BIOTEKNOLOGI FARMASI (FA-4117)

BIOTEKNOLOGI FARMASI
Ekspresi Gen dan
Protein Rekombinan
#5
tarwadi.ista1@gmail.com
HP. 085813077396
FA-4117
PROGRAM STUDI FARMASI @tarwadi

INSTITUT SAINS DAN TEKNOLOGI AL-KAMAL 05

Penggunaan dan pemilihan
vektor ekspresi, strategi Ekspresi Gen dan Protein
overproduksi (protein),

BIOTEKNOLOGI FARMASI
pemilihan sel inang (sistem Rekombinan
prokraiot atau eukariot).
Recombinant protein expression in Escherichia
coli: advances and challenges
https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/f
micb.2014.00172/full

Expression and analysis of the glycosylation

properties of recombinant human
erythropoietin expressed in Pichia pastoris
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/P
MC3168189/

Human cell lines for biopharmaceutical

2016 manufacturing: history, status, and future FA-4117
perspectives @tarwadi

CHAPTER 11 & 13
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26383226/
05
 PROSES TRANSKRIPSI
DAN TRANSLASI

BIOTEKNOLOGI FARMASI
Hasil transkripsi gen sangat
penting (3 produk):

APA SAJA?
FA-4117
@tarwadi
 Intron tidak ditranslasi menjadi protein.
 Hanya ekson yang ditranslasi protein 05
BAGAIMANA MENDETEKSI ADANYA INTRON?

BIOTEKNOLOGI FARMASI
HIBRIDISASI cDNA-mRNA

+ NUCLEASE

FA-4117
@tarwadi

05
Gene Expression Regulation
 PROMOTER MUTLAK
DIPERLUKAN UNTUK EKSPRESI

BIOTEKNOLOGI FARMASI
GEN

 EKSPRESI GEN DIPENGARUHI

OLEH SEKUEN SEBELUM
PROMOTER

 ENHANCER & SILENCER

Transcription factors- 3’

https://www.youtube.com/w
atch?v=MkUgkDLp2iE

Lac Operon- 5’ FA-4117

@tarwadi
https://www.youtube.com/wa
tch?v=sc9pAk0blgo
05
FAKTOR TRANSKRIPSI

Gen yang berada di sel otot dan sel otak: APAKAH SAMA?

BIOTEKNOLOGI FARMASI
JIKA sama, mengapa
fungsi sel berbeda?
Transcription factors- 3’

https://www.youtube.com/w
atch?v=MkUgkDLp2iE

 Faktor transkripsi mengontrol ekspresi gen

 Faktor transkripsi berinteraksi dengan DNA mencari
tempat untuk berinteraksi dengannya, sebelum
berinteraksi dengan protein lainnya untuk terjadinya
transkripsi.
 Faktor transkripsi (~1500 jenis) pada sel manusia untuk
mengatur ekspresi gen FA-4117
@tarwadi

05
 BAGAIMANA EKSPRESI GEN DIREGULASI?

 Proses transkripsi dan translasi membutuhkan energi yang intensif

BIOTEKNOLOGI FARMASI
 Gen yang terlibat dalam homeostatis diekspresikan setiap saat
(constitutive expression)
 Regulator gen: positif (aktivator), negatif (repressor)
 Operon: unit DNA mengandung sekelompok gen yang ekspresinya
dikoordinasikan/diatur oleh satu promotor

 Homeostasis : proses dan mekanisme

otomatis yang dilakukan makhluk hidup
untuk mempertahankan kondisi konstan
agar tubuh dapat berfungsi dengan normal,
meskipun terjadi perubahan pada
lingkungan di dalam atau di luar tubuh .

 Perubahan lingkungan itu antara lain: suhu

tubuh, pH cairan ekstraselular,
keseimbangan cairan tubuh, konsentrasi ion FA-4117
natrium, kalium, dan kalsium, serta kadar Lac Operon- 5’
@tarwadi
gula darah). https://www.youtube.com/wa
tch?v=sc9pAk0blgo
05
Regulasi gen:
induksi dan
represi

BIOTEKNOLOGI FARMASI
FA-4117
@tarwadi

05
Urgensi Reporter Gene
Jika gen yang dikloning (diinsersikan) juga diekspresikan oleh sel inang yang
berada dalam kromosom, apa yang harus dilakukan untuk memastikan

BIOTEKNOLOGI FARMASI
bahwa gen insert diekspresikan?

FA-4117
@tarwadi

05
SENYAWA YANG DIPRODUKSI OLEH MIKROBA

BIOTEKNOLOGI FARMASI
FA-4117
@tarwadi

05
VECTOR EKSPRESI UNTUK SEL INANG E.COLI

BIOTEKNOLOGI FARMASI
FA-4117
@tarwadi

Produksi Protein (manusia) pada Bakteri 05

The use of an expression vector to achieve expression of a
foreign gene in E. coli.

BIOTEKNOLOGI FARMASI
 BAGAIMANA AGAR TERJADI
OVER PRODUKSI PROTEIN?
 The promoter is the most important
component of an expression vector. This is
because the promoter controls the very first
stage of gene expression (attachment of an
RNA polymerase enzyme to the DNA) and
determines the rate at which mRNA is
synthesized.

 The amount of recombinant protein obtained

FA-4117
therefore depends to a great extent on the
@tarwadi
nature of the promoter carried by the
expression vector.
05
KUAT LEMAH

BIOTEKNOLOGI FARMASI
 Gene regulation are
recognized in E. coli –
induction and repression. An
inducible gene is one whose
transcription is switched on
by addition of a chemical to
the growth medium.

 Often, this chemical is one of

the substrates for the
enzyme coded by the
inducible gene (Figure 13.7a).
In contrast, a repressible
gene is switched off by
addition of the regulatory
chemical (Figure 13.7b). FA-4117
@tarwadi

05
 BIOTEKNOLOGI FARMASI
CONTOH PROMOTER

 Lac Promoter
 Trp Promoter
 Tac Promoter
 Lambda Promoter
 T7 Promoter

FA-4117
@tarwadi

05
GENERAL PROBLEM EXPRESSING PROTEIN IN E.COLI

BIOTEKNOLOGI FARMASI
FA-4117
@tarwadi

05
EKSPRESI PROTEIN DI E.COLI

BIOTEKNOLOGI FARMASI
 Inclusion bodies
 -S-S- disulfide bond
 degradation

FA-4117
@tarwadi

05
PROMOTER PADA SEL EUKARIOT

 S. CEREVICEAE
 PICHIA PASTORIS

BIOTEKNOLOGI FARMASI
 HANSENULA POLYMORPHA

FA-4117
@tarwadi

05
POST TRANSLASI MODIFIKASI DI SEL EUKARIOTIK

BIOTEKNOLOGI FARMASI
FA-4117
@tarwadi

05
BIO-FARMING

BIOTEKNOLOGI FARMASI
FA-4117
@tarwadi

05
PEMILIHAN SEL INANG

BIOTEKNOLOGI FARMASI
FA-4117
@tarwadi

05
 BIOTEKNOLOGI FARMASI
PROTEIN
TERAPEUTIK FA-4117
@tarwadi

 FDA ~ AMERIKA
 EMA ~ EROPA 05
  Although other
mammalian cell
lines can produce

BIOTEKNOLOGI FARMASI
PTMs similar to
human cells, they
also produce non-
human PTMs, such
as galactose-a1,3-
galactose and N-
glycolylneuraminic
acid, which are
SEL MAMALIA potentially
immunogenic.
 CHO
 Murine
myeloma cells
(NSO, Sp2/O)

FA-4117
@tarwadi

05
KELEBIHAN DAN KEKURANGAN SISTEM EKSPRESI
MENGGUNAKAN SEL INANG YANG BERASAL DARI MANUSIA

BIOTEKNOLOGI FARMASI
 KEKURANGAN: A possible disadvantage of using human cell lines is the
potential for human specific viral contamination, although this risk can be
mitigated with multiple viral inactivation or clearance steps.
FA-4117
 KEKURANGAN: Uji klinis produksi protein dengan sel inang dari manusia masih @tarwadi
relatif sedikit dibanding sel mamalia lainnya.
05
 BIOTEKNOLOGI FARMASI
 One of the most important advantages of using human FA-4117
HT-1080: sel kanker fibrosarkoma cell lines for protein production is the greater likelihood
@tarwadi
PER.C6: sel retina fetus (1985) that the resulting recombinant protein will bear post-
HEK: sel ginjal dari embrio translational modifications (PTMs) that are consistent
with those seen on endogenous human proteins
05
 1. Siapkan kertas dan pulpen, waktu
KUIS-15 MENIT KUIS hanya 15 menit.
2. Menjawab soal dengan lengkap,

BIOTEKNOLOGI FARMASI
singkat dan jelas.
3. Foto hasil jawaban dan kirimkan:
email: tarwadi.ista1@gmail.com

1. Apa yang anda ketahui tentang DNA, GEN, transkripsi dan

translasi?

2. Apa beda vektor kloning dan vektor ekspresi. Persyaratan apa

saja agar ekspresi gen dapat berjalan sesuai harapan?

3. Bagaimana mengevaluasi hasil PCR dan apa yang harus

diperhatikan saat akan melakukan kloning dari gen hasil PCR? FA-4117
@tarwadi

@@@selamat bekerja.
05
Down syndrome and the complexity of genome
dosage imbalance
https://www.nature.com/articles/nrg.2016.154?foxt

BIOTEKNOLOGI FARMASI
rotcallback=true

YouTube (type of mutation):

https://www.youtube.com/watch?v=xYOK-yzUWSI

Next Week meeting

Mutasi dan Produk GMO

FA-4117
Terima Kasih @tarwadi

05