berturut-turut dengan menggunakan campuran yang mengandung larutan
standar analit konsentrasi rendah, sedang atau tinggi (1, 25 dan 50ppm).
Presisi dinyatakan sebagai persentase deviasi standar relatif (RSD%), dan
akurasi dihitung menggunakan persamaan berikut: [(konsentrasi terukur
rata-rata - konsentrasi berduri) / (konsentrasi berduri)] × 100%. Presisi dan
akurasi dalam sehari dan antar hari ditentukan dengan analisis berulang dari
sampel analit.
Hewan Penelitian dilakukan sesuai dengan prinsip etika untuk hewan
percobaan yang telah diadopsi oleh Sekolah Tinggi Percobaan Hewan Brazil,
dan penelitian tersebut disetujui oleh komite etika penelitian hewan di
Universitas Federal Alfenas (no. 398 / 2012). Total, 80 tikus Wistar jantan
dewasa (20 per kelompok) ( Rattus norvegicus) beratnya 300 ± 25g yang
diperoleh dari Unifal-MG vivarium digunakan dalam penelitian ini. Tikus itu
Vol.43, No.1 (2020) Biol. Pharm. Banteng. 171

bertempat di ruang dengan suhu terkontrol dengan jadwal 12 jam terang / gelap
dengan makanan dan air tersedia ad libitum.
Protokol Percobaan Hewan Hewan-hewan itu allo-
dikelompokkan menjadi empat kelompok: kontrol (C) - hewan non-diabetes yang tidak
diobati dengan ekstrak kering; penderita diabetes (D) - hewan yang diobati dengan
aloksan; ekstrak (E) - hewan non-diabetes yang diobati dengan P. edulis ekstrak daun
kering; ekstrak diabetes (DE) -hewan yang diobati dengan aloksan juga diobati dengan P.
edulis ekstrak daun kering. Alloxan (larutan 2%) diberikan secara intraperitoneal (150mg
/ kg) menurut Martins dkk. 15) Dalam penelitian ini, tikus diabetes tipe 1 didefinisikan
sebagai tikus dengan glikemia lebih dari 250mg / dL setelah 7 hari injeksi aloksan.
Glukosa darah dipantau secara teratur menggunakan strip tes dengan darah yang
diambil dari ekor selama percobaan setiap 15 hari setelah tikus diabetes ditentukan.
Ekstrak kering diencerkan dalam air dan diberikan ke hewan (200mg / kg) 11.15)
dengan pemberian selama 13 minggu setelah induksi diabetes. Kelompok
kontrol menerima air 0,5mL. 16)
Berat badan hewan dicatat setiap minggu. Pakan harian dan asupan air
diperiksa tiga kali seminggu selama periode perawatan. Hewan dibius pada
hari ke 90, dan darah diambil dengan menusuk aorta abdominalis.
Darah yang terkumpul dan penentuan kreatinin, urea, glukosa,
tein (VLDL)) menggunakan metode enzimatis. Kadar haemo-globin terglikasi
(HbA1c) ditentukan dalam darah dengan HPLC pada peralatan Bio-Rad. 17)
Agregasi trombosit dinilai dalam alikuot plasma yang kaya akan trombosit,
diperoleh dari hewan yang diberi perlakuan sesuai dengan metode Baldissera-Jr, 18) menggunakan
1 µ M adenosin difosfat sebagai agonis dalam aggregometer saluran ganda
(Qualiterm) yang distandarisasi pada 37 ° C.
Produksi spesies pengoksidasi dalam trombosit dari tikus diabetes dan
non-diabetes dengan ada dan tidak adanya Phorbol myristate acetate (PMA)
dievaluasi dengan che-miluminescence, menurut Martins 15) dengan
modifikasi. Sistem lengkap (diabetes, ekstrak diabetes, kontrol ekstrak dan
kontrol negatif) berisi: trombosit (1 × 10 8 sel / tes), luminol (1mM) dan PMA
(16ng / assay). Hasilnya diperkirakan dengan area emisi cahaya terintegrasi.
Kolagen yang diperoleh dari tendon tikus diekstraksi menurut Maria dan
Wada. 19) Serat dikeringkan pada suhu kamar selama 24 jam, ditimbang dan
dibilas dengan etanol 70%. Kolagen dilarutkan dalam asam asetat (0,5 M)
sambil diaduk selama 48 jam pada suhu 4 ° C. Kemudian protein didialisis
dalam Spectra ® membran dialisis dengan kapasitas vol / 3.2mL dan membuka
12–14000KDa terhadap air suling steril pada suhu 2–8 ° C sambil diaduk
selama 48 jam. Uji fluoresensi digunakan untuk memeriksa modifikasi AGEs

fruktosamin, kolesterol total, kolesterol high density lipoprotein (HDL) dan konten dalam kolagen. 20)

trigliserida dilakukan dalam serum, menggunakan alat analisa otomatis

LabMax Plenno (Labtest).
Fungsi ginjal dievaluasi melalui penentuan kreatinin dan urea dalam
serum. Konsentrasi kreatinin ditentukan dengan metode Jaffe yang
dimodifikasi. Kadar urea dan glukosa darah dievaluasi menggunakan metode
enzimatik, kadar fruktosamin dengan metode kinetik dan profil lipid serum
dinilai melalui penentuan kolesterol total, kolesterol HDL, trigliserida dan
kolesterol non-HDL (low density lipoprotein (LDL) dan lipopro dengan
densitas sangat rendah
Analisis statistik Data yang ditemukan untuk setiap variabel diserahkan
ke ANOVA. Beberapa perbandingan antara rata-rata perlakuan yang berbeda
dilakukan dengan menggunakan uji Tukey; P. nilai> 0,05 adalah signifikan.
Program Sisvar versi 5.3 digunakan.
HASIL DAN DISKUSI
Analisis dari P. edulis ekstrak menunjukkan adanya beberapa

Tabel 1. Identifikasi Puncak Kromatografi HPLC Spesies dari Genus P. edulis dan Data Diambil dari HPL-PDA dan HPLC-ESI-ITMS / MS
Analisis

Tidak. Molekul [M - H] - Ion fragmen ( m / z) UV maks (nm)

1 Quercetin-3- O-β- glukopiranosil-7- O-α- rhamnopyranoside dan Quercetin-8- O-β- glukopiranosil-6-

609 519; 489; 462447; 301 268, 330sh, 335
O-α- rhamnopyranoside.dll
2 6,8-Di-C- β- glukupirinosilapigenin (vicenin-2) 593 575; 503; 473; 353 269, 330sh, 335
3 Apigenin-6- Ç- arabinoside-8- Ç- glikosida 563 504; 473; 443 267, 290sh, 335
4 Isoorientin 447 327; 357 269, 330
5 Isovitexin 431 341; 311 268, 290sh, 328
6 4- O-β- Asam caffeic glukopiranosil 325 183
7 Asam fenolat 195 -
8 Turunan asam fenolat 133 -

Tabel 2. Pengaruh P. edulis Ekstrak Daun Kering pada Penanda Biokimia pada Hewan Non-diabetes dan Diabetes

Grup Kontrol Ekstrak Diabetes Ekstrak diabetes

Glukosa (mg / dL) 171.9 ± 14.4 Itu) 177.7 ± 39.1 Itu) 486.8 ± 18.9 B) 353.7 ± 99.6 ç)
HbA1c (%) 11.5 ± 0,51 Itu) 10.6 ± 0,99 Itu) 21.2 ± 2.43 B) 16.9 ± 2.60 ç)
TG (mg / dL) 92.7 ± 14.5 Itu) 65.8 ± 15.5 Itu) 114.1 ± 29.1 B) 116.7 ± 47.8 B)
TC (mg / dL) 114.1 ± 9.30 Itu) 55.99 ± 10.0 ç) 265.5 ± 29.7 B) 84.10 ± 8.67 ç)
HDL-C (mg / dL) 47.39 ± 7.84 Itu) 47.01 ± 7.27 Itu) 68.98 ± 6.88 B) 67.44 ± 9.83 B)
N-HDL-C (mg / dL) 66.7 ± 8.21 Itu) 8.98 ± 4.43 ç) 174.8 ± 50.6 B) 16.65 ± 6.75 ç)
Kreatinin (mg / dL) 0,57 ± 0,05 Itu) 0,51 ± 0,07 Itu) 0.82 ± 0,09 B) 0,50 ± 0.15 Itu)

Itu) Data diungkapkan dengan cara ± deviasi standar untuk 16-18 penentuan per pengobatan. Huruf yang berbeda dalam baris yang sama menunjukkan signifikansi statistik, p < 0,05. B)
TG = Trigliserida, TC = Kolesterol Total, HDL-C = Kolesterol dari lipoprotein densitas tinggi, N-HDL-C = Kolesterol non-HDL.
172 Biol. Pharm. Banteng. Vol.43, No.1 (2020)

Gambar 1. Pengaruh P. edulis Ekstrak Daun Kering pada Kadar AGEs dalam Kolagen Tipe I dari
Tendon Hewan Non-diabetes dan Diabetes
Hasilnya mewakili rata-rata ± deviasi standar 16-18 penentuan per pengobatan. Huruf yang berbeda menunjukkan
signifikansi statistik, p < 0,05. C = kelompok kontrol; D = hewan penderita diabetes; E = P. edulis hewan non-diabetes
yang diobati dengan ekstrak kering; DE = P. edulis hewan diabetes yang diobati dengan ekstrak kering.
Gambar 2. Pengaruh P. edulis Ekstrak Daun Kering pada Agregasi Trombosit pada Hewan Non
Diabetes dan Diabetes
Hasilnya mewakili rata-rata ± deviasi standar dari 6-8 penentuan per pengobatan. Huruf yang berbeda menunjukkan
signifikansi statistik, p < 0,05. C = kelompok kontrol; D = hewan penderita diabetes; E = P. edulis hewan non-diabetes
yang diobati dengan ekstrak kering; DE = P. edulis hewan diabetes yang diobati dengan ekstrak kering.

Gambar. 3. Pengaruh P. edulis Ekstrak Daun Kering pada Kinetika Emisi Cahaya dalam Sistem yang Mengandung Trombosit dari Tikus Diabetik dan Non Diabetes

Data diungkapkan dengan cara ± Statistik SE untuk 6-8 penentuan per pengobatan. # p < 0,05 vs. Kontrol, * p < 0,05 vs. Diabetes. C = kelompok kontrol; D = hewan penderita diabetes; E = P. edulis hewan non-diabetes yang diobati dengan
ekstrak kering; DE = P. edulis hewan diabetes yang diobati dengan ekstrak kering. A) stimulasi PMA; B) Tanpa stimulasi PMA.

fl avonoid, dimana empat diantaranya adalah fl avonoid Ç- sisi heterosideglyco (Tabel 1).
Dengan menggunakan standar internal, kami dapat mengonfirmasi keberadaan 3,9%
isoorientin di P. edulis ekstrak.
Seperti yang diharapkan, glukosa puasa secara signifikan lebih tinggi pada hewan
kelompok D dibandingkan pada hewan kelompok C dan E, menunjukkan bahwa protokol
penyebab diabetes yang digunakan dalam penelitian ini efektif dalam menginduksi model
diabetes tipe 1 praklinis pada tikus. Selain itu, terjadi penurunan pertambahan berat badan
pada hewan diabetes dibandingkan dengan hewan non diabetes, tetapi tidak ada
perbedaan peningkatan berat badan antara kelompok D dan DE.
Pada hewan diabetes, P. edulis ekstrak menunjukkan arti penurunan
glukosa, kreatinin, kolesterol total dan kolesterol non-HDL dalam serum serta
darah HbA1c (Tabel
2) dan AGEs dalam kolagen (Gbr. 1). Hasil ini menunjukkan bahwa P. edulis ekstrak
mampu mengurangi kadar glikemik, berkontribusi pada peningkatan kontrol
glikemik selama 90 hari pengobatan.
Beberapa penelitian menunjukkan bahwa flavonoid yang berbeda seperti turunan
apigenin dan luteolin glikosida, kaempferol, kaemp-feritrin, rhamnopyranoside dan
kaempferol-3-neohesperidoside mampu menurunkan kadar glukosa pada tikus
Wistar berpuasa 2 jam setelah perlakuan. 21.22) Diketahui bahwa polifenol tidak hanya
dapat mengurangi penyerapan gula tetapi juga meningkatkan pengambilan glukosa
oleh otot rangka dan jaringan adiposa, yang berkontribusi pada penurunan kadar
glukosa darah. 23–25)
Penghambatan glikasi protein dapat difasilitasi oleh pound dengan potensi
dengan meningkatkan kontrol glikemik dan dengan adanya comMartins dkk. 15)
antioksidan dalam ekstrak yang dievaluasi.
mendemonstrasikan sifat antioksidan
Passi fl ora edulis ekstrak etanol daun in vitro.
Selain itu, penelitian telah menyelidiki aktivitas struktur flavonoid seperti
sifat antiglikasinya. 26) Penelitian ini menunjukkan flavonoid dengan gugus OH
pada C-3 ′, 4 ′, 5 dan 7 telah meningkatkan kemampuan penghambatan glikasi
protein. 27)
Analisis fitokimia dari P. edulis Ekstrak menggunakan HPLC-ESI-IT-MS
mengkonfirmasi adanya flavonoid isoorientin yang memiliki gugus OH pada
C-3 ′, 5 dan 7, dan menyarankan adanya beberapa flavonoid dengan gugus
OH di C-3 ′, 4 ′, 5 dan 7.
Salah satu penyebab utama penyakit ginjal adalah peningkatan kadar glikasi
protein. 28) Hasil kami menunjukkan bahwa hal itu mungkin untuk mencegah
disfungsi ginjal pada hewan penderita diabetes yang diobati P. edulis ekstrak
(Tabel 2). Efek ini dapat dikaitkan dengan peningkatan kontrol glikemik dan
penurunan glikasi protein pada hewan ini.
Telah diamati bahwa hewan diabetes menunjukkan konsentrasi lipid
secara signifikan lebih tinggi daripada kelompok kontrol. Itu P. edulis Pemberian
ekstrak kering mencegah peningkatan kadar kolesterol total dan kolesterol
non-HDL (Tabel 2).
Vol.43, No.1 (2020) Biol. Pharm. Banteng.
Mempertimbangkan efek dari P. edulis ekstrak kontrol glikemik, seperti yang
diamati dalam penelitian ini, efek ekstrak pada kadar kolesterol non-HDL
dapat dikaitkan dengan peningkatan kontrol glikemik. 29.30) serta efek langsung
senyawa fenolik dalam sintesis atau metabolisme kolesterol LDL. 31,32)
Temuan ini sesuai dengan penelitian lain yang berhubungan dengan aktivitas
antidiabetes dari senyawa lain. 29,33)
Selain itu, diketahui bahwa hiperglikemia yang berkepanjangan dapat
meningkatkan produksi oksigen spesies reaktif (ROS) yang mengintensifkan
peroksidasi lipid dan reaksi oksidasi protein serta mengubah fungsi seluler, seperti
pada trombosit. Dengan demikian, peningkatan agregasi platelet yang diinduksi
diabetes mellitus telah dibuktikan oleh penulis yang berbeda. 25–29)
Beberapa penelitian telah menyarankan bahwa peningkatan agregasi platelet
mungkin terkait dengan perubahan dalam produksi ROS yang secara langsung
dapat mempengaruhi aktivasi agregasi platelet serta pembentukan trombus dan
gangguan vaskular. 34–38)
Di sini kami menunjukkan, untuk pertama kalinya, bahwa pengobatan
hewan diabetes dengan ekstrak P. edulis daun mengurangi agregasi platelet
dan menghambat produksi spesies oksidasi dalam platelet (Gambar 2, 3A,
3B). Terdapat perbedaan kinetika emisi cahaya antara trombosit hewan
diabetes dan non diabetes. Sistem reaksi tanpa penambahan PMA
menunjukkan bahwa metabolisme oksidatif basal diaktifkan dalam trombosit
hewan diabetes. Efek ini mungkin terkait dengan peningkatan kontrol glikemik
pada hewan diabetes yang diobati dengan ekstrak tersebut.
Di sisi lain, juga harus dipertimbangkan bahwa sebagian besar efek
kesehatan yang menguntungkan dari senyawa polifenol, khususnya flavonoid,
dikaitkan dengan kemampuannya untuk menghilangkan radikal bebas, logam
kelat dan mengaktifkan enzim antioksidan. 39) Dengan cara ini, mengingat
penelitian sebelumnya yang menunjukkan sifat antioksidan Passi fl ora edulis
ekstrak, 12,13,15) efek ekstrak pada agregasi platelet juga dapat dikaitkan
dengan kemungkinan aksi antioksidan dari ekstrak ini, sehingga
memungkinkan penghapusan ROS dari spesies ini di lingkungan seluler.
Perlu dicatat bahwa beberapa studi klinis menggunakan Pas- fl ora edulis telah
dilaporkan negatif. 40,41) Namun, dalam penelitian ini dievaluasi efek fl yang
kami peroleh dari kulit buah markisa yang komposisi kimianya mungkin
berbeda dari ekstrak yang dianalisis dalam penelitian ini.
Dengan demikian, penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak daun
markisa mampu meningkatkan kontrol glikemik, fungsi ginjal, dan profil lipid
selain mengurangi agregasi dan mengoksidasi produksi spesies dalam
trombosit hewan diabetes. Semua hasil yang disajikan dalam penelitian ini
menunjukkan bahwa ekstrak Pas- fl ora edulis Daunnya bisa bermanfaat bagi
kesehatan, terutama mencegah komplikasi diabetes melitus kronis. Efek ini
dapat dikaitkan dengan aktivitas antihiperglikemik serta sifat antioksidan dan
antiglikasi dari senyawa yang ada dalam ekstrak ini, khususnya, glikosida
flavonoid. 21–27) Penelitian selanjutnya diperlukan untuk lebih spesifik
menentukan mekanisme kerja ekstrak ini. Studi ini sedang dikembangkan
oleh kelompok penelitian kami.
Ucapan Terima Kasih Studi ini dibiayai sebagian oleh Koordinasi untuk
Peningkatan Personil Pendidikan Tinggi - Brasil (CAPES) - Kode Keuangan
001. Penulis berterima kasih kepada FAPEMIG atas Beasiswa Penelitian
kepada Salles, BCC dan Taniguthi, L.
173
Konflik Kepentingan Para penulis menyatakan dalam konflik
bunga.
Bahan Pelengkap Versi online artikel ini berisi materi tambahan.
REFERENSI
1) Jamir TT, Sharma HK, Dolui AK. Tanaman obat cerita rakyat dari Na- galand, India. Fitoterapi,
70, 395–401 (1999).
2) Ogurtsova K, da Rocha Fernandes JD, Huang Y, Linnenkamp U, Guariguata L, Cho
NH, Cavan D, Shaw JE, Makaroff LE. Atlas Diabetes IDF: Estimasi global untuk
prevalensi diabetes untuk 2015 dan 2040. Klinik Res Diabetes Praktik., 128, 40–50
(2017).
3) Santilli F, Simeone P, Liani R, Davi G. Trombosit dan diabetes melitus. Prostaglandin
Mediat Lipid Lainnya., 120, 28–39 (2015). Eddouks M, Bidi A, El Bouhali B, Hajji L,
4) Zeggwagh NA. Tanaman antidiabetes meningkatkan sensitivitas insulin. J. Pharm.
Pharmacol.,
66, 1197–1214 (2014).
5) Miroddi M, Calapai G, Navarra M, Minciullo PL, Gangemi S. Inkarnasi pasif L .:
etnofarmakologi, aplikasi klinis, keamanan dan evaluasi uji klinis. J.
Ethnopharmacol., 150, 791–804 (2015).
6) Dhawan K, Dhawan S, Sharma A. Passi fl ora: pembaruan ulasan. J. Ethnopharmacol., 1,
1–23 (2004).
7) Vargas FS, Almeida PDO, Boleti APA, Pereira MM, Souza TP, Vasconcellos MC.
Aktivitas antioksidan dan penghambatan peroksidase dari ekstrak tumbuhan Amazon
secara tradisional digunakan sebagai anti inflamasi. Pelengkap BMC. Alternatif. Med., 16,
83 (2016). Hügel HM, Jackson N, Mei B, Zhang AL, Xue CC. Perlindungan polifenol
8) dan pengobatan hipertensi. Phytomedicine, 23, 220–231 (2016).
9) Ishihata A, Maruki-Uchida H, Gotoh N, Kanno S, Aso Y, Togashi
S, Sai M, Ito T, Katano Y. Efek perlindungan vaskular dan hepato dari ekstrak biji markisa yang
mengandung piceatannol pada tikus yang diberi makan diet tinggi lemak kronis. Fungsi Makanan., 7,
4075–4081 (2016).
10) Uchida-Maruki H, Inagaki H, Ito R, Kurita I, Sai M, Ito T. Piceatannol menurunkan
kadar glukosa darah pada tikus diabetes. Biol. Pharm. Banteng., 38, 629–633 (2015).
11) Panelli MF, Pierine DT, de Souza SLB, Ferron AJT, Garcia JL, Santos KCD, Belin
MAF, Lima GPP, Borguini MG, Minatel IO, Cicogna AC, Francisqueti FV, Corrêa
CR. Kulit kayu Passi fl ora edulis
pengobatan merangsang kapasitas antioksidan, dan mengurangi dislipidemia dan lemak
tubuh pada tikus db / db. Antioksidan, 7, 120 (2018). Kandandapani S, Balaraman AK,
12) Malu HM. Ekstrak kulit buah markisa dan bijinya Passi fl ora edulis ( Passi fl oraceae)
mengurangi stres oksidatif pada tikus diabetes. Dagu. J. Nat. Med., 13, 680–686 (2015).
13) Rudnicki M, MR de Oliveira, Veiga Pereira T, Reginatto FH, Dal- Pizzol F,
Fonseca Moreira JC. Sifat antioksidan dan antiglikasi Passi fl ora alata dan Passi fl
ora edulis ekstrak. Kimia Makanan,
100, 719–724 (2007).
14) Administrasi Makanan dan Obat Amerika Serikat. “Guidance for Industry,
Bioanalytical Method Validation, 2001.”: ‹https: //www.gmp-
compliance.org/guidelines/gmp-guideline/fda-guidance-for-industry-
bioanalytical-method-validation-Issuation- 5-2001-posted-5-22-2001 ›, diakses 30
Juni 2018.
15) Martins CFR, Salles BCC, Brigagão MRPL, Rodrigues MR, Ferreira ER, Duarte SMS,
Paula FBA. Ekstrak etanolik daun Passi fl ora edulis Sims menghambat glikasi protein
dan mengembalikan ledakan teroksidasi pada makrofag tikus diabetes setelah Candida
Albicans paparan. Braz. J. Pharm. Sci., 51, 869–878 (2015).
16) Doyama JT, Rodrigues HG, Novelli EL, Cereda E, Vilegas W. Penyelidikan kimia
dan efek teh Passi fl ora alata pada parameter biokimia pada tikus. J.
Ethnopharmacol., 96, 371–374 (2005).
174 Biol. Pharm. Banteng.
17) Burtis CA, Ashwood E. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, WB Saunders
Company, Philadelphia, 2008.
18) Baldissera L Jr, Monteiro PF, de Mello GC, Morganti RP, Antunes
E. Adhesi platelet dan kadar kalsium intraseluler pada tikus yang mengalami antigen. Pulm.
Pharmacol. The R., 23, 327–333 (2010).
19) Maria SS, Wada MLF. Analisis sitokimia sel Vero pada gel kolagen tipe I dalam
kultur jangka panjang. Sel In Vitro. Dev. Biol. Animasi,
33, 748–750 (1997).
20) Pageon H, Bakala H, Monnier VM, Asselineau D. Glikasi kolagen memicu
pembentukan kulit menua secara in vitro. Eur. J. Dermatol.,
17, 12-20 (2007).
21) El-Sayed MIK. Pengaruh biji Portulaca oleracea L. dalam pengobatan pasien
diabetes mellitus tipe-2 sebagai terapi tambahan dan alternatif. J. Ethnopharmacol., 137, 33)
643–651 (2011).
22) Zanatta L, Rosso A, Folador P, Figueiredo MSRB, Pizzolatti MG, Leite LD, Silva
FRMB. Efek insulinomimetik kaempferol 3-neohesperidoside pada otot tikus
soleus. J. Nat. Prod., 71, 532– 535 (2008).
23) Anhê FF, Desjardins Y, Pilon G, Dudonné S, Genovese MI, Lajolo FM, Marette
A. Polifenol dan diabetes tipe 2: tinjauan prospektif. Nutrisi Farmasi, 1, 105–114
(2013).
24) Leonidas DD, Hayes JM, Kato A, Skamnaki VT, Chatzileonti- ed DS, Kantsadi
AL, Kyriakis E, Chetter BA, Stravodimos GA. Polifenol fitogenik sebagai inhibitor
glikogen fosforilase: potensi triterpen dan flavonoid untuk pengendalian glikemik
pada diabetes tipe 2. Curr. Med. Chem., 24, 384–403 (2017).
25) Hegde PS, Chandrakasan G, Chandra T.Hambatan glikasi kolagen dan ikatan
silang in vitro oleh ekstrak metanol Finger millet ( Eleusine coracana) dan Kodo
millet ( Paspalum scrobicula-tum). J. Nutr. Biochem., 13, 517–521 (2002).
26) Khangholi S, Majid FA, Berwary NJ, Ahmad F, Aziz RB. Mekanisme
penghambatan pembentukan produk akhir glikasi lanjutan melalui polifenol
dalam kondisi hiperglikemik. Planta Med., 82, 32–45 (2016).
27) McCullough M, Peterson J, Patel R, Jacques PF, Shah R, Dwyer JT. Asupan flavonoid
dan mortalitas penyakit kardiovaskular dalam kohort prospektif orang dewasa AS. Am. J.
Clin. Nutr., 95, 454–464 (2012). Arthur JF, Jandeleit-Dahm K, Andrews RK.
28) Hiperreaktifitas trombosit pada diabetes: fokus pada pensinyalan GPVI - apakah obat
yang berguna sudah tersedia? Diabetes, 66, 7–13 (2017). Kianbakht S, Nabati F, Abasi
B. Salvia of fi cinalis ( Ekstrak daun sage sebagai tambahan untuk terapi statin pada
29) pasien diabetes tipe 2 hiperkolesterolemia: uji klinis acak. J. Mol. Sel Med., 5, 141– 148
(2016).
30) Nandini HS, Naik PR. Antidiabetes, antihiperlipidemik dan anti-
Vol.43, No.1 (2020)
efek oksidan dari Vincamine, pada tikus diabetes yang diinduksi streptozotocin.
Eur. J. Pharmacol., 843, 233–239 (2019).
31) Mulvihill EE, Allister EM, Sutherland BG, Telford DE, Sawyez CG, Edwards JY,
Markle JM, Hegele RA, Huff MW. Naringenin mencegah dislipidemia, produksi
berlebih apolipoprotein B, dan hiperinsulinemia pada tikus nihil reseptor LDL dengan
resistensi insulin yang diinduksi diet. Diabetes, 58, 2198–2210 (2009).
32) Zidan Y, Bouderbala S, Djellouli F, Lacaille-Dubois MA, Bouchenak M. Portulaca
oleracea mengurangi trigliseridemia, kolesterolemia, dan meningkatkan lesitin: aktivitas
asiltransferase kolesterol pada tikus yang diberi makanan kaya kolesterol. Phytomedicine,
21, 1504–1508 (2014).
Al-Ali K, Abdel Fatah HS, El-Badry YAM. Efek ganda kompleks kurkum-dalam-seng dalam
mengendalikan diabetes mellitus pada tikus diabetes yang diinduksi secara eksperimental. Biol.
Pharm. Banteng., 39, 1774–1780 (2016). Ferreiro JL, Rumah Sakit Gómez JA, Angiolillo DJ.
34) Kelainan trombosit pada diabetes melitus. Diab. Vasc. Dis. Res., 7, 251–259 (2010).
El-Bassossy HM, Hassan NA, Mahmoud MF, Fahmy A. Baicalein melindungi dari hipertensi
35) yang berhubungan dengan diabetes: efek pada reaktivitas vaskular dan kekakuan. Phytomedicine,
21, 1742–1745 (2014).
36) Begonja AJ, Teichmann L, Geiger J, Gambaryan S, Walter U. Regulasi platelet dengan
pensinyalan NO / cGMP dan ROS yang dibangkitkan oksidase NAD (P) H. Sel Darah
Mol. Dis., 36, 166–70 (2006).
37) Zhu X, Li Z, Li C, Zhang J, Zou Z, ekstrak Wang J. Ginkgo biloba dan aspirin secara
sinergis melemahkan produksi ROS yang diinduksi platelet dan ekspresi LOX-1
dalam sel endo-thelial arteri koroner manusia. Phytomedicine, 20, 114–119 (2013).
38) Magwenzi S, Woodward C, Wraith KS, Aburima A, Raslan Z, Jones H, McNeil C,
Wheatcroft S, Yuldasheva N, Febbriao M, Kearney M, Naseem KM. LDL
teroksidasi mengaktifkan trombosit darah melalui penghambatan kaskade
pensinyalan cGMP / protein kinase G yang dimediasi CD36 / NOX2. Darah, 125, 2693–2703
(2015). Procházková D, Boušová I, Wilhelmová N. Sifat antioksidan dan
39) prooksidan dari flavonoid. Fitoterapi, 82, 513–523 (2011). Araújo MFM, Veras VS,
Freitas RWJF, Paula MDL, Araújo TM, Uchôa LRA, Gaspar MWG, Cunha
40) MDCDSO, Serra MAAO, CML oak, Costa EC, Damasceno MMC. Pengaruh fl
kami dari kulit buah markisa kuning terhadap pengendalian glikemik penderita
diabetes mellitus tipe 2: uji klinis secara acak. J. Diabetes Metab. Disord., 16, 18
(2017).
41) Queiróz MSR, Janebro DI, Cunha MAL, Medeiros JS, Sabaa-Srur AUO, Diniz MFFM,
Santos SC. Pengaruh kulit markisa kuning fl our ( Passi fl ora edulis f. fl avicarpa derajat)
pada sensitivitas insulin pada pasien diabetes mellitus tipe 2. Nutr. J., 11, 89 (2012).