Mengepung. Sci. teknologi.
1997, 31, 860-865
Akumulasi Pb yang Ditingkatkan
dalam Mustard India oleh Agen
Chelating Terapan Tanah
MICHAELJ. BLOKIR , * ,†
DAVID. GARAM ,‡ SLAVIKDUSHENKOV , †
OLGAZAKHAROVA, †
CHRISTOPHERGUSSMAN , †
YORAMKAPULNIK , †
BURT. ENSLEY,† ANDILYARASKIN ‡
Phytotech, Inc., One Deer Park Drive, Suite I,
Monmouth Junction, New Jersey 08852, dan AgBiotech Center, Rutgers
University, Cook College, PO Box 231,
New Brunswick, New Jersey 08903
Fitoremediasi muncul sebagai solusi hemat biaya potensial untuk
remediasi tanah yang terkontaminasi. Karena kontaminan seperti
timbal (Pb) memiliki bioavailabilitas yang terbatas di dalam tanah,
suatu cara untuk melarutkan Pb di dalam tanah dan memfasilitasi
pengangkutannya ke pucuk tanaman.
sangat penting untuk keberhasilan fitoremediasi. mustard India (Brassica
juncea) digunakan untuk mendemonstrasikan kemampuan tanaman
untuk mengakumulasi konsentrasi Pb yang tinggi di jaringan ketika
ditanam di tanah yang terkontaminasi Pb. Konsentrasi dari
1,5% Pb pada pucuk B.juncea diperoleh dari tanah yang
mengandung 600mg Pb/kg dengan khelat sintetik seperti
EDTA. Akumulasi Pb dalam jaringan berhubungan dengan
konsentrasi Pb dalam tanah dan konsentrasi EDTA yang
ditambahkan ke dalam tanah. Akumulasi Cd, Cu, Ni, dan Zn
dari tanah yang terkontaminasi diubah dengan EDTA dan
chelators sintetis lainnya juga ditunjukkan. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa akumulasi logam pada pucukB.juncea
dapat ditingkatkan melalui aplikasi kelat sintetis ke tanah,
memfasilitasi akumulasi biomassa yang tinggi serta
penyerapan logam.
pengantar
Penggunaan tanaman untuk menghilangkan logam beracun dari
tanah (fitoremediasi) muncul sebagai strategi potensial untuk
remediasi tanah yang terkontaminasi yang hemat biaya dan ramah
lingkungan (1-4). Tumbuhan tertentu, yang dikenal sebagai
hiperakumulator logam, telah ditemukan yang mengandung logam
berat dengan konsentrasi yang sangat tinggi dalam jaringannya.
Hiperakumulator Ni dan Zn, misalnya, mengandung sebanyak 5%
dari logam-logam ini berdasarkan berat kering (5, 1).
Fitoremediasi sebagai teknologi pembersihan tanah berupaya
memanfaatkan kemampuan tanaman pengakumulasi logam untuk
mengekstraksi logam dari tanah dengan akarnya dan mengonsentrasikan
logam tersebut di bagian tanaman di atas tanah. Bahan tanaman yang
kaya logam dapat dipanen dan dipindahkan dengan aman dari lokasi
tanpa penggalian ekstensif, biaya pembuangan, dan hilangnya lapisan
tanah atas yang terkait dengan praktik remediasi tradisional.
Keberhasilan fitoremediasi tergantung pada beberapa faktor.
Tanaman harus menghasilkan biomassa yang cukup sambil
mengumpulkan konsentrasi logam yang tinggi. Tanaman pengumpul
logam juga harus responsif terhadap praktik pertanian untuk
memungkinkan penanaman dan pemanenan berulang
* Faks penulis yang sesuai: 908-438-1209; email: soilrx@aol.com.
† Phytotech, Inc.
‡ Pusat AgBiotek.
860 9 ILMU & TEKNOLOGI LINGKUNGAN / VOL. 31, TIDAK. 3, 1997
jaringan kaya logam. Selain itu, tanaman ini sebaiknya
mengakumulasi logam beracun yang penting bagi lingkungan
(misalnya, Pb, Cd, Cr, dll.). Akumulator logam yang dikenal tidak
memenuhi kriteria ini. Kemampuan membudidayakan tanaman
dengan biomassa tinggi dengan kandungan logam beracun yang
tinggi pada tanah yang terkontaminasi akan menjadi faktor penentu
keberhasilan fitoremediasi. Oleh karena itu, meningkatkan akumulasi
logam pada tanaman tanaman unggul yang ada tanpa mengurangi
hasil mereka adalah strategi yang paling layak dalam pengembangan
fitoremediasi.
Selain itu, ketersediaan logam dalam tanah untuk serapan tanaman
merupakan batasan lain untuk keberhasilan fitoremediasi. Sebagai contoh,
Pb, salah satu pencemar lingkungan yang paling penting, memiliki
kelarutan yang terbatas dalam tanah dan ketersediaannya untuk diserap
tanaman karena kompleksasi dengan bahan organik, penyerapan oksida
dan lempung, dan pengendapan sebagai karbonat, hidroksida dan fosfat (
6). Untuk tanah dengan pH antara
5.5 dan 7.5, di mana kelarutan Pb dikendalikan oleh endapan fosfat
atau karbonat, aktivitas maksimum Pb2+ dalam larutan tanah adalah
sekitar 10-8.5 M, atau sekitar 0,6 ppb (7). Pb2+ aktivitas dalam larutan
tanah harus tetap konstan terlepas dari besarnya konsentrasi Pb
tanah karena keseimbangan antara larutan dan fase padat dalam
tanah. Ekstrem pada pH tanah di atas 7,5 atau di bawah 5,5 akan
menurunkan atau meningkatkan kelarutannya. Di sebagian besar
tanah yang mampu mendukung pertumbuhan tanaman,
bagaimanapun, kadar Pb terlarut akan tetap sangat rendah dan tidak
akan memungkinkan serapan substansial oleh tanaman meskipun
memiliki kapasitas genetik untuk mengakumulasi logam ini. Vegetasi
yang tumbuh di daerah yang sangat terkontaminasi seringkali
memiliki kurang dari 50μg/g Pb di pucuk (8). Selain itu, banyak
tanaman mempertahankan Pb di akarnya melalui penyerapan dan
pengendapan dengan hanya transportasi minimal ke bagian yang
dapat dipanen di atas tanah (9, 4).
Namun demikian, beberapa hiperakumulator Pb telah dilaporkan
dalam kasus terisolasi di tanah yang sangat terkontaminasi. Contoh
laporan yang paling sering dikutipThlaspi rotundifolium
(L.) Gaud.-Beaup, dengan konsentrasi Pb pucuk 8500 μg/g berat
kering (10), tetapi sangat sedikit contoh lain yang ditemukan. Kultivar
dariBrassica juncea (L.) Czern. (Saus India, hijauan biomassa tinggi
dan tanaman minyak) juga telah menunjukkan kemampuan untuk
mengakumulasi Pb setinggi 1,5% dalam jaringan pucuk ketika
ditanam dalam larutan nutrisi dengan konsentrasi tinggi Pb terlarut (
11). Pada konsentrasi Pb yang lebih rendah dalam larutan, akumulasi
jaringan pucuk secara substansial lebih sedikit, meskipun konsentrasi
akar sangat tinggi. Terlepas dari kapasitas yang signifikan dari
B.junceatanaman untuk berkonsentrasi P dan mentranslokasikannya
ke pucuk dalam kultur larutan, sedikit serapan ke dalam pucuk
diamati pada B.juncea tanaman yang tumbuh di tanah di mana
bioavailabilitas Pb terbatas (11). Dalam makalah ini, kami melaporkan
peningkatan serapan akumulasi Pb di tanah yang ditanamB.juncea
tanaman dengan kelat sintetis. Besarnya peningkatan ini
mungkin cukup untuk membuat fitoekstraksi tanah yang
terkontaminasi Pb menjadi teknologi lingkungan yang layak.
Bahan dan metode
Studi ruang pertumbuhan dilakukan untuk mengevaluasi keefektifan agen
pengkelat yang diaplikasikan tanah dalam meningkatkan serapan logam
dalam akumulator logam yang dikenal, Indianmustard (B.juncea, CV.
426308) (11). Sebuah tanah lempung lumpur Sassafras Ap dikumpulkan
dari Universitas Rutgers Pertanian Hortikultura dan
diubah dengan CdCO3, CuCO3, 2NiCO3.3Ni(OH)2.4H2O, Pb-
BERSAMA3, dan/atau ZnCO3 untuk mencapai konsentrasi yang
diinginkan. Bentuk karbonat dipilih untuk menyediakan logam
dalam bentuk kelarutan terbatas tergantung pada reaksi logam
dengan tanah. Tanah diolah dengan kapur hingga pH
7.3 dan dibuahi dengan urea (150 mg N/kg), kalium
klorida (83 mg K/kg), dan gipsum (70 mg CaSO4/kg).
S0013-936X(96)00552-4 CCC: $14.00   1997 American Chemical Society
Pengaruh pH terhadap serapan logam juga dipelajari dengan
mengatur jumlah kapur yang ditambahkan ke tanah untuk mencapai
nilai pH tanah 5,0, 6,0, 6,5, 7,0, dan 7,5. Tanah yang diubah dibiarkan
untuk menyeimbangkan untuk jangka waktu 2 minggu di rumah kaca
menjalani tiga siklus saturasi dengan air dan pengeringan, sebelum
dicampur dan ditanam. Tanah kemudian ditempatkan dalam pot
bulat berdiameter 8,75 cm (350 g tanah/pot) dan ditanamiB.juncea
biji. Pupuk fosfat ditambahkan sebagai tempat penempatan triple
super fosfat 1 cm di bawah benih saat tanam dengan kecepatan 44
mg P/kg. Setelah bibit muncul, pot ditipiskan menjadi dua tanaman
per pot.
Tanaman ditumbuhkan selama 3 minggu dalam ruang pertumbuhan
menggunakan fotoperiode 16 jam dan perlakuan pemupukan mingguan
masing-masing 16 dan 7 mg/kg N (urea) dan K (KCl). Garam kalium dari
GAMBAR 1. Konsentrasi Pb Tembak B.juncea ditanam di tanah Sassafras Ap
chelators sintetis CDTA (trans-1,2cyclohexylenedinitrilotetraacetic acid),
(dikapur hingga pH 7,3) dengan penambahan Pb sebagai timbal karbonat.
DTPA (diethylenetrinitrilopentaacetic acid), EDTA
(ethylenedinitrilotetraacetic acid), EGTA
(ethylenebis[oxyethylenetrinitrilo]tetraacetic acid), dan asam sitrat atau
malat diaplikasikan ke permukaan tanah sebagai larutan 3 minggu setelah
kemunculan bibit menggunakan empat ulangan setiap pengobatan. Pot
ditempatkan di nampan individu untuk mencegah hilangnya amandemen
dari pencucian. Setelah aplikasi amandemen, tanah diairi hingga kapasitas
lapangan setiap hari. Tanaman ditumbuhkan selama 3 minggu setelah
kecambah muncul (pada awal pembungaan) sebelum aplikasi kelat ke
tanah. Tanaman dipanen 1 minggu setelah perlakuan amandemen dengan
memotong batang 1 cm di atas permukaan tanah. Jaringan tanaman
dikeringkan pada suhu 70

°C kemudian dibasah dengan menggunakan asam nitrat dan asam

perklorat. Solusi yang dihasilkan dianalisis kandungan logamnya
dengan spektrometri plasma berpasangan induktif (ICP) (Fisons
Accuris, Fisons Instruments, Inc., Beverly, MA). Sampel tanah
dikumpulkan dari pot dan dianalisis untuk logam yang larut dalam air
dengan menyetarakan 2,5 g tanah dengan 25 mL 0,01 M KNO3
selama 2 jam. Suspensi disentrifugasi, dan supernatannya
larutan dianalisis untuk logam terlarut dengan ICP. Institut
Standar dan Teknologi Nasional Bersertifikat Standar tanaman
dan tanah dilakukan melalui pencernaan, ekstraksi, dan analisis
sebagai bagian dari protokol QA/QC. Kosong reagen dan paku
digunakan jika sesuai untuk memastikan akurasi dan presisi GAMBAR 2. Konsentrasi Pb Tembak dari B.juncea (A) dan Pb (B) yang larut dalam air

dalam analisis.
Penyelidikan lebih lanjut terhadap fenomena yang diamati dari
peningkatan penyerapan khelat ini dilakukan dengan menggunakan
sistem ahidroponik di ruang pertumbuhan. B.juncea bibit ditanam
selama 3 minggu larutan inanutrien yang mengandung 28,7mg/L
NH4H2PO4, 0,71mg/LH3BO3, 164.1mg/LCa(TIDAK3)2, 0,02mg/L CuSO
4, 2.66mg/L besi tartrat, 60.19mg/LMgSO4, 0,45mg/L MnCl2,
0,004mg/LMoO3, 151.7mg/L KNO3, dan 0,055mg/L
ZnSO4. Tanaman berumur 3 minggu dipindahkan ke larutan air suling
yang disesuaikan dengan pH 3,5 atau pH 5,5 menggunakan
HNO3 mengandung PbNO3 dan/atau K2EDTA pada equimolar (0,2
mM). Tanaman dipanen 1 minggu setelah
pengenaan perlakuan Pb dan EDTA. Akar dan pucuk dibilas
dengan air DI dan dianalisis kandungan logamnya.
Sebuah studi lapangan juga dilakukan di bekas lokasi pembuatan
kabel di Bayonne, NJ, dengan tanah yang terkontaminasi Pb (pH 8,3,
1200 mg Pb/kg). Tanah dipupuk dengan
150, 44, 83, dan 70 mg/kg N, P, K, dan CaSO4, masing-masing, sebelum
dirototil hingga kedalaman 15 cm. Permukaan tanah (0-15 cm)
kemudian digali dan ditempatkan dalam lysimeter (peti es 48-qt).
Sekitar 65 kg tanah ditempatkan di setiap lysimeter dan
diletakkan di permukaan tanah di lapangan.B.juncea benih
ditanam dan ditanam selama 3 minggu sebelum aplikasi
perlakuan. Aplikasi EDTA dan asam asetat diberikan sebagai
larutan 1-L yang diaplikasikan dengan 5,0 mmol/kg EDTA dan
asam asetat. Irigasi ringan (0,25 cm) disediakan setelah
penerapan amandemen. Tanaman dipanen 1 minggu setelah
aplikasi amandemen. Jaringan akar dan pucuk dikumpulkan dan
dicuci dengan air DI untuk menghilangkan endapan tanah
sebelum analisis.
dalam tanah Sassafras Ap (dikapur hingga pH 7,3) yang mengandung 600 mg Pb/kg
sebagai timbal karbonat sebagai hasil dari agen pengkelat yang diaplikasikan
pada tanah.
Hasil
Konsentrasi logam dalam tanah diharapkan memainkan peran besar
dalam menentukan serapan logam oleh tanaman dan kandungan
logam bahan pucuk. Namun, dalam kasus Pb, konsentrasi Pb total
yang tinggi di dalam tanah tidak serta-merta menghasilkan
konsentrasi Pb yang tinggi di pucuk-pucuk karena sifatnya yang tidak
larut. Pada tanah yang ditambahkan Pb sebagai timbal karbonat
dengan kadar 600, 900, 1200, dan 1800 mg/kg, hanya kadar Pb yang
sangat rendah (<100 mg/kg) yang terakumulasi pada pucuk tanaman.
B.juncea (Gambar 1). Akumulasinya tergantung pada konsentrasi
tanah dan meningkat dari 45 menjadi 100mg/kg karena Pb tanah
meningkat dari 1200 menjadi 1800 mg/kg.
Melalui penambahan chelators sintetis ke tanah yang
terkontaminasi logam, akumulasi Pb di P B.juncea ditingkatkan. Studi
awal dilakukan untuk mengevaluasi potensi chelator yang
diaplikasikan pada tanah dan amandemennya pada empat
konsentrasi yang berbeda untuk meningkatkan penyerapan Pb dan
logam lain dari tanah yang terkontaminasi. Studi selanjutnya
dilakukan dengan menggunakan konsentrasi EDTA yang lebih
rendah untuk mengoptimalkan penambahan khelat sehubungan
dengan aplikasi lapangan potensial. Aplikasi EDTA, DTPA, CDTA,
EGTA, dan asam sitrat pada tanah melarutkan Pb di dalam tanah
serta meningkatkan serapan dan translokasi Pb ke pucuk (Gambar
2). Konsentrasi Pb di pucuk meningkat dengan konsentrasi
chelator diterapkan ke tanah. Peningkatan dramatis dalam
konsentrasi Pb pucuk terjadi antara perlakuan EDTA 1 dan 5
mmol/kg. Baik EDTA dan DTPA

JOL. 31, TIDAK. 3, 1997 / ILMU & TEKNOLOGI LINGKUNGAN9 861

TABEL 1. Hasil Bahan Kering B.juncea Tumbuh di Tanah yang Diperlakukan dengan Agen ChelatingSebuah
konsentrasi (mmol/kg)
chelating
agen 0 (g/pot DW) 0,1 (g/pot DW)
CDTA 2.05 (0.16 2.07 (0.22
DTPA 2.05 (0.16 2.53 (0.19
EDTA 2.05 (0.16 2.37 ( 0,05
EGTA 2.05 (0.16 2.33 (0.22
asam sitrat 2.05 (0.16 2.08 ( 0.13
Sebuah Tanaman ditanam selama 3 minggu sebelum aplikasi perlakuan. Nilai adalah sarana (1 SE.
GAMBAR 3. Pengaruh agen pengkelat yang diaplikasikan tanah pada konsentrasi
Cd pucuk di B.juncea ditanam di tanah Sassafras Ap yang diubah dengan kadmium
karbonat (100 mg Cd/kg) dan dikapur hingga pH 7,3.
melarutkan sekitar 470 mg Pb/kg (2,2 mmol Pb/kg) di dalam tanah
dengan laju 10 mmol/kg; namun, aplikasi EDTA menghasilkan
tanaman dengan 1,6% Pb pada pucuk dibandingkan dengan hanya
1,0% Pb pada pucuk tanaman yang diberi perlakuan DTPA (Gambar
2A). Kapasitas pelarutan Pb CDTA dalam tanah mirip dengan DTPA
pada laju 5mmol/kg dan menghasilkan serapan Pb yang lebih besar
dibandingkan dengan DTPA dalam jaringan tanaman pada laju 5 dan
10mmol/kg. EGTA kurang efektif dalam melarutkan Pb di dalam
tanah dan juga dalam meningkatkan serapan Pb oleh tanaman. Asam
sitrat hanya menghasilkan sedikit peningkatan penyerapan Pb oleh
tanaman. Dengan tidak adanya agen pengkhelat, serapan Pb pada
tunas menjadi minimal.
Hasil bahan kering tanaman juga dipengaruhi secara nyata
oleh aplikasi perlakuan. Tanaman yang tumbuh di tanah yang
tidak diberi perlakuan atau tanah yang diberi perlakuan 0,1
mmol/kg menghasilkan hampir dua kali biomassa tanaman yang
menerima aplikasi kelat 10 mmol/kg (Tabel 1). Namun, besarnya
akumulasi logam pada perlakuan 10 mmol/kg adalah beberapa
ribu hingga lebih dari sepuluh ribu kali lebih besar dari
perlakuan kontrol. Tanaman yang tidak diberi perlakuan hampir
menggandakan biomassanya selama periode waktu antara
perlakuan dan panen.
Penyerapan Cd juga ditingkatkan melalui penambahan agen
pengkelat ke tanah (Gambar 3). Penambahan EGTA ke tanah
meningkatkan konsentrasi pucuk Cd menjadi sekitar 2800 mg/kg
pada perlakuan 10 mmol/kg dibandingkan dengan hanya 220mg/
kg pada perlakuan kontrol. CDTA, DTPA, dan EDTA kurang efektif
dibandingkan EGTA tetapi masih menghasilkan akumulasi Cd
sekitar 1000mg/kg pada perlakuan 5mmol/kg dan 1500mg/kg
pada perlakuan 10mmol/kg CDTA dan EDTA. Peningkatan laju
DTPA dari 5 menjadi 10 mmol/kg tidak meningkatkan serapan
Cd ke dalam tunas. Amandemen asam malat tidak meningkatkan
serapan Cd di atas perlakuan kontrol.
Studi tambahan menggunakan tanah yang mengandung kontaminan
multilogam menunjukkan bahwa kemampuan pengkhelat pengaplikasi minyak
seperti EDTA untuk meningkatkan serapan logam tidak terbatas pada Pb dan Cd.
Perlakuan EDTA 2,5 mmol/kg untuk tanah yang mengandung
Cd, Cu, Ni, Pb, dan Zn secara substansial meningkatkan serapan
862 9 ILMU & TEKNOLOGI LINGKUNGAN / VOL. 31, TIDAK. 3, 1997
1.0 (g/pot DW) 5.0 (g/pot DW) 10 (g/pot DW)
1,95 (0,38 0,99 (0,09 1.13 (0.04
1,05 (0,09 1,11 (0,15 1,31 ( 0,03
1,38 (0,17 0,93 (0,08 1,02 (0,13
1,88 (0,25 0,88 (0,09 1,17 (0,15
1,54 (0,12 0,95 (0,10 0,89 (0,18
GAMBAR 4. Peningkatan konsentrasi logam pucuk di B.juncea
ditanam di tanah Sassafras Ap yang mengandung tambahan Cd, Cu, Ni, Pb, dan Zn
melalui aplikasi tanah EDTA (2,5 mmol/kg). Konsentrasi logam tanah diberikan
(dalam mg/kg) dalam tanda kurung.
GAMBAR 5. Akumulasi Pb pada pucuk B.juncea tumbuh di tanah Sassafras
Ap (dikapur hingga pH 7,3) dengan Pb ditambahkan sebagai timbal
karbonat dan diubah dengan 0,5 mmol/kg EDTA.
logam-logam itu ke pucuk B.juncea (Gambar 4). Konsentrasi
pucuk Cu, Pb, dan Zn berada pada atau di atas 1000 mg/kg,
dengan Pb menunjukkan konsentrasi tertinggi pada hampir
3600 mg/kg. Namun, konversi konsentrasi logam pucuk ke basis
amolar menunjukkan Cu, Pb, dan Zn dengan konsentrasi yang
sama yaitu 15,3, 17,4, dan 16,3μmol/g, masing-masing.
Kandungan Cd dan Ni pucuk secara signifikan lebih sedikit
dengan konsentrasi masing-masing 4,3 dan 3,5μmol/g.
Karena Pb dianggap sebagai kontaminan tanah logam yang
paling penting, kami memusatkan upaya penelitian kami selanjutnya
pada fitoremediasi Pb dan pada mendefinisikan peran kelat sintetis
dalam proses ini. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar
2, peningkatan kelarutan Pb melalui penambahan chelator dapat
menghasilkan konsentrasi Pb yang jauh lebih tinggi di tanaman
daripada peningkatan konsentrasi total Pb di dalam tanah (Gambar
1). Efek ini dapat diamati bahkan pada konsentrasi Pb tanah total
yang rendah. Tanah yang mengandung konsentrasi Pb total
ditambahkan sebagai timbal karbonat (150, 300, 450, dan 600 mg/kg)
dan diubah dengan 0,5 mmol/kg EDTA menghasilkan tanaman
dengan sebanyak 5000 mg Pb/kg pada level 600 mg/kg, dengan
peningkatan tajam kandungan Pb pada pucuk karena Pb tanah
meningkat dari 150 menjadi 300 mg/kg (Gambar 5). Mekanisme lain
untuk meningkatkan kelarutan logam, seperti pengasaman tanah,
juga dapat sedikit meningkatkan penyerapan logam, tetapi

GAMBAR 6. Konsentrasi Pb Tembak B.juncea ditanam di tanah Sassafras Ap yang
dikapur hingga nilai pH yang berbeda dengan 600 mg Pb/kg ditambahkan sebagai
timbal karbonat dan diubah dengan 2,5 mmol/kg EDTA.
GAMBAR 7. Pengaruh EDTA terhadap distribusi Pb antara akar dan tunas
B.juncea ditumbuhkan dalam kultur larutan pada pH 3,5 dan pH 5,5.
konsentrasi lebih besar dari 1000 mg Pb/kg dalam bahan pucuk
hanya diamati melalui achelator edisi kepala. Gambar 6 menunjukkan
pengaruh kombinasi pH tanah dengan amandemen EDTA terhadap
akumulasi Pb diB.juncea. Penyerapan timbal sedikit meningkat
menjadi 445 mg/kg karena pH menurun menjadi 5,0 tanpa EDTA,
tetapi meningkat secara dramatis hingga hampir 4000 mg/kg ketika
EDTA ditambahkan ke tanah pH 5. Penyerapan Pb dari larutan
hidroponik juga sangat terkait dengan pH larutan dengan adanya
EDTA dalam larutan (Gambar 7). Pada pH 5,5 tanpa penambahan
EDTA, hanya ditemukan kadar Pb dalam jaringan pucuk.
Penambahan 0.2mM EDTA meningkatkan Pb jaringan tunas menjadi
sekitar 0.8mg/
g. Pada pH3,5 pengambilan Pbuptake jauh lebih tinggi. Tanpa EDTA,
tunas mengakumulasi 6mg Pb/g. EDTA meningkatkan serapan Pb
dalam pengobatan ini menjadi 17 mg/g. Konsentrasi Pb akar
menurun pada pH yang lebih rendah dan dengan penambahan
EDTA. Akar pada perlakuan kontrol pada pH 5,5 mengandung 225 mg
Pb/g. Menurunkan pH larutan menjadi 3,5 menurunkan Pb akar
menjadi 110mg/g, dan penambahan EDTA menurunkan Pb akar
menjadi 65 dan 20 mg/g pada pH 5,5 dan pH
3,5, masing-masing.
Studi lapangan dilakukan untuk menilai efektivitas dan kelayakan
penggunaan khelator yang diaplikasikan pada tanah untuk
memfasilitasi penyisihan logam sebagai bagian dari kegiatan
fitoremediasi. Penambahan EDTA ke tanah dalam studi lysimeter
lapangan mengkonfirmasi studi laboratorium yang menunjukkan
TABEL 2. Serapan Pb pada Akar dan Tunas B.juncea di
Studi Lisimeter Lapangan
pengobatan menembak Pb (mg/kg) akar Pb (mg/kg)
EDTA 785 152
EDTA + kontrol asam 1471 466
asetat 28 101
diterapkan chelator pada peningkatan serapan Pb. Tambahan dari
EDTA meningkatkan serapan Pb pada rebung dari 28 mg/kg pada
perlakuan kontrol menjadi 785mg/kg. Asam asetat diaplikasikan
bersama dengan EDTA untuk menentukan apakah penurunan pH
tanah juga akan meningkatkan serapan Pb di lapangan. Aplikasi
asam asetat dengan EDTA menghasilkan peningkatan akumulasi Pb
lebih lanjut menjadi 1475 mg/kg Pb di pucuk (Tabel 2) meskipun pH
tanah hanya sedikit menurun dari 8,3 menjadi
7.8. Akumulasi Pb di pucuk juga lebih besar dari konsentrasi Pb
akar dengan penambahan EDTA dan asam asetat, menunjukkan
penurunan pengikatan Pb oleh jaringan akar akibat aplikasi
EDTA.
Diskusi
Fitoremediasi yang berhasil adalah kombinasi dari beberapa langkah
dan proses. Karena penyisihan logam total merupakan fungsi dari
konsentrasi logam dalam pucuk dan total biomassa yang dapat
dipanen, langkah pertama dalam fitoremediasi adalah menghasilkan
tingkat biomassa tanaman yang tinggi di lokasi yang terkontaminasi.
Hal ini dapat dicapai melalui budidaya intensif, yang memfasilitasi
pembentukan dan pertumbuhan tanaman yang cepat.B.juncea
dan Brassicas biji minyak lainnya dapat menghasilkan 18 t/ha
biomassa (12) kurang lebih 2.5 bulan budidaya. Laju
pertumbuhan lebih dari 200 kg ha bahan kering-1 hari-1 biasanya
dicapai oleh tanaman ini dalam kondisi pertanian (13).
Produksi biomassa kemungkinan akan lebih rendah untuk tanaman yang
dibudidayakan di lokasi yang terkontaminasi logam, yang tidak ideal untuk
pertanian.
Langkah kedua yang vital untuk keberhasilan fitoremediasi
adalah induksi akumulasi Pb pada tunas. BahkanB.juncea, yang
memiliki potensi genetik untuk mengakumulasi Pb dan Cd (11,
14), tidak dapat secara efisien menghilangkan logam-logam ini
dari matriks tanah kecuali jika dilarutkan. Oleh karena itu,
fitoremediasi yang berhasil harus melibatkan mobilisasi logam
beracun ke dalam larutan tanah yang bersentuhan langsung
dengan akar tanaman. Kami telah menunjukkan bahwa ini dapat
dicapai dengan penggunaan kelat sintetis (Gambar 2).
Di dalam tanah, kelat yang digunakan pertama-tama bekerja
untuk mengkomplekskan logam terlarut dalam larutan tanah.
Saat aktivitas logam bebas menurun, pelarutan ion logam yang
terikat mulai mengkompensasi pergeseran kesetimbangan.
Proses ini berlanjut sampai kelat menjadi jenuh, suplai logam
dari fase padat habis, dan/atau keseimbangan tercapai dan
ketidaklarutan fase padat membatasi aktivitas logam bebas.
Dalam kasus EDTA, pembentukan Pb-EDTA diharapkan menjadi
kompleks logam-EDTA yang dominan di sebagian besar tanah
antara pH 5,2 dan pH 7,7, asalkan konsentrasi total Pb dan
kelarutan fase padat Pb spesifik tidak membatasi (15). Akibatnya,
jika EDTA ditambahkan dalam jumlah yang cukup, hampir semua
Pb terlarut akan dikomplekskan sebagai Pb-EDTA dengan hanya
aktivitas Pb yang sangat rendah.2+. Misalnya, menambahkan
10mmol EDTA/kg tanah (Gambar 2), yang melebihi jumlah Pb
dalam tanah (sekitar 3 mmol/kg), menghasilkan ekstraksi 2,2
mmol/kg Pb terlarut (73% dari total tanah Pb). Pb yang tersisa
tidak tersedia untuk kompleksasi dengan EDTA, mungkin karena
spesiasinya sebagai kompleks yang sangat stabil. Tingkat
penambahan EDTA sebesar 5, 1, dan 0,1 mmol/kg menghasilkan
proporsi yang lebih rendah dari total Pb tanah yang dilarutkan
(masing-masing 64, 22, dan 3%). Jumlah Pb pada pucuk selalu
berbanding lurus dengan jumlah EDTA yang ditambahkan ke
dalam tanah (Gambar 2). Jumlah Pb terlarut dalam tanah
tampaknya menjadi faktor kunci
JOL. 31, TIDAK. 3, 1997 / ILMU & TEKNOLOGI LINGKUNGAN9 863
untuk meningkatkan penyerapan Pb. Ketika total Pb tanah
membatasi, kolam Pb terlarut juga dapat membatasi, bahkan
dengan adanya chelator seperti EDTA, sehubungan dengan
penyerapan Pbby akar dan translokasi ke tunas (Gambar
5).
Kemampuan EDTA yang lebih besar untuk meningkatkan
penyerapan Pb di atas khelat lain juga tampaknya terkait dengan
kapasitas ikat EDTA untuk Prelatif terhadap khelat lainnya. Norvell (
16) agen chelating peringkat untuk Pb2+ pada pH 7, di bawah kondisi
yang sedikit berkurang, dalam urutan EDTA ≈ DTPA > CDTA
> EGTA. Dalam penelitian kami, EGTA adalah chelator paling
efektif untuk meningkatkan akumulasi C dalamB.juncea.
Pengamatan ini sesuai dengan prediksi bahwa, di atas pH 5,7, Cd-
EGTA diharapkan menjadi spesies logam-EGTA yang dominan (
15) dibandingkan dengan afinitas pengikatan Cd yang kurang
menguntungkan dari kelat lain yang diuji. Tingkat persaingan
dari kation lain dalam larutan tanah akan bervariasi antara
sistem tanah dan oleh karena itu efektivitas khelat, tetapi
tampaknya pemilihan khelat dengan afinitas pengikatan
tertinggi berdasarkan data termodinamika yang ada
memberikan perkiraan yang baik tentang potensi amandemen
yang berhasil untuk meningkatkan penyerapan logam.
PH tanah merupakan parameter penting dalam menentukan
efektivitas penerapan EDTA dalam meningkatkan serapan logam
(Gambar 6). Hasil yang sesuai menunjukkan peningkatan Pb
yang dapat diekstraksi EDTA sebagai fungsi dari penurunan pH
telah dicatat dalam studi pencucian tanah (17). Penambahan
agen pengasaman tanah, seperti asam asetat, memiliki efek
aditif pada serapan logam pucuk yang dimediasi EDTA. Studi
lysimeter lapangan menunjukkan bahwa mengubah tanah basa
dengan asam asetat dengan adanya EDTA hampir dua kali lipat
akumulasi P di pucuk (Tabel 2). Eksperimen hidroponik yang
lebih rinci (Gambar 7) menegaskan bahwa pengasaman
merangsang pergerakan Pb dari akar ke pucuk. Menurunkan pH
larutan hidroponik dari 5,5 menjadi 3,5 dengan adanya EDTA
secara dramatis meningkatkan akumulasi P pucuk dan
menurunkan retensi Pb di akar.
Retensi timbal di akar didasarkan pada pengikatan Pb ke
situs pertukaran ion di dinding sel dan pengendapan
ekstraseluler, terutama dalam bentuk karbonat timbal yang
disimpan di dinding sel.9). EDTA, dalam kombinasi dengan pH
rendah, secara efektif mencegah retensi dinding sel Pb,
sehingga membuatnya tersedia untuk translokasi ke tunas. Efek
ini diamati baik di tanah (Gambar 6) dan sistem hidroponik
(Gambar 7). Menambahkan14EDTA-Pb berlabel C ke media
hidroponik mengakibatkan akumulasi 14Senyawa berlabel C di
pucuk (data tidak ditampilkan). Karena waktu retensi HPLC dari14
Senyawa berlabel C identik dengan standar EDTA asli, kami
berasumsi bahwa pucuk tanaman percobaan mengandung [14
C]EDTA. Jumlah EDTA yang terdeteksi pada pucuk cukup untuk
mengkhelat sebagian besar Pb yang terakumulasi dalam
jaringan. Oleh karena itu, ada kemungkinan bahwa Pb masuk ke
dalam tanaman dan diangkut ke pucuk sebagai kompleks EDTA.
Peningkatan penyerapan Pb chelated relatif terhadap Pb ionik
bertentangan dengan pemahaman umum tentang perilaku chelate
larutan buffer-bufferednutrient. Secara umum diyakini bahwa bentuk
khelat dari logam kurang tersedia untuk diserap dibandingkan
dengan bentuk ionik (18, 19). Beberapa bukti menunjukkan bahwa
logam chelated dapat diserap oleh akar. Agen pengkelat yang
dieksudasi akar (fitosiderofor) yang dikomplekskan dengan Fe mudah
dan disukai diserap oleh tanaman (20).
Pengangkutan kompleks khelat-logam sintetik melintasi
membran tidak diterima secara luas. Bel dkk. (21) melaporkan
bahwa konsentrasi Cu, Zn, dan Mn daun barley umumnya lebih
besar ketika konsentrasi total Cu, Zn, dan Mn lebih besar
meskipun mempertahankan aktivitas Cu bebas yang konstan.2+,
Zn2+, danMn2+ dalam larutan melalui penggunaan khelat.
Penyerapan logam chelated terkait dengan kemungkinan
istirahat di endodermis akar dan strip Casparian dan / atau
pertukaran antara logam chelated dan logam bebas di
864 9 ILMU & TEKNOLOGI LINGKUNGAN / VOL. 31, TIDAK. 3, 1997
rizosfer dan tidak menyerap kompleks logam khelat (21). Salah satu
pertimbangan penting adalah bahwa banyak pekerjaan yang
dilakukan dengan kelat dalam larutan nutrisi melibatkan konsentrasi
yang jauh lebih rendah daripada yang diterapkan dalam penelitian
ini. Besarnya akumulasi logam yang diamati dalam penelitian ini (>1%
konsentrasi Pb pucuk) juga jauh lebih besar daripada akumulasi
logam yang diamati dalam penelitian dengan konsentrasi kelat yang
jauh lebih rendah, yang menunjukkan bahwa mungkin mekanisme
yang berbeda terlibat.
Tanaman tanaman memompa sejumlah besar air dari tanah.
Rasio transpirasi tanaman tanaman berkisar antara 850 dan 300 kg
air yang digunakan/kg bahan kering yang dihasilkan (22). Kami telah
melaporkan bahwa memblokir transpirasiblocksCduptake oleh
B.juncea tanaman (14). Kami juga telah mengamati bahwa
menempatkan tanah-tumbuh B.juncea tanaman yang dekat dengan
kipas meningkatkan penyerapan Pb yang dimediasi EDTA sebesar
30%, sementara menempatkan kantong plastik di atas tanaman akan
menguranginya sebesar 35% (data tidak ditampilkan). Perawatan ini
harus meningkatkan dan mengurangi transpirasi, masing-masing.
Dengan demikian, kami mengusulkan bahwa transpirasi adalah
kekuatan utama yang mendorong akumulasi Pb di pucuk. Aliran
massa air dari tanah dan ke dalam tanaman memberikan Pb terlarut
ke tunas, di mana air menguap dan Pb tetap. Kami juga
menyarankan bahwa sebagian besar Pb seluler di pabrik dikelat oleh
EDTA, yang mencegah pengendapannya di akar dan sistem vaskular.
Selain itu, EDTA dapat secara langsung memfasilitasi pergerakan Pb
melalui membran sel akar dan ruang ekstraseluler. Kemungkinan
menarik ini membutuhkan studi lebih lanjut.
Data kami menunjukkan bahwa akumulasi lima logam beracun oleh
B.juncea tanaman dapat ditingkatkan dengan chelates sintetis (Gambar 4).
Akumulasi Pb yang ditingkatkan EDTA selanjutnya ditingkatkan dengan
menurunkan pH substrat. Amandemen ini diterapkan beberapa hari
sebelum panen ketika tanaman sudah mapan. Penerapan khelat dan
pembenah tanah lainnya di lapangan tentunya akan membutuhkan kajian
dan optimasi lebih lanjut untuk mendapatkan serapan dan penghilangan
logam yang maksimal. Namun, hasil laboratorium menunjukkan bahwa
tanaman dapat diperlakukan untuk mengakumulasi hingga 1,5% dari
berat keringnya dalam Pb dari tanah yang mengandung 600 ppm Pb.
Dengan asumsi 6 t/ha biomassa, 6 minggu budidaya, dan tiga kali panen
per musim,
B.juncea tanaman dapat menghilangkan 180 kg Pb/ha dalam satu
musim tanam. Pengabuan biomassa yang dipanen selanjutnya akan
mengkonsentrasikan Pb yang diekstraksi dengan tambahan 10 kali
lipat (dengan asumsi bahan kering tanaman adalah 10% abu) yang
menghasilkan konsentrasi 250 kali lipat Pb yang diekstraksi di atas
permukaan tanah. Durasi efisiensi ekstraksi ini karena penurunan
konsentrasi Pb tanah total tidak jelas tetapi kemungkinan besar akan
menjadi fungsi dari besarnya kolam Pb yang dapat diekstraksi EDTA.
Kami telah memperkirakan bahwa penambahan chelators ke
tanah akan menghasilkan peningkatan biaya sebesar $7,50/t
tanah yang diolah, yang tidak akan berdampak besar pada
keseluruhan biaya fitoremediasi sebagai alternatif. Kekhawatiran
tambahan mengenai potensi mobilitas logam chelated sedang
ditangani melalui pemodelan dinamika hidrologi profil tanah
dan pemantauan migrasi logam. Namun, integrasi praktik tanam
intensif dan pengembangan sistem perakaran ekstensif bersama
dengan pengelolaan irigasi yang hati-hati akan menghasilkan
kehilangan air bersih dari tanah selama musim tanam (23).
Fitoremediasi menawarkan alternatif yang menarik untuk
remediasi tanah yang terkontaminasi logam. Hasil yang disajikan
dalam makalah ini menunjukkan bahwa, dengan integrasi
teknologi ini dengan keterampilan agronomi dan teknik yang
tepat, fitoremediasi tanah yang terkontaminasi Pb akan segera
menjadi alat remediasi yang kompetitif.
Ucapan Terima Kasih
Pekerjaan ini didukung sebagian melalui Hibah Penelitian
Inovasi Usaha Kecil (DE-FG02-95ER82053) yang diberikan kepada
Phytotech, Inc. oleh Departemen Energi AS. Itu
penulis mengucapkan terima kasih atas bantuan teknis yang
berharga dari Tracey Ledder.
Daftar pustaka
(1) Tukang Roti, AJM; McGrath, SP; Sidoli, CMD; Reeves, RD
sumber daya. Konservasi Daur ulang.1994, 11, 41.
(2) Chaney, RL Pengolahan Lahan Limbah B3; Noyes Data Corp.: Park
Ridge, NJ, 1983; hal 50-76.
(3) Raskin, I.; Kumar, NPBA; Dushenkov, S.; garam, DECurr. pendapat.
Bioteknologi.1994, 5, 285.
(4) Garam, DE; Blaylock, MJ; Kumar, NPBA; Dushenkov, V.; Ensley, BD;
Chet, aku.; Raskin, saya.Bioteknologi 1995, 13, 468.
(5) Coklat, SL; Chaney, RL; Sudut, JS; Baker, AJMIlmu Tanah. Soc. Saya. J
1995, 59, 125.
(6) McBride, MB Kimia Lingkungan Tanah; Pers Universitas Oxford: New
York, 1994.
(7) Lindsay, WL Kesetimbangan Kimia di Tanah; Wiley: New York,
1979.
(8) Cunningham, SD; Berti, WR; Huang, JW InBioremediasi Anorganik;
Hinchee, RE, Sarana, JL, Burris, DR, Eds.; Batelle Press: Columbus-
Richland, 1995; hal 33-54.
(9) Dushenkov, V.; Kumar, NPBA; Moto, H.; Raskin, saya.Mengepung. Sci.
teknologi.1995, 29, 1239.
(10) Reeves, RD; Brooks, RRMengepung. polusi. (Ser. A)1983, 31, 277.
(11) Kumar, NPBA; Dushenkov, V.; Moto, H.; Raskin, saya.Mengepung. Sci.
teknologi.1995, 29, 1232.
(12) Bhargawa, SC InMinyak BijiBrassica di IndiaPertanian;Chopra,
VL, Prakash, S., Eds.; Vika: New Delhi, 1991; hal 161-197.
(13) Downey, RK; Robbelen, spesies G. Brassica. DiTanaman Minyak Dunia;
Robbelen, G., Downey, RK, Ashri, A., Eds.; McGraw- Hill: New York,
1989; hal 339-362.
(14) Garam, DE; Pangeran, RC; Pickering, IJ; Raskin, saya.Fisiol Tumbuhan.
1995, 109, 1427.
(15) Sommers, LE; Lindsay, WLIlmu Tanah. Soc. Saya. J1979, 43, 39.
(16) Norvell, WA In Mikronutrien dalam Pertanian, edisi kedua; Seri Buku
SSSA, No. 4; Mortvedt, JJ, dkk., Eds.; Masyarakat Ilmu Tanah Amerika:
Madison, WI, 1991; hal 187.
(17) Peters, RW; Sem, L.InSpesiasi Logam dan Pencemaran Tanah; Allen,
HE, dkk., Eds.; Penerbit Lewis: AnnArbor, MI, 1995; hal 55-274.
(18) Coklat, JC; Tiffin, LO; Holmes, RSFisiol Tumbuhan. 1960, 35,
878-886.
(19) Chaney, RL J. Nutrisi Tanaman. 1988, 11, 1033.
(20) Romheld, V.; Marschner, H.Fisiol Tumbuhan. 1986, 80, 175.
(21) Bel, PF; Chaney, RL; Sudut, JSTanah Tanaman 1991, 130, 51.
(22) Chrispeels, MJ; Sadava DE InTanaman, Gen, dan Pertanian;
Chrispeels, MJ, Sadava, DE, Eds.; Jones dan Bartlett Penerbit: Boston,
London: 1994; hal 190.
(23) Allison, GB; Wah, GW; Tyler, SWIlmu Tanah. Soc. Saya. J1994,
58, 6.
Diterima untuk ditinjau 25 Juni 1996. Naskah yang direvisi
diterima 22 Oktober 1996. Diterima 28 Oktober 1996.X
ES960552A
X Abstrak diterbitkan di Abstrak ACS Lanjutan, 15 Januari 1997.
JOL. 31, TIDAK. 3, 1997 / ILMU & TEKNOLOGI LINGKUNGAN9 865